Upload
danielle-nieves
View
270
Download
5
Embed Size (px)
DESCRIPTION
Lp
Citation preview
1
Coloraţii şi coloranţi
2
COLORAREA
etapa prin care se urmetapa prin care se urmăărereşşte te crecreşşterea contrastului dintre terea contrastului dintre diferitele diferitele ccomponente tisulare omponente tisulare prin modificarea indicilor de prin modificarea indicilor de refracrefracţţie ai substratului ie ai substratului morfologic cu ajutorul morfologic cu ajutorul colorancoloranţţilor .ilor .
3
COLORAREA
Tehnica de colorare depinde de Tehnica de colorare depinde de natura fixatorului utilizat natura fixatorului utilizat şşi de i de ţţesutul pe care dorim sesutul pe care dorim săă îîl l examinexaminăăm.m.
4
COLORANTUL HISTOLOGIC substansubstanţăţă chimic chimicăă colorat colorată,ă, de de
obicei de naturobicei de naturăă organic organică,ă, ce ce poate intra poate intra îîn celuln celulăă ata ataşâşându-se ndu-se la nila nivvelul componentelor elul componentelor celulare celulare şşi permii permiţâţând astnd astffel el diferendiferenţţierea lor opticierea lor opticăă..
Nu toate substanNu toate substanţţele colorate ele colorate sunt coloransunt coloranţţii!!
5
COLORANŢI
- - grupgrupăări cromoforeri cromofore – – purtpurtăătoare de culoaretoare de culoare
- - grupgrupăări auxocromeri auxocrome – – capacitatea de a coloracapacitatea de a colora
6
GRUPARILE AUXOCROME 1.1.Ionizate Ionizate ( principale ) – formeaz( principale ) – formeazăă
leglegăături electrochimice cu turi electrochimice cu substratulsubstratul
2.2.Neionizate (Neionizate ( secundare) – secundare) – formeazformeazăă legaturi de hidrogen cu legaturi de hidrogen cu substratul. Acest tip de legatursubstratul. Acest tip de legaturăă mmăărreşeşte stabilitatea colorantului.te stabilitatea colorantului.
7
CLASIFICAREA COLORANŢILOR
-- natura lor natura lor
- - caracterele chimicecaracterele chimice
8
CLASIFICAREA COLORANŢILOR După natura lor
Naturali Naturali
-- vegetali : hematoxilina vegetali : hematoxilina ,safranina , orceina , turnesolul,safranina , orceina , turnesolul
- - animali : carminulanimali : carminul
SinteticiSintetici : albastru de metil : albastru de metil
9
CLASIFICAREA COLORANŢILOR Dupa caracterele chimice
AciziAcizi – sunt de obicei s – sunt de obicei săăruri de ruri de acizi organici , gruparea acizi organici , gruparea auxocromauxocromăă principal principalăă fiind fiind îîncncăărcatrcatăă electric negativ. electric negativ.
- s- se atae ataşşeazeazăă pe un substrat pe un substrat morfologic morfologic îîncncăărcat electric rcat electric pozitivpozitiv
10
CLASIFICAREA COLORANŢILOR Dupa caracterele chimice
BaziciBazici – gruparea auxocroma – gruparea auxocroma principalprincipalăă îîncncăărcatrcatăă electric electric pozitiv , deci se va atapozitiv , deci se va ataşşa pe un a pe un substrat substrat încărcatîncărcat negativ negativ
11
CLASIFICAREA COLORANŢILOR Dupa caracterele chimice
NeutriNeutri – grup – grupăări auxocrome ri auxocrome principale principale îîncncăărcate electric rcate electric pozitiv pozitiv şşi negativ, fiind solui negativ, fiind soluţţii ii apoase de coloranapoase de coloranţţi bazici i bazici şşi acizi i acizi îîntr-o anumitntr-o anumităă propor proporţţieie
12
MECANISMUL COLORĂRII
PROTEINELE - PROTEINELE - substratul substratul molecular la nivelul cmolecular la nivelul căărora se rora se fixeazfixeazăă coloran coloranţţii prin legii prin legăături turi electrochimice electrochimice şşi de hidrogen.i de hidrogen.
13
MECANISMUL COLORĂRII
In funcIn funcţţie de tipul grupie de tipul grupăărilor rilor ionizabileionizabile din structurdin structurăă , , proteinele sunt proteinele sunt
1 acide1 acide
2 bazice2 bazice
3 neutre3 neutre
14
MECANISMUL COLORĂRII
ColorantColorant bazic – bazic – substrat substrat ((==proteina) proteina) acid acid (ex: hemalaunul)
Nucleul – caracter bazofil:
albastru-închis / violet
15
MECANISMUL COLORĂRII
Colorant acid – substrat bazic (ex: eozina)
Citoplasma – caracter acidofil: roz/roşu
16
Evidentierea componentelor celulare ( hemalaun-eozină)
17
ETAPELE COLORĂRII
1.1. DeparafinareaDeparafinarea
2.2. HidratareaHidratarea
3.3. Mordansarea ( la nevoie)Mordansarea ( la nevoie)
4.4. Colorarea propriu-zisăColorarea propriu-zisă
5.5. SpălareaSpălarea
6.6. DeshidratareaDeshidratarea
7.7. ClarificareaClarificarea
18
METODE DE COLORARE
1.1. In funcţie de momentul colorăriiIn funcţie de momentul colorării
2.2. Dupa nr. de coloranti utilizaDupa nr. de coloranti utilizaţţi i
3.3. DupDupăă mecanism mecanism
4.4. După metoda de obţinere a După metoda de obţinere a coloraţiei optimecoloraţiei optime
5.5. In funcţie de raportul dintre In funcţie de raportul dintre rezultatul colorării şi culoarea rezultatul colorării şi culoarea colorantuluicolorantului
19
Momentul colorării
VitaleVitale - colorant vital care - colorant vital care este este îîncorporat de animal ncorporat de animal îîn n timpul vietimpul vieţţiiii; ; persistpersistăă numai numai atatâât timp ct timp câât celulele t celulele supraviesupravieţţuiesc uiesc îîn vitron vitro
PermanentePermanente – pentru – pentru colorarea preparatelor colorarea preparatelor permanentepermanente
20
Număr de coloranţi
a a Simple Simple – folose– foloseşşte un singur te un singur colorantcolorant
b b Combinate Combinate (policrom(policromăă) – 2 sau ) – 2 sau mai mulmai mulţţi colorani coloranţţii
i. Succesivi. Succesivăă
ii. ii. SimultanSimultană,ă, ex . : ex . : hemalaun hemalaun -- eozin eozinăă, azan, azan
21
Mecanism
-- directdirectăă –simplu contact –simplu contact dintre colorant si substratdintre colorant si substrat
- - indirectindirectăă necesitnecesităă prezen prezenţţa a unui mediator sau MORDANT , unui mediator sau MORDANT , îîntre colorant ntre colorant şşi substrat. i substrat. Acesta fixeazAcesta fixeazăă colorantul de colorantul de componentele celulare. componentele celulare.
22
Metoda de obţinere a coloraţiei optime
- - progresiveprogresive – prin – prin adăugări adăugări succesive psuccesive pââna se ajunge la na se ajunge la momentul optim de colorare momentul optim de colorare
- - regresiveregresive - prin ac - prin acţţiunea iunea prelungitprelungităă a colorantului p a colorantului pânăână la obla obţţinerea unei supracolorinerea unei supracolorăări , ri , apoi se acapoi se acţţioneazioneazăă cu un agent cu un agent chimic decolorant chimic decolorant (diferenţiator)(diferenţiator) (e(ex. Coloratia x. Coloratia NisslNissl))..
23
Rezultatul colorării şi culoarea colorantului
- - OrtocromaticOrtocromaticăă – substratul – substratul se coloreazse coloreazăă îîn aceean aceeaşşi culoare i culoare ca ca şşi cea a colorantuluii cea a colorantului
- - MetacromaticMetacromaticăă - substratul - substratul se coloreazse coloreazăă îîn altn altă ă culoare ca culoare ca cea a colorantuluicea a colorantului
24
IMPREGNARI METALICE
PRINCIPIU: PRINCIPIU: precipitat de metal precipitat de metal care se depune pe diferitele care se depune pe diferitele elemente de tesuturi elemente de tesuturi evidenevidenţiindţiind structuri care structuri care îîn n mod obisnuit nu se coloreazmod obisnuit nu se coloreazăă cu colorancu coloranţţi.i.
- - cele mai folosite sunt : Ag , Au , cele mai folosite sunt : Ag , Au , Os , Hg.Os , Hg.
25
IMPREGNARE ARGENTICĂ
- - folositfolosităă pentru eviden pentru evidenţţierea ierea elementelor din elementelor din ţţesutul esutul epitepiteeliallial,, conjunctiv conjunctiv şşi i îîn n cercetarea sistemului nervos.cercetarea sistemului nervos.
RezultateRezultate: structurile vizate : structurile vizate sunt colorate în negru.sunt colorate în negru.
26
Rezultate Componenţi
Coloraţia
27
COLORAŢIA HEMALAUN EOZINĂ 2 coloran2 coloranţţii::
1 1 -- hemalaunul – colorant bazic hemalaunul – colorant bazic
2 2 - - eozina – colorant acideozina – colorant acid
REZULTATEREZULTATE
- - nuclei – albastru - violetnuclei – albastru - violet
- - citoplasma – roz- rosucitoplasma – roz- rosu
28
HEMALAUN-EOZINĂ
29
COLORAŢIA HEMALAUN – EOZINA CU ALBASTRU DE METIL
- - coloratie coloratie tricromtricromăă1. hemalaun1. hemalaun2. eozina 2. eozina 3. albastru 3. albastru de metilde metil
REZULTATE REZULTATE 1. Nuclei – 1. Nuclei – violetviolet2. Citoplasma 2. Citoplasma – albastru – – albastru – cenusiucenusiu3. Fibrele de 3. Fibrele de colagen – colagen – albastrualbastru intens intens
30
COLORAŢIA HEMALAUN – EOZINA CU ALBASTRU DE METIL
31
COLORATIA VAN GIESON- - coloratie coloratie tricromtricromăă
1. 1. hematoxilina hematoxilina fericfericăă
2. acidul 2. acidul picricpicric
3. fuxina 3. fuxina acidacidăă
REZULTATEREZULTATE
1. Nuclei – 1. Nuclei – negrinegri
2. Citoplasma 2. Citoplasma – galben– galben
3. F3. Fiibbrere de de colagen – rocolagen – roşşu u intensintens
32
VAN GIESON
33
COLORATIA MASSON
- - coloratie coloratie tricromtricromăă 1. 1. hematoxilinhematoxilinăă fericfericăă2. solu2. soluţţia ia colorantcolorantăă A ce A ce conconţţine fuxinine fuxinăă acidacidăă3. solu3. soluţţia ia colorantcolorantăă B ce B ce conconţţine albastru ine albastru de anilinde anilinăă
REZULTATEREZULTATE1. Nuclei – 1. Nuclei – negru negru 2. Citoplasma 2. Citoplasma – ro– roşşu – violet u – violet deschisdeschis33 Fibrele de Fibrele de colagen – colagen – albastru intensalbastru intens
34
COLORATIA MASSON
35
COLORATIA MALLORY
Se utilizeazSe utilizeazăă : :
1. fuxin1. fuxinăă acid acidăă
2 albastru 2 albastru Mallory ( contine Mallory ( contine albastru de anilina albastru de anilina şşi orange G )i orange G )
REZULTATE REZULTATE 1. Nuclei - ro1. Nuclei - roşşu u intensintens2. Citoplasma – ro2. Citoplasma – roşşieie3. F3. Fiibbrere de colagen de colagen şşi reticulini reticulinăă – albastru – albastru4. 4. ŢŢesut muscular esut muscular neted - violetneted - violet5. 5. ŢŢesut muscular esut muscular striat - rostriat - roşşu – u – portocaliuportocaliu
36
COLORATIA MALLORY
37
COLORATIA AZAN
-- azocarmin Cazocarmin C
- albastru - albastru Heidenhein , cu Heidenhein , cu anilinanilinăă şşi i orange Gorange G
REZULTATEREZULTATE
Nuclei – roNuclei – roşşu – viuu – viu
Citoplasma – roCitoplasma – roşşuu
FFiibbrere de colagen de colagen şşi i reticulinreticulinăă – albastru – albastru deschisdeschisŢŢesut muscular striat – esut muscular striat – roroşşu , orange sau u , orange sau galbengalben
38
COLORATIA AZAN
39
COLORATII CITOLOGICE
- - utilizate pentru evidenutilizate pentru evidenţţierea ierea anumitor organite ceanumitor organite celularelulare
40
METODA CAJAL DA FANO
- - evidenevidenţţierea complexului Golgiierea complexului Golgi
REZULTATEREZULTATE Nuclei – necoloraNuclei – necoloraţţii Aparatul Golgi – reAparatul Golgi – reţţea ea
perinuclearperinuclearăă de culoare neagr de culoare neagrăă Citoplasma – aurieCitoplasma – aurie
41
METODA CAJAL DA FANO
42
METODA HEMATOXILINA FERICA REGAUD
- - evidenevidenţţierea mitocondriilorierea mitocondriilor
REZULTATEREZULTATENucleu – necoloratNucleu – necoloratNucleol – negruNucleol – negruMitocondrii –puncte negreMitocondrii –puncte negre
43
METODA HEMATOXILINA FERICA REGAUD
44
TEHNICI DE EXAMINARE A TESUTULUI EPITELIAL
IMPREGNAREA ARGENTICA RANVIER
- - evidentierea interstievidentierea interstiţţiului iului dintre celulele epiteliului din dintre celulele epiteliului din seroase – limitele intercelulare seroase – limitele intercelulare apar net apar net îîn culoarea neagrn culoarea neagrăă
45
IMPREGNARE ARGENTICA ŢESUT EPITELIAL
46
TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI
CONJUNCTIV
COLORACOLORAŢŢIA CU ALBASTRU DE IA CU ALBASTRU DE TOLUIDINTOLUIDINĂĂ
- - granulagranulaţţiile din mastocite prin iile din mastocite prin coloracoloraţţie metacromaticie metacromaticăă îîn n roroşşu – violetu – violet
47
48
TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI
CONJUNCTIVMETODE PENTRU EXAMINAREA METODE PENTRU EXAMINAREA
FIBRELOR CONJUNCTIVEFIBRELOR CONJUNCTIVE 1. 1. Fibrele de reticulinFibrele de reticulinăă – se – se
examineazexamineazăă folosind o metoda electiv folosind o metoda electivăă - IMPREGNAREA ARGENTICA – - IMPREGNAREA ARGENTICA – şşi apar i apar colorate colorate îîn negrun negru
2. 2. Fibrele elasticeFibrele elastice – se poate utiliza – se poate utiliza coloracoloraţţia cu ia cu
a. Rezorcin fuxina - albastrea. Rezorcin fuxina - albastreb. Orceinb. Orceinăă – cafeniu - roscate – cafeniu - roscate
49
Fibre elastice – orceină Fibre reticulină – impregnare argentică
50
TEHNICI SPECIALE PENTRU EXAMINAREA ŢESUTULUI MUSCULAR
METODA HEIDENHEINMETODA HEIDENHEIN- - evidentiazevidentiazăă structura periodic structura periodicăă
a miofibrilelor. Se remarca miofibrilelor. Se remarcăă alternanalternanţţa de zone clare a de zone clare şşi i îîntunecate.ntunecate.
51
METODA HEIDENHEIN
52
Metode speciale pentru evidenţierea ţesutului nervos- - metoda Nisslmetoda Nissl- impregnare argenticimpregnare argenticăă- EvidenEvidenţţierea tecii de mielinierea tecii de mielinăă
prin fixare cu tetraoxid de prin fixare cu tetraoxid de osmiuosmiu
53
Impregnare Ag Nissle
54