7

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tanaman Plantago major L.

2.1.1 Klasifikasi Tanaman

Klasifikasi dari tanaman Plantago major L. adalah sebagai berikut:

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Sub Divisi : Angiospermae

Kelas : Dicotyledoneae

Ordo : Plantaginales

Famili : Plantaginaceae

Genus : Plantago

Spesies : Plantago major L.

Nama Lokal : Daun Sendok (Syamsuhidayat SS dan Hutapea JR, 1991).

Sinonim : P.asiatica L, P.erenata Blanco, P.depressa Willd, P.erosa Wall,

P.exaltata Horn, P.hasskarlii Decne, P.incisa Hassk, P.loureiri

Roem, P.media Blanco (Dalimartha, 2008).

Gambar 2.1 Plantago major L. (Plantamor, 2008)

2.1.2 Nama Lain Plantago major L.

Daun sendok di berbagai daerah dikenal dengan nama yang berbeda-beda.

Sumatra: daun urat, daun urat-urat, ekor angin, kuping menjangan (Melayu). Jawa:

Ki urat, ceuli, ceuli uncal (Sunda), meloh kiloh, otot-ototan, sangkabuah,

8

sangkubah, sangkuwah, sembung otot, suri pandak (Jawa). Sulawesi: torongoat

(Minahasa) (Syamsuhidayat SS dan Hutapea JR, 1991).

2.1.3 Morfologi Tanaman

Daun sendok merupakan tanaman gulma yang sering tumbuh di perkebunan

teh dan karet, tumbuh liar di hutan, ladang, halaman, berumput yang agak lembap

yang tumbuh di ketinggian 3.300 m diatas permukaan laut. Daun sendok berasal

dari daratan Asia dan Eropa. (Wijayakusuma, 1994). Habitus tanaman daun sendok

berupa herba, semusim, dan memiliki tinggi 6-50 cm. Batangnya pendek, bulat,

berwarna coklat. Daunnya tunggal, bulat telur sampai lancet, ujungnya tumpul,

pangkal meruncing, tepi bergerigi, roset, permukaan licin, pertulangan daun

melengkung, hijau muda, hijau, lebar 1-20 cm, panjang tangkai 1-25 cm. Bunga

majemuk berbentuk bulir, dengan panjang ± 40 cm, tangkai berbulir dengan

panjang 4-27 cm, panjang tajuk 1,5 mm berwarna putih. Buahnya terdiri dari kotak-

kotak, tiap kotak berisi 4 biji, berwarna hijau. Bijinya bulat kecil, jika masih muda

berwarna coklat, setelah tua berwarna hitam. Jenis akar serabut dengan panjang 3-

22 cm, warna putih kotor atau putih tulang (Syamsuhidayat SS dan Hutapea JR,

1991).

2.1.4 Kandungan Senyawa Plantago major L.

Penelitian menunjukkan bahwa daun dari Plantago major L. mengandung

ascorbic acid, chlorogenic acid, ursolic acid, choline, fiber, sorbitol, salicylic acid,

tannin dan flavonoid (Duke J. A., 2010). Hasil skrining fitokimia ekstrak daun

Plantago major L. menunjukkan bahwa bagian daun mengandung senyawa

alkaloid, flavonoid, saponin, terpenoid, dan steroid. Sedangkan bagian batang tidak

mengandung flavonoid, dan bagian akar tidak mengandung saponin. Dari hasil

analisa GC-MS diduga bahwa komponen senyawa alkaloid adalah turunan

kuinolin, senyawa terpenoid diduga berupa beta-karoten, dan senyawa steroid

diduga berupa fukosterol, stigmasterol, dan beta-sitosterol. Selain itu berdasarkan

hasil GC-MS ditemukan juga asam-asam organik dan senyawa-senyawa sakarida

(Rosyd, 2008).

Total kandungan asam lemak dalam daun Plantago major L. utama adalah

286mg per 100g bahan tanaman segar: asam lemak utama adalah asam linolenat,

linoleat, dan asam palmitat, tetapi sejumlah kecil asam stearat, oleat, dan miristat

9

juga terdeteksi. Daun Plantago major L. mengandung polisakarida seperti

plantaglucide, glucomannan, PMIa (31% arabinose, 32% galactose, 6% rhamnose,

dan 7% galacturonic acid) dan PMII (mengandung polygalacturonan halus dan dua

daerah bercabang berbeda), raffinose dan stachyose diisolasi dari daun (masing-

masing 0,3 dan 4,5 mg/g berat kering). Plantago major L. mengandung lendir, asam

silikat, seng, silika, dan kalium (Stanisavljević et al., 2008)

Biji Plantago major L. mengandung asam planterolik plantasan (dengan

komposisi xylose, arabinose, asam galacturinat dan rhamnose), protein, musilago,

aucubin, asam suksinat, adenine cholin, katalpol, syringing, asam lemak (palmitat,

stearat, arakidat, oleat, linolenat dan lenoleat), serta flavanone glycoside.

Sedangkan bagian akar mengandung naphazolin (Dalimartha, 2008)

Herba Plantago major L. mengandung senyawa aktif seperti senyawa fenolik,

tannin, alkaloid, flavonoid, saponin, sterol, glikosida iridoid, terpenoid, plantagin,

kalium, vitamin A; B1; C, asam sitrat, dan senyawa benzoate (asam vanilat).

P.major L. memiliki turunan utama asam caffeic yaitu Plantamajoside. Flavonoid

yang diisolasi dari Plantago major L. adalah apigenin, baicalein, baicalin, luteolin,

hispidullin, plantaginnin, scutellarein, nepetin, dan homoplantaginnin.

(Stanisavljević et al., 2008).

Tabel 2.1 Kandungan Kimia Dan Efek Farmakologi Daun Sendok

No. Kandungan Kimia Efek Farmakologis

1. Ascorbic acid, chlorogenic acid, ursolic

acid, manganese

Antidiabetik, hipoglikemik,

antioksidan

2. Choline, chromium, fiber,

magnesium, niacin, sorbitol, zinc

Antidiabetik

3. Chromium, niacin Hipoglikemik

4. Salicylic-acid Hipoglikemik, antioksidan

5. Allantoin, apigenin, aucubin,

baicalin, beta-carotene, caffeicacid, ferulic-

acid, fumaric-acid,

geniposidic-acid, gentisic-acid,

hispidulin, luteolin, oleanolicacid, p-

coumaric-acid, p-hydroxybenzoic-acid,

riboflavin

selenium, syringic-acid, tannin

tyrosol, vanillic-acid

Antioksidan, antibakteri,

antijamur

10

2.1.5 Manfaat Plantago major L.

Studi etnofarmakologis dari ramuan P.major L. dilaporkan menunjukkan

efek yang mampu menekan pada pembentukan parut, aktivitas antimikroba, dan

tingkat kolesterol darah (ÖZKAN, METİNER and AK, 2012). Tanaman daun

sendok sering digunakan masyarakat sebagai obat untuk untuk keluhan berbagai

penyakit seperti luka, antidiabetes, antidiare, nyeri perut akibat peningkatan asam

lambung, disentri, gatal-gatal pada kulit, sariawan, dan peradangan gusi. Flavonoid

yang diisolasi dari P.major L. memiliki aktivitas biologis seperti antiallergenic,

antivirus, anti-aksi inflamasi, dan vasodilatasi serta kemampuannya menginduksi

kematian karsinoma. Turunan utama asam caffeic yaitu Plantamajoside yang

memiliki aktivitas sebagai anti-inflamasi, antioksidan, antibakteri, dan antijamur

(Stanisavljević et al., 2008).

Penelitian yang dilakukan oleh Stanisavljević et al., 2008 melaporkan bahwa

ekstrak etanol daun Plantago major L. yang diujikan terhadap Candida albicans

dengan ekstrak 20 mg/ml menunjukkan zona hambat sebesar 17mm dengan kontrol

positif Erytromycin 0.05mg/ml yang menunjukkan zona hambat sebesar 23mm.

Hal ini menunjukkan bahwa kandungan dari daun Plantago major mampu

memberikan efektivitas sebagai antijamur (Stanisavljević et al., 2008).

Karima, Farida and Mihoub, 2015 melaporkan bahwa ekstraksi Plantago

major L. menggunakan petroleum ether, ethyl acetate, dan air tidak menunjukkan

adanya efek antijamur terhadap Candida albicans (Karima, Farida and Mihoub,

2015). Aktivitas antijamur tertinggi diamati dengan ekstrak etanol daun Plantago

major L. bahkan pada konsentrasi rendah 20 ppm (aktivitas 78%) yang diujikan

terhadap Candida albicans, Candida glabrata, dan Candida krusei. Dalam

konsentrasi yang sama ekstrak biji etanol memiliki aktivitas sangat rendah (25%).

Aktivitas antijamur dari kedua ekstrak tersebut meningkat dengan cara yang

tergantung konsentrasi, hingga 60 ppm. Tingkat aktivitas antioksidan untuk kedua

ekstrak sangat dekat dalam konsentrasi 100ppm. Ekstrak air panas dan dingin daun

Plantago major L. lebih efektif daripada ekstrak biji. Juga diamati bahwa ekstrak

etanol lebih aktif daripada ekstrak air panas dan dingin dari sampel yang diteliti

Hasil penelitian menunjukkan bahwa sifat antijamur yang diujikan terhadap

Candida albicans, Candida glabrata, dan Candida krusei, disebabkan oleh gugus

11

hidroksil yang ada dalam senyawa fenolik daun Plantago major L.. Konsentrasi

ekstrak 0,8 mg/ml memiliki aktivitas antijamur 89,3 ± 1,5 %. Kandungan total fenol

pada daun yang bertanggung jawab atas aktivitas antijamur, diukur sebesar 31±4

mg/ml. Mekanisme lain yang bertanggung jawab atas aktivitas antijamur Plantago

major L. adalah bahwa flavonoid yang sangat aktif yang memiliki 3', 4'-dihidroksi

ditempati cincin B dan / atau kelompok 3-OH yang dapat merangkul radikal oksigen

dan menguranginya menjadi zat yang dinetralkan seperti air (Nazarizadeh et al.,

2013).

Senyawa Aucubin dan Baicalein yang diisolasi dari ekstrak etanol P. major

L. menunjukkan aktivitas antijamur terhadap C. albicans. Konsentrasi hambatan

minimum Aucubin (61 - 244 μg/ml) dan baicalein (0,0063 - 100 μg/ml) pada total

pertumbuhan C. albicans terlihat jelas pada konsentrasi tertinggi mereka dan

penghambatan tergantung pada dosis. Konsentrasi fungisida minimum dievaluasi

setelah 48 jam inkubasi, dan Aucubin (244 μg/ml) menunjukkan aktivitas fungisida

yang kuat pada konsentrasi tertinggi terhadap pertumbuhan C. albicans. Tidak ada

pertumbuhan atau pengurangan pertumbuhan C. albicans pada konsentrasi aucubin

tertinggi (61 - 244 μg/ml) dan baicalein (25 - 100 μg/ml). Demikian pula, efek dari

reagen ini pada aktivitas antijamur C. albicans menunjukkan efektivitas tinggi pada

konsentrasi tertinggi mereka (Shirley et al., 2015).

Penelitian yang dilakukan oleh Sharma et al., 2016 menggunakan ekstrak

etanol 67% P. major L., Glycyrrhiza glabra, dan Ficus religiosa yang masing-

masing konsentrasi 5mg/ml dengan kontrol positif Flukonazol 10 µg, Itraconazol

10 µg, dan Clotrimazol 10 µg menunjukkan aktivitas antijamur terhadap C.

albicans. Ekstrak P.major menunjukkan rata-rata zona hambat 10,6±0,89 mm yang

mirip dengan agen antijamur sintetis Itraconazole 10 µg (zona hambat 10,2±0,83

mm). Ekstrak G. glabra menunjukkan rata-rata zona hambat 19,8±0,83 mm.

Ekstrak F. religiosa menunjukkan rata-rata zona hambat 11,4±0,54 mm.

Flukonazol 10 µg menunjukkan rata-rata zona hambat 15,8±2,16 mm. Clotrimazol

menunjukkan rata-rata zona hambat 22,4±0,54 mm. Penelitian mengungkapkan

bahwa ekstrak etanol Glycyrrhiza glabra konsentrasi 5mg/ml menunjukkan sifat

penghambatan yang kuat pada C. albicans dibandingkan dengan ekstrak lain dan

juga dibandingkan dengan agen antijamur sintetis Flukonazol 10 µg dan Itrakonazol

12

10 µg, tetapi kurang efikasinya dibandingkan dengan Clotrimazole 10 µg. Ficus

religiosa dan Plantago major L. menunjukkan khasiat yang mirip dengan agen

antijamur sintetis Itraconazole (10 µg). Kemanjuran serupa yang ditunjukkan oleh

Ficus religiosa dan Plantago major L. dibandingkan dengan antijamur sintetis

menunjukkan hasil yang menjanjikan untuk digunakan sebagai bahan yang

berpotensi alami dalam obat kumur antijamur, dan komponen pelega tenggorokan

yang perlahan larut (Sharma et al., 2016).

Uji antijamur yang dilakukan oleh Nopiyanti 2015 dengan menggunakan

ekstrak etanol 70% akar Plantago major L. terhadap C. albicans dan Trichophyton

rubrum secara dilusi menunjukan hasil yang positif sebagai antijamur. Hasil

penelitian menunjukkan bahwa semakin encer konsentrasi ekstrak didapat

kekeruhan yang semakin meningkat yang ditandai dengan adanya pertumbuhan

koloni jamur, hal ini disebabkan semakin kecil konsentrasi ekstrak menyebabkan

aktivitas hambat dan bunuh terhadap Candida albicans dan Trichophyton rubrum

semakin kecil. KHM ditunjukkan pada konsentrasi kecil ekstrak pada tabung reaksi

yang jernih yang jika dilakukan perataan pada medium SDA akan tumbuh koloni,

sedang KBM ditunjukkan pada konsentrasi ekstrak pada perataan yang tidak ada

pertumbuahan jamur uji. Ekstrak Plantago major L. mempunyai KHM 6,25% untuk

Candida albicans dan 3,13% untuk Trichophyton rubrum, sedangan KBM 12,5%

untuk Candida albicans dan 6,25% untuk Trichophyton rubrum (Nopiyanti, 2015).

Ekstrak etanol daun dan akar dari Plantago major L. memiliki aktivitas

sebagai antijamur terhadap Candida albicans dengan kontrol positif Itraconazol 10

µg. Ekstrak Plantago major L. dengan konsentrasi 5 mg/ml mampu menghasilkan

zona hambat 9,8±0,44 mm dan Itraconazol 10 µg menghasilkan zona hambat

9,6±0,54 mm yang diinkubasi selama 48 jam. Pengujian dilakukan hingga inkubasi

72 jam yang menghasilkan zona hambat pada ekstrak sebesar 8,8±1,09 mm dan

Itraconazol 10 µg 8,6±0,54 mm. Ekstrak Plantago major L. menunjukkan hasil

zona hambat yang mirip dengan Itraconazole yang diinkubasi hingga 72 jam. Hal

ini menunjukkan bahwa ekstrak Plantago major L. memiliki aktivitas antijamur

yang yang lebih tinggi daripada Itraconazol 10 µg meskipun telah diinkubasi

hingga 72 jam sehingga ekstrak Plantago major L. mampu dijadikan bahan obat

antijamur (Najafian et al., 2018).

13

Penelitian terbaru tahun 2019 uji antijamur menggunakan ekstrak etanol dan

aquous Plantago major L. yang diujikan terhadap Saccharomyces cerevisiae

menggunakan metode nanopartikel Ag dan AgCl dengan konsentrasi 30µg/ml

menunjukkan hasil yang efektif sebagai antijamur. Hasil tes antijamur dengan

nanopartikel perak yang disintesis dalam medium berair pada suhu 85ºC dan di

bawah sinar matahari pada Saccharomyces cerevisiae yang diukur pada panjang

gelombang 600nm spektrometer UV-Vis, menunjukkan jumlah sel yang sama

dalam media yang diuji. Konsentrasi nanopartikel terendah 5mg/ml telah

menunjukkan pemisahan antar sel pada jamur. Pada konsentrasi tertinggi 100mg/ml

tidak menunjukkan pertumbuhan jamur yang sama hasilnya dengan kontrol positif

AgNO3. Dalam semua kasus, nanopartikel perak menunjukkan sifat biosida yang

efisien terhadap bakteri dan jamur, dengan toksisitas yang lebih tinggi terhadap

bakteri. Akhirnya, sintesis dimediasi ekstrak Plantago major L. tampaknya menjadi

metode yang efisien dan hemat biaya untuk sintesis nanopartikel perak antimikroba

(Küünal et al., 2019).

2.2 Candida tropicalis

Candida tropicalis adalah spesies ragi dalam genus Candida . Ini adalah

patogen yang umum pada inang neutropenik, di mana dapat menyebar melalui

aliran darah ke organ perifer. Untuk penyakit invasif dapat dilakukan perawatan

dengan Amfoterisin B, Echinocandin, atau antijamur triazol dengan spektrum luas.

Dalam genus Candida, ada spesies lain yang identik dengan Candida tropicalis.

Candida albicans secara taksonomi dekat dengan C. tropicalis yang berbagi banyak

sifat patogen, sedangkan C. maltosa dan C. sake secara fisiologis mirip dengan C.

tropicalis tetapi mereka dapat dibedakan dengan pertumbuhan pada 35° C (hanya

C. sake yang menunjukkan negatif) dan asimilasi pati larut (hanya C. tropicalis yang

menunjukkan asimilasi pati positif) (Mastromarino, Vitali and Mosca, 2013).

Candida tropicalis awalnya diisolasi dari pasien dengan bronkitis jamur pada

tahun 1910 dan dinamai Oidium tropicale. Ini adalah ragi milik Filo Ascomycota,

dari kelas Hemiascomycetes, yang memiliki Orde tunggal yang dibuat pada tahun

1960 oleh Kudrjavzev, yang disebut Saccharomycetales. Silsilah monofiletik ini

terdiri dari sekitar 1.000 spesies yang diketahui, termasuk beberapa ragi yang

https://translate.googleusercontent.com/translate_c?client=srp&depth=1&hl=id&rurl=translate.google.com&sl=en&sp=nmt4&tl=id&u=https://en.m.wikipedia.org/wiki/Candida_(fungus)&xid=17259,15700022,15700186,15700191,15700256,15700259,15700262,15700265,15700271&usg=ALkJrhjyuS7hncqf6qQ_rQXpppsCVrg1Qghttps://translate.googleusercontent.com/translate_c?client=srp&depth=1&hl=id&rurl=translate.google.com&sl=en&sp=nmt4&tl=id&u=https://en.m.wikipedia.org/wiki/Amphotericin_B&xid=17259,15700022,15700186,15700191,15700256,15700259,15700262,15700265,15700271&usg=ALkJrhjaMkSN5Cyd_x43UOKv9DtWQQPXSwhttps://translate.googleusercontent.com/translate_c?client=srp&depth=1&hl=id&rurl=translate.google.com&sl=en&sp=nmt4&tl=id&u=https://en.m.wikipedia.org/wiki/Echinocandin&xid=17259,15700022,15700186,15700191,15700256,15700259,15700262,15700265,15700271&usg=ALkJrhihvT2pbKzuePvBgCWCU-hAlTZ3hwhttps://translate.googleusercontent.com/translate_c?client=srp&depth=1&hl=id&rurl=translate.google.com&sl=en&sp=nmt4&tl=id&u=https://en.m.wikipedia.org/wiki/Triazole_antifungal&xid=17259,15700022,15700186,15700191,15700256,15700259,15700262,15700265,15700271&usg=ALkJrhj1bI750FAleKU4AUWR-8X-Jyb0vA

14

penting secara medis seperti C. tropicalis. Menurut Kurtzman et al. (2011) Koloni

Candida tropicalis pada Sabouraud Dextrose Agar (SDA) berwarna putih sampai

krem, dengan tekstur krem dan penampilan halus dan mungkin memiliki tepi yang

sedikit kusut. Oleh karena itu, tidak dapat dibedakan dari spesies Candida lainnya.

Setelah 7 hari mikrokultur pada agar tepung jagung yang mengandung Tween 80,

diinkubasi pada suhu 25oC, blastokonidia bulat atau ovoid, yang dapat digolongkan

sebagai pasangan, berukuran 4–8 × 5–11 mm, pseudohiphae dalam rantai

bercabang, dan bahkan hifa yang benar dapat diamati. Sehubungan dengan

karakteristik biokimia, diketahui bahwa Candida tropicalis mampu memfermentasi

galaktosa, sukrosa, maltosa, dan trehalosa, selain mengasimilasi karbohidrat ini dan

karbohidrat lain melalui jalur oksidatif (Kurtzman Cletus, J.W. Fell, and Teun

Boekhout, 2011).

2.2.1 Klasifikasi Candida tropicalis

Candida tropicalis adalah ragi diploid, yang genomnya diurutkan pada tahun

2009 (strain MYA-3404). Ini memiliki ukuran genomik 14,5Mb, mengandung

6.258 gen yang mengkode protein dan kandungan guanin-sitosin 33,1 %. Jumlah

kromosom tidak diketahui dengan presisi. Pada tahun 2013 dilakukan penelitian

terhadap Candida tropicalis dan dilaporkan 12 kromosom per sel untuk Candida

tropicalis. Telah banyak dipercaya bahwa Candida tropicalis adalah ragi aseksual.

Namun, beberapa penelitian yang dilakukan baru-baru ini melaporkan bahwa

perkawinan antara sel diploid a dan α, menghasilkan sel tetraploid a / α dapat terjadi.

Perkawinan semacam itu diatur oleh Switching Fenotip koloni, di mana sel-sel

berubah dari putih menjadi buram (Porman et al., 2013).

Klasifikasi

Kingdom : Fungi

Phylum : Ascomycota

Class : Saccharomycetes

Order : Saccharomycetales

Family : Debaryomycetaceae

Genus : Candida

Species : Non Candida Albicans Candida (NCAC)-Candida tropicalis

Sinonim : Oidium tropicale Castellani, Endomyces tropicalis Castellani,

15

Atelosaccharomyces tripocallis Castellani.

(Kurtzman Cletus, J.W. Fell, and Teun Boekhout, 2011).

(a) (b)

Gambar 2.2 (a) Candida tropicalis (Mita, 2016) (b) Candida tropicalis pada

ekstrak yeast (MMRC, 1999)

2.2.2 Morfologi Candida

Sel jamur Candida berbentuk bulat, lonjong atau bulat lonjong. Koloninya

pada medium padat sedikit timbul dari permukaan medium, dengan permukaan

halus, licin atau berlipat-lipat, berwarna putih kekuningan dan berbau ragi. Besar

koloni bergantung pada umur. Pada tepi koloni dapat dilihat hifa semu sebagai

benang-benang halus yang masuk ke dalam medium. Pada medium cair jamur

biasanya tumbuh pada dasar tabung (Suprihatin, 1982).

Candida tropicalis adalah sel vegetatif dengan bentuk dari bulat ke oval

mulai dari sekitar 2 - 10 mikrometer. Cetakan menunjukkan dimorfisme

membentuk ragi sel tunggal atau disebut blastoconidia yang mereproduksi dengan

tunas sederhana. Conidia adalah unit aseksual yang dihasilkan oleh tunas ujung atau

dinding hifa. Conidia adalah jenis tubuh sederhana dan uniseluler yang dapat

berbentuk sel multisel dengan berbagai bentuk, ukuran, dan warna. Mikrokonidia

digunakan untuk merujuk pada konidia kecil dan uniseluler sedangkan

makrokonidia mengacu pada konidia besar dan multiseluler. Struktur dinding sel

tersusun oleh protein hidrofobik yang tertanam dalam matriks seluler yang mungkin

mendukung interaksi awal, karena partikel hidrofobik cenderung melekat pada

beragam bahan plastik dan protein inang seperti laminin, fibronogen, dan

fibrektektin (Rippon, 1988).

2.2.2.1 Sifat Biakan

Kemampuan sel-sel ragi untuk membentuk biofilm merupakan penentu

penting virulensi di Candida dan telah dianggap sebagai bentuk utama

16

pertumbuhan mikroba baru-baru ini. Biofilm adalah struktur kompleks yang

dibentuk oleh komunitas mikroorganisme yang melekat pada permukaan padat

yang bersifat biotik atau abiotik. Oleh karena itu, pembentukan biofilm in vitro

dapat diatur dengan tiga langkah penting, sebagai berikut: adhesi dan kolonisasi sel

ragi pada permukaan; pertumbuhan dan proliferasi sel, membentuk lapisan basal;

dan pseudohifa dan / atau formasi hifa sejati (untuk spesies yang mampu

membentuk filamen), dengan sekresi matriks ekstraseluler eksopolimer berikutnya

yang menggunakan fenotip mikroorganisme yang mengalami perubahan mikro.

Matriks exopolymeric (EPS) dapat disekresikan oleh populasi yang berbeda dari

masing-masing spesies yang unik atau berbeda budaya (Adam et al., 2002).

Beberapa keuntungan dari pembentukan biofilm meliputi: perlindungan

mikroorganisme terhadap kerusakan lingkungan, ketersediaan nutrisi, kerja sama

metabolisme, dan perolehan modifikasi genetik (Zuza-Alves, Silva-Rocha and

Chaves, 2017)

Ada berbagai media tempat Candida tropicalis dapat tumbuh secara efektif.

Media yang umum digunakan adalah agar Sabouraud yang mengandung pepton dan

gula. Ini cukup untuk mengidentifikasi spesies tetapi dengan kerugian

mempromosikan pertumbuhan miselia dan menekan pembentukan konidia. Media

lain yang umum digunakan adalah agar tepung jagung yang berguna dalam

menginduksi pembentukan konidia. Kentang-glukosa, kentang-wortel, jus tomat,

kacang dan lainnya juga merupakan jenis media yang digunakan untuk

pertumbuhan. Suhu optimal untuk pertumbuhan adalah antara 25-35 ° C (77-95 °

F) dan pertumbuhan ditingkatkan jika gula atau lemak ditambahkan dalam medium.

Koloni C. tropicalis berwarna putih, halus dan butyrous dengan garis tepi yang

dibatasi. (Rippon, 1988)

2.2.2.2 Sifat Pertumbuhan

Tahap stabilitas pertumbuhan adalah keadaan ketika Candida yang telah

masuk melalui akuisisi dapat menetap, berkembang dan membentuk populasi

dalam rongga mulut. Hal itu berkaitan erat dengan interaksi antara sel jamur dengan

sel epitel rongga mulut hospes. Pergerakan saliva yang terjadi secara terus menerus

mengakibatkan sel Candida tertelan bersama saliva dan keluar dari dalam rongga

mulut. Jika penghilangan lebih besar dari akuisisi maka tidak terjadi kolonisasi. Jika

17

penghilangan sama banyak dengan akuisisi maka agar terjadi kolonisasi diperlukan

faktor predisposisi. Jika penghilangan lebih kecil dari pada akuisisi maka Candida

akan melekat dan bereplikasi. Hal itu yang merupakan bagian penting kolonisasi

yang merupakan awal terjadinya infeksi. Pertumbuhan Candida dalam rongga

mulut dipengaruhi oleh beberapa faktor, yaitu:

a. Saliva

Saliva memiliki kemampuan untuk menurunkan perlekatan Candida pada

permukaan akrilik biomaterial mulut. Menurunnya jumlah saliva dan ketiadaan

antifungal dalam saliva seperti laktoferrin dan lisosim dapat meningkatkan

jumlah Candida dalam rongga mulut.

b. Keasaman/pH

Secara umum kondisi pH yang menurun mendukung pertumbuhan dan

kolonisasi Candida.

c. Bakteri Rongga Mulut

Pertumbuhan dan kolonisasi Candida dapat diperbanyak dengan keberadaan

beberapa bakteri yang merupakan flora normal rongga mulut seperti

Streptococcus sanguis dan Streptococcus gordonii. Kompetisi dan

penghambatan oleh flora normal rongga mulut merupakan bagian penting dalam

membatasi pertumbuhan jamur. Interaksi mikroorganisme berupa kompetisi

nutrisi, perubahan dalam lingkungan mikro, pengembangan toksin dan hasil

produk metabolik. Flora normal bakteri dapat menurunkan kolonisasi Candida

dengan jalan kompetisi untuk melekat pada sel epitel rongga mulut.

d. Temperatur

Suhu lingkungan saat pertumbuhan diketahui mempengaruhi morfologi sel

jamur dimorfik termasuk Candida. Kemampuan Candida untuk tumbuh pada

suhu 37ºC menunjukkan Candida dapat bersifat patogen.

e. Glukosa

Salah satu penyebab kolonisasi adalah keberadaan karbohidrat dalam

jumlah besar. Glukosa merupakan bahan dasar pembentukan mannoprotein

(glikoprotein) pada dinding sel Candida yang diketahui dapat meningkatkan

daya adesi dan produksi asam yang menurunkan pH rongga mulut.

(Scully, Ei-Kabir and Samaranayake, 1994)

18

2.2.2.3 Patogenesis Candida tropicalis

Candida tropicalis adalah yang paling ganas dari spesies NCAC. Ini

mungkin karena kemampuannya untuk mematuhi sel-sel epitel in vitro dan

kemampuannya untuk mengeluarkan proteinase tingkat sedang. Biasanya diisolasi

dari rongga mulut dan kulit. Ini juga dapat menyebabkan infeksi kerongkongan.

Kasus terakhir, bagaimanapun, telah terbukti berkorelasi dengan penyakit sistemik,

dengan kata lain, kesehatan umum yang buruk membuat pasien bertanggung jawab

untuk kandida yang disebabkan oleh jenis ini (Meurman et al., 2007)

Untuk memfasilitasi invasi jaringan host, beberapa mikroba patogen

mengeluarkan enzim litik seperti proteinase, fosfolipase, dan hemolisin untuk

menghancurkan, mengubah, atau merusak integritas membran inang, menyebabkan

disfungsi, atau pecahnya sel inang. Spesies Candida patogen menghasilkan

sejumlah besar hidrolase, termasuk proteinase aspartik (Saps) yang disekresikan

(Sanitá et al., 2014).

Protein-protein ini telah diselidiki secara intens dan memiliki berbagai

macam substrat, termasuk kolagen, queratin, dan musin. Mereka memiliki

kemampuan untuk mendegradasi hambatan epitel, antibodi, komplemen, dan

sitokin dan dikodekan oleh keluarga gen yang hebat. Keluarga gen Secreted

Aspartyl Proteinase (SAP) terdiri oleh 10 gen dan awalnya dijelaskan dalam C.

albicans. Gen-gen ini secara berbeda diatur dan diekspresikan dalam beberapa

kondisi laboratorium dan diaktifkan selama beberapa tahap infeksi in vivo. Selain

itu, beberapa gen SAP lebih penting untuk superfisial daripada infeksi sistemik, dan

juga terlibat dalam proses patogenik lainnya dalam C. albicans, seperti adhesi,

invasi jaringan host, dan penghindaran sel sistem imunologis. Sudah diketahui sejak

tahun 1983 bahwa C. tropicalis mampu mengeluarkan proteinase sebagai salah satu

penentu paling penting dari virulensi spesies ini. Adhesi merupakan faktor yang

berpengaruh pada proses infeksi dan patogenitas. Perubahan yang terjadi dari

bentuk khamir ke filamen dan produksi enzim ekstraseluler. Adhesi melibatkan

interaksi antara reseptor dan ligan pada sel inang dan proses melekatnya sel Candida

ke sel inang. Perubahan bentuk dari khamir ke filamen diketahui berhubungan

dengan patogenitas dan proses penyerangan Candida terhadap sel inang yang

diikuti pembentukan lapisan biofilm sebagai salah satu cara Candida. Untuk

19

mempertahankan diri dari obat antifungi. Produksi dari enzim hidrolitik ektraseluler

yaitu aspartyl proteinase sering dihubungkan dengan patogenitas Candida. (Hube

and Naglik, 2001).

Peningkatan virulensi isolat C. tropicalis diamati ketika diberikan secara

oral kepada tikus yang dikompromikan, yang sejajar dengan pengamatan klinis

pada pasien immunocompromised. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa

C.tropicalis bahkan lebih invasif daripada C.albicans di usus manusia, terutama

pada pasien onkologi. Aktivitas Aspartyl Proteinase 5 dan 9 (SAP5 dan SAP9) yang

disekresikan terjadi pada semua spesies Candida, dengan urutan sebagai berikut: C.

albicans, C. tropicalis, Candida kefyr, Candida krusei. Beberapa penelitian

eksperimental telah menyarankan bahwa, setelah menelan sel ragi oleh sel fagosit,

antigen SAP disekresikan oleh C.albicans dan C.tropicalis, tetapi tidak oleh

C.parapsilosis (Mitchell et al., 1982). Protease aspartik yang disekresikan oleh

C.tropicalis juga telah ditunjukkan pada permukaan dinding sel jamur sebelum

menyerang jaringan selama infeksi disebarluaskan dan menyerang makrofag

setelah fagositosis sel ragi (Walsh and Merz, 1986).

Beberapa spesies CNA yang sebelumnya dianggap SAP negatif sebenarnya

adalah proteolitik. Tropiase yang dimurnikan dari C.tropicalis (novel acid

proteinase) menunjukkan aktivitas perdarahan dan kemampuan untuk

meningkatkan permeabilitas kapiler (Mitchell et al., 1982). Untuk memeriksa sifat-

sifat merusak tropiase pada manusia, evaluasi komprehensif dalam pengaturan

klinis (gastroenterologi) perlu difokuskan pada pasien yang terinfeksi C. tropicalis

yang juga menderita kolitis ulserativa atau berbagai tingkat penyakit atau

komplikasi gastrointestinal. Studi terbaru pada tiga faktor virulensi kunci spesifik

(proteinase, fosfolipase dan biofilm) menunjukkan bahwa deteksi enzim hidrolitik

dan kemampuan ragi Candida untuk membentuk biofilm mungkin merupakan

indikator yang berguna untuk kemungkinan infeksi hematogen. Temuan tersebut

dapat mendukung dokter dalam pengelolaan pasien yang memiliki risiko tinggi

infeksi Candida hematogen (Kothavade et al., 2010).

2.2.3 Manifestasi Klinis

Gejala yang timbul adalah adanya bercak putih pada lidah dan sekitar mulut

bayi dan sering menimbulkan nyeri. Infeksi mulut oleh spesies Candida biasanya

20

memunculkan kumpulan lapisan kental berwarna putih atau krem pada membran

mukosa (dinding mulut dalam). Pada mukosa mulut yang terinfeksi mungkin

muncul radang berwarna merah, nyeri, dan terasa seperti terbakar.

1. Pada anak-anak dan dewasa

Awalnya, seseorang mungkin tidak menyadari gejala oral trush.

Tergantung pada penyebab, tanda dan gejala dapat terjadi tiba-tiba dan

bertahan untuk waktu yang lama. Gejala-gejala tersebut, antara lain:

a. Lesi putih atau krem di lidah, pipi bagian dalam, langit-langit mulut, gusi,

dan amandel (tonsil),

b. Lesi menyerupai keju,

c. Nyeri,

d. Sedikit perdarahan jika lesi digosok atau tergores,

e. Pecah-pecah dan kemerahan pada sudut mulut (terutama pada pemakai

gigi tiruan),

f. Sensasi seperti terdapat kapas pada mulut,

g. Kehilangan selera makan.

2. Pada bayi dan ibu menyusui

Selain lesi mulut khas berwarna putih, bayi mungkin juga memiliki

kesulitan makan atau rewel dan mudah marah. Bayi dapat menularkan infeksi

tersebut kepada ibu mereka selama menyusui. Wanita yang payudaranya

terinfeksi candida mungkin mengalami tanda-tanda dan gejala, antara lain:

a. Puting berwarna sangat merah, sensitif, dan gatal,

b. Terdapat serpihan kulit di daerah berwarna gelap yang melingkari puting

(areola),

c. Puting terasa sakit saat menyusui,

d. Sakit yang tajam jauh di dalam payudara.

(Rossie and Guggenheimer, 1997)

2.3 Antijamur

Antijamur merupakan bagian antibiotik yang dapat memperlambat maupun

membunuh jamur, sedangkan antibiotik sendiri merupakan suatu bahan kimia yang

diperoleh dari atau dibentuk oleh berbagai spesies mikroorganisme, yang dalam

21

konsentrasi rendah mampu menghambat pertumbuhan mikroorganisme (Lyu et al.,

2016).

Menurut indikasi klinis obat antijamur dibedakan menjadi 2 macam, yaitu:

1. Antijamur untuk infeksi sistemik, yaitu: Imidazole (ketoconazol,

mikonazol, flukonazol), amfiterisin B, hidroksisistilbamidin, dan

flusitosin.

2. Antijamur untuk infeksi mukokutan dan dermatofit ,yaitu: nistatin,

griseofulfin, tolnaftat, golongan imidazole(tiokonazol, klotrimazol,

isokonazol, ekonazol, bifonazol, dan mikonazol)

2.3.1 Obat Antijamur Golongan Polien (Nistatin)

Gambar 2.3 Struktur Kimia Nistatin (Dobias & Hazen, 1961)

Nistatin (Candistatin, Mycostatin), diisolasi dari Streptomyces noursei, dan

tersedia dalam berbagai bentuk, seperti suspensi oral, pil oral, krim topikal. Nistatin

digunakan secara oral maupun lokal, untuk pengobatan infeksi yang disebabkan

oleh Candida spp. Nistatin tidak terserap ketika berada di saluran gastrointestinal

saat diberikan secara oral, sehingga penggunaan nistatin topikal dianggap sebagai

jalur administrasi yang paling umum dalam kedokteran gigi, karena paparan

sistemik minimal. Selanjutnya, nistatin juga berperan penting dalam profilaksis

kandidiasis oral dan sistemik pada bayi baru lahir dan prematur, bayi, dan pasien

dengan immunocompromised (misalnya, pasien AIDS, pasien kanker, dan

penerima transplantasi organ), karena dikaitkan dengan rendahnya insiden interaksi

obat dan biaya yang dapat diterima, terutama di negara-negara berkembang. Dosis

umum yang disarankan untuk penggunaan nistatin topical adalah 200.000-600.000

IU/hari untuk anak-anak dan orang dewasa, dan 100.000-200.000 IU/hari untuk

bayi dan bayi baru lahir. Durasi pengobatan dapat bervariasi dari 1 atau 2 sampai 4

minggu (Lyu et al., 2016).

22

2.3.2 Mekanisme Kerja Nistatin

Nistatin akan diikat oleh jamur. Aktivitas antijamur tergantung dari adanya

ikatan dengan sterol pada membran sel jamur terutama ergosterol. Sehingga

mengakibatkan gangguan pada permeabilitas membrane sel jamur dan mekanisme

transpornya. Kompleks polien-ergostrerol yang terjadi dapat membentuk satu pori,

dan melalui pori tersebut konstituen esensial sel jamur bocor keluar sehingga

menyebabkan penghambatan pertumbuhan jamur (Lyu et al., 2016).

2.4 Mekanisme Obat Antijamur

Mekanisme kerja obat antijamur adalah dengan mempengaruhi sterol membran

plasma sel jamur, sintesis asam nukleat jamur, dan dinding sel jamur yaitu β

glukan, mannooprotein, dan kitin (Gubbins and Anaissie, 2009).

1. Sterol membran plasma: ergosterol dan sintesis ergosterol.

Ergosterol adalah komponen penting yang menjaga integritas membran

sel jamur dengan cara mengatur fluiditas dan keseimbangan dinding

membran sel jamur. Kerja obat antijamur secara langsung (golongan polien)

adalah menghambat sintesis ergosterol dimana obat ini mengikat secara

langsung ergosterol dan channel ion di membran sel jamur, hal ini

menyebabkan gangguan permeabilitas berupa kebocoran ion kalium dan

menyebabkan kematian sel. Sedangkan kerja antijamur secara tidak langsung

(golongan azol) adalah mengganggu biosintesis ergosterol dengan cara

mengganggu demetilasi ergosterol pada jalur sitokrom P450 (demetilasi

prekursor ergosterol) (Gubbins and Anaissie, 2009).

2. Sintesis asam nukleat

Kerja dari obat antijamur yang mengganggu sintesis asam nukleat dengan

cara menterminasi secara dini rantai RNA dan menginterupsi sintesis DNA.

Sebagai contoh obat antijamur yang mengganggu sintesis asam nukleat

adalah 5 flusitosin (5FC), dimana 5 FC masuk ke dalam inti sel jamur melalui

sitosin permease. Di dalam sel jamur 5FC diubah menjadi 5 fluoro uridin

trifosfat yang menyebabkan terminasi dini rantai RNA. Trifosfat ini juga akan

berubah menjadi 5 fluoro deoksiuridin monofosfat yang akan menghambat

23

timidilat sintetase sehingga memutus sintesis DNA (Gubbins and Anaissie,

2009).

3. Unsur utama dinding sel jamur: glukans

Dinding sel jamur memiliki keunikan karena tersusun atas

mannoproteins, kitin, dan α dan β glukan yang menyelenggarakan berbagai

fungsi, diantaranya menjaga rigiditas dan bentuk sel, metabolisme,

pertukaran ion pada membran sel. Sebagai unsur penyangga adalah β glucan.

Obat antijamur seperti golongan ekinokandin menghambat pembentukan β1,

glukan tetapi tidak secara kompetitif. Sehingga apabila β glukan

tidakterbentuk, integritas struktural dan morfologi sel jamur akan mengalami

lisis (Gubbins and Anaissie, 2009).

2.4.1 Resistensi Antijmur

Resistensi obat terjadi ketika terapi obat yang tepat tidak efektif

menyebabkan persistensi/perkembangan infeksi. Namun, mekanisme molekuler

yang mengarah pada resistensi antijamur sangat kompleks. Sel-sel jamur harus

secara umum beradaptasi dengan keberadaan obat-obatan beracun; strategi survival

molekuler utama meliputi (1) mutasi target obat yang mengurangi keaslian obat, (2)

ekspresi berlebih dari protein target dengan modifikasi daerah gen promotor, (3)

ekspresi sistem e-ux, (4) degradasi obat, dan (5) respons obat pleiotropik.

Kesamaan biologi dari inang eukariotik dan patogen jamur telah menyebabkan

pengembangan obat yang berfokus pada karakteristik spesifik jamur. Misalnya,

target jamur obat jamur. Selain itu, ergosterol hadir dalam membran jamur dan

dapat digunakan sebagai target obat, karena berbeda dari kolesterol yang ada dalam

sel mamalia. Obat antijamur komersial yang bekerja di dinding sel atau pada

ergosterol termasuk azol, echinocandins, dan poliena (Parente-rocha et al., 2017).

Poliena adalah fungisida dan bekerja pada membran. Molekul-molekul ini

adalah produk fermentasi alami dari Streptomyces, dan obat poligen yang paling

banyak digunakan adalah amfoterisin B (digunakan dalam mikosis sistemik).

Selama bertahun-tahun, diyakini bahwa poliena (obat amphipati) berikatan kuat

dengan steroid, menghancurkan proteinradien dan memungkinkan kebocoran ion.

Saat ini, diketahui bahwa kompleks obat-lipid mengekstrak ergosterol dari

fosfolipid dalam membran, menipiskan ergosterol dalam sel. Amphotericin B tahan

24

terhadap perkembangan resistensi, meskipun telah digunakan selama 50 tahun

dalam perawatan klinis. Dalam Candida tropicalis, konten ergosterol yang rendah

dalam membran dikaitkan dengan penurunan kerentanan terhadap amfoterisin B.

Karena Amphotericin B meningkatkan Reactive Oxygen Species (ROS) dalam sel

jamur, amfoterisin B tahan C. tropicalis menghasilkan lebih sedikit ROS dan

mengubah aktivitas mitokondria. Dalam Aspergillus terreus, kerusakan oksidatif

yang disebabkan oleh amfoterisin B lebih penting dalam menyebabkan cedera sel

daripada permeasi membrane (Parente-rocha et al., 2017).

2.5 Tinjauan Tentang Simplisia

2.5.1 Cara Pembuatan Simplisia

Dalam buku Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1989

mendefinisikan bahwa simplisia adalah bahan alamiah yang digunakan sebagai obat

yang belum mengalami pengolahan apapun juga dan kecuali dikatakan lain, berupa

bahan yang telah dikeringkan. Pembuatan simplisia merupakan proses memperoleh

simplisia dari alam yang baik danmemenuhi syarat-syarat mutu yang dikehendaki.

Adapun tahap-tahap proses pembuatan simplisia meliputi:

1. Pengumpulan bahan / panen

a) Pengumpulan atau panen dapat dilakukan dengan tangan atau menggunakan

alat (mesin). Apabila pengambilan dilakukan secara langsung (pemetikan)

maka harus memperhatikan keterampilan si pemetik, agar diperoleh

tanaman/bagian tanaman yang dikehendaki, misalnya dikehendaki daun yang

muda, maka daun yang tua jangan dipetik dan jangan merusak tanaman

lainnya. Kalau menggunakan alat, harus disesuaikan dengan kandungan

kimianya agar tidak merusak zat aktif yang dikandungnya, misalnya jangan

menggunakan alat yang terbuat dari logam untuk simplisia yang mengandung

senyawa fenol dan glukosa (Departemen Kesehatan Republik Indonesia,

1989).

b) Waktu pengumpulan atau panen Kadar kandungan zat aktif suatu simplisia

ditentukan oleh waktu panen, umur tanaman, bagian tanaman yang diambil

dan lingkungan tempat tumbuhnya, sehingga diperlukan satu waktu

pengumpulan yang tepat yaitu pada saat kandungan zat aktifnya mencapai

25

jumlah maksimal tanaman yang diambil harus sehat, tidak berpenyakit atau

terjangkit jamur, bakteri dan virus karena dapat menyebabkan berkurangnya

kandungan zat aktif dan terganggunya proses metabolism serta terbentuknya

prosuk metabolit yang tidak diharapkan (Departemen Kesehatan Republik

Indonesia, 1989).

2. Pencucian dan Sortasi Basah

Pencucian dan sortasi basah dimaksudkan untuk membersihkan simplisia dari

benda-benda asing dari luar (tanah, batu dan sebagainya), dan memisahkan

bagian tanaman yang tidak dikehendaki (Departemen Kesehatan Republik

Indonesia, 1989).

3. Pengeringan

Tujuan pengeringan pada tanaman atau bagian tanaman adalah:

1. Untuk mendapatkan simplisia yang awet, tidak rusak dan dapat digunakan

dalam jangka yang relatif lama.

2. Mengurangi kadar air, sehingga mencegah terjadinya pembusukan oleh jamur

atau bakteri karena terhentinya proses enzimatik dalam jaringan tumbuhan

yang selnya telah mati. Agar reaksi enzimatik tidak dapat berlangsung, kadar

air yang danjurkan adalah kurang dari 10 %.

3. Mudah dalam penyimpanan dan mudah dihaluskan bila ingin dibuat serbuk.

Cara pengeringan dapat dilakukan secara alamiah dan secara buatan.

a. Pengeringan alamiah tergantung dari kandungan zat aktif simplisia,

pengeringan dapat dilakukan dengan dua cara yaitu:

1. Sinar matahari langsung, terutama pada bagian tanaman yang keras

(kayu, kulit biji, biji dan sebagainya) dan mengandung zat aktif yang

relatif stabil oleh panas.

2. Diangin-anginkan dan tidak terkena sinar matahari secara langsung,

umumnya untuk simplisia bertekstur lunak (bunga, daun dan lain-lain)

dan zat aktif yang dikandungnya tidak stabil oleh panas (minyak atsiri).

b. Pengeringan buatan. Cara pengeringan dengan menggunakan alat yang

dapat diatur suhu, kelembaban, tekanan atau sirkulasi udaranya.

4. Pewadahan dan penyimpanan simplisia. Sortasi kering dilakukan sebelum

pewadahan simplisia bertujuan memisahkan sisa-sisa benda asing atau bagian

26

tanaman yang tidak dikehendaki yang tidak tersortir pada saat sortasi basah.

Simplisia yang diperoleh diberi wadah yang baik dan disimpan pada tempat

yang dapat menjamin terpeliharanya mutu dari simplisia. Wadah terbuat dari

plastik tebal atau gelas yang berwarna gelap dan tertutup kedap memberikan

suatu jaminan yang memadai terhadap isinya. Ruangan penyimpanan

simplisia harus diperhatikan suhu, kelembaban udara dan sirkulasi udara

ruangannya (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1989).

2.5.2 Pembuatan Serbuk Simplisia dan Klasifikasinya

Proses awal pembuatan ekstrak adalah tahapan pembuatan serbuk simplisia

kering (penyerbukan). Dari simplisia dibuat serbuk simplisia dengan peralatan

tertentu sampai derajat kehalusan tertentu. Proses ini dapat mempengaruhi mutu

ekstrak dengan dasar beberapa hal sebagai berikut:

1. Makin halus serbuk simplisia, proses ekstraksi makin efektif-efisien,

namun makin halus serbuk, maka makin rumit secara teknologi peralatan

untuk tahapan filtrasi.

2. Selama penggunaan peralatan penyerbukan dimana ada gerakan dan

interaksi dengan benda keras (logam, dll). Maka akan timbul panas (kalori)

yang dapat berpengaruh pada senyawa kandungan. Namun hal ini dapat

dikompensasi dengan penggunaan nitrogen cair (Ditjen POM, 2000).

2.6 Tinjauan Tentang Ekstraksi

2.6.1 Definisi Ekstrak

Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif

dari simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau

hampir semua pelarut diuapkan dan masa atau serbuk yang tersisa diperlakukan

sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Departemen Kesehatan

Republik Indonesia, 1995).

Tumbuhan segar yang telah dihaluskan atau material tumbuhan yang

dikeringkan diproses dengan cairan pengekstraksi. Jenis ekstraksi dan bahan

ekstraksi mana (cairan, ekstraksi, menstruum) yang sebaiknya digunakan, sangat

tergantung kelarutan dan stabilitasnya. Untuk memperoleh sediaan yang cocok

27

umumnya digunakan campuran etanol-air sebagai cairan pengekstraksi (Voight,

1994).

1. Ekstrak kering (Sicca) adalah sediaan padat yang memiliki bentuk serbuk yang

didapatkan dari penguapan oleh pelarut yang digunakan untuk ekstraksi dan

sebaiknya memiliki kandungan lembab tidak lebih dari 5%. Ekstrak kering harus

mudah digerus menjadi serbuk. Ekstrak kering juga bersifat higroskopik, maka

setelah ditimbang harus segera diolah, jika dibiarkan di udara akan berubah

menjadi massa yang bergumpal sehingga tidak dapat diolah dengan baik (Van

Duin, 1947).

2. Ekstrak kental (Spissum) atau ekstrak semisolid, adalah sediaan yang memiliki

tingkat kekentalan di antara ekstrak kering dan ekstrak cair. Suatu ekstrak kental

diartikan dengan ekstrak dengan kadar air antara 20-25%; hanya pada Extractum

Liquiritae diizinkan kadar air sebanyak 35% (Van Duin, 1947).

3. Ekstrak cair (Liquidum) adalah sediaan cair simplisia nabati, yang mengandung

etanol sebagai pelarut atau sebagai pengawet atau sebagai pelarut dan pengawet.

Jika tidak dinyatakan lain pada masing-masing monografi, tiap ml ekstrak

mengandung bahan aktif dari 1 g simplisia yang memenuhi syarat. Ekstrak cair

yang cenderung membentuk endapan dapat didiamkan dan disaring atau bagian

yang bening dienaptuangkan. Beningan yang diperoleh memenuhi persyaratan

Farmakope. Ekstrak cair dapat dibuat dari ekstrak yang sesuai (Anonim, 1979).

2.6.2 Definisi Ekstraksi

Ekstraksi adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif

dari simplisia nabati atau simplisia hewani dengan menggunakan pelarut yang

sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan masa atau serbuk

yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan

(Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995).

2.6.3 Metode Ekstraksi

Metode pembuatan ekstrak yang umum digunakan antara lain maserasi,

perkolasi dan sokhletasi. Metode ekstraksi dipilih berdasarkan beberapa faktor

seperti dari bahan mentah obat dan daya penyesuaian dengan tiap macam metode

ekstraksi dan kepentingan dalam memperoleh ekstrak yang sempurna (Ansel,

1989). Sifat dari bahan mentah obat merupakan faktor utama yang harus

28

dipertimbangkan dalam memilih metode ekstraksi. Metode ekstraksi dapat

dilakukan dengan berbagai cara, antara lain:

2.6.3.1 Cara Panas

A. Refluks

Refluks adalah proses penyarian simplisia dengan menggunakan pelarut pada

temperature titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang

relatif konstan dengan adanya pendingin balik (Ditjen POM, 2000).

B. Sokletasi

Sokletasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang dipanaskan hingga

mendidih sehingga uap membasahi serbuk simplisia karena adanya pendingin balik

dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif

konstan (Ditjen POM, 2000).

C. Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada temperatur

yang lebih tinggi dari temperatur ruangan, yaitu secara umum dilakukan pada

temperatur (40-50) °C (Ditjen POM, 2000).

D. Infus

Infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari simplisia dengan air pada

suhu 90°C selama 15 menit (Ditjen POM, 2000). Pembuatan infus merupakan cara

yang paling sederhana untuk membuat sediaan herbal dari bahan lunak seperti daun

dan bunga (BPOM RI, 2010).

2.6.3.2 Cara Dingin

A. Maserasi

Maserasi adalah proses penyarian dengan merendam simplisia dalam pelarut

yang sesuai dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur

ruangan dan terlindung dari cahaya (Ditjen POM, 2000). Maserasi biasanya

dilakukan pada temperatur (15-20) °C dalam waktu selama 3 hari sampai bahan-

bahan yang larut melarut (Ansel, 1989).

B. Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai sempurna

(exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan (Ditjen

POM, 2000). Proses perkolasi memerlukan keterampilan operator yang lebih

29

banyak daripada proses maserasi dan dari kedua proses, perkolasi mungkin lebih

mahal dalam pelaksanaannya, karena memerlukan peralatanyang khusus dan waktu

yang lebih banyak diperlukan oleh operator (Ansel, 1989).

2.7 Tinjauan Pelarut

Pelarut adalah benda cair atau gas yang dapat melarutkan benda padat, cair

atau gas, yang menghasilkan sebuah larutan. Berbagai macam pelarut dapat

digunakan untuk ekstraksi, akan tetapi pelarut toksik harus dihindari (Agoes, 2007).

Dalam penelitian ini digunakan pelarut etanol. Pelarut yang digunakan dalam

proses ekstraksi harus memenuhi syarat-syarat tertentu yaitu:

1. Bersifat selektif.

2. Pelarut harus dapat melarutkan semua zat wangi dengan cepat dan

sempurna serta memungkinkan dapat melarutkan bahan seperti lilin,

pigmen, dan albumin.

3. Mempunyai titik didih yang cukup rendah. Hal ini supaya pelarut dapat

mudah diuapkan tanpa menggunakan suhu tinggi namun titik didih pelarut

tidak boleh terlalu rendah karena akan mengakibatkan kehilangan zat

berkhasiat yang disebabkan oleh penguapan.

4. Bersifat Inert, yaitu pelarut tidak bereaksi dengan komponen minyak.

5. Mudah didapatkan dan murah (Guenther, 1987).

2.7.1 Pelarut Etanol

Etanol juga disebut dengan etil alkohol, dengan rumus kimia C2H5OH atau

CH3CH2OH dengan titik didihnya 78,4°C. Karakteristik etanol yaitu, berupa zat

cair, berbau khas, tidak berwarna, mudah menguap dan terbakar, dapat bercampur

dengan air. Secara umum, penggunaan etanol sebagai pelarut untuk zat organik

maupun zat anorganik (Endah R D et al., 2007).

2.8 Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan suatu teknik pemisahan dengan

menggunakan adsorben (fase stasioner) berupa lapisan tipis seragam yang

disalutkan pada permukaan bidang datar berupa lempeng kaca, pelat aluminium

atau pelat plastik. Teknik kromatografi yang banyak digunakan untuk analisis

30

kualitatif senyawa organik, isolasi senyawa tunggal dari campuran multikomopen,

analisis kuantitatif, dan isolasi berskala preparatif (Hajnos, Sherma and Komsta,

2008; Mukhriani, 2014).

Sorbent yang diterapkan dalam KLT memiliki karakteristik permukaan yang

berbeda dan sifat fisikokimia yang berbeda. Pengembangan kromatografi terjadi

ketika fase gerak tertapis melewati adsorben (Deinstrop, 2007). KLT dapat

digunakan jika:

1. Senyawa tidak menguap atau tingkat penguapannya rendah.

2. Senyawa bersifat polar, semi polar, non polar, atau ionik.

3. Sampel dalam jumlah banyak harus dianalisis secara simultan, hemat biaya, dan

dalam jangka waktu tertentu.

4. Sampel yang akan dianalisis akan merusak kolom pada Kromatografi Cair (KC)

ataupun Kromatografi Gas (KG).

5. Pelarut yang digunakan akan mengganggu penjerap dalam kolom Kromatografi

Cair.

6. Senyawa dalam sampel yang akan dianalisis tidak dapat dideteksi dengan

metode KC ataupun KG atau memiliki tingkat kesulitan yang tingggi.

7. Setelah proses kromatografi, semua komponen dalam sampel perlu dideteksi

(berkaitan dengan nilai Rf).

8. Komponen dari suatu campuran dari suatu senyawa akan dideteksi terpisah

setelah pemisahan atau akan dideteksi dengan berbagai metode secara

bergantian (misalnya pada drug screening).

9. Tidak ada sumber listrik.

Analisis senyawa dengan kromatografi lapis tipis tersebut dengan

menggunakan nilai Rf (Reterdation factor). Posisi noda yang dihasilkan senyawa

(spot) dalam kromatogram lapis tipis dapat dijelaskan dengan faktor retardasi. Rf

didefinisikan sebagai hasil bagi dari jarak antara zona zat dan garis start dengan

jarak antara pelarut dan garis start. Setiap senyawa aktif yang dianalisis memiliki

nilai Rf yang berbeda. Perhitungan nilai Rf pada dasarnya ≤ 1, diawali dengan 0

dan diikuti dengan angka decimal (Deinstrop, 2007).

31

2.8.1 Fase Diam

Fase diam merupakan salah satu komponen penting dalam teknik pemisahan

kromatografi lapis tipis. Fase diam berupa lapisan tipis seragam yang disalutkan

pada permukaan bidang datar berupa lempeng kaca, pelat aluminium, atau pelat

plastik. Fase diam yang digunakan pada kromatografi lapis tipis yaitu plat yang

terdiri dari partikel yang homogen atau berpori (Mukhriani, 2014).

Pelarut dapat berjalan ke atas plat (fase diam) dengan noda sampel pada

pengikat tepat diatas pelarut. Komponen paling polar dari sistem pelarut menjadi

akan memberikan noda pada dekat garis start. Sedangkan yang komponen kurang

polar akan menimbulkan noda menjauhi garis start (Deinstrop, 2007).

Silika atau silika gel adalah fase diam yang paling sering digunakan dalam

teknik pemisahan kromatografi. Penggunaan silika gel sebagai fase diam karena

memiliki karakteristik adsorpsi yang kuat. Selain sebagai adsorben, silika gel

digunakan sebagai pengering karena dapat menyerap berbagai macam zat. Silika

adalah bentuk koloid yang dipolimerisasi asam silikat. Asam silikat, H2SO4, tidak

tersedia sebagai monomer bebas namun tersedia dalam bentuk larutan natrium

silikat. Bila larutan natrium silikat diasamkan maka akan terbentuk polimer silika

polimer. Silika yang digunakan untuk kromatografi mengalami proses pemurnian

untuk menghilangkan kotoran logam dan kemudian dilumatkan, dikeringkan dan

difraksinasi dalam ukuran partikel yang sesuai (Gandjar and Rohman, 2007).

Silika memiliki luas permukaan antara 200-800 m2/g. besarnya luas

permukaan silika menjadikan silika memiliki stuktur yang berpori. Diameter pori

yang baik pada teknik pemisahan kromatografi yaitu 60-150 A (satu angstrom

adalah 10-10 m). Pada teknik pemisahan senyawa dengan KLT menggunakan plat

silika gel G R, G F254 R, H F254 R dll. Plat silika gel tersebut memiliki ketebalan

lapisan 0,25 mm atau 0,5 mm. Ukuran maksimum pelat KLT yang digunakan

adalah 20 × 20 cm (Deinstrop 2007; Gandjar and Rohman, 2007).

2.8.2 Fase Gerak

Fase gerak merupakan zat yang membawa komponen suatu campuran melalui

fase diam. Pada KLT, fase gerak lebih nonpolar daripada fase diam dan dari pelarut

organik. Fase gerak tersebut memiliki tujuan, yaitu untuk:

1. Menjaga analit dalam larutan.

32

2. Mengangkut analit melalui fase diam.

3. Berkontribusi pada pemisahan.

4. Bersaing dengan analit untuk proses adsorpsi pada fase diam. Jika digunakan

fase diam silika yang merupakan adsorben polar maka digunakan fase gerak non

polar. Kekuatan fase gerak ditentukan oleh polaritas pelarut yang digunakan dan

kepolaran pelarut yang digunakan (Deinstrop, 2007; Gandjar and Rohman,

2007).

2.9 Tinjauan Skrining Fitokimia

Fitokimia atau kadang disebut fitonutrien adalah segala jenis zat kimia atau

nutrient yang diturunkan dari tumbuhan, termasuk sayuran dan buah-buahan.

Tumbuhan memproduksi berbagai macam bahan kimia untuk tujuan tertentu, yang

disebut dengan metabolit sekunder. Metabolit sekunder tanaman merupakan bahan

yang tidak esensial untuk kepentingan hidup tanaman tersebut, tetapi mempunyai

fungsi untuk berkompetisi dengan makhluk hidup lainnya. Metabolit sekunder yang

diproduksi tanaman bermacam-macam seperti alkaloid, terpenoid, isoprenoid,

flavonoid, glukosida, glukosinolat, dan asam amino bukan protein (Kristanti et al.,

2008).

Skrining fitokimia merupakan analisis kualitatif terhadap senyawa-senyawa

metabolit sekunder. Suatu ekstrak dari bahan alam terdiri atas berbagai macam

metabolit sekunder yang berperan dalam aktivitas biologinya. Senyawa-senyawa

tersebut dapat diidentifikasi dengan pereaksi-pereaksi yang mampu memberikan

ciri khas dari setiap golongan dari metabolit sekunder, namun secara umum

penentuan golongan senyawa kimia dilakukan dengan cara uji warna dengan

menggunakan pereaksi yang spesifik karena dirasakan lebih sederhana (Harborne

J.B., 1987).

Pada penelitian tumbuhan, untuk aktivitas biologi atau senyawa yang

bermanfaat dalam pengobatan, satu atau lebih konstituen yang mempunyai respon

farmakologi perlu diisolasi. Oleh karena itu pemeriksaan fitokimia, teknik skrining

dapat membantu langkah-langkah fitofarmakologi yaitu melalui seleksi awal dari

pemeriksaan tumbuhan tersebut untuk membuktikan ada tidaknya senyawa kimia

33

tertentu dalam tumbuhan tersebut yang dapat dikaitkan dengan aktivitas biologinya

(Farnsworth, 1996).

2.9.1 Uji Alkaloid

Alkaloid adalah senyawa bahan alam yang mempunyai atom nitrogen yang

bersifat basa pada strukturnya. Nama alkaloid diturunkan dari kata alkalin yang

mendeskipsiksn berbagai nitrogen yang bersifat basa. Alkaloid dihasilkan oleh

berbagai makhluk hidup antara lain bakteri, jamur, tumbuhan, dan binatang.

Berbagai alkaloid dapat dipurifikasi atau dimurnikan dari ekstrak kasarnya dengan

metode ekstraksi asam basa. Untuk mendeteksi adanya alkaloid pada skrining

fitokimia, ada dua jenis reaktan yang tersedia yaitu presipitasi (tes pengendapan)

dan spray (tes dengan penyemprotan) (Hayati, Fasyah and Sa’adah, 2010).

Uji alkaloid dilakukan dengan metode Mayer, Wagner, dan Dragendorff.

Sampel sebanyak 3 mL diletakkan dalam cawan porselin kemudian ditambahkan 5

mL HCl 2 M, diaduk dan kemudian didinginkan pada temperatur ruangan. Setelah

sampel dingin ditambahkan 0,5 g NaCl lalu diaduk dan disaring. Filtrat yang

diperoleh ditambahkan HCl 2 M sebanyak 3 tetes, kemudian dipisahkan menjadi 4

bagian A, B, C, D. filtrat A sebangai blangko, filtrat B ditambah pereaksi Mayer,

filtrat C ditambah pereaksi Wagner, sedangkan filtrat D digunakan untuk uji

penegasan. Apabila terbentuk endapan pada penambahan pereaksi Mayer dan

Wagner maka identifikasi menunjukkan adanya alkaloid. Uji penegasan dilakukan

dengan penambahan ammonia 25% pada filtrat D hingga pH 8-9. Kemudian

ditambahkan kloroform, dan diuapkan diatas waterbath. Selanjutnya ditambahkan

HCl 2 M, diaduk dan disaring. Filtratnya dibagi menjadi 3 bagian. Filtrat A sebagai

blangko, filtrat B diuji dengan pereaksi Mayer, sedangkan filtrat C diuji dengan

pereaksi Dragendorff. Terbentuknya endapan menunjukkan adanya alkaloid

(Harborne J.B., 1987).

2.9.2 Uji Flavonoid

Flavonoid merupakan metabolit sekunder tumbuhan yang umum dikenal

sebagai anti-oksidan, namun sekarang dengan perkembangan ilmu pengetahuan

flavonoid dipergunakan juga sebagai obat kanker dan sakit jantung. Flavonoid

sering juga dikenal dengan bioflavonoid karena sebagian besar berasal dari bahan

biologi atau hayati (Cowan, 1999).

34

Uji flavonoid dapat dilakukan dengan cara sebanyak 3 ml ekstrak eter

diuapkan, dicuci dengan heksana sampai jernih. Residu dilarutkan dalam 20 ml

etanol kemudian disaring. Filtrat dibagi 3 bagian A, B, dan C. filtrat A sebagai

blangko, filtrat B ditambahkan 0,5 ml HCl pekat kemudian dipanaskan pada

penangas air, jika terjadi perubahan warna merah tua sampai ungu menunjukkan

hasil yang positif (metode Bate Smith-Metchalf). Filtrat C ditambahkan 0,5 ml HCl

dan logam Mg kemudian diamati perubahan warna yang terjadi (metode Wilstater).

Warna merah sampai jingga diberikan oleh senyawa flavon, warna merah tua

diberikan oleh flavonol atau flavonon, warna hijau sampai biru diberikan oleh

aglikon atau glikosida (Hayati dkk., 2010).

Untuk uji Analisa KLT dapat menggunakan Fase gerak asam asetat glacial:

butanol: air (1:4:5), dengan penampak noda uap ammonia. Reaksi positif

ditunjukkan dengan terbentuknya noda berwarna kuning cokelat setelah diuapi

ammonia pada pengamatan dengan sinar tampak dan berwarna biru pada UV 366

nm menegaskan adanya kandungan flavonoid (Hayati dkk., 2010).

2.9.3 Uji Steroid/Triterpenoid

Sejumlah sampel dilarutkan dalam 2 ml kloroform dalam tabung reaksi yang

kering, lalu ditambahkan 10 tetes anhidra asetat dan 2 tetes H2SO4 pekat.

Terbentuknya larutan berwarna jingga dan ungu untuk pertama kali menandakan

adanya senyawa triterpenoid, kemudian berubah menjadi biru dan hijau

menunjukkan reaksi positif mengandung senyawa steroid (Nohong, 2009).

Sedangkan untuk uji Analisa KLT Fase gerak yang digunakan adalah Kloroform -

metanol (9:1), dengan penampak noda pereaksi Liberman-Buchard disertai dengan

pemanasan pada suhu 105oC selama 5 menit. Reaksi positif steroid ditunjukkan

dengan adanya noda berwarna hijau biru (Kristanti et al., 2008).

2.9.4 Antrakinon

Antrakuinon termasuk golongan kuinon fenolik yang dalam biosintesisnya

berasal dari turunan fenol. Senyawa golongan kuinon telah tersebar luar di alam

dan senyawa ini memiliki ciri yang sangat reaktif. Kuinon merupakan cincin

aromatik dengan substitusi dua keton. Senyawa ini, bertanggung jawab dalam

reaksi pencoklatan pada buah-buahan dan sayuran dan sebagai perantara melanin

dalam jalur sintesis pada kulit manusia. Dengan menyediakan sumber radikal bebas

35

yang stabil, kuinon merupakan ireversibel kompleks nukleofilik asam amino dalam

protein yang menimbulkan inaktivasi protein dan hilangnya fungsi sehingga besar

potensi kuinon sebagai efek antimikroba (Cowan, 1999). Kuinon memiliki aktivitas

antimikroba yang cukup luas, senyawa tersebut juga dapat membentuk kompleks

dengan asam amino nukleofilik dalam protein sehingga dapat membentuk protein

kehilangan fungsinya. Kuinon bereaksi dengan protein adesin bulu-bulu sel,

polipeptida dinding sel, dan eksoenzim yang dilepaskan melalui membran

(Kristanti et al., 2008).

2.9.5 Polifenol

Polifenol adalah kelompok zat kimia yang ditemukan pada tumbuhan. Zat ini

mempunyai tanda khas yaitu banyak gugus fenol dalam molekulnya. Senyawa fenol

dalam tanaman dibagi dalam 3 kelompok besar yaitu asam fenol, flavonoid dan

tannin (Kristanti et al., 2008).

2.9.6 Uji Tanin

Ekstrak didihkan dengan 20 ml air lalu disaring. Ditambahkan beberapa tetes

feriklorida 1% dan terbentuknya warna coklat kehijauan atau biru kehitaman

menunjukkan adanya tannin. Selain itu untuk uji Analisa KLT dapat dilakukan

dengan Fase gerak metanol-air (6:4), dengan penampak noda Pereaksi FeCl3 5 %.

Reaksi positif ditunjukkan dengan terbentuknya noda berwarna hitam (Banu and

Nagarajan, 2014).

2.10 Uji Kepekaan Terhadap Antijamur

2.10.1 Metode Dilusi

Metode dilusi adalah salah satu metode yang digunakan untuk mengetahui

potensi suatu senyawa terhadap aktifitas mikroba dengan menentukan Konsentrasi

Hambat Minimal (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimal (KBM). Penentuan

KHM dan KBM dilakukan dengan metode dilusi cair Kirby and Bauer yang

dimodifikasi menggunakan media cair Nutrien Broth (NB) dan diukur absorbansi

dengan spektrofotometer UV-Vis sebelum dan sesudah inkubasi untuk melihat

pertumbuhan jamur yang diuji (Fatisa, 2013).

Pada prinsipnya adalah menggunakan satu seri tabung reaksi yang diisi media

cair dan sejumlah tertentu sel mikroba yang diuji. Setelah itu masing-masing diuji

36

dengan obat yang telah diencerkan secara serial, yaitu tabung reaksi tersebut

kemudian diukur absorbansi (Optical Density = OD) jamur dengan menggunakan

spektrofotometer UV-Vis (λ = 480 nm) Selanjutnya tabung-tabung tersebut

diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37°C dalam inkubator. Setelah diinkubasi,

diukur lagi absorbansi jamur dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis (λ =

480 nm). KHM ditentukan dengan membandingkan absorbansi perlakuan inkubasi

dikurangi absorbansi sebelum perlakuan. Nilai KHM (konsentrasi hambat

minimum) sangat bervariasi dan bergantung pada kondisi inkubasi, media

pertumbuhan jamur, jenis kultur yang digunakan, dan bagaimana cara pertumbuhan

jamur yang diteliti (Azrifitria, Aziz and Chairul, 2010; Fatisa, 2013).

2.10.2 Metode Difusi Cakram

Metode difusi cakram merupakan teknik mikrobiologi klasik yang paling

sering digunakan untuk uji kepekaan antimikroba. Hal ini karena metode tersebut

aman, murah, dan efisien. Metode ini dilakukan dengan meletakkan cakram kertas

yang telah direndam larutan uji di atas media padat yang telah diinokulasi dengan

mikroba uji. Zona bening akan terbentuk disekitar cakram sebagai inokulasi dari

pertumbuhan mikroba. Zona bening yang terbentuk pada media yang telah

diinokulasi mikroba disekitar cakram kertas yang di celupkan sampel menunjukkan

aktivitas penghambatan dari sampel terhadap mikroba uji (Ngaisah, 2010; Choma

and Grzelak, 2011).

Pencelupan cakram kertas ke dalam larutan sampel sampai merata di seluruh

permukaan cakram kertas. Cakram dicelupkan ke dalam larutan sampel sampai

merata di seluruh permukaan cakram dengan berbagai macam konsentrasi yang

telah disiapkan. Konsentrasi terendah dari sampel yang mampu menghambat

pertumbuhan mikroba uji merupakan nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM).

Penuangan media nutrient agar (NA) yang telah disterilkan ke dalam petridish.

Agar-agar biasanya mengandung (berat/volume): 30,0% infus daging sapi; 1,75%

kasein hidrolisat; 0,15% tepung; agar agar 1,7%; pH disesuaikan ke netral pada

suhu 25°C (Ngaisah, 2010; Choma and Grzelak, 2011).

Media nutrient agar (NA) yang telah dingin dan memadat selanjutnya di

tanami jamur. Jamur yang di tanam diratakan hingga seluruh permukan nutrient

agar (NA) dengan menggunakan spreader. Kemudian cakram tersebut diletakkan

37

dalam media nutrient agar (NA) yang telah ditanami jamur. Langkah selanjutnya

dilakukan dengan inkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C. Penghambatan

pertumbuhan di sekitar masing-masing cakram diukur dengan skala millimeter.

Aktivitas antijamur terbesar ditunjukkan oleh luas diameter zona bening terbesar

yang terbentuk dari konsentrasi tersebut. Konsentrasi terkecil dari sampel yang

mampu menghambat jamur yang diinokulasikan dengan terbentuknya zona bening

merupakan nilai konsentrasi hambat minimum (KHM) dari sampel tersebut

(Ngaisah, 2010).