BAB IIIMETODOLOGI
A. Jenis dan Rancangan PenelitianPenelitian ini bersifat
eksperimen karena bertujuan untuk mengetahui efektivitas daya
antimikroba alami ekstrak daun, buah, dan kulit buah maja (Aegle
marmelos (L.) Corr.) terhadap diameter zona hambat bakteri
Staphylococcus aureus, dan untuk mengetahui bagian organ tanaman
yang paling efektif sebagai antimikroba alami terhadap diameter
zona hambat bakteri bakteri Staphylococcus aureus yang akan
dilakukan sebanyak 4 perlakuan termasuk kontrol dengan 10 kali
ulangan. Rancangan penelitian ini menggunakan rancangan acak
lengkap (RAL) karena perlakuan, kondisi, dan segala sesuatu yang
berhubungan dengan hasil penelitian dibuat sama.
B. Variabel Penelitian1. Variabel bebasVariabel bebas yang
digunakan dalam penelitian ini adalah organ tanaman maja (Aegle
marmelos (L.) Corr.)2. Variabel terikatVariabel terikat yang
digunakan dalam penelitian ini adalah diameter zona hambat pada
cawan petri3. Variabel kontrolVarriabel kontrol yang digunakan
dalam penelitian ini adalah:a. konsentrasi (100%)b. massa bahan uji
(50 g)c. diameter dan ketebalan paper disk (0,7mm x 0,1mm)d. ukuran
cawan petrie. suhu inkubatorf. lama waktu inkubasig. waktu
pengukuran
C. Objek PenelitianObjek penelitian dalam penelitian ini terdiri
atas populasi dan sampel yaitu:a. populasi: Bakteri Staphylococcus
aureusb. sampel: 1 cawan petri bakteri Staphylococcus aureus D.
Lokasi dan Waktu Penelitiana. Lokasi penelitianPenelitian ini
dilakukan di Gedung Biologi Ruang 305 Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Malangb. Waktu
penelitianPenelitian ini dilakukan pada tanggal 07 November 2014
sampai 16 November. Penelitian ini dilakukan selama 1 minggu.
E. Instrumen Penelitian1. Alat dan BahanAlat yang digunakan
dalam penelitian ini yaitu: Mortar Pistil Beaker glass 500 ml
Beaker glass 50 ml Gelas ukur 100 ml Pipet tetes Makropipet Kompor
Otoklaf Cawan petri Gelas arloji Pinset Lampu spiritus Kain lap
Kain pel Inkubator Neraca analitik Pisau Spatula LAF (Laminair Air
Flow) Gunting Alat tulis StopwatchBahan yang dignakan dalam
penelitian ini yaitu: Daun maja Buah maja Kulit buah maja Paper
disk Medium NA Akuades Korek api Alkohol 70% Kertas saring Kertas
label Aseton Benang Kertas sampul Pepton Vaselin
F. Prosedur Kerja1. PersiapanMenstrerilisasi alat-alat yang akan
digunakan terlebih dahulu dengan otoclaf pada suhu 121 selama 15
menit dengan tekanan 15 lbs.2. Pembuatan Medium Agara. Menyiapkan
alat dan bahan yang dibutuhkanb. Menimbang bahan sebanyak 8 gr
dengan menggunakan neraca analitik. c. Memasukkan bahan tersebut
kedalam beaker glass dan menambahkan akuades sebanyak 400 ml. d.
Memanaskan bahan tersebut di atas kompor yang sudah diberi kawat
kassa dan mengaduknya sampai bening seperti minyak. e. Menuang
bahan tersebut kedalam cawan petri dengan menggunakan makropipet
sebanyak 10 mlf. Meratakan bahan pada medium dan diusahakan tidak
terdapat gelembung. g. Membungkus medium lempeng dengan kertas
sampul sebanyak tiga buah dalam satu sampul dan mengikatnya dengan
tali. h. Memasukkan air kedalam otoclaf sebanyak 600 ml dan
menutupnya dengan sarangan.i. Memasukkan Medium lempeng kedalam
otoclaf. Sebelum ditutup, mengolesi dahulu penutup dengan vaselin
agar tidak ada uap yang masuk atau keluar dari tutupnya. Setelah
ditutup, membuka penutup uapnya sampai uap keluar, seelah itu
menutupnya kembali dan menunggu sampai tekanan 15 lbs selama 15
menit. Setelah proses sterilisasi selesai.j. Memasukkan medium
dalam inkubator.3. Pembuatan Ekstrak Aegle marmelos (L.) Corra.
Menyiapkan alat dan bahan yang dibutuhkanb. Mengambil dan menimbang
A. marmelos sebanyak 50 gram dengan neraca analitik. c. Menggerus
A. marmelos dengan mengguanakan mortar dan pistil sampai halus. d.
Melarutkan hasil gerusan A. marmelos dengan acetone sebanyak 100
ml. Metode ini dimaksudkan agar kandungan kimia yang ada pada P.
indica dapat keluar. Menyaring ekstrak dengan menggunakan kertas
saring4. Proses Menginokulasia. Menyiapkan alat dan bahan yang
dibutuhkanb. Membuka penutup kapas pada tabung reaksi tempat biakan
S. aureus c. Memfiksasinya dengan cara melewatkan ujungnya pada
pembakar spiritus. d. Mengambil koloni bakteri S. aureus dengan
cotton bud lalu menggoreskannya pada medium lempeng secara zig-zag
rapat dari ujung. e. Memfiksasi medium agar yang telah ditanam
bakteri Staphylococcus aureus dengan melewatkannya pada pembakar
spiritus dan memasukkan medium ke dalam inkubator.5. Pengujian
Bahan Antimikrobaa. Menyiapkan hasil ekstraksi dari daun, buah, dan
kulit buah ke dalam gelas arloji sebanyak 25 ml.b. Memasukkan
kertas cakram yang telah dibuat kedalam ekstrak selama 10 menit. c.
Memfikasai pinset dengan melewatkannya diatas pembakar spiritus.
Setelah 10 menit, mengangkat kertas cakram tersebut dengan
menggunakan pinset lalu memasukkannya kedalam medium agar.d.
Memfiksasi medium agar dengan cara melewatkan diatas pembakar
spiritus lalu memasukkanya ke dalam inkubator.6. Pengamatan
Melakukan pengamatan selama 1 x 24 jam, 2 x 24 jam, 3x24 jam, 4x24
jam,5x24 jam, 6x24 jam, dan 7x 24 jam setelah pemberian
antimikroba. Kemudian mengukur diameter zona hambat yang tidak
ditumbuhi bakteri S. aureus dengan penggaris dan mencatat hasilnya
pada lembar observasi.
G. Teknik Pengumpulan DataTeknik pengumpulan data dalam
penelitian ini yaitu
H. Teknik Analisis DataTeknik analisis data yang digunakan dalam
penelitian ini adalah:Analisis Varian (ANAVA) Tunggal dan uji BNT.
Analisis Varian (ANAVA) Tunggal yang terdiri atas Uji Homogenitas
dan Uji Normalitas
