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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BAJA CALIFORNIA SUR
CIENCIAS DEL MAR
BIOLOGIA MARINA
DANIEL HERNANDEZ SAAYEDRA
EVIDENCIA DE LA TRANSFORMACION EN LA SUPERFICIE CELULAR DE
Schizosaccharomyces pombe EXPUESTA A TENSION SAUNA POR
ADSORCION HIDROFOBICA EN FENIL Y OCTlL SEFAROSA
LA PAZ B C S 1 985
7
I
I ILlj
13660
DEDICATORIA
A ai esposa elaudia Irene y a alahijos Daniela y Pablo
A a1a padre
nrique y Øatalla
A IÚ h anos
Lui Enrique Alejandra Virginia Alicia MercedJuan Pablo Natali Joaqutn y Beatriz
AGUDECIMIERTOS
Quiero agradecer al Centro de Investigaciones Bio16giças de Baja California Sur A C el apoyo recibido para la realizaci6n de este trabajo
AsI i880 a los profesores del Departamento de Biologla Marina de la Universidad Aut6noma de Baja California Sur que de alguna manera contribuyeron con sus opiniones y sugerencias
T biEn agradezco al Biol Teodoro Reynoso Granados y al P B M Jorge RaGlMurgula Bautista por la elaboraci6n de Dibujos y Grificas
A la Sra Leticia Lirs Castro por la valiosa ayuda en el mecanografeado de
este trabajo
A todas aquellas personas que de una forma u otra contribuyeron en el desarrollo del presente
IRDICE
LISTA DE ABREVIATURAS
TABLA DE EQUIVALERCIAS
RESUMEN
I OBJETIVOS
11 INTRODUCCIOR
111 MATERIALES y MFTODOS
1 Cepa utilizada
2 Medios de cultivo
3 Esterilizaci6n de terial4 Cuantificaci6n del crectaiento5 Condiciones de crecimiento
6 Tratamiento de los geles7 F nsayo de adsorciın hidrof6bica8 AnÆlisis espectrofotomØtrico9 AnÆlisis estadtstico
IV RESULTADOS Y DISCOS ION
1 Crecimiento en diferentes medios de cultivo2 CrecÚBiento en diferentes concentraciones de NaCl
3 Caractertsticas hidrofıbicas de la cepa
V CONCLUSIONES
VI BIBLtOGRAFIA
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11
1
2
3
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20
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47
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ABREVIACIOnS
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Cloruro de IOdio
Potencial de Ridr6geno
Hilllitr08
Atll6sferas
Grados Centlgrados
Hicras
Ha n6llle tr08
Revoluciones por minuto
LogaritDO natural
Concentraci6n Molar
Medio de cultIvo glucosa 1 0
Medio de cultivo galactola 1 0
MedIo de cultivo glucosa 2 0
GrllllOl
H1lIgrllllOs
HicrogrllllOl
Absorbancia
Acido clorbldrico
Partes por 1111
Concentraci6n Rormal
Unidadee Klett
Bi6x1do de carbono
CUulas por aJ lllItro
Nivel de signif1cancia
11
EQUIVALENCIAS
RaCl M NaCl PplII RaCl
1 0
2 0
0
6 0
0 172
0 3l6
0 703
1 069
10
20
1
60
UK A 500
1
IlISUJlI
Mediante la adsorci6n hidrof6bica utilizando I118trices CClllO la fenU y
octil sefarosa se han detectado camios en la superficie celular de
CCllllO resultado de su exposici6n a tell8i6n salina 10 que posible
mente se relacione con un mecanismo de adaptaci6n a tales condiciones
Los resultados obtenidos en la fase experimental demuestran que al BUmen
tar la concentraci6n de NaCl en el medio de cultivo pome disminuye su
crecimiento en relaci6n a dicho incremento
Con el uso de diferentes medios de cultivo se pone en evidencia la d1fereEcia en cuanto a crecimiento se refiere ya sea en relaci6n Gnic8ente al
incremento a la salinidad o en cuanto a las características de cada uno de
los medios utilizados
2
OBJETIVOS
1 0 Obtener informaci6n acerca de la adaptaci6n de organi880s dulcea
cuico las a condiciones de tensi6n salina para el posible aprovech
miento de stos
1 1 Determinar el comportamiento de Schizosaccharomyces pombe en dife
rentes medios de cultivo a diferentes concentraciones de NaCl de
terminando su crecimiento en cada caso
1 2 Aplicar la t cnica de adsorci6n hidrof6bica para detectar loa c
bios en las propiedades hidrof6bicas de la superficie celular de
pombe cuando es expuesta a tensi6n salina
3
INTRODUCCION
La continua sobreexplotaci5n de los mantos aculferos para uso urbano y la
disminuci6n de la calidad del agua provocada por la infiltraci6n de aguas
ocelnicas nos hacen pensar en la futura necesidad de utilizar el agua sa
lobre o de mar para irrigar los campos de cultivo o para procesos que
requieran grandes cantidades de este liquido por lo que es recomendable
realizar estudios que nos permitan conocer los mecanismos mediante los cu
les los organismos dulceacuicolas se pueden adaptar al aumento de salini
dad en el medio
Dentro de estos estudios se han seguido diferentes estrategias y se han u
tilizado diversos organismos desde cultivo de tejidos en plantas superio
res hasta ingenieria genfitica en bacterias Estos estudios se han dirigido
hacia el conocimiento de la respuesta a la tensi6n salina en la pared y
membrana celular ya que dichas estructuras estÆn relacionadas intfmamen
te con el medio externo
Actualmente el estudio de organismos que son expuestos a tensión salina
es un campo de inter s con vistas al posible aprovechamiento de suelos y
aguas salobres que no son utilizadas en la actualidad
SegGn Aller y Oskar 1979 el concepto de biosalinidad involucra la armo
niosa interrelaci6n de sistemas biológicos con sistemas medioambientales
salinos para beneficio del hombre Los suelos ªridos son un parte intrtns
ca del concepto de biosalinidad stos constituyen un recurso actualmente
inutilizado y existen en la zona de influencia de muchos oc anos Los elemen
4
tos esenciales para este concepto son los sistemas biológico y 10 i te
s medioaabientales salinos o marinos Figura No 1
Los sistemas biol6gicos representan antmales plantas microorganismo o
constituyentes celulares Los sistemas físicos salinos estÆn representados
por ocianos estuarios y suelos Æridos
Los estudios en biosalinidad involucran el uso y desarrollo de tecnologtas
avanzadas para producir y procesar derivados de los medioambientes salinos
En la Figura No 2 se muestran algunas alternativas para producir recur
sos biosalinos
Rains y Valentine 1980 indican que el agua es esencial para toda forma
de vida Los sistemas biológicos expuestos a medioambientes con reducida
disponibilidad de agua extrema salinidad temperaturas extreæas sequta
tienen respuestas adaptativas que involucran osmorregulación orginica o
inorgÆnica Cuando los solutos en el agua se concentran comienza una des
hidratación celular hasta causar la muerte del organismo El hombre y ani
males superiores combaten fundamentalmente el problema de ajuste osmótico
usando su sistema renal mientras que los microorganismos y plantas presen
tan respuestas diversas para balancear la tendencia a la deshidratación pr
vocada por la presencia elevada de solutos en el medioambiente que le ro
dea Segœn Brown y Edgley 1980 las respuestas celulares a condiciones
medioambientales extremas son observadas mejor en microorganismos y desde
luego son los Gnicos habitantes de ciertos tipos de medioaabientes extre
mos como lo son los lagos hipersalinos
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7
Diversos investigadores han realizado estudios de osmorregulaci6n utiliza
do levaduras Watanabe y Takakuwa 1984 encontraron diferente c posici6n
de l pidos lntracelulares en Saccharomyces al ser crecida en distin
tas concentraciones de NaCl as como un cambio en su morfolog a celular
Ramada y col 1984 relacionan la estructura de la pared celular y los ma
nanos extracelulares de S rouxii con las variaciones de NaCl en el medio
de cultivo Sus observaciones indican un cambio en la morfologta de
rouxii ademÆs de una modificaci6n m nima en la composici6n qutmica de
la pared celular y manano externo Figura No 3 Estos autores coinciden
en las observaciones hechas sobre el cambio morfológico de S en
condiciones normales sin NaCl en el medio de cultivo la forma es semeja
te a una esfera y al incrementar la concentraci6n de NaCl Ista se modifica
alargÆndose por 10 que adopta una forma elipsoidal
Norkrans y Kylin 1969 comparan el potencial osm6tico y la regula
ci6n de los niveles de sodio y potasio con relación al HaCl en
Saccharomyces cerevislae y Debaromyces hansenii planteando la hip6tesls
de que la resistencia a la salinidad depende particularmente de la habili
dad de movilizar energta para la salida y entrada de Na y K tambiin in
dican un cambio de volumen mayor en S cerevisiae que en hansenii al i
crementar el tiempo de exposición a elevadas salinidades Robot y Jennings
1981 confirman las observaciones hechas por Norkrans y Kylin 1969 cua
do relacionan el crecimiento de D hansenii y S cerevisiae con el incremen
to en la salinidad y pR Ellos encontraron que hansenii crece mÆs fÆcil
mente que S cerevisiae en medios de cultivo con altas concentraciones
de sodio e indican que esto puede deberse a la presencia de una bomba de
1 6 GlucOfto
Mllftbrana
Cltoplallllåtca
Glóbulo di
L˝plcIo
Cltopla ma
MeMbrana
Cltoplalmåtca
Manano
1 3 Glucano
Fig 3 Representación esquemÆtica de una
levadura tipo
Pored
Celular
Nœcleo
Vacuola
q
extrusi6n de sodio que no esti presente en S cerevisiae y si esti prese
te no es activa o efectiva
La determinaci6n del grado de hidrofobicidad en microorganlsmos ha sido
publicado principalmente en bacterias Smyth y col 1978 presentan la
t cnica de cromatografla de interacci6n hIdrof6bica como un nuevo mØtodo
para analizar ripida y convenientemente las propiedades hidrof6bicas de
las superficies bacterianas
Ochoa 1978 indica que dicha t cnica ayuda a determinar la hidrofobicidad
de biomol culas ya que la interacci6n hidrof6bica juega un papel importa
te en los sistemas bio16gicos debido a que las membranas celulares estin
formadas de complejos lipldicos y lipoprotelnas que interactGan princIpal
mente por hidrofobicldad
Por otra parte la t cnica de adsorci6n hidrof6bIca podrla dar mis informa
ci6n acerca de los posibles cambios que ocurran a nivel de la pared o mem
brana celular en organismos expuestos a altas concentraciones de Nae1
LIndah1 y col 1981 utilizando dIferentes cepas de scherIchIa coll
hacen una comparaci6n del grado de hidrofobicidad de la superficie celular
empleando la t cnIca de interaccI6n hIdrof6bIca y una nueva prueba test
basada en la precIpItacI6n con sales de NH4 2S04 su1fato de amonio Fa
bry y col 1981 demuestran la presencia de sItios hIdrof6bIcos en la su
perficie de ribosomas de Escherichia coli mediante el uso de cromatografla
de interacci6n hidrof6bica y propone que en los filtros de nitrocelulosa
los ribosoms se adhieren mediante mecanismos de naturaleza hidrof6bics
Faris y col 1982 aplican la t cnica antes mencionada psra determinar la
hidrofobicidad de algunas especies de vibrios Que poseen caracterlsticas
10
hemaglutinantes ellos asocian dicha característica de adhesi6n a la pro
piedades hidrofıbicas de laa fimbria presentea en estoa lcroorganios
Por otra parte Weiss y col 1982 utilizan como adsorbente hexadecano pa
ra poner en evidencia la hidrofobicidad de la superficie celular de bacte
rias que se encuentran adheridas en la cavidad bucal indicando que un 701
de las bacterias usadas en el exper ento exhiben una elevada habilidad
para adherirse a este hidrocarburo Doyle y col 1984 trabajando con es
poras del genero Bacillus encuentran diferenciaa en el grado de hidrofobi
cidad de subtilis B anthracis y thuringiensis e indi
can que las características hidrofóbicas de las esporas pueden tener un pa
pel importante en la adaptaci6n de ciertas bacterias Ferreirós y Criado
1984 estudian la expresión de la hidrofobicidad en la superficie celular
de Escherichia coli codificada por pliłmidos resistentes a antibiótico
Rplasmids empleando 3 tecnicas Salting out adsorción a xileno y ad
sorci6n a hexadecanos encontrando que no hay correlaci6n en los resulta
dos obtenidos e indican que probableente se debe a la presencia de dife
rentes molØculas hidrof6bicas en la interacci6n con los diferentes mØtodo
No hay informes acerca de la determinación de las caractertsticas hidrof6
bicas de la superficie celular en levaduras 10 que representa un extenso
campo de estudio
11
MATERIAL y HETODOS
Cepa utilizada
SChizosaccharomyces tipo silvestre de la Co1ecciðn de Cultivos
del Instituto de Investigaciones Biom dicas de la Universidad NacionalAut6noma de Hxico
Medios de cultivo utilizados
a Medio de manten1aiento
Se utiliz6 el medio sugerido por Sherman y col 1980
MEDIO MR
Glucosa 2 0 1
2 0 1
101
Peptona
Extracto de levadura
Agua Destilada 100 al
pH 5 4 Aju t8do con
HCl 0 1 N
b Medio de propagad6n
Se emplearon lo medios de cultivo sugeridos por Sherman y col 1980 y
por Norkrans y Kylin 1969 ademÆs una modificac16n de este œltimo en do
de se c8lllbia la fuente de carbono de glucosa a galactosa en la a1811l8 con
centraci6n
Maerooutrieotes
Glucosa
Asparagioa
KB2p04128P0412804
Na2804
Agua destilada
Metales traza
MgCli 6820
CaCl2 2820
Mn804 20
ZnS04 7820
Cu804 S820
FeC6HS07 S820
Addo cttrlco
Vlt8lllinas
Biotlna
Pantotenato dŁ Calcio
Inositol
N 1aclna
Aeldo p amlnobenz81co
MEDIO Il
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g litro
10 00
1 00
0 35
0 15
0 34
0 28
1000 al
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406 60
147 00
4 46
4 31
0 25
10 05
6 30
pg l1tro
2 0
400 0
2000 0
400 0
200 0
13
pg l1tro
Clorhidrato de Piridoxina 400 0
Clorhidrato de Tiaaina 400 0
Riboflavina 200 0
Cianocobalaaina 2 0
pR 5 4 Ajustado con
Rel 0 1 N
MEDIO ME
Es una modificaci6n del anterior cambiando œnicaaente la fuente de carbono
de glucosa a galactosa en la misma concentración
Los medios de cultivo s6lido fueron preparados a una concentración de 2 0
de agar El pH de stos es medido en un potenci6metro Metrohl y son verti
dos en matraces Erlenmeyer de 250 mI hasta completar un volumen de 50 al
Esterilización del material
Los medios de cultivo sin vitaminas se esterilizaron en autoclave duran
te 15 minutos a una presión de 1 1 atm Los componentes termolªbiles como
las vitaminas se esterilizaron por separado usando un sistema de filtra
ción M1llipore con membranas de policarbonato de 0 21 de poro
Cuantificaci6n del crecimiento
La cuantificaci6n del crecimiento de los microorganismos y del nœmero de
cØlulas se realiz6 indirectamente midiendo la absorbancia Densidad Opti
ca a 580 nm de longitud de onda en un espectrofot6metro Espectronic 20
Habiendo ajustado previamente una curva patrón del conteo en hemocit6metro
Cimara de Neubawer y la densidad óptica correspondientes Figura No 4
CDCÞ
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Condiciones de crecfaiento
a Preparaciðn del in6culo
La preparaciðn de los in6culos se realiz6 haciendo una suspensi6n con S 1
de medio de cultivo liquido de c lulas provenientes de un cultivo de 48 h
ras de crecimiento en agar inclinado Esta suspensi6n se vierte en un ma
traz Erlenmeyer de 1000 mI conteniendo 200 mI de medio de cultivo corres
pondiente a cada experimento ste se incub6 bajo las siguientes condicio
nes
Temperatura 24t 20C
Agitaci6n orbital 100 rpm
El tiempo de incubaci6n fue variable segGn el medio de cultivoutilizado en cada caso
b Propagaci6n
Del in6culo anterior se tomaron 5 mI variando la densidad 6ptica de 0 28 a
0 46 Y se adicionaron a matraces Erlenmeyer de 250 mI conteniendo SO mI de
medio usando una campana de flujo laminar VECO y cerca de un mechero para
evitar la contaminaciðn de los cultivos Una serie de matraces se incuban
bajo las siguientes condiciones
Temperatura 24t20C
Agitaci6n orbital 100 rpm
Tomando muestras cada 2 horas a partir del tiempo cero hasta
alcanzar la fase estacionaria de crecimiento variando entre
14 y 18 horas
En todos los casos los experimentos se realizaron por triplicado para que
los datos pudieran ser tratados estadlsticamente cilculo de media y des
viaci6n estindar
16
En cada uno de los matraces se determln6 lo siguiente
Este se determln6 directamente del contenido liquido de cada matraz
usando un potenci6aetro Metrohm
Azœcares totales Se determinaron utilizando la ticnica del fenol sulfœri
co sugerida por Dubois y col 1956 utilizando el sobrenadante
obtenido en la determinac16n de peso seco
Biomasa Se determin6 en nœmero y peso
a en nœmero por absorbancia Se tom6 una altcuota de 5 mI Y se
determln6 la densidad 5ptica a 580 nm en un espectrofot6metro
Bspectronic 20
b Bn peso por peso seco Se tom6 una altcuota de 10 mI en tubos
previamente puestos a peso constante y se centrifugaron a 2500
rpł durante 15 minutos en una centrlfuga DAHON El paquete ce
lular se coloc6 en un horno BLUE M a 600C hasta llevarlo a peso
constante la biomasa se determin6 por diferencia de peso entre
los tubos con y sin paquete celular en una balanza analttica
METTLER RCAR
Con los datos de blomasa se determinaron ademÆs los siguientes
parimetros
Velocidad especifica de crecfaiento p mediante la
slguiente f6rmula
NIIn
No
1t
Tiempo de c1upl1cac16n Td TID 2
d J
Duraci6n de la fase log tlog
1ln
LtI ogp
In NI In NoDuraci6n de la fase tlag t t
lagp
tlogN6 ro de generaciones n n
td
Coeficiente de rendimiento celular con respecto al sustr to Yx
x xo
yx s
So S
De acuerdo al balance de materia expresado por
glucosa amonio agua cØlulas iniciales c lul s finalea
CO2 Agua
Se obtiene el coeficient de rendimiento en base a sustrato por medio dela ecuacion
en donde
yx s
cØlulas finales
glucosa inicialcØlulas iniciales
glucosa final
En donde
N Concentraci5n celular en cØlulas mI
x Concentraci6n celular en gramos de cØlulas por litro
S Sustrato glucosa o galactosa g litro
t Tiempo horas
17
IR
Tratamiento de los geles
Para la utilización de los geles de fenil y octil sefarosa en la tientca
de interacción hidrofóbica Estos fueron lavados con una solución amorti
guadora de fosfatos a una concentración de 0 025H y eon un pH de 5 4 El
lavado se realizó en un filtro de vidrio con una Malla de 20 p de luz has
ta que el filtrado se estabilizó a O de absorbancia a 580 nm con respecto
a un blanco de la solución amortiguadora Estos geles fueron esterilizados
en autoclave durante 15 minutos a 1 1 atm y posteriormente utilizados en
los ensayos de adsorción hidrofóbica
Para la regeneración de los geles se siguieron las recomendaciones de Phar
macia Fine Chemicals
Ensayo de adsorci6n hidrof6bica
Las cElulas utilizadas en el ensayo de adsorciôn hidrofóbica provienen de
la fase exponencial de crecimiento en cada uno de los casos Estas cElulas
fueron lavadas centrifugÆndolas a 2500 rpm durante 15 minutos y resuspen
diØndolas en solución amortiguadora de fosfatos 0 025 K pH 5 4 dos veces
Se colocaron en tubos de ensayo 1 mI de los geles de fenil u octil sefaro
sa resuspendidos en 1 mI de solución de fosfatos y 4 mI de las cØlulas la
vadas y ajustadas a una absorbancia de 1 0 aproximadamente Estos tubos
se invirtieron 3 ó 4 veces hasta homogenizar la suspensión la cual se ver
ti6 a un sistema de filtración M1llipore de 15 mI y con malla de 20 f de
luz Este sistema de filtración se mont6 en un matraz Kitazato y se hizo
vacto con una bomba manual a 0 17 atm lavando con 3 mI de la solución
amortiguadora de fosfatos los geles para efectuar el anÆlisis de los fil
trados
19
AnÆlisis espectrofotomŒtrico
Los filtrados fueron analizados en espectrofot6metro a 580 nm y fueron
comparados con su control en cada caso Los controles se hicieron pasando
4 mI de las cØlulas lavadas por el sistema de filtraci6n y enjuagando el
sistema con un volumen igual de soluci5n de fosfatos 0 025 M pH 5 4
AnÆlisis Estad1stico
Se realiz6 un anÆlisis de varianza a aquellas curvas en las que el creci
miento pudiera ser similar aplicando el modelo de bloques utilizando el
estadhUco F con un 0 0 05
20
R E S U L T A D O S Y D 1 S e u s ION
I CRECIMIENTO EN DIFERENTES MEDIOS DE CULTIVO
En la Figura No 5 se muestran las curvas control de crecimiento de
pombe en los medios de cultivo MD ME Y MR sin NaCl observÆndose
un crecimiento mayor en medio MR debido a laalta disposici6n de nutrien
teso En el medio ME se observa un crecimiento menor que en el caso ante
rior probablemente debido a que en este medio la disposici6n del sustrato
se encuentra a la mitad que en el medio MR Por otro lado el crecimiento
en medio MD es similar al medio ME la œnica diferencia entre estos dos
medios es la fuente de carbono MD Glucosa MEGalactosa lo que puede in
dicar un aprovechamiento similar de estos sustratos
Al aplicar el anÆlisis estadístico entre estas 3 curvas de crecimiento se
hace notar una diferencia en el crecimiento de pombe con un Q 0 05
Pero al analizar solamente el crecimiento entre el medio MD y ME se pone
en evidencia la similitud en cuanto al crecimiento de pombe con un 95
de confianza 10 que apoya lo antes mencionado
Los parametros determinados en la cinŒtica de crecimiento indican 10 si
guiente Figura No 6
a Velocidad especifica de crecimiento p
Se puede observar que en el medio MR la velocidad especifica de crecimien
to es mayor que en 108 casos de los medios MD y ME ya que en este medio
hay mayor disposici6n de nutrientes Por otro lado comparando los medios
ii
IJ 2
Ae
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Tilmpo de incubociÓll In
FiQ 5 Curvos de crecimiento de S pomlJł crecidos en 3
diferentes medios de cultivo Medio MR i 4 t
Medio ME i e t Medio MO
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OMR MD ME
OMR 110 MI
Figuro 6 porÆmetrol de crecimiento de 5ll1H en medios
de cultivo sin NaCI Control
23
MD Y ME se observa que la velocidad espectfica de crecimiento es mayor en
el medio MD lo que podrta indicar que la fuente de carbono es tarta siendo
aprovechada con mas facilidad
b Tiempo de duplicaci6n T
En este caso en el medio MR se encuentra el menor tiempo de duplicación
seguido del medio MD y por œltimo el medio ME Esto se puede explicar por
la naturaleza de la fuente de carbono ya que en los medios MR y MD el sus
trato es glucosa siendo en el medio MR el doble de cantidad que en el me
dio MD Por otro lado en el medio ME la fuente de carbono es galactosa 10
que nos indica que el aprovechamiento de este sustrato bajo estas condi
ciones sin NaCl es menor
c Duraci6n de la fase de adaptaci6n t
La fase de adaptación en los medios MD y ME 1 fuente de carbono no pre
senta diferencias sin embargo cuando se determin6 el tiempo de la fase
de adaptaci6n tI en un medio con alta concentración de fuente de carag
bono 2 MR se observa mayor duración de esta fase probablemente este
fenómeno ocurre por diferencias en presi6n osm6tica del medio de crecimien
to y no por las diferencias en fuentes de carbono Ahora bien es conoci
do que las levaduras excretan al medio las enzimas necesarias para degra
dar la fuente de carbono y bien pudiera ocurrir que como indican Dixon y
Webb 1964 que a altas concentraciones de sustrato disminuye la veloci
dad de reacci6n y por lo tanto hasta que la concentración de sustrato vie
ne a ser la óptima entonces se observa un crecimiento logarltmico como
se describe abajo
24
d Duraci6n de la fase logarttmica de crecimiento t
En este caso se observa un menor tiempo en el medio MR debido al ripido
crecimiento de la poblaci6n ya que no hay nutrientes limitantes En el me
dio K se observa un tiempo ligeramente mayor lo que nos indica que la gl
cosa es asimilada casi de igual manera que en el medio MR Con el medio ME
se incrementa 4 horas en comparaci6n con los medios anteriores MD y MR
lo que nos indica que la fuente de carbono en forma de ga1actosa no es
asimilada con la misma facilidad que en el caso de glucosa ya que para la
asimilaci6n total de la fuente de carbono se requiere de mis tiempo
e Coeficiente de rendimiento celular con respecto al sustrato
lgr cel gr sust1Los datos muestran que con los medios MD y ME se obtiene un rendimiento si
milar y mayor que en el caso de MR esto probablemente a causa de que en
este medio no se aprovecha toda la fuente de carbono debido a la concen
traci6n de metabolit08 que inhiben o limitan el crecimiento celular
f NGmero de generaciones n
En el medio MR se observa el mayor n6mero de generaciones siguiendo el llI
dio ME Y por œltimo el medio MD lo que se relaciona a la magnitud del cr
cimiento de pombe en ada uno de los medios de cultivo
II CRECIMIENTO EN DIFERENTES CONCENTRACIONES DE NaCl
Los valores obtenidos del crecimiento de pombe en diversas concentra
ciones de NaCl se presentan por separado en cada medio de cultivo Los re
soltados del control medios sin NaC1 se discutieron en el capttulo ante
r ior
Con el fin de obtener una eva1uaci6n de la pendiente para calcular los pa
25
rimetros de erecimiento las curvas fueron expresadas en In de UK En las
figuras 7 8 9 inciso b se muestran dichas grifieas
l HE Figura No 7
El creeimiento de pombe a una concentración Molar de 0 172 de NaCl fue
mayor que en el control 10 que puede indicar un mejor aprovechamiento de
la fuente de carbono debido a la presencia de NaCl ` una coneentración de
0 346 M de NaCl el crecimiento fue similar al de las cØlulas control Sin
NaCl y a las concentraciones de 0 703 y 1 069 M hubo una disminución en
el crecimiento debido al aumento de NaCl en el medio
Como se puede notar el ereeimiento de pombe en medio ME se ve afeetado
s6lo al incrementar la eoncentración de NaCl por encima de 0 346 M 1 que
nos indica que las concentraciones de 0 172 y 0 346 M de NaCl no disminu
yen el ereeimiento eon respecto al control Habiendo realizado un anÆlisis
de varianza entre estas 3 condiciones de crecimiento se asegura que el
crecimiento de pombe es similar eon un c 0 05 Sehultz y Curran 1970
indican que la presencia de eiertos iones inorgânicos es esencial para el
transporte de metabolitos a travØs de las membranas biológicas por otra
parte Crane 1968 pone en evidencia que en un medio libre de sodio el
transporte de azœeares a travØs de las membranas biológicas disminuye en
forma considerable lo cual pudiera ser aplieable es este caso estando el
Na a bajas cocentraeiones OOl M en el control e incrementândose a
0 172 y 0 346 M en los easos en los que el crecimiento fue similar al con
trol
Los parimetros de ereeimiento se determinan igual que en el easo del eon
trol y se presentan a continuaci6n
˛it
ı
11Je
81
i 7
1r
50
o
o 6 12tlelnpo inccIboGtifIt Ilrtl
le
b
6
6 12TiMIlpo de 11IC 1Õft
F iO 1 Curvas de crecimiento de S pomb en Medio
ME Y diferentes oonc ntrociones de NaCI
Control 0 112 Mi 0 o346M O O703Mi L069M
o
27
a Velocidad especifica de crecimiento tu Figura No 10
Comparando con el control este parÆmetro decrece a una concentración de
0 172 M para luego incrementarse a una molaridad de 0 346 de NaCI Los
valores a concentraciones de 0 703 y 1 069 M son menores con respecto al
control Estos resultados nos indican que a 0 346 M el crecimiento de
pombe se ve beneficiado debido a un mejor aprovechamiento de los nu
trientes del medio de cultivo
b Tiempo de duplicadón Figura No 11
Aqu se observa que hay un aumento en el tiempo de duplicación a una sali
nldad de 0 172 M de NaCl con respecto al control Por otra parte en una
sa1inidad de 0 346 M existe una disminución del tiempo de duplicación in
c1uso por debajo de los valores obtenidos para el control Los resultados
encontrados a las concentraciones de 0 703 y 1 069 M muestran un aumento
similar en ambos casos con respecto al control Este parÆmetro se comporta
de manera inversa a la velocidad especIfica de crecimiento
c Duración de la fase de adaptación tI Figura No 12ag
Se puede observar un incremento en el tiempo de adaptación conforme aumen
ta la concentración de NaCl 10 que resulta lógico pues mientras se incr
menta la molaridad del NaCl las celulas requieren mayor tiempo para asimi
lar estas condiciones y comenzar a reproducirse
d Duración de la fase 10garItmica de crecimiento tI Figura No 13
Con respecto a este parÆmetro podemos observar que en las concentraciones
de 0 172 Y 0 703 M de NaCI existe un incremento en la duración de esta
fase mientras que a una concentración de 0 346 M esta fase se ve reduci
da probablemente a causa de una rÆpida utilización de la fuente de carbono
28
A una concentraci6n de 1 069 M de NaCl esta fase disminuye considerableme
te 10 cual es producido por la larga duraci6n de la fase de adaptaci6n en
la cual una considerable fracci6n de sus trato es consumido con fines de
mantenimiento sin que se manifieste un incremento celular con la consecuen
te limitaci6n de nutrientes en el medio para un posterior crecimiento en
fase logar tmica Lo anterior puede reflejarse en una disminuci6n en ren
dfmientos
e Coeficiente de rendimiento celular con respecto al sustrato
Y1 Figura No 14
r ce gr susto
Los valores obtenidos reflejan que este parfimetro se ve reducido con res
pacto al control a una concentraci6n de 1 069 M de NaCl mientras que a
0 703 M se nota un incremento considerable lo que podr a indicar que en
este medio de cultivo y a esta concentraci6n de NaCl pombe aprovecha
mejor el sustrato en comparaci6n con el control A 0 346 M no se aprecian
diferencias importantes con respecto al control mientras que a 0 172 M de
NaCl hay un ligero incremento
2 MD Figura No 8
Los resultados obtenidos del crecimiento de pambe en este medio de cul
tivo muestran el efecto del NaCl al incrementar su concentraci6n en el me
dio Aqu se observa que existe una ligera disminuci6n en el crecimiento a
una concentraci6n de 0 172 M Y aœn mÆs a 0 346 M de NaCl DemostrSndose
la diferencia de crecimiento entre el control y a la concentraci6n de
0 172 M de NaCl al realizar un anSlisis de varianza con una significancia
de 0 05 El mayor efecto es observado al incrementar la concentraci6n a
0 703 Y 1 069 M de NaCl Esto parece indicar que en este medio de cultivo
50a
1o
12lsJcf
o6 12
Tlelllpo de incubaCIón hn
b
z
l7J
6 12Tlelllpo de incubocìÓn hn
FiO 8 Curvas de crecimiento de Spomb en Medio MD
y diferentes concentraciones de NaCI Control
0 172 M 0 0 346 M IJ 0 703 M 1069 M
30
el efecto del NaCl se pone MÆs de manifiesto que en los otros medios uti
l1zados
a Velocidad especifica de crecimiento P Figura No 10
La determinación de este parâmetro indica que existe una relación entre el
a ento de NaCl en el medio de cultivo y la disminuci6n de la v locidad
espectfica de crecimiento lo que se explica por el efecto del NaCl en la
inhibición del crecimiento de pombe
b Tiempo de duplicaci6n tD Figura No 11
En la determinaci6n de este parâmetro se observa una relaci6n con reapecto
al incremento de NaCl en el medio de cultivo lo cual parece lógico pues
las cUulas de pombe expuestas al aumento de NaCl tardan MÆs tiempo en
duplicarse debido a la acción inhibidora del NaCl
c Duración de la fase de adaptación tI Figura No 12
Los valores resultantes de la determinación de este parÆmetro muestran que
en todas las concentraciones de NaCl el tiempo de la fase de adaptaci6n es
mayor que en el control Los valores a 0 172 y 0 346 M son similares entre
si Y mis largos que el control mientras que a 0 703 M la relaci6n es igual
que en el control A una concentraci6n de 1 069 M se observa el mayor tiem
po de esta fase lo cual resulta de la elevada concentraci6n de NaCI
d Duración de la fase logarltmica de crecimiento tI Figura No 13
A todas las concentraciones de NaCl se observa un incremento en la dura
ci6n de esta fase con respecto al control Los resultados en las diversas
concentraciones de NaCl presentan una diferencia mtnima incrementindose
de menor a mayor salinidad
31
e Coeficiente de rendimiento celular con respecto al sustrato
Y1 t
Figura No 14gr ce gr sus
Los datos obtenidos dejan ver que el rendimiento celular con respecto al
control disminuye al incrementar la concentración de NaCl A 0 172 M los
valores son muy similares al control mientras que disminuyen a 0 346 M
aumentando a 1 069 M pero por abajo de los valores encontrados en el con
trol Esto indica que en todas las concentraciones de NaCl pombe no es
ti aprovechando el sustrato de la misma manera que las cØlulas control p
ro se puede observar en la comparación entre salinidades 0 346 0 703 y
1 069 M de NaCl que a 1 069 M se encuentra un mejor rendimiento
3 MR Figura No 9
El crecimiento de pombe en este medio de cultivo es el mayor comparado
con los medios HD y ME en todas las concentraciones de NaCl
Al aumentar la concentración de NaCl en el medio de cultivo el crecimien
to de pombe disminuye en relación a dicho incremento
Aqut las curvas de crecimiento control y a una concentración de 0 172 M
de NaC1 pudieran ser las mÆs similares rechazÆndose esta suposición al
realizar un anÆlisis de varianza con un 95 de confianza
A pesar de la inhibici6n parcial del crecimiento de pombe en este medio
al aftadir NaCl el crecimiento es mayor que en los medios anteriores m
y ME esto debido a que la fuente de carbono es mayor el doble que en
los otros medios siendo poSiblemente el œnico factor limitante la prese
eia de NaCl en este medio Los parâmetros calculados indican lo siguiente
a Velocidad especifica de crecimiento p Figura No 10
Los datos obtenidos indican que este parªmetro disminuye conforme aumenta
50a
oü
g 25
e
e̊
O1II
6 12TlelllpO de illcllbockin IlN
b
l
6
O
Õ
o7
1J
5
O 6 12
Tiempo de Incubación In18
Fig 9 Curvos de creciniento de poi11bł en Medio MR
y diferentes concentraciones de NaCl t Control
0 172 M O 0 346M 0 0 703 M t 1069 M
33
la concentraci6n de NaCl Las concentraciones de 0 703 y 1 069 M de NaCl
muestran la misma velocidad especifica de crecimiento entre si Estos re
su1tados indican que el NaCl estS inhibiendo el crecimiento 10 que se re
fleja en la baja asimilaci6n de la fuente de carbono
b Tiempo de duplicaci6n to Figura No 11
Este parimetro se comporta inversamente que el anterior ya que existe
una relaci6n entre la velocidad especifica de crecimiento y el tiempo de
In 2duplicaci6n td tomando en cuenta que este medio de cultivo po
psee una fuente de carbono en exceso asi como varios nutrientes es posi
ble deducir que la presencia de Nael provoca que la divisi6n celular sea
mÆs lenta Este efecto parece ser comGn para otros organismos
e Duraci6n de la fase de adaptaci6n tI Figura No 12
Esta fase presenta una ligera disminuci6n al incrementar la concentraci6n
de NaCl en el medio hasta 0 703 M para luego tener un aumento considera
ble con respecto al control a la concentraci6n de 1 069 M Los datos su
gieren que s6lo a una concentraci6n de 1 069 M de NaCl pombe se ve a
fectada ya que el tiempo que tarda esta fase con respecto al control es 4
veces mayor Las otras concentraciones de NaCl 0 172 0 346 y 0 703 M
comparadas con el control indican que existe una disminuci6n en el tiempo
de adaptaci6n que al parecer no es relevante
d Duraci6n de la fase 10gar1tmica de crecimiento tI Figura No 13
Se observa que al aumentar la concentraci6n de NaCl esta fase se va incre
mentando 10 que se puede explicar debido a una lenta as1milaci6n del sus
trato ya que al estar en cantidades excesivas soporta una fase logarttmi
ea mÆs amplia conforme aumenta el grado de salinidad
34
de este parâmetro con diferentes molarida
des de NaCl se puede observar que a una concenttac16n de 0 172 y 0 346 M
se obtiene un mayor rendimiento comparado con el control 10 que p obable
ente se debe a la utilizaci6n mÆs efectiva del sustrato a estas concentr
ciones En el caso de las otras salinidades 0 703 y 1 069 M el efecto
del NaCl parece ser mÆs evidente ya que los valores disminuyen comparând2
108 con el control
o
a
o
j11
uoz
Iol
u
J
0172 014 0101 LO
ConctrulÓn de N CI 1M
FiO IO Velocidad Específica de Crecimiento J en
S płmÞe en diferentes medios de cultivo y
distintas concentraciones de NaCI Medio
ME O Medio MR Medio MO
10
i
ii
I50
O 0346 UØS 018
COllCllltrOClÓn de Noel M
FiO II Tiempo de duplicación Ud en S pomJe en diferentes medios de cultivo y distintas concentraciones de
NaCI Medio MD i O Medio MR i l Medio ME
o
2
el
0 346Concentración
FiO 12 DuraciÓn de la fase de adaptación t en
S pombe en diferentes medios de cultivo y distintas concentraciones de NaCí 1 Medio MD iO Medio MR Medio ME
I
c2
o
o 0172 o 6 0 703 1
COlICtlltroción cM OCI lit
Fig 13 Duración de la fase logarítmica tIO en S pomJłen diferentes medios de cultivo y distintas concen
tracones de NaCI Medio MO O Medio MR i1 Medio ME
o
º
je
a
02
t
o
o 0 172 Q346 0703 lO92
Concllllroción d NaCl M
Fig 14 Coeficiente de rendimiento celular con respecto al
sustrato y celo su de Spombe en diferentes
medios de cultivo y distintos concentraciones de NoCI
Medio MO O Medio MR Medio ME
40
IU CARACfERISTICAS HIDROFOBICAS DE LA CEPA
Los valores obtenidos mediante el anâllsis espectrofotomEtrico se descri
ben en la Tabla No l Dichos valores son el resultado de las mediciones
hechas despub de efectuar la adsorci6n hidrof6bica en pOIIIbe utilizan
do distintos geles hidrof6bicos Los resultados muestran que existe un co
portamiento diferente en cuanto a adsorci6n dependiendo del medio y la s
linldad utilizada Las condiciones experimentales se describen en Materia
les y Mitodos
1 FENIL SEFARaSA Figura No 15
Los experimentos realizados utilizando este tipo de gel indican lo siguie
te
En el medio MD se observa que las cØlulas crecidas a una molaridad de 0 172
de HaCl se adsorben a las matrices hidrof6bicas en un porcentaje mayor que
con respecto al control 8 0 aproximadamente para luego disminuir a la
concentraci6n de 0 346 M quedando este valor aœn por encima 1 0 apro
xbladamente del porcentaje de adsorci6n obtenido en el control cØlulas
sin HaCl Esto indica que a estas concentraciones de NaC1 la superficie
celular de pombe adquiere propiedades hidrof6bicas distintas que cuando
no existe NaCl en el medio durante el crecimiento A la concentraci6n de
0 703 M el porcentaje de adsorci6n disminuye 3 5 con respecto al control
y hasta 14 5 cuando las cØlulas son crecidas a una molaridad de 1 069 de
H Cl Estos resultados sugieren que existen 2 tipos de respuestas de
s pOlllbe a la tensi6n salina en este medio de cultivo el primero cuando
se somete a crecimiento a bajas concentraciones de NaCl 0 172 y 0 346 M
30
10
1
i
O om 0346 0703ConcentracIÓn de NoCI M
F lO 15 Adsorción de S pombł a matrices de Fenil Sefa
rosa Las cØlulas fueron crecidas en medIos dis
tintos y diferentes salinidades t Medio MO e tMedio ME ð t Medio MR
42
las caractertsticas de adsorción a matrices hidrofóbIcas aumenta con res
pecto al control pero al incrementar la concentracI6n de NaCl a 0 703 y
1 069 M dicha caractertstIca disminuye con respecto a los valores encon
trados en el control
Por otro lado las c lulas crecidas en el medio MR muestran que a concen
traciones de 0 172 0 703 Y 1 069 M los valores de adsorción son mayores
en 4 0 7 0 Y 5 0 respectivamente en comparación con el control este
61tiao presenta valor en porcentaje similar a las crecidss en 0 346 M de
laCl Lo que podrta indicar que con excepción de las c lulas crecidas con
0 346 M de RaC1 en todas las otras molaridades pombe tiende a aumentar
su caractertstica de adsorción a matrices hidrofóbicas
Los resultados obtenidos con la utilización del medio ME hacen notar que
el comportamiento de S pombe al incrementar la concentración de NaCl du
rante su crecimiento es similar al encontrado con el medio MR solo que
en la concentración de 1 069 M el porcentaje de adsorción disminuye a
proximadamente 2 5 con respecto al control
Los resultados de estos experimentos indican que con la utilizaci6n de los
dios MR Y ME a distintas molaridades de NaCl las caractertsticas hidro
f6bicas de la superficie celular de R pambe no muestran relaci6n directa
con respecto al incremento en la concentración de RaCl mientras que con
el medio MD se observa que al aumentar la molaridad de RaCl a 0 172 hay un
incremento en el porcentaje de adsorción que decrece en relacion directa
al aumento en la concentración de RaCI
2 OCTIL SEFAROSA Figura No 16
Los siguientes datos se obtuvieron utilizando el gel hidrof6bico oetil se
O
e0ti
2e
1
o 0 172 0 346 0703ConcentrociÓll d NoCI M
1069
Fig 16 Adsorción de S pombł a matrices de Octll Sefa
rosa Las cØlulas fueron crecidas en medios dis
tintos y diferentes sallnidades Medio MO D t
Medio ME ð t Medio MR
44
far08a Tabla No 1
Al aumentar la molaridad a 0 172 de NaCl en el medio MD se observa un pe
quefto incremento 0 5 de adsorciðn en pombe con respecto al control
En las concentraciones de 0 346 0 703 Y 1 069 M 108 datos indican una
diłainuci6n del grado de adsorciðn en las matrices hidrofóbicas con rela
ci6n al incremento en la sa1inidad 10 que sugiere el mismo comportamiento
encontrado cuando se utilizð fenil sefarosa para la determinación de las
caractertsticas hidrofóbicas de la superficie celular de pombe Los re
8oltados encontrados cuando se utilizan las c lulas crecidas en el medio
MR muestran al igual que en feni1 sefarosa un comportamiento similar en
las propiedades hidrofóbicas de la superficie celular de pombe es de
cir las caractertsticas de adsorción aumentan con respecto al control al
incrementar la salinidad en el medio de cultivo excepto en el caso de
0 346 M en el cual se encontró un porcentaje parecido al del control Mlen
tras que en las concentraciones de 0 172 0 703 Y 1 069 M el aUmento en
adsorciðn es de 2 5 5 0 Y 2 75 respectivamente Esto indica que dicha
caractertstica es dependiente de la presencia de Nael en el medio de culti
VO pero no est en relación directa al incremento de NaCI
Las cŒlulas crecidas en el medio ME muestran que en condiciones normales
Sin NaCl la adsorciðn en las matrices hidrofðbicas es nula para luego
auaentar a 8 4 a una molaridad de 0 172 de NaCl Este valor disminuye a
4 26 a una concentración de 0 346 M Y se incrementa a 8 63 de adsorción
con respecto al control a 0 703 M de NaCl El porcentaje de adsorción de
las cŒlulas crecidas en 1 069 M de NaCl presentan 9 88 de adsorción a
las matrices hidrofóbicas Las caractertsticas de adsorción hidrofðbica en
45
CONCENTRACION DE NaCl
MEDIO CONTROL 0 172M 0 346M 0 703M 1 069M
MI 22 73 23 21 19 82 13 64 10 30
Mil 6 25 8 51 6 12 11 36 9 09 OCTIL
ME 0 00 8 40 4 26 8 63 9 88
MI 17 61 25 30 18 35 14 03 3 08
MI 6 25 10 64 6 12 13 64 11 36 FENIL
ME 3 61 7 98 2 5 1l 48 0 84
TABLA No 1
PORCENrAJE DE INrERACCION RIDROFOBICA DE Schizosaccharomyces pombe CRECIDA
EN DIFERENrES MEDIOS DE CULTIVO Y A DISTINTAS CONCENTRACIONES DE NaCl
46
la luperficie celular de pombe al crecer en este medio de cultivo no
parece estar relacionada de una manera directa al incremento de NaCl pue
to que 101 valores de adsorci6n encontrados son variables dependiendo de
la sa1inidad
Las determinaciones de las caractedsticas hidrof6bicas de la
celular de pombe crecida en diferentes medios de cultivò y a
salinidades utilizando los geles hidrof6bicos fenil y octil
superficie
distintas
sefarosa
estran que existe un comportamiento diferente en cada caso Walther y
col 1984 reportan diferencias al microscopio electrónico en la superf
de celular de pombe al crecer en diferentes medios de cultivo a pesar
de que no existen datos referentes al comportamiento de S pombe con res
peeto a su crecimiento en diferentes concentraciones de NaCl Ramada y col
1984 utilizando la levadura Saccharomyces rouxii ponen en evidencia una
odificaci6n en la composición qutmica de las estructuras superficia
les de al crecer en diferentes molaridades de NaCl Lo que po
dda explicar el comportamiento de pombe al determinar las caractedst
cas hidrofåbicas de su superficie celular bajo las diferentes condiciones
de crecimiento tanto en medio de cultivo distinto como en diferentes con
centraciones de NaCl
47
e o N e L u S ION E S
En base a los resultados obtenidos se puede notar la diferencia en cuanto
al aprovechamiento de nutrientes en los diferentes medios de cultivo para
el crecimiento de pombe
La aptitud de pombe para obtener nutrientes del medio de cultivo estå
relacionada con la naturaleza del medio ya que como se observa en el caso
de la utilización del medio MR la respuesta al incremento en la salinidad
es evidente pero no tan marcadamente como en el caso de los medios HD y
ME 10 que indica que siendo MR un medio enriquecido y los medios HD y ME
edios de cultivo con nutrientes bien definidos al incrementar la concen
traci6n de NaCl el crecimiento de pombe es proporcional al tipo de me
dio de cultivo y aprovechamiento de ste
Lo mismo sucede en las propiedades hidrofåbicas de la superficie celular
de pombe en donde en el medio HD es mÆs evidente el cambio gradual de
las caracteristicas hidrof6bicas de pombe al incrementar la salinidad
Comportåndose de diferente manera en el caso de los medios ME y MR Por 10
que se puede poner de manifiesto que la respuesta a la tensi6n salina en
pombe es mås evidente en el medio HD en cuanto al crecimiento mientras
que en la determinación de las propiedades hidrofðbicas utilizando la ad
sorciðn hidrof6bica en los geles de fenil y octil sefarosa se presentan
evidencias mås claras de la transformación en la superficie celular de
pombe al incrementar la salinidad en el medio HD durante su crecimiento
De esto se desprende que la utilización de esta t cnica en la caracteriza
ci6n de las propiedades hidrofóbicas de la superficie celular de microorg
48
n s es aplicable siempre y cuando se tenga el conocimiento de la res
puesta al medioambiente de dicho microorganismo para a81 determinar los
paretros mis acordes y poder estimar un posible cambio en sus propieda
des hidrof6bicas ante un cambio en el medioambiente que 10 rodea como un
aecanismo de adaptaci6n a dicho cambio
49
BIBLIOGRAFIA
l Aller J C y R Z Oskar 1979 The Biosaline Concepto pp 2 8 En
The Biosaline Concepto Rollander A ed Plenum Press New YorkLondon
2 Brown A D y M Edgley 1980 Osmorregulation ineucariotlc organlsmsp 3 En GenetIc EngineerIng of osmorregulation Rains D W ed
P1enum Press New York London
3 Crane R K 1968 Absorption of sugars pp 1323 1351 En Randbookof Physi010gy Code C F ed 1
4 Doyle R J N H FarIborz y J S Singh 1984 Hydrophobic Characteristics of Bacll1us Spores Curro Microblol 10 329 332
5 Dubois M K A GIlles J K Ramllton P A Roberts y F SmIth1956 Color1metrlc method for determlnation of sugars and related
substances Anal Chem 28 350 356
6 Dixon M y E C Webb 1964 Enzymes Longmans London 2nd edltlon
7 FÆbry M L Kaluoda e l Rychl k 1981 Rydrophoblc lnteractionsof Escherichia coli rIbosomes Bioch1m BIophys Acta 652 139 150
8 Faris A M Lindahl y T Wadstrom 1982 High surface hydrophobicity of hemagg1utinating Vibrio cholerae and Other Vibrios Curr Micro
biol 7 357 363
9 Ferreirós C M y M T Criado 1984 Expression of surface hydrophobicity encoded by Rplasmids in EscherichIa coli laboratory strains
Arch Microbiol 138 191 194
10 Ramada T F Noda y K Hayashi 1984 Structure of Cell Wall and
Extracellular Mannans from Saccharomyces rouxil and Their Relationshipta a Righ concentration of NaCl in the Growth Medium App and Environ
Microbiol 48 4 708 712
11 Robot J A y D R Jennings 1981 Growth of Debaromyces hansenii and
Saccharomyces cerevisIae in relation to pR and salinity Exp Mycol5 217 228
50
12 L1ndah1 M A Faris T Wadstrom y S RjertŒn 1981 A new test on
Salt1ngout to mesure re1at1ve surface hydrophobicity of hacterialcells Biochim Biophys Acta 677 471 476
13 Norkrans B y A Kylin 1969 Regulation of the Potassium to Sodiumratio and osmotic potential in relatioo to salinity in yeast J Bacte
riol 10 836 845
14 Ochoa J t 1979 Hydrophobic interactioo chromatography Biochimie
60 1 15
15 Raios D W y R C Va1entine 1980 Biologica1 Strategies for Osmo
rregu1ation p 3 En Genetic Engineering of Osmorregulation Ralos
D W ed Plenum Press New York London
16 Schultz S G y P F Curran 1970 Coupled transport of soð1um and
inorganic solutes Physiol Rev 50 637 718
17 Sherman F G R Fink Y J B Hicks 1980 Methods in Yeast Genetlcs
Cold Spring Harbor Laboratory New York 61
18 Smyth C J R Jonsson E 01sso O Soderlind J Rosengren S
Hjerten y T Wadstrom 1978 Diferences in Hydrophobic surface characteristics of porcine enteropathogenic Escherichia coli with or
without T88 antigen as revealed by hydrophobic interaction chromatography Infect and Immun E 2 462 472
19 Walther P M Muller y M E Scuweingruber 1984 The ultrastructureof the cell surface and plasma membrane of exponential and stationaryphase cells of Schizosaccharomyces pombe grown in different media ArchMicrobio1 137 128 134
20 Watanabe Y y M Takakuwa 1984 Effect of Sodium Chloride on LipldComposltion of Saccharomyces rouxii Agric Bl01 Chem 48 10 24152422
21 Welss E M Rosenberg R Judes y E Rosenberg 1982 Cell surface
hydrophobicity of adherent oral bacterla Curro Microbiol 125 128
