BAB III Aktivitas Antibakteri Daun Mareme Terhadap Escherichia Coli (Krisna)-Rev

8/16/2019 BAB III Aktivitas Antibakteri Daun Mareme Terhadap Escherichia Coli (Krisna)-Rev

http://slidepdf.com/reader/full/bab-iii-aktivitas-antibakteri-daun-mareme-terhadap-escherichia-coli-krisna-rev 1/7

18

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Alat dan Bahan

3.1.1 Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah rotary evavorator,

oven, inkubator, refluks, timbangan analitik, kertas perkamen, spatula, batang

pengaduk, allumunium foil, plastik warp, blender, gelas kimia, gelas ukur, pipet

ukur, pipet volume, mikro pipet, pipet tetes, erlenmeyer, pinset, bulf, loyang,

penjepit kayu, tabung reaksi, rak tabung reaksi, kaca arloji, labu ukur, botol

semprot, cawan uap, cawan petri, jangka sorong, kertas saring, kertas saring

wothman, corong, kertas payung.

3.1.2 Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun mareme, etanol

9!, methanol, etil asetat, n"heksana, bakteri uji Escherichia coli, antibiotik

kloramfenikol, media #$A, %a&l fisiologis, a'uades, (tanol ), $&l *#, %a&l

serbuk, reagen wagner, $*+- ), e&l/ 1!, %a$, pereaksi 0iberman"Buchardat,

eter, pereaksi anisaldehid"asam sulfat, pereaksi vanilin"asam sulfat, pereaksi

#ayer, Ba&l* 1!.

3.2 Sampel Penelitian

+ampel yang di gunakan dalam penelitian ini adalah daun mareme yang

diperoleh dari daerah panumbangan kampung &idoyang.

3.3 Prosedr Penelitian



19

)enelitian ini terdiri dari tahapan determinasi tanaman, pengumpulan

bahan, pengolahan bahan, penafisan fitokimia, ekstraksi, uji aktivitas antibakteri.

3.3.1 Determinasi Tanaman

eterminasi tanaman dilakukan di herbarium Biologi, 2nstitut 3eknologi

Bandung. eterminasi dilakukan terhadap bagian daun mareme.

3.3.2 Pen!mplan Bahan

aun yang digunakan sebagai sampel adalah daun mareme yang

berwarna hijau muda yang diperoleh dari daerah )anumbangan kampung

&idoyang.

3.3.3 Pen!mplan dan Pen!olahan Bahan

aun mareme yang diperoleh dari kebun di daerah )anumbangan

kampung &idoyang dilakukan sortasi basah untuk menghilangakan pengotor yang

berupa daun yang cacat atau bahan"bahan asing yang lain, kemudian dilakukan

pencucian dengan menggunakan air mengalir sampai bahan pengotor lainnya

hilang. 4emudian dilakukan pengeringan dengan cara di oven pada suhu 56"6o&.

4emudian dilakukan sortasi kering untuk memisahkan benda"benda asing yang

tidak berguna dan bagian tanaman yang tidak digunakan yang masih terdapat pada

simplisia kering. 4emudian simplisia yang telah kering dihaluskan sampai

menjadi serbuk simplisia.

3.3." Penapisan #ito$imia

)enapisan fitokimia meliputi pemeriksaan kandungan golongan

senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, tanin dan polifenol, terpenoid, kuinon,



*6

steroid dan triterpenoid, monoterpenoid dan seskuiterpen pada daun mareme.

)enapisan fitokimia ini dilakukan pada simplisia dan ekstrak.

3.3.".1 Pemeri$saan Golon!an Sen%a&a Al$aloid

+implisia atau ekstrak ditambah ammonia encer lalu digerus dalam

mortar, tambahkan beberapa ml kloroform sambil terus digerus. iltrat disaring

dan dikocok dengan asam klorida * %. 0apisan asam dipisahkan kemudian

dibagi menjadi tiga bagian. Bagian pertama digunakan sebagai blanko, bagian

kedua ditetesi dengan pereaksi #ayer, bagian ke tiga ditetesi dengan pereaksi

ragendroff. 3erbentuknya endapan putih pada pereaksi #ayer dan endapan

jingga coklat pada pereaksi ragendroff menunjukan reaksi positif adanya

senyawa alkaloid 7arnswoth,19.

3.3.".2 Pemeri$saan Golon!an Sen%a&a #la'onoid

+implisia digerus dalam mortar, ditambahkan air dan dipanaskan pada

penangas air, kemudian disaring. iltrat yang dihasilkan kemudian dimasukkan

ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan serbuk n, larutan alkohol : $&l

71:1 dan amil alkohol, campuran kemudian kocok kuat. Adanya senyawa

flavonoid ditandai dengan filtrat berwarna merah, kuning atau jingga yang dapat

ditarik oleh amil alkohol 7arnswoth,19.

3.3.".3 Pemeri$saan Golon!an Sen%a&a Saponin

+implisia ditambahkan air dan digerus dalam mortar hingga lumat,

kemudian dipindahkan ke dalam tabung reaksi lalu tambahkan lagi sedikit air

dan dipanaskan. +etelah dingin disaring filtrat ditampung pada tabung reaksi

dikocok kuat selaama beberapa menit. )embentukan busa sekurang"kurangnya



*1

setinggi 1 cm dan persisten selama beberapa menit serta tidak hilang dengan

penambahan asam menunjukan adanya senyawa saponin 7arnswoth,19.

3.3."." Pemeri$saan Golon!an Sen%a&a Tanin dan Poli(enol

+implisia digerus dalam mortar dan dipanaskan dengan air di atas

penangas kemudian disaring. iltrat dibagi menjadi * bagian, bagian pertama

ditetesi dengan pereaksi besi 7222 klorida. 3erbentuk warna biru hitam

menunjukan adanya senyawa tanin dan polifenol. Bagian kedua ditambahkan

larutan gelatin 1!, adanya endapan putih menunjukan bahwa dalam simplisia

terdapan senyawa tanin. 7arnswoth,19.

3.3.".) Pemeri$saan Golon!an Sen%a&a Steroid dan Triterpenoid

+implisia disari dengan eter, sari eter kemudian diuapkan hingga kering.

)ada residu diteteskan pereaksi 0iberman"Burchard. )enambahan pereaksi

dilakukan dalam keadaan dingin, terbentuknya warna ungu menunjukan bahwa

dalam simplisia terkandung senyawa terpenoid, sedangkan bila terbentuk warna

hijau biru menunjukan adanya senyawa steroid 7arnswoth,19.

3.3.".* Pemeri$saan Golon!an Monoterpenoid dan Ses$iterpen

+implisia disari dengan eter, sari eter kemudian diuapkan hingga kering.

)ada residu diteteskan pereaksi anisaldehid"asam sulfat atau vanillin"asam

sulfat. )enambahan pereaksi dilakukan dalam keadaan dingin. 3erbentuknya

warna ungu menunjukan adanya senyawa monoterpen dan seskuiterpen

7arnswoth,19.



**

3.3.".+ Pemeri$saan Golon!an Sen%a&a ,inon

+implisia digerus dalam mortar dan dipanaskan dengan air diatas

penangas kemudian disaring. iltrat ditetesi dengan larutan %a$. 3erbentuknya

warna kuning hingga merah menunjukan adanya senyawa kuinon 7arnswoth,

19.

3.3.) E$stra$si Simplisia Dan Mareme

+erbuk daun mareme ditimbang sebanyak *66 g, kemudian di ekstraksi

bertingkat dengan metode refluks menggunakan pelarut n"heksan, etil asetat dan

metanol pada suhu sesuai titik didih pelarutnya, dengan masing"masing pelarut

diganti setiap - jam sekali dengan tiga kali pergantian pelarut sampai semua

kandungan metabolit sekunder tertarik berdasarkan tingkat kepolarannya.

#aserat yang dihasilkan kemudian ditampung sesuai pelarutnya, setelah itu

kemudian dipekatkan menggunakan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak

kental. (kstrak kental yang diperoleh ditimbang kemudian dihitung nilai

rendemen, kemudian dilakukan pemantauan dengan penapisan fitokimia, dan uji

aktivitas antibakteri terhadap E.coli.

3.3.* Pen!-ian A$ti'itas Antia$teri E$tra$ Dan Mareme

;ji aktivitas antibakteri meliputi sterilisasi alat, pembuatan media,

pembuatan standar media bakteri, pengujian antibakteri berbagai ekstrak daun

mareme dengan metode difusi dan uji kesetaraan aktivitas dengan pembanding

antibiotik kloramfenikol.



*/

3.3.+.1 Sterilisasi Alat

+emua alat yang digunakan untuk pengujian aktivitas antibakteri

terlebih dahulu di cuci bersih, dikeringkan dan dibungkus dengan kertas paying

kemudian dilakukan sterilisasi dengan menggunakan autoklaf selama 15 menit

pada suhu 1*1o& dengan tekanan 1 atm untuk media 7%iken, *61-.

3.3.+.2 Pematan Standar Media Ba$teri

a. +tandar 6,5 #c arland

Ba&l* 1! 6,65 m0 dicampur dengan 9,95 m0 $*+- 1! setara dengan </66

= 168 &; 7koloni>m0 7?ini, *615.

b. )embuatan #edia #uller $inton Agar 7#$A

#edia #uller $inton Agar 7#$A ditimbang sebanyak / g medium larutkan

ke dalam 1 0 a'uadest, medium dipanaskan sampai medidih agar tercampur

sambil di aduk sesekali dengan sempurna selama 1 menit. 4emudian di

sterilkan dengan menggunakan autoklaf selama 15 menit pada suhu 1*1o&

7Agus, *615.

3.3.+.3 Pen!-ian A$ti'itas Antia$teri eerapa E$stra$ Dan Mareme

den!an Metode Di(si

+ebanyak @ *6 m0 media #uller $inton Agar 7#$A masukan pada

cawan petri yang telah steril dan tambahkan suspensi bakteri sebanyak *66 l.

&awan digerakan dengan gerakan memutar supaya media dan bakteri tercampur

merata, kemudain dibiarkan sampai mengeras dan buat lubang sebanyak

- lubang dengan jarak antar lubang yang sama. 4edalam tiap lubang dimasukan

ekstrak dengan konsentrasi yang berbeda yaitu konsentrasi 6!, 16!, *6!, /6!,

-6!, 56!, 6!, 6!, 86!, 96!, dan 166!. 4emudian inkubasi pada



Documents

BAB III Aktivitas Antibakteri Daun Mareme Terhadap Escherichia Coli (Krisna)-Rev