BACTERII COLIFORME ppt

  • View
    2.948

  • Download
    1

Embed Size (px)

DESCRIPTION

controlul calitatii

Text of BACTERII COLIFORME ppt

IZOLAREA I CONFIRMAREA BACTERIILOR COLIFORME

Bacteriile coliforme sunt - bacili aerobi sau facultativ anaerobi, nesporulai, Gram negativi; - fermenteaz lactoza la 370C, cu producere de gaze, n condiiile indicate incubrii uzual pe mediul B.B.L.V.; Cele mai multe STANDARDE descriu procedurile de izolare a speciilor care fermenteaz lactoza i produc gaze la 35-37C, de form bacilar sau cocobacilar: E. coli, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter i Serratia.

Limitele contaminrii cu bacterii coliforme n cazul produselor alimentare de origine animal sunt foarte largi. Bacteriile coliforme, nu sunt n general, bacterii patogene; sunt INDICATOR SANITAR (igienic); este recunoscut faptul c i numrul mare, de bacterii coliforme poate produce fenomene nedorite produsului sau consumatorului.

n grupa bacteriilor coliforme sunt cuprinse , n principal, genurile: -Escherichia, - Enterobacter i - Klebsiella (Brzoi D., 1978).

Criteriile morfologice nu sunt suficiente pentru identificarea genurilor. Configuraia biochimic este important, ns examenele serologice bazate pe structura lor antigenic, sunt considerate exacte. Confirmarea serologic a speciei de cercetat, urmeaz apoi doar ca o continuare fireasc a finalizrii rezultatelor nu este utilizata n mod curent.

Pentru efectuarea unor examene serologice precise este nevoie de decodificarea profilului biochimic. Profilul biochimic a fost stabilit prin utilizarea galeriilor ID 32 E sau galeriilor tip 32 GN, utilizate pentru identificarea tulpinilor de Enterobacteriaceae.

Directive generale pentru stabilirea numrului de bacterii coliforme. Tehnica numrului cel mai probabil SR ISO 4831/2009

SR ISO 4831/2009 Directive generale pentru stabilirea numrului de bacterii coliforme Tehnica numrului cel mai probabil prevede directivele generale pentru stabilirea numrului cel mai probabil de bacterii coliforme din produsele ALIMENTARE DE ORIGINE ANIMAL destinate consumului uman.

Din cauza diversitii produselor alimentare care intr n acest domeniu de aplicare se vor aplica pe ct posibil aceste directive cu exactitate i nu se va recurge la derogri, dect atunci cnd acest lucru nu poate fi evitat. Metoda este mai puin precis dect SR ISO 4832 metoda prin numrarea coloniilor obinute pe mediu solid, ns permite o analiz mai substanial.

Definiie Utilizarea prezentului Standard Internaional, se aplic urmtoarea definiie: coliforme sunt bacterii care cresc/se dezvolt la temperatura specificat (35oC sau 37oC), produc fermentarea lactozei, cu producere de gaz, atunci cnd analiza este efectuat pe mediile de cultura i n condiiile prevzute n metoda specificat conform SR ISO 4831.

INCUBAREA Tuburile nsmnate se vor incuba la 30oC, 35oC sau 37oC (ultimele dou temperaturi fiind preferate), timp de 24 ore sau 48 de ore (dac la 24 de ore nu se constat cretere microbian).

Principiu de lucru nsmnarea a trei eprubete cu mediul de mbogire B.B.L.V., la trei diluii succesive (de ex. 10-3, 10-4, 10-5), cu o cantitate determinat de eantion pentru analiz (1 ml), dac produsul care se examineaz este lichid sau cu o cantitate determinat de suspensiemam, n cazul produselor solide. Identic se procedeaz cu nsmnarea diluiilor obinute din eantionul pentru analiz sau din suspensia-mam, dar se utilizeaz mediu BBLV dublu concentrat.

Rensmnarea se face din culturile aflate n eprubetele cu mediul bulion cu triptoz i lauril sulfat (LST) dublu concentrat i din culturile provenite din prima serie de eprubete cu mediul bulion cu triptoz i lauril sulfat (LST) simplu concentrat, care sunt opace, tulburi sau care au provocat o degajare de gaz, ntr-o serie de eprubete cu mediu de confirmare bulion lactozat cu bil i verde briliant (BBLV)

METODA ORIZONTAL PENTRU ENUMERAREA BACTERIILOR COLIFORME. METODA NUMRRII COLONIILOR. SR ISO 4832/2009

SR ISO 4832/2009

Acest Standard Internaional stabilete directivele generale privind obinerea numrului de bacterii coliforme din produsele alimetare destinate consumului uman, prin numrarea direct a coloniilor caracteristice obinute pe un mediu solid specific - VRBL, dup incubare la 35oC sau 37oC i fermentarea lactozei cu producere de gaz pe mediul BBLV - specificat de standard.

Stabilirea numrului de bacterii coliforme se efectueaz prin numrarea direct a coloniilor obinute pe un mediu solid (VRBL mediu cu cristal violet, rou neutru, bil i lactoz), dup incubare la 30oC sau 37oC, temperatura fcnd obiectul unui acord ntre prile interesate.

Definiie La utilizarea prezentului Standard Internaional (S.I.), se aplic urmtoarea definiie: prin bacterii coliforme se neleg bacteriile care cresc/se dezvolt, la temperatura specificat (adic 35oC sau 37oC, conform nelegerii), formeaz colonii caracteristice n mediu de VRBL (gelozlactoz, bil, cristal violet i cu rou neutru), atunci cnd analiza este efectuat dup metoda specificat n prezentul S.I.

Principiu nsmnarea n profunzimea unui mediu selectiv solid (VRBL), turnat n dou plci Petri, cu o cantitate determinat de eantion pentru analiz, dac produsul care se examineaz este lichid sau cu o cantitate determinat de suspensie-mam. nsmnarea a cel puin nc o diluie urmtoare, obinute din eantionul pentru analiz sau din suspensia-mam. INCUBAREA plcilor se face la 35oC sau 37oC, timp de 24 - 48 ore.

ATENIE! NSMNAREA Pe mediul VRBL se efectueaz ntre 2 straturi de mediu. Aceasta presupune turnarea unui strat n cantitate de 12-15ml, se las la solidificat, se adaug inoculum, iar dup ce acesta a ptruns n mediu se adaug un al doilea strat de mediu (4 ml la temperatura de 44oC, maxim 47oC), pentru a limita dezvoltarea coloniilor i a fi numrate cu uurin. INCUBAREA plcilor se face la 30oC, 35oC sau 37oC, timp de 24 - 48 ore.

CITIREA sau NUMRAREA Se consider colonii prezumtive de bacterii coliforme, acele colonii care prezint coloraie roz i au un diametru mai mare de 0,5 mm. Se citesc plcile cu colonii tipice care conin ntre 10 i 150 de colonii. Citirea coloniilor caracteristice pe mediul VRBL trebuie difereniate de coloniile de Escherichia coli i alte tipuri de coliformi. Coliformi totali Coliformi termotolerani

Coliformi totali Coliformi termotolerani Coliformi totali sunt bacteriile care cresc pe medii specifice pentru coliformi la temperatura de incubare de 35oC sau 37oC. Coliformi termotolerani sunt reprezentani de bacteriile care cresc pe medii specifice pentru coliformi la temperatura de incubare de 44oC.

Tipul de bacterii Care se dezvolt

Incubare le 30 oC

Incubare le 44 oC sau 44,5 oC

Coliformi totali

Colonii roz Diametru 0,5 mm

Colonii roz Diametru > 0,5 mm

Alte bacterii Necoliforme

Colonii incolore sau de alte culori Diametru < 0,5 mm

Inhibate sau colonii necaracteristice

Bacterii coliforme pe mediul VRBL

CONFIRMAREA Se preleveaz cte 5 colonii minim din fiecare plac n care s-au identificat colonii tipice de bacterii coliforme i se nsmeaz n cte un tub cu cte 10 ml de BBLV (bulion , bila, lactoz i verde briliant ). INCUBAREA Tuburile cu cte 10 ml de bulion lactoz i verde briliant nsmnate se vor incuba 35oC sau 37oC, timp de 24 - 48 ore. Se considera coliformi - bacteriile care formeaz colonii tipice pe mediul VRBL i formeaz gaz n tubuleele DURHAM - la To de incubare din SR ISO pe mediul BBLV.

IZOLAREA I CONFIRMAREA SPECIEI ESCHERICHIA COLI DIN PRODUSELE ALIMENTARE DE ORIGINE ANIMAL

Izolarea i confirmarea Escherichia coli din produsele alimentare se efectueaz - conform SR ISO/TS 16 649 1,2,3/2009 sau conform SR ISO 7251/2009 E. coli reprezint cel mai bun indicator al CONTAMINRII FECALE a produselor alimentare. E. coli reprezint un bun indicator al CONTAMINRII RECENTE a produselor alimentare.

Trebuie sublinat aspectul de adaptabilitate al bacteriilor n general i al speciei E. coli n special, la modificri de temperatur: frig, congelare, modificri de umiditate (uscciune), modificri de pH, rezisten la antibiotice, etc.

Escherichia coli sau colibacilii sunt bacterii aerobe din grupul coliformelor, se prezint sub form de bastona, sunt mobile, nesporogene, fermenteaz lactoza la 440C, cu producere de gaze i formare de indol din triptofan . Ross T., Ratkowsky D.A., Mellefont L.A., McMeekin, (2003), consider c dezvoltarea speciei E. coli este influenat de mai muli factori: temperatur - este favorizat de o temperatur cuprins ntre 7,63 i 47,43C, existena unor soluii, la o activitatea a apei cuprins ntre 0,951 i 0,999, ajutat de soluii de clorur de sodiu i la un pH situat ntre 4,0 i 8,2.

Mecanismele adaptrilor sunt de natur genetic, traduse prin modificri n genom i al transcripiei expresiei acestor modificri la nivelul genelor. COLIBACILII sunt bacterii care au form de bastonae mici, drepte - bacili sau cocobacili (2,0-6,0/1,1-1,5 micrometri, vii i 1,0-3,0/0,4-0,7 micrometri, moarte i colorate), Gram negative, aezate izolat sau n perechi, adesea mobile dar i imobile, unele tulpini capsuleaz, formnd microcapsule, asporogene.

Temperatura optim de dezvoltare este de 37 0C, dar se dezvolt foarte bine i la 44-450 C. Aceast ultim temperatur fiind un criteriu de diferniere, denumit testul Eyjkman-Mackensie. n laboratoare de bacteriologie alimentar, aceast test se utilizeaz pentru diferenierea lui E. coli de speciile nrudite, de tip Enterobacter, Klebsiella sau alte enterobacterii.

E. coli se dezvolt foarte bine n prezena srurilor biliare i a bilei, a srurilor de seleniu, a colorantului verde briliant, a tetrationatului, etc. Se dezvolt bine la pH neutru; nu se dezvolt la pH mai mic de 5,9 i mor la pH acid. Pe medii nutritive simple se dezvolt bine, producnd turbiditate intens, uneori cu inel la suprafa pe bulionul simplu, cu adunarea unui depozit n cazul culturilor vechi, iar pe suprafaa agarului nutritiv cresc colonii netede, de 2-6 mm, uor convexe, opace, nepigmentate, de tip S. Culturile de