BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA … · 2009-11-24 · Debemos recordar que el objetivo y el ocular del microscopio funcionan como lentes convergentes biconvexas, por lo

PE: “LICENCIATURA EN FARMACIA”

LICENCIATURA EN FARMACIA

ÁREA: ANALÍSIS CLÍNICOS

ASIGNATURA: LABORATORIO DE

BIOLOGÍA MOLECULAR DE LA CÉLULA

CÓDIGO: FARM-014 L

ELABORADO POR: MC Ma. De Lourdes Martinez Moreno MC Sara Silvia Domínguez Baez DC Bertha Alicia León Chávez MC Marisela Torres y Soto MC Aida Osorno Tecpa MC Rafael Muñoz Bedolla MC Martha Alicia Salgado Juárez MC Rosa Maria Aguilar Garduño

FEBRERO 2009

BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA

DIRECCIÓN GENERALDE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS


PRÁCTICA 1. FUNDAMENTO FÍSICO, MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO.

APLICACIONES DEL MICROSCOPIO INTRODUCCIÓN.- El microscopio es el aparato más importante e indispensable en un laboratorio de Biología, su función es permitir observar la imagen considerablemente aumentada de un objeto u organismo que a simple vista pasa desapercibido. La palabra microscopio proviene de dos raíces griegas: Micros ; que quiere decir pequeño y scopein ; que significa observar. En la actualidad existe toda una ciencia dedicada a estudiar las características de estos aparatos que cada vez son mas precisos y espectaculares, nos referimos a la creación de la microscopía; ésta es cada día mas importante, ya que el conocer las características de un microscopio nos permite sacar el mayor provecho de él, dándole una mayor aplicación. Existen dos tipos básicos de microscopio: el simple y el compuesto. El microscopio simple está formado tan solo por una lente convergente a la que también se le llama "lupa", la cual nos proporciona una imagen virtual y aumentada. El microscopio compuesto esta constituido por dos sistemas de lentes: 1.- El sistema que está constituido por los objetivos, que son las lentes quedan más cerca del objeto de observación. 2.- El sistema constituido por los oculares, que son las lentes que quedan más cerca del observador. Cada sistema proporciona un aumento independiente y el producto de estos aumentos parciales dados por oculares y objetivos, determina el aumento total del microscopio. Para manejar con mayor eficiencia un microscopio, es necesario conocer cómo está constituido. Las partes que lo constituyen se agrupan en tres sistemas: mecánico, óptico, y de iluminación. A) El sistema mecánico está formado por: una base, la columna, el tubo del microscopio, la platina, los tornillos para el enfoque y el revolver. B) El sistema óptico está representado por las lentes oculares y las lentes objetivos. C) El sistema de iluminación está representado por la fuente de luz (foco), el condensador y el diafragma. Debemos recordar que el objetivo y el ocular del microscopio funcionan como lentes convergentes biconvexas, por lo que la imagen final que nos proporciona el microscopio compuesto es virtual, aumentada e invertida. Toda imagen proporcionada por el sistema óptico de un microscopio, debe reunir tres características: poseer un buen poder de resolución, de penetración y de definición.

El poder de resolución (P.R.): es la característica del microscopio que permite ver con claridad las estructuras finas y muy cercanas entre si; podemos ver que este poder de resolución es directamente proporcional a la longitud de onda media de la luz blanca (550 nm) (1 nm= 10 -6 mm ) e inversamente proporcional a la apertura numérica (A.N.) del objetivo. Esto es: P.R. = O.61 A.N. Donde P.R.: es la distancia mínima entre dos puntos de la muestra que permite verlos separados; 0.61 es una constante que representa la diferencia mínima en contraste que es detectable; es la longitud de onda de la luz empleada y A.N: la apertura numérica de la lente del objetivo. Si las estructuras que se desean precisar, están colocadas a una distancia menor una de otra, necesitaremos un objetivo de mayor apertura numérica.


La apertura numérica (A.N.): es una medida del ángulo máximo con que los rayos provenientes del objeto inciden en la lente del objetivo del microscopio y de ahí son llevados al ojo del observador. Ahora bien, hay dos factores que determinan la apertura numérica: el ángulo que forman los rayos que penetran por el objetivo y el índice de refracción del medio que exista entre el objeto a observar y el objetivo, dicho de una manera matemática, la apertura numérica es el producto del seno del semi ángulo de abertura (que mide la capacidad de la lente para concentrar la luz) por el índice de refracción del medio que existe entre el objetivo y el objeto a observar. Todos los objetivos traen grabada la apertura numérica. El poder de penetración: es la característica que permite definir simultáneamente las estructuras existentes a diferentes niveles de la preparación; esto solo se puede lograr con objetivos de pequeño aumento, a medida que aumenta el poder del objetivo y la apertura numérica, es menor el poder de resolución. El poder de definición: es la característica que permite una imagen clara, precisa y con bordes definidos; para esto, el microscopio debe presentar lentes bien pulidas, con sus aberraciones cromática y de esfericidad, corregidas. El índice de refracción: es una medida de la velocidad comparativa de luz en un medio. Cuando existe aire entre la lente y el cubreobjetos, parte de la luz proyectada a través de la muestra es desviada (refractada), por lo que a medida que se usa un objetivo de mayor aumento, la pérdida de resolución tiene un efecto significativo sobre la calidad de la imagen. El uso de aceite de inmersión (que tiene el mismo índice de refracción que el vidrio) entre la muestra y la lente del objetivo de inmersión, evita el cambio del índice de refracción, y por lo tanto, mejora la resolución.

OBJETIVO.- Que el alumno identifique cada uno de los componentes del microscopio y sepa qué función desempeña cada uno, que logre paso a paso un enfoque correcto y que aprenda a detectar los errores de manejo para corregirlos; además aprenderá a tener los cuidados correspondientes al microscopio. MATERIAL.- Microscopio óptico, portaobjetos, cubreobjetos y alguna muestra para observar al microscopio. PROCEDIMIENTO.- a) Señale cada componente del microscopio y anote su función y a qué sistema pertenece. b) Observe los grabados en los oculares y en los objetivos y anote su significado. c) Ensaye el enfoque una preparación, empezando con el objetivo de menor aumento, anotando el aumento total que logra de su imagen en cada caso. d) Indique cuál es el poder de resolución de cada objetivo. e) Mida el grosor, largo y ancho del portaobjetos y del cubreobjetos. f) Ensaye la iluminación Köhler AJUSTE.- en la actualidad casi todos los microscopistas practican la iluminación basada en los principios establecidos por Köhler, conocida como iluminación de Köhler. Su finalidad es obtener una distribución homogénea de la iluminación, sobre el espécimen a observar, a pesar de las irregularidades de la fuente de luz. Pasos a seguir para la iluminación de Köhler:

1. Prender la fuente de luz (foco). 2. Enfocar la preparación con el objetivo de menor aumento (10X) 3. Subir el condensador hasta el tope, con mucho cuidado. 4. Cerrar por completo el diafragma de la lámpara ( o diafragma de campo)

colocado en la base del microscopio (de dónde sale la luz). 5. Cerrar por completo el diafragma de Iris. 6. Observar la figura geométrica que aparece en el campo (hexágono), y a la cual

se le llama diafragma. 7. Bajar el condensador lentamente hasta lograr la máxima nitidez de los bordes de

la figura geométrica o diafragma


8. Si no está centrado el diafragma en el campo, entonces: 9. Centrar el diafragma en el campo con los tornillos de centrado que están en el

condensador, moviéndolos simultáneamente y lentamente, para evitar que el diafragma salga del campo.

10. Abrir el diafragma de campo luminoso (o de la lámpara) hasta obtener iluminada un área igual al campo visual.

11. Si el diafragma está centrado en el campo, ningún vértice debe salir del campo y los espacios que hay entre vértice y vértice, deben ser iguales.

12. Si no es el caso, debe cerrarse un poco el diafragma de campo luminoso y repetir los pasos 9, 10 y 11.

13. Abrir completamente el diafragma de campo luminoso. (Éste debe estar siempre, completamente abierto o ligeramente cerrado, sólo se cierra cuando se hace la iluminación Köhler).

14. Abrir poco a poco el diafragma de Iris, hasta obtener una iluminación que no lastime a los ojos.

15. Ajustar la intensidad de la luz con el tornillo de control de la intensidad, hasta donde no lastime a los ojos.

16. Ajustar la altura del condensador dependiendo del objetivo a utilizar. 17. Verificar el ajuste observando por el ocular, el campo debe estar iluminado total y

homogéneamente.

Pasos a seguir para enfocar el espécimen o muestra: 1) Con los tornillos macrométricos, bajar con cuidado la platina hasta el tope. 2) Con el revolver, colocar el objetivo de menor aumento (seco débil) en dirección

del orificio de la platina. 3) Colocar el portaobjetos que contiene la muestra, en la platina, centrándolo en el

área del orificio de la platina. 4) Asegurar el portaobjetos con las pinzas que hay en la platina. 5) Con los tornillos macrométricos, sin ver por los oculares, subir lentamente la

platina hasta que llegue al tope (actualmente la mayoría de los microscopios compuestos tienen un tope sólo para el objetivo seco débil, se recomienda verificar esto antes de colocar un portaobjetos).

6) Sin ver todavía por los oculares, verificar hacia que sentido (si es hacia mi, o hacia fuera) se tienen que mover los tornillos macrométricos para bajar la platina.

7) Prender la fuente de luz (lámpara o foco). 8) Con los tornillos macrométricos, bajar la platina lentamente hasta obtener una

imagen del espécimen. 9) Afinar la imagen con los tornillos micrométricos. 10) Ajustar la altura del condensador. 11) Ajustar la cantidad de luz con el diafragma de iris. 12) Ajustar la intensidad de luz con el tornillo de control de la intensidad. 13) Observar la muestra. Si se va a observar con los otros objetivos: 14) Con el revolver cambiar primero al objetivo seco fuerte y seguir los pasos 9 a 13. 15) Con el revolver cambiar al objetivo de inmersión y seguir los pasos 9 a 13 16) Antes de colocar el objetivo de inmersión en dirección de la muestra, debe

siempre colocarse una gotita de aceite de inmersión.


Recomendaciones para el uso de los objetivos:

Característica Objetivo

Seco débil Objetivo

Seco fuerte Objetivo de Inmersión

Altura del condensador

Aproximadamente de 1- 2 cm por debajo de la

platina

Aproximadamente de 1- 2 cm por debajo de la

platina

Condensador pegado a la platina

Cantidad de luz (Diafragma de Iris)

Poca X Media XX Mucha XXX

Intensidad de luz (Tornillo de control de intensidad)

Baja X Media XX Alta XXX

X: significa una medida cualitativa a manera de comparación.

MICROSCOPIO COMPUESTO Y SUS COMPONENTES PRINCIPALES

OCULARES

REVOLVER

OBJETIVOS

PLATINA

FOCO

BASE

CABEZAL

BRAZO

DESPLAZAMIENTO PLATINA

MACROMÉTRICO

MICROMÉTRICO

CONDENSADOR


PROCEDIMIENTO:

- Identificar cada componente del microscopio, señalar su función. - Observar y anotar las cifras grabadas en el ocular y objetivos. - Enfoque de varias preparaciones.

Reporte: Elabore una matriz de información.


PRÁCTICA NO. 2 LA CÉLULA VEGETAL.

INTRODUCCIÓN. Es de todos conocida la importancia que representa el Reino Vegetal. Los vegetales son casi los únicos seres vivos capacitados para captar energía, la cual, en unión de las sustancias inorgánicas que toman del aire y del suelo la emplean para la elaboración de sus propios alimentos; la energía así utilizada la obtienen de la luz solar.

Los otros organismos como las plantas no verdes y los animales, obtienen esa energía de los alimentos que toman de otros seres vivos, donde ésta se encuentra almacenada y en estado potencial. Por lo tanto casi toda la energía contenida en las substancias de que se hallan compuestas los organismos, inclusive el hombre, procede en último término de la luz solar captada por los vegetales verdes. Por consiguiente los vegetales verdes son e capital importancia para el mantenimiento de la vida. Los vegetales comprenden desde plantas unicelulares, por ejemplo levaduras y algunas algas verdes, hasta las plantas mayormente diferenciadas. Para apreciar la organización de los procesos bioquímicos comprendidos en la producción de los metabolitos primarios y secundarios de la plantas es necesario tener conocimiento de la delicada estructura de la célula vegetal. OBJETIVO: Que el alumno conozca algunas estructuras de la célula vegetal y pueda identificarlas. MATERIAL: Microscopio, bisturí, agujas, cuentagotas, portaobjetos, cubreobjetos, caja petri, pipetas Pasteur. MATERIAL BIOLÓGICO: Trocitos de cebolla, papa, plátano, semillas de legumbres, cereales, tallos y pétalos de flores, cáscara de cítricos, lechuga, jitomate, zanahoria, pera, aceituna. REACTIVOS: Solución de nitrato de plata al 0.1N. sol’n de lugol, sol’n de EDTA 0.1 M, glicerina verde de metilo acético, ácido acético, alcohol de 70°, carmín alumínico, vede brillante. PROCEDIMIENTO:

a) Limpie la cebolla de las hojas exteriores secas, separe una de las hojas internas y desprenda la membrana tenue que está adherida por su cara interna cóncava. Lleve esta muestra al portaobjetos evitando que se formen burbujas de aire. Séquelo al aire, vierta unas gotas de verde de metilo acético por 5 minutos, lave con agua para quitar el exceso de colorante, agregue una gota de glicerina, coloque encima el cubreobjetos y observe al microscopio. Observará las células de formas alargadas y bastante grandes. La pared celular celulósica se destaca muy clara teñida por el colorante. Los núcleos son grandes y muy visibles, en su interior pueden llegar a observarse granulaciones; son los nucleótidos. El citoplasma tiene aspecto bastante claro, en el que se distinguen algunas vacuolas grandes coloreadas débilmente.


b) Tome una hoja externa seca de la cebolla y corte un trocito de 1 cm cuadrado, deposítelo sobre un portaobjetos que contenga una gota de glicerina y observe al microscopio. Observará capas de células secas, con poco contenido celular y las membranas de unas capas de células con otras superpuestas. Al enfocar con cuidado observará unas formas poliédricas transparentes con aspecto cristalino, si enfoca en distintos planos, podrá observar las caras de cristales de oxalato de calcio. Estos son abundantes en los vegetales y tienen formas variadas, agujas, prismas alargados y puntiagudos, etc. En la cebolla presentan aspecto de prisma.

c) Para hacer evidentes los cloroplastos y poderlos observar fácilmente,

podemos usar una sustancia que puede ser reducida por ellos, (capacidad reductora de los plástidos) como el nitrato de plata. Extender nuevamente un pedacito de membrana de la cebolla en un portaobjetos evitando que se formen burbujas, agregará una gota de solución de nitrato de plata 0.1N y observe a 40X. Espere el efecto de ennegrecimiento de los cloroplastos.

d) Los amiloplastos son importantes porque representan la sustancia de

reserva (almidón), de la célula vegetal, se puede encontrar en mayor proporción en los cereales y semillas de legumbres, así como algunos tubérculos o frutos, para identificarlos parta y raspe el cereal, leguminosa o tubérculo con el bisturí, deposite el producto obtenido en el portaobjetos. Agregue una gota de agua y una de lugol, coloque el cubreobjetos y observe. Los granos de almidón se tiñen de color violeta intenso debido al lugol que contiene yodo.

e) Los cromoplastos contienen substancias del tipo de los carotenos y pueden

observarse de la siguiente forma: Coloque una pequeña muestra de jitomate en un portaobjetos sin agregar agua, coloque el cubreobjetos y comprima suavemente, observe al microscopio. La pulpa del jitomate muestra por lo general las células bastante sueltas unas de otras, se percibe en el citoplasma una serie de gránulos rojizos- anaranjados que son los cromoplastos. También puede obtener un corte fino de zanahoria, deposítelo en un portaobjetos, agregue una gota de agua, colóquele el cubreobjetos y observe al microscopio. En las células de la zanahoria se observan una multitud de corpúsculos irregulares de color rojizo débil hasta anaranjado.

f) Los tallos o pecíolos de las plantas tienen una resistencia mecánica relativa y

sirven de sostén, debido a que las células tienen gran cantidad de celulosa que las engruesa. A este tejido se le da el nombre de colénquima y está formado por células alargadas. Corte secciones transversales de tallo o pecíolos de malva lo más finamente posible, fije con alcohol de 70° durante dos minutos, lave con agua y tiña con carmín alumínico por 15 minutos, lave abundantemente con agua y monte el corte en un portaobjetos con una gota de glicerina, cubra y observe. Con seco débil observará una especie de granulado de puntos rojos, cambie a seco fuerte y después a inmersión.


g) El mesocarpio del fruto de la pera y la aceituna representan el esclerénquima. Este tejido está formado por grupos o “nidos” de células impregnadas de lignina a esto se debe la dureza de los frutos cuando no están maduros. La Lignina se tiñe con verde brillante. Perta la pera y la aceituna y obtenga un raspado de cada uno por separado, colóquelo en un portaobjetos y agregue una gota de verde brillante, dejarlo actuar por un minuto y lavar cuidadosamente con agua, seque el exceso con papel filtro y ponga una gota de glicerina, cubra y observe al microscopio.

h) La cáscara o pericarpio de los frutos cítricos (naranja, mandarina, limón,

toronja, etc) poseen cavidades hechas por las mismas células y están llenas del aceite esencial al que deben su aroma. Haga cortes delgados de la cáscara de los frutos, coloque la muestra en un portaobjetos, agregue una gota de agua, cúbralo y observe con poco aumento.

i) Los tallos de lechuga o acelga tienen vasos llenos de látex que los hace

menos transparentes. Haga cortes longitudinales del tallo de la lechuga o acelga, colóquelos en el portaobjetos con una gota de agua, se observan ramificaciones irregulares que tienen color más oscuro que el resto de las células que corresponden a los vasos de látex.

Reporte: Elabore un mapa conceptual o una V Gowin.


PRÁCTICA Nº 3. OBSERVACIÓN DE CÉLULAS PROCARIÓTICAS Y SUS

CARACTERÍSTICAS TINTORIALES

INTRODUCCION.- La fijación de las células o tejidos puede ser definida como el procedimiento que permite la preservación selectiva de su organización morfológica y de su composición química para ser observados al microscopio. Los mejores fijadores contienen una o más sustancias que precipitan las proteínas de las células, o que las hacen insolubles sin llegar a precipitarlas. Según cual sea el fijador y las condiciones bajo las cuales se lo utilice, la fase sólida de protoplasma se separa de la acuosa en forma de fibrillas, gránulos, redes o vacuolas. La separación de la fase sólida se produce esencialmente debido a las uniones entre las moléculas proteicas, aumentando de esta manera su estabilidad para los tratamientos posteriores y la observación El fijador usado debe ser seleccionado de acuerdo a su actividad química específica, de manera que aquellas estructuras que se deseen conservar, sean preservadas con exclusión de otros materiales que podrían interferir con el efecto deseado. Es necesario también evitar toda destrucción del material que va a ser estudiado y distribuir el efecto del fijador uniformemente en toda la célula. Por otro lado, la selección de un colorante para el estudio de las células por medio del microscopio óptico, depende de distintos factores, que incluyen la naturaleza del material a estudiar, el tipo de fijador utilizado y la reactividad química del colorante. La tinción de las bacterias por el método de Gram, permite clasificar a las bacterias selectivamente en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas. Las primeras retienen el colorante cristal violeta sin decolorarse por los reactivos diferenciadores que se aplican en la técnica de tinción. Las bacterias Gram positivas aparecen en visión microscópica teñidas de un color morado intenso, por el cristal violeta, debido a la capa gruesa de peptidoglicanos

Las bacterias Gram negativas, aparecen en visión microscópica teñidas de un color sonrosado débil, por la Safranina., debido a la capa fina de peptidoglicanos.

OBJETIVO.- Que el alumno conozca a las bacterias como el principal ejemplo de células procarióticas y que aprenda a emplear la técnica de tinción de Gram para bacterias, como introducción a la identificación morfológica y afinidad de las células a los colorantes.

MATERIAL BIOLÓGICO: Nódulos de las raíces de leguminosas, alfalfa, trébol, soya, etc. Vino agriado, yogurt, infusión vegetal.

REACTIVOS: Alcohol etílico al 96° o alcohol etílico-acetona 1:1, cristal violeta, lugol, safranina, aceite de inmersión.

PROCEDIMIENTO: 1. Se lavan los nódulos de las raíces de leguminosas, se parten y colocan sobre

portaobjetos, se agrega una gota de agua, se quitan los residuos y se fijan a la llama del mechero, se colocan en el puente de tinción y se tiñen.


2. Con una asa se toma una pequeña porción de la superficie del vino agriado y se extiende sobre un porta con una gota de agua, se fija a la llama del mechero y se tiñe.

3. Con una pipeta Pasteur se toma una pequeña gota de de yogurt y se coloca en el portaobjetos en el que previamente se depositó una gota de agua destilada, se mezcla y se hace una extensión delgada y se seca a la llama del mechero. Lavar la preparación con xilol por escurrimiento, para eliminar la grasa que contiene el yogurt y dejar que se seque al aire.

4. Se toma una pequeña porción de la película fina que aparece en la superficie de la infusión, haciendo un frote sobre un portaobjetos, se seca a la llama del mechero y se tiñe.

TÉCNICA DE TINCIÓN DE GRAM

1.. Coloque la laminilla en el soporte de la tina de tinción, cuidando que quede completamente horizontal. 2.. Agregue unas gotas del colorante cristal violeta, cubriendo la extensión; el tiempo de actuación del colorante es de dos minutos. 3.. Lave con agua destilada para arrastrar el colorante, se hace por goteo con una pipeta Pasteur, sin exceder el lavado y nunca directamente sobre el extendido para evitar el arrastre del mismo. 4.. Vuelva a colocar la laminilla en el soporte de la tina de tinción. 5.. Agregue solución de lugol, cubriendo el frotis y deje actuar durante un minuto. 6.. Lave nuevamente con agua destilada. 7.. Agregue unas gotas de alcohol etílico al 96° o alcohol etílico-acetona 1:1, cubriendo el frotis y deje actuar de 30 segundos a un minuto, para arrastrar el colorante que queda libre y decolorar. 8.. Lave cuidadosamente con agua destilada. 9.. Agregue unas gotas de safranina cubriendo el frotis y deje actuar durante un minuto. 10.. Lave con agua destilada. 11.. Seque al aire, perfectamente . 12..Agregue una “gotita” de aceite de inmersión y observe a 100 X.

Identifique en cada muestra la forma de las bacterias y, por el color cuáles son Gram negativas y cuáles son Gram positivas.

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES Solución A: Cristal violeta 2 gr. Alcohol etílico 20 ml. Solución B Oxalato de amonio 0.8 gr H2O destilada 80 ml. Mezclar A y B para madurarlo y filtrar.


Lugol Yodo 1 gr. Yoduro de potasio 2 gr H2O destilada 300 ml Alcohol etílico-acetona 1:1 Safranina. REPORTE: Elabore un mapa conceptual o una V Gowin.


PRÁCTICA 4.

CÉLULAS EUCARIÓTICAS Y SU DIVERSIDAD

INTRODUCCIÓN.- Las células vivas son entidades dinámicas, que cambian y se mueven constantemente. Las células fijadas y teñidas son estables, y ya no cambian. Cuando mucho, las imágenes obtenidas con material fijado solo pueden ser "instantáneas" de las células dinámicas. A menudo es necesario reconstruir una cadena de acontecimientos por el estudio cuidadoso de muchas de estas instantáneas a intervalos diversos. Las células procarióticas por su tamaño no pueden ser observadas tan fácilmente sin fijar y teñir En cambio las células eucarióticas pueden observarse en movimiento como algunos seres unicelulares, por ejemplo; los protozoarios, si es que se cuida de conservarlos bajo las condiciones de su medio natural. Pero la célula vegetal es más fácil de observar debido a su tamaño y a la pared celular que recubre a la membrana plasmática. Puede teñirse para contrastar sus estructuras más importantes, tales como núcleo y plástidos. El uso de colorantes adecuados para resaltar determinadas estructuras es frecuente, tomando en cuenta la composición química de tales estructuras. OBJETIVO.- Que el alumno identifique algunos organismos unicelulares (protozoarios) como ejemplo de célula viva, obtenidos de medios adecuados, y que observe células vegetales para identificar en ellas características que las hacen tan diferentes de las células procarióticas. Además de que conozca e identifique mohos, como ejemplo de hongos.

MATERIAL.- Microscopio, portaobjetos, cubreobjetos, pipetas Pasteur con chuzo, navaja, alfileres o agujas. Como material biológico: agua estancada (de florero con agua "podrida"), células de cebolla o pétalos de flor, pan o tortilla con moho.

PROCEDIMIENTO.- A) Con la pipeta Pasteur tome una gota de agua estancada y colóquela en un portaobjetos; cúbrala inmediatamente con un cubreobjetos y observe a seco débil. Una vez enfocada la muestra, puede pasar a mayor aumento. Bajo el microscopio podrá ver muchas especies de organismos unicelulares nadando activamente en la gota de agua. Estos organismos son protozoarios que han estado viviendo en el medio adecuado para su crecimiento y proliferación. Trate de identificarlos con ayuda de los esquemas anexos.

B) Tome ahora la cebolla o el pétalo de una flor y haga una incisión que le permita separar una capa delgada para obtener un trocito y extenderlo perfectamente sobre el portaobjetos. A la célula de la cebolla puede agregarle una gota de colorante como el verde de metilo. Con éste se teñirán los núcleos. Al corte de flor no es necesario teñirla pues las células poseen una vacuola de pigmento coloreado que las hace muy visibles con su contorno bien delimitado por la pared celular.

C) Con la punta de un alfiler o de una aguja, tome una porción muy pequeña del moho del pan o de tortilla, colóquelo en un portaobjetos que previamente tendrá una gota de agua destilada, luego agregue una gota de colorante azul de metileno. Identifique las partes que constituyen al moho.


PRÁCTICA NO 5. PERMEABILIDAD CELULAR.

INTRODUCCIÓN: Una membrana celular es una capa de macromoléculas que

encierra todas las células y muchos organelos, se denomina membrana plasmática cuando forma el límite exterior de una célula, Todas las membranas, sin considerar el tipo de organismo o célula, se construyen del mismo modo a partir del mismo modo, a partir de dos tipos de macromoléculas: los fosfolípidos que proveen la estructura; y las proteínas, que proveen las funciones específicas de la membrana. Las membranas animales también contienen el colesterol, que estabiliza la capa de fosfolípidos.

La estructura única de una membrana celular se describe frecuentemente como un mosaico fluido. Es un fluido porque antes que un sólido, el fosfolípido es un líquido, es un mosaico a causa de la disposición de diversas proteínas dentro de la capa de fosfolípidos.

Una membrana celular es una barrera selectivamente permeable: algunos materiales cruzan de manera libre y otros cruzan sólo en ciertos momentos. El paso es controlado por la misma bicapa de fosfolípidos, y por el particular ordenamiento de las proteínas en ella empotradas.

La estructura fosfolipídica es impermeable a muchos materiales. Sólo materiales muy pequeños o sin ninguna carga eléctrica pueden penetrar esta barrera. Los materiales cruzan las membranas celulares de cuatro maneras: difusión simple, difusión facilitada, transporte activo y transporte de volumen, y se resumen en la siguiente tabla:

TIPO DE TRANSPORTE

TIPOS DE MATERIALES DIRECCIÓN REQUISITOS

Difusión simple Esteroides, grasa, O2, CO2, H2O

Altas a bajas concentraciones

Ninguno

Difusión facilitada Glucosa, Iones Altas a bajas concentraciones

Proteína de canal, proteína receptora

Transporte activo Aminoácidos Bajas a altas concentraciones

Proteínas de transporte, energía

Transporte de partículas en suspensión

Hormonas no esteroideas, enzimas, moco, microbios, neutronsmisores, residuos

Dentro o fuera de la célula según necesidad

Energía, algunas veces proteínas receptoras.

OSMOSIS: La difusión de agua a través de una membrana celular tiene un nombre especial, ósmosis. Las moléculas de agua son suficientemente pequeñas para difundirse mediante orificios en la estructura de fosfolípidos, mientras que muchas moléculas e iones no lo son. El agua se difunde desde el lado de la membrana donde se concentra más (es decir, donde hay menos materiales disueltos) al lado donde es menos concentrada (es decir, donde hay más materiales disueltos). La dirección de la ósmosis es muy importante


para la célula. El hecho de que el agua entre o salga de una célula depende de las concentraciones relativas de materiales disueltos dentro y fuera de la célula. Tres términos describen estas concentraciones relativas: isotónico, (mismo), hipertónico, (por encima de), e hipotónico (por debajo de). Estas concentraciones y sus efectos de definen en la siguiente tabla: TÉRMINO CONCENTRACIÓN

DE MATERIALES DISUELTOS

CONCENTRACIÓN DE AGUA

DIRECCIÓN NETA DE FLUJO DE AGUA

Ambiente isotónico Igualdad dentro y fuera de la célula

Igualdad dentro y fuera de la célula

Ninguna

Ambiente Hipertónico

Más alta fuera de la célula

Más baja fuera de la célula

Fuera de la célula

Ambiente Hipotónico

Más baja fuera de la célula

Más alta fuera de la célula

Dentro de la célula

OBJETIVO: Que el alumno compruebe la función de permeabilidad de la membrana citoplasmática, y su función de separar dos medios, el intracelular y el extracelular, tanto en células animales como en células vegetales, así como observar los efectos que sobre la célula ejercen sustancias diferentes al medio intracelular. MATERIAL: Microscopio, tubos de ensaye, lancetas, portaobjetos, cubreobjetos, bisturí, pipetas Pasteur. MATERIAL BIOLÓGICO: Sangre capilar, o sangre venosa con anticoagulante (para observar eritrocitos), pétalos de flores, de preferencia de color fuerte, para que las vacuolas de antocianinas sean más visibles con el efecto de las soluciones. REACTIVOS: Anticoagulante, solución salina isotónica, solución salina hipertónica y solución salina hipotónica, agua destilada. PROCEDIMIENTO:

1. Obtenga unas gotas de sangre, por punción en la yema del dedo, y deposítelas en un tubo con anticoagulante.

2. Marque sus tubos como 1, 2, 3 y 4 y coloque unas gotas de solución isotónica en el primer tubo, hipotónica en el segundo, hipertónica en el tercero y agua destilada en el cuarto.

3. Agite suavemente (para no romper los eritrocitos) y mezcle. Tome una gota y deposítela en un portaobjetos, cúbralo con un cubreobjetos y observe a seco fuerte y anote sus resultados.

4. Tome un pétalo y haga una incisión con el bisturí hasta la mitad del grosor del pétalo y desprenda la capa “aterciopelada”.

5. Coloque en portaobjetos un fragmento de esta capa, 3 cortes en cada uno y agregue al primero solución isotónica, al segundo solución hipertónica y al tercero, solución hipotónica. Observe a seco fuerte y anote sus resultados.

Reporte :Explique los resultados de cada observación


PRÁCTICA NO. 6.

DIVISIÓN CELULAR POR MITOSIS

INTRODUCCIÓN: Toda célula procede de otra célula preexistente. Las células vegetales crecen debido sobre todo a la toma de agua. Cuando alcanzan un tamaño determinado se dividen, formando cada una de ellas dos células hijas idénticas. Las diversas partes de la célula a menudo están distribuidas asimétricamente y han de repartirse entre las dos células hijas de tal modo que las nuevas células sean copias exactas de la célula original. En los eucariontes, el material hereditario forma parte de cromosomas complejos, la repartición equitativa de este material requiere por tanto un mecanismo más complicado, mediante el cual los cromosomas se dupliquen, se separen y se distribuyan de una manera precisa entre dos células hijas, este mecanismo es la MITOSIS. La mitosis o división celular, apareció evolutivamente como una solución al problema de asegurar una repartición equitativa del material nuclear entre las células hijas, en los organismos eucarióticos. Es un proceso continuo que convencionalmente se divide en cuatro fases principales, profase, metafase, anafase y telofase. En el tiempo antes y después de la mitosis la célula está en interfase. En la mitosis los cromosomas aparecen como largas fibras estiradas que se van acortando a medida que avanza su enrollamiento y que se dirigen hacia el centro de la célula cuando se han contraído completamente. Entonces se escinden longitudinalmente en las dos mitades idénticas, las cuales son llevadas a los polos opuestos de la célula mediante una serie de microtúbulos. En estos dos grupos equivalentes genéticamente, los cromosomas se desenrollan y se establecen en los núcleos de las células hijas. Una planta conserva la mayoría de las células que se forman durante su vida y va produciendo otras nuevas en regiones en activa división celular, localizadas en los ápices de las ramas y las raíces. En los ápices se localizan áreas especializadas de división celular activa, llamadas meristemas (del griego meristos = dividido). En el extremo de cada tallo hay un meristema apical que produce un flujo continuo de células hijas a medida que el tallo se alarga más y más. Este alargamiento es el resultado no solo de la división celular, sino también de que las células nuevas absorben agua y aumentan de tamaño. Luego las células se diferencian en formas adaptadas a la función que desempeñan en la planta adulta. El meristema apical de la raíz produce células hijas hacia delante y hacia atrás. Hacia delante originan la “pilorriza”, una cubierta dura de células que se desgasta continuamente a medida que la raíz avanza a través del suelo y que es regenerada desde atrás por división celular por el sistema apical. OBJETIVO: Que el alumno observe en células vegetales las diferentes etapas de la mitosis.. MATERIAL.- Microscopio, tubos pyrex chicos, portaobjetos, cubreobjetos, bisturí o navaja de un filo nueva y 2-4 agujas largas, aplicadores de madera, pinzas para los tubos, mechero Bunsen, caja de petri. MATERIAL BIOLOGICO.- Un bulbo de cebolla tierna (de cambray), con raíz.


REACTIVOS.- Solución de acetocarmín en frascos goteros, esmalte transparente para uñas. PROCEDIMIENTO: 1. Con tres días de anticipación a la práctica, coloque un bulbo de cebolla (fresca y que tenga raíces largas de más de 3 cm) en un recipiente con agua, para estimular el crecimiento de las raíces. 2. Elija la parte final de una raíz de 4 cm de longitud, córtela por la base con un bisturí y colóquela sobre un portaobjetos. 3. Sujétela por la base y con el bisturí elimine perfectamente la cofia (cubierta protectora cuyas células no están en división). 4. Inmediatamente por debajo de la cofia se encuentran ya las células meristemáticas, corte con el bisturí una porción de 0.5 cm de la parte apical y colóquela dentro de un tubo de ensaye pyrex. Es recomendable procesar de 2 a 3 raíces, para asegurar el obtener células en división. 5. Agregar la solución carmín-acético a que cubra la porción de raíz (aproximadamente 2 ml). 6. Se calienta el tubo hasta que la solución carmín-acético entre en ebullición y se mantiene durante 15 segundos. Tenga cuidado de que no se bote el contenido del tubo. 7. Transcurrido este tiempo se pasa el contenido a una caja Petri y se coloca la raíz con una pinza sobre un portaobjetos. 8. Coloque sobre el portaobjetos que contiene la-s raíces otro portaobjetos y presione firmemente para lograr el aplastamiento y por lo tanto la separación de las capas celulares. 9. Retire con mucho cuidado el portaobjetos de encima de la raíz, coloque un cubreobjetos y presione nuevamente, cuidando de no romperlo. 10. Selle los bordes del cubreobjetos con el esmalte para uñas, transparente. (Para evitar que se seque la muestra y que al enfocar con los objetivos se vaya a mover el cubreobjetos y las capas celulares) 11. Examine al microscopio con objetivo de inmersión, colocando una pequeña gota de aceite de inmersión sobre el cubreobjetos, para observar células meristemáticas en mitosis 12. Tenga paciencia para revisar célula por célula en busca de las diferentes fases de la división celular.

REPORTE: Elabore un mapa conceptual o una V Gowin.


PRÁCTICA NO. 7

MEDICIONES EN EL MICROSCOPIO

INTRODUCCIÓN.- La medición de objetos microscópicos es relativamente sencilla, aunque implica el empleo de los siguientes medios auxiliares o accesorios: ocular de medición, micrómetro objetivo y micrómetro ocular. El micrómetro objetivo: es un portaobjetos de 76 x 25.5 mm, en cuyo centro se halla grabada una escala. La escala es por lo general, de 1 a 2 mm de longitud, y presenta de 100 o 200 divisiones, respectivamente, cada una de las cuales mide 10 micras. El micrómetro ocular: es un disco de vidrio de 12 mm de diámetro o bien un ocular especial, ambos presentan grabada una escala de 5 mm, cada milímetro tiene 10 divisiones de 100 micras cada una. En el caso del disco, éste se coloca sobre el diafragma de cualquier ocular. Y en el caso del ocular éste debe ser del mismo modelo del microscopio. Coeficiente micrométrico: es una cifra que expresa la equivalencia en micras de una división de la escala del micrómetro ocular, al emplear cada objetivo del microscopio. Suele denominarse factor y la operación para obtenerlo, calibración del microscopio. El coeficiente micrométrico es inversamente proporcional al poder de amplificación de los objetivos utilizados. Usualmente se obtienen tres coeficientes micrométricos para cada microscopio, uno para cada tipo de objetivo (10X, 40X y 100X). Una vez que ha sido calibrado el microscopio, no deben intercambiarse ni el ocular micrométrico ni los objetivos del mismo con los oculares micrométricos u objetivos de otro microscopio. Aplicación de las mediciones en el microscopio: en algunas áreas y/o disciplinas es muy importante hacer la medición de ciertas estructuras, por ejemplo en Parasitología médica para diferenciar un parásito de otro, hay que medirlos, ya que producen enfermedades diferentes y su tratamiento y complicaciones difieren. En Hematología la medición de células permite diferenciar cierto tipo de anemias. En el árae de Farmacia se requiere de cierto de tamaño de las partículas de las suspensiones, para que éstas cumplan con su función. En el área de alimentos por ejemplo los corpúsculos de grasa deben tener cierto tamaño para que puedan ser absorbidos a nivel intestinal. OBJETIVO.- Que el alumno aprenda a tomar medidas microscópicas y las distintas aplicaciones que se tienen en diversas disciplinas.

MATERIAL.- Microscopio, micrómetro ocular, micrómetro objetivo, preparaciones biológicas-

PROCEDIMIENTO.-

I) 1.- Se coloca el micrómetro objetivo sobre la platina y se enfoca como cualquier preparación con el objetivo seco débil, con cuidado se localiza la escala y se enfoca hasta que las líneas de la escala se vean claramente. 2.- Se coloca el micrómetro ocular en el ocular de medición Si el microscopio es biocular, se elige uno de ellos). Si se trata del disco micrómetro, se desenrosca primero la parte inferior del ocular y después se inserta la plaquita del micrómetro (con la división hacia


arriba y evitando tocar la escala con los dedos), dejándolo caer suavemente y se vuelve a enroscar la parte inferior del ocular.

Si se trata del ocular especial, se sustituye por el ocular normal.

3.- Se corrige el enfoque de ambas escalas (del objetivo y del ocular) hasta que aparezcan igualmente nítidas. 4.- Luego se colocan paralelas las escalas, muy próximas entre sí o superpuestas, ayudándose con el movimiento de la platina y girando el ocular . 5.- Es necesario hacer coincidir o superponer exactamente dos líneas de ambas escalas empezando por las líneas de cero de ambas escalas, 6.- Luego busque hacia la derecha de las líneas de cero que otra línea coincide de una escala con la otra. 7.- Cuente el número de divisiones que hay para cada escala entre las dos líneas coincidentes (entre el cero y la línea de la derecha). 8.- Aplique la siguiente fórmula matemática para obtener el coeficiente micrométrico:

C.M. = NDMOB x 10 / NDMO

En donde NDMOB = número de divisiones del micrómetro objetivo;

NDMO = número de divisiones del micrómetro ocular y 10 son las micras que mide exactamente cada una de las divisiones del micrómetro objetivo y C.M. = es el número de micras de una división de la escala del micrómetro ocular.

Ejemplo: Se hacen coincidir las dos escalas de los micrómetros como en la figura siguiente, cuando la línea 0 del micrómetro objetivo coincide con la línea 0 del ocular, luego la línea 27 del ocular coincide con la línea 20 del objetivo, por lo tanto, sustituyendo en la fórmula:

C.M. = 20 x 10 / 27 = 7.4 micras

Recuerde: El valor micrométrico encontrado de esta manera, vale únicamente para el objetivo con el cual se ha efectuado la calibración.


9.- Retire el micrómetro objetivo de la platina.

II) Repita los pasos del 1-9 para el objetivo seco fuerte y luego para el objetivo de inmersión. III) Coloque en la platina alguna muestra que le proporcione su profesora-or, enfoque y mida una célula con la escala del micrómetro ocular, con el objetivo seco débil, contando el número de divisiones que ocupa o abarca la célula de interés y aplique la siguiente expresión matemática: NDMOM X C.M. = Talla de la estructura medida expresada en micras Donde NDMOM: es el número de divisiones de la escala del ocular que ocupó o abarcó la célula o estructura de interés; C.M.: es el factor que obtuvo para ése objetivo dónde midió la estructura. IV) Repita el anterior proceso con la misma célula pero con el objetivo seco fuerte y luego con el objetivo de inmersión. V) Anote sus resultados en la siguiente hoja y haga un análisis de los mismos.

1.- Con el objetivo 10X (seco débil), el número de divisiones coincidentes con el

micrómetro objetivo fueron: _________ y el número de divisiones coincidentes con el

micrómetro ocular fueron:________ . Por tanto sustituyendo en la fórmula el Coeficiente

Micrométrico para éste objetivo fue: ___________________________

2.- Con el objetivo 40X (seco fuerte), el número de divisiones coincidentes con el




3.- Con el objetivo 100X (inmersión), el número de divisiones coincidentes con el




4.- El tamaño de la estructura que medí con el objetivo seco débil fue de _________

micras.

5.- El tamaño de la estructura que medí con el objetivo seco fuerte fue de _________

micras.

6.- El tamaño de la estructura que medí con el objetivo seco de inmersión fue de

_________ micras.


REPORTE: Informar los resultados obtenidos para cada objetivo


PRÁCTICA NO. 8

IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS, PROTEÍNAS Y LÍPIDOS. INTRODUCCIÓN: Los compuestos orgánicos más importantes de las células son: los carbohidratos, las proteínas, los lípidos, las vitaminas y los ácidos nucleicos. Dentro de ellos, algunos como los carbohidratos y lípidos son necesarios como fuente de energía, las proteínas también se pueden considerar como fuente de energía, pero no directamente, puesto que esencialmente actúan como reguladoras del metabolismo (enzimas) o para preservar la integridad de las células (proteínas estructurales), y como anticuerpos del sistema inmune. La proteínas son los constituyentes orgánicos más abundantes y hay varios tipos. En casi todas las partes de la célula, las proteínas están presentes de alguna manera. Ciertos tipos que se encuentran en el citoplasma, constituyen el ingrediente principal de los geles protoplásmicos, entre ellos se incluyen las globulinas. Otras proteínas simples se encuentran en el núcleo, como las histonas, importantes en cuanto a la estructura y función de los cromosomas, algunas proteínas son complejos formados por una proteína y otra sustancia. Estas proteínas se llaman proteínas conjugadas. Las nucleoproteínas del núcleo y del citoplasma, las lipoproteínas de la membrana citoplasmática, las cromoproteínas como la hemoglobina y muchas enzimas, constituyen ejemplos de este tipo. Los carbohidratos incluyen varios azúcares, almidones y celulosa de la pared de las células vegetales. Los lípidos son componentes estructurales de las membranas citoplasmáticas y aparecen también como inclusiones insolubles en el hialoplasma. Los fosfolípidos son compuestos importantes que se encuentran en distintos organelos celulares. OBJETIVO Comprobar la presencia (macroscópicamente), de carbohidratos, lípidos y proteínas en productos comestibles. MATERIAL: Gradilla, tubos de ensaye, pinzas para tubo, mortero, parrilla eléctrica, Vaso de precipitado de 600 ml. MATERIAL BIOLÓGICO: Muestras de pan, frutos, cereales, semillas, frutas secas y frescas, lácteos, ... REACTIVOS: Benedict, ácido nítrico, solución de yodo 0.1N, cloroformo, Sudán III, solución de sacarosa, de almidón y de gelatina. PROCEDIMIENTO:

1. Marque 4 tubos y en ellas realizará las reacciones testigo o patrón que le permitirá observar fácilmente la presencia de azúcares, lípidos, y proteínas.

Tubo 1. Deposite 5 ml de solución de sacarosa y agregar 1 ml de reactivo de Benedict. Caliente a baño maría y observe el cambio de color. Tubo 2. Deposite 5 ml de solución de almidón y agregue 1 ml de solución de yodo 0.1N. Observe el cambio de color. Tubo 3. Deposite 5 ml de solución de gelatina, agregue 1 ml de ácido nítrico y caliente el tubo. Anote el cambio de color. Tubo 4. Deposite 1 ml de aceite y agregue 3 ml de agua y 3 de cloroformo, enseguida agregue unas gotas e Sudán III y agite cuidadosamente. (LEJOS DE CUALQUIER MECHERO O FLAMA) y observe el resultado.


Los 6 tubos restantes le servirán para determinar en los comestibles que llevó, triturándolos previamente en un mortero, la presencia de proteína, lípidos, carbohidratos sencillos y polisacáridos, Anote sus resultados y compare con sus determinaciones testigo. Las pruebas anteriores demostrarán macroscópicamente, las substancias orgánicas que se encuentran en forma más abundante en los productos comestibles que le permitirán relacionar a éstos con su origen químico.

REPORTE: ALIMENTOS Y ENERGÍA. ESTIMA: Cada día hay que ingerir un cierto número de calorías si se desea mantener una buena condición física. La energía que tu necesitas depende de tu edad , sexo, tamaño, y el tipo de actividades que realizas. En promedio, una persona como tu requiere cerca de 1 800 kcal al día solo para mantener el calor del cuerpo y asegurar que continúen todas las funciones metabólicas, (metabolismo basal). Esto es lo mínimo que tienes que tomar para sobrevivir durmiendo todo el día en una cama. Pero si haces otras cosas, hay que sumar las calorías extras que se necesitan. La siguiente tabla indica el consumo de calorías al realizar algunas actividades: ACTIVIDAD KCAL POR HORA ACTIVIDAD KCAL POR HORA Sentado(ver tv o leer)

25 Tender la cama 230

Sentado (comiendo)

35 Nadar 320

De pie 40 Bailar 400 Caminar 100 Andar en bicicleta 200 Correr 400 Jugar fútbol 520 Subir escaleras 800 Jugar basquetbol 400 Bañarse 25 Jugar voleibol 120 Haz una lista de tus actividades diarias y del número de horas que gastas en cada una de ellas. Estima la cantidad del total de calorías que requieres para hacer cada una de ellas y anota tus resultados en la siguiente tabla. ACTIVIDAD NO. HORAS KCAL

REQUERIDAS ACTIVIDAD NO. HORAS KCAL

REQUERIDAS A) ¿Cuántas kcal extras requieres al día? B) ¿Cuántas kcal totales requieres al día? Esta energía la obtienes de los alimentos que ingieres, consulta un libro de nutrición donde encontrarás el contenido de carbohidratos, grasas y proteínas de algunos alimentos comunes. Organízate en equipo con tus compañeros de equipo y usen esta información para diseñar un menú balanceado (desayuno, comida y cena) que les proporcione las calorías que requieren al día.


PRÁCTICA N°8

OBSERVACIÓN DE CROMOSOMAS

INTRODUCCIÓN

En biología, se denomina cromosoma (del griego χρώµα, -τος chroma, color y σώµα, -τος soma, cuerpo o elemento) a cada uno de los pequeños cuerpos en forma de bastoncillos en que se organiza la cromatina del núcleo celular durante las divisiones celulares (mitosis y meiosis). La cromatina es un material microscópico que lleva la información genética de los organismos eucariotas y está constituida por ADN asociado a proteínas especiales llamadas histonas. Este material se encuentra en el núcleo de las células eucariotas y se visualiza como una maraña de hilos delgados. Cuando el núcleo celular comienza el proceso de división (cariocinesis), esa maraña de hilos inicia un fenómeno de condensación progresivo que finaliza en la formación de entidades discretas e independientes: los cromosomas. Por lo tanto, cromatina y cromosoma son dos aspectos morfológicamente distintos de una misma entidad celular.

Cuando se examinan con detalle durante la mitosis, se observa que los cromosomas presentan una forma y un tamaño característicos. Cada cromosoma tiene una región condensada, o constreñida, llamada centrómero, que confiere la apariencia general de cada cromosoma y que permite clasificarlos según la posición del centrómero a lo largo del cromosoma. Otra observación que se puede realizar es que el número de cromosomas de los individuos de la misma especie es constante. Esta cantidad de cromosomas se denomina número diploide y se simboliza como 2n. Cuando se examina la longitud de tales cromosomas y la situación del centrómero surge el segundo rasgo general: para cada cromosoma con una longitud y una posición del centrómero determinada existe otro cromosoma con rasgos idénticos, o sea, casi todos los cromosomas se encuentran formando parejas. Los miembros de cada par se denominan cromosomas homólogos. En la figura de la derecha se presentan todos los cromosomas mitóticos de una niña, ordenados por parejas de homólogos y por su longitud, lo que se denomina cariotipo. Puede observarse que en ese cariotipo hay 46 cromosomas (o sea, 2n=46) que es el número cromosómico de la especie humana. Se puede advertir, también, que cada cromosoma tiene una estructura doble, con dos cromátidas hermanas que yacen paralelas entre sí y unidas por un único centrómero. Durante la mitosis las cromátidas hermanas, que son idénticas, se separan una de otra hacia dos nuevas células. Las parejas de cromosomas homólogos que se observan en la imagen tienen, además, una semejanza genética fundamental: presentan los mismos genes situados en los mismos lugares a lo largo del cromosoma (tales lugares se denominan locus o loci en plural). Esto indica que cada miembro del par de homólogos lleva información genética para las mismas características del organismo. En organismos con reproducción sexual, uno de los miembros del par de cromosomas homólogos proviene de la madre (a través del óvulo) y el otro del padre (a través del espermatozoide). Por ello, y como consecuencia de la herencia biparental, cada organismo diploide tiene dos copias de cada uno de los genes, cada una ubicada en uno de los cromosomas homólogos. Una excepción importante en el concepto de parejas de cromosomas homólogos es que en muchas especies los miembros de una pareja, los cromosomas que determinan el sexo o cromosomas


sexuales, no tienen usualmente el mismo tamaño, igual situación del centrómero, la misma proporción entre los brazos o, incluso, los mismos loci. En la imagen puede observarse, por ejemplo, que el cromosoma Y (que determina el sexo masculino en humanos) es de menor tamaño y carece de la mayoría de los loci que se encuentran en el cromosoma X.

Para conocer o estudiar los cromososmas, se pueden usar distintos tejidos o muestras biológicas, ya sea de humanos, vegetales o animales; por ejemplo, en el humano, sangre periférica, medula ósea, fluido amniótico y productos de la concepción (para fines de diagnóstico). En vegetales el clásico estudio se hace en células de cebolla. Y en animales el clásico estudio se hace en la mosca de la fruta o del vinagre, Drosophila melanogaster.

Aunque las técnicas específicas difieren según el tejido usado, el método básico para obtener preparaciones de cromosomas es así:

• Recolección de la muestra y preparación inicial.

• Cultivo celular.

• Adición de un inhibidor de la mitosis para detener las células en metafase.

• Recogida de las células. Este paso es muy importante para obtener preparaciones de alta calidad. Implica exponer las células a una disolución hipotónica, seguida de una serie de disoluciones fijadoras. Esto hace que las células se expandan, de modo que los cromosomas se extiendan y puedan examinarse individualmente.

• Tinción de las preparaciones cromosómicas para detectar los posibles cambios numéricos y estructurales.

OBJETIVO.- Que el alumno conozca los cromosomas, su morfología e importancia a nivel biológico, así como el que aprenda a realizar una técnica de estudio de los cromosomas.

MATERIAL.- Microscopio, laminillas de colección permanentes, material de acuerdo a la técnica a realizar y de acuerdo al material biológico (sangre, cebolla o la mosca de la fruta o del vinagre, Drosophila melanogaster) Procedimiento: Cuando se trata de los glóbulos blancos, se toma una muestra de sangre por su fácil accesibilidad. Siembra: se realiza agregando aproximadamente 1 mililitro de sangre entera heparinizada a un medio de cultivo enriquecido con suero fetal bobino, antibióticos y mitógenos, lo cual estimulará el crecimiento y división de las células. Incubación: Se mantiene a 38.0 grados centígrados con una atmósfera de CO2 al 5 % y humedad por 72 horas idealmente. Cosecha: Se agrega colchicina a la muestra para detener los núcleos ceulares en metafase, posteriormente se cenfrifuga la mezcla para retirar el sobrenadante (suero sanguíneo y medio de cultivo). Se agrega solución hipotónica de cloruro de potasio para romper las membranas celulares y para finalizar el paso de la cosecha se realizan 3 lavados con una solución de metanol-ácido acético 3:1. Goteo: Posterior a los lavados, por medio de centrifugación, se obtiene un botón celular blanco, el cual se suspende en la misma solución fijadora metanol-ácido acético 3:1 y se


procede a gotear en un portaobjetos a unos cuantos centímetros, esto es con el objetivo de "reventar" las células y obtener los cromosomas. Envejecimiento: En este paso se espera a que los cromosomas pierdan humedad. Se puede aplicar calor al portaobjetos para deshidratar la muestra. Tinción: Existen muchos tipos de tinciones para observar los cromosomas. La más utilizada es la tinción con colorante Giemsa, se conoce como técnica de bandas GTG. En este caso se expone la muestra del portaobjetos a tripsina, con el objetivo de desnaturalizar algunas de las proteínas constitucionales de los cromosomas. Posteriormente se tiñen con dos colorantes, Giemsa y Wrigth, en algunos laboratorios puede emplearse un solo colorante, pero el empleo de los dos mejora la calidad del resultado, puesto que facilita el análisis al microscopio para el citogenetista creando un contraste de color en las bandas que se formaron al emplear la tripsina. Por medio de estas bandas podemos distinguir las características de un cromosoma y determinar si es normal o presenta alguna anomalía estructural. Existen otras técnicas de tinción, como bandas NOR, ICH, bandas Q, bandas R, técnicas para teñir centrómero y heterocromatina. Con este tipo de técnicas se puede llegar a realizar un diagnóstico citogenético acerca de una enfermedad cromosómica. Lectura: El último paso consiste en leer por lo menos 20 metafases, es decir 20 células reventadas y formar un cariotipo o cariograma, donde se acomodan los cromosomas por grúpos según el tamaño y la localización del centrómero. REPORTE: Dibuje los cromosomas que observo y anote los nombres de cada de las partes que lo constituyen.


CRITERIOS DE EVALUACIÓN

La acreditación del Laboratorio de Citología te da derecho a la evaluación de la Teoría.

Asistencia 100%. (dos retardos equivalen a una falta).

Elaboración en equipo de un mapa conceptual de cada sesión de laboratorio.

Exámenes parciales Exposiciones por equipo

BIBLIOGRAFÍA 1- Thompson, James S. Genética médica . Barcelona : Salvat Editores, 1975 2- Wells, Albert Laurence The microscope made easy . New York : Frederick Warne, 1957 3- Bernis Matev, J. Atlas de microscopía . Barcelona : Juver, 1973. 4- De Haro Vera, A. Atlas de biología / Barcelona : Jover, 1974. 5- Castillo, Luis Felipe del. El fenómeno mágico de la ósmosis / Mèxico : F.C.E. ; 1986, reimpresión 6- Herrath, Ernest Von. Atlas de citología, histología y anatomí Barcelona : cientifico medica, 1975. 7.- Karp Gerald. Biología celular y molecular. Edit. Mc Graw-Hill Interamericana. 8.- Albert Bruce, Bray Denis. Biología molecular de la célula. Edit. Omega. 9.- De Robertis, Eduardo D.P. Biología molecular. Edit. El Ateneo. Última edición 10.- Lodish, Harvey. Biología molecular y celular. Edit. Médica Panamericana. 11.- Paulsen Douglas F.. Histología Básica. Edit. Manual Moderno 12.- Jawetz, Melnick y Adelberg. Microbiología médica. Edit. Manual Moderno


Reglamento del Laboratorio de Biología

El alumno deberá: 1- Siempre presentarse con bata blanca, incluso si en la sesión sólo se llevan a cabo

seminarios y o exámenes. 2- Cumplir con las actividades y o tareas solicitadas por la profesora. 3- Asistir puntualmente a las sesiones, sólo tendrá 10 minutos de tolerancia, una vez

que se pase lista, si llega después, se considerará como falta. 4- Colocar fuera de las mesas de trabajo, mochilas, suéteres, chamarras u otros

objetos que no requiera para la realización de la práctica. 5- Traer el material biológico o de otro tipo solicitado por la profesora. 6- Siempre traer guantes, cubreboca y perilla para las pipetas. 7- Siempre traer jabón y papel sanitario para el aseo de las manos y para la limpieza

del material de vidrio y de las mesas de trabajo. 8- Solicitar el material que requiere para las prácticas por medio de un vale, ya sea a

la profesora o a la persona encargada del área del material y reactivos. 9- Manejar con mucho cuidado el material, las soluciones o reactivos. 10- Siempre pipetear las soluciones, con la perilla correspondiente y nunca con la

boca. 11-Dejar los frascos de las soluciones en el lugar de donde los tomó, después de su

uso. 12-No desechar soluciones de colorantes, papeles, muestras biológicas sólidas

(vegetales), ni material de vidrio roto (portaobjetos, cubreobjetos, tubos) en las tarjas.

13- No dejar pipetas contaminadas directamente sobre las mesas. 14-Colocar el material contaminado en las bolsas o recipientes correspondientes, de

acuerdo a la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, Protección ambiental-Salud ambiental- Residuos peligrosos biológicos infecciosos- Clasificación y especificaciones de manejo.

15-Manejar y cuidar los microscopios de acuerdo a la información proporcionada al inicio del curso.

16-Anotarse en la libreta que está al lado del microscopio que utilice, y en su caso reportar cualquier anomalía o desperfecto hallado en el microscopio antes o durante su manejo.

17-Limpiar el aceite de inmersión de los objetivos del microscopio, de acuerdo a las indicaciones dadas por la profesora.

18-Al término de la práctica, dejar desconectados los microscopios, cubrir el microscopio con su correspondiente funda y dejar cerrada la caja con llave.

19-Al término de la práctica, dejar limpias las mesas, libres de papeles, material biológico o de otro tipo.

20- Al concluir la práctica, entregar el material que empleó según las indicaciones de la profesora, así como solicitar la devolución del vale.

21- En caso de romper algún material, deberá reponerlo a la brevedad posible, para lo cual se le retendrá el vale.

22- En caso de algún incidente o accidente, deberá informarle a la profesora, para que se tomen las medidas pertinentes.

23-Antes de retirarse del laboratorio, checar que no se le olvide algo, ya que la profesora no se hará responsable por manuales, celulares, libros, batas, etc, olvidados.


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BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA … · 2009-11-24 · Debemos recordar que el objetivo y el ocular del microscopio funcionan como lentes convergentes biconvexas, por lo