Facultad de Medicina Humana y Ciencias de la SaludEscuela de Medicina Humana

Practica No. 9: Determinacin cuantitativa de Triglicridos

Curso: Bioqumica y NutricinGrupoN 3

Docentes:1) Bolarte Arteaga, Mario A.2) Soriano Chvez, Gabriela

Alumnos:1) Andrs Medrano, Jess Alejandro++++2) Rodrguez Ruiz, Jos Luis++++3) Rojas Laura, Christian Saul++++4) Silva Willis, Evelyn Estephana++++5) Vela Villacorta, Diego Martin++++6) Ziga Mercado, Daniel Alfredo++++

Fecha de entrega:23/10/2013Introduccin y Marco TericoLos triglicridos forman la mayor parte del peso seco del tejido adiposo, constituyendo por lo tanto una potente forma de almacenamiento de energa.Lostriglicridos,triacilglicridosotriacilglicerolessonacilgliceroles, un tipo delpidos, formados por unamolculadeglicerol, que tieneesterificadossus tres gruposhidroxlicospor trescidos grasos, ya seansaturadoso insaturados.Los triglicridos forman parte de lasgrasas, sobre todo de origen animal. Losaceitesson triglicridos en estado lquido de origen vegetal o que provienen del pescado.Los cidos grasos estn unidos al glicerol por el enlacester:CH2COOR-CHCOOR'-CH2-COOR"Donde R, R', y R" son cidos grasos; los tres cidos grasos pueden ser diferentes, todos iguales, o slo dos iguales y el otro distinto. Cada cido graso se une por la reaccin de esterificacin:Acido carboxlico+ alcoholster + agua R1-COOH + R2-OHR1-COO-R2+ H2OCon el caso particular de:cido graso + gliceroltriglicrido + aguaLa longitud de las cadenas de los triglicridos oscila entre 16 y 22 tomos de carbono.El movimiento de cidos Grasos entre los distintos compartimientos del organismo, se produce con gran rapidez en respuesta a diversos estmulos (dieta, actividad fsica, stess, edad, etc).Por este motivo es de esperar que los triglicridos (uno de los ms importantes vehculos para el transporte de cidos grasos) varen tambin su concentracin en respuesta a estos factores fisiolgicos.Para la determinacin de triglicridos en suero se usara la determinacin enzimtica de glicerol a partir de glicridos.Los mtodos enzimticos se basan en la determinacin del glicerol contenido en las molculas de los triglicridos, tras la hidrolisis para remover los cidos grasos.

Observaciones experimentalesMateriales en General: Espectrofotmetro Probeta, micro pipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados. Frasco de vidrio color mbar. Cubetas espectrofotomtricas. Bao de agua a 37 C. Reloj. Reactivo de Trabajo. Tubos de ensayo. Tubo (Vacutainer) Desarrollo:Experimento A:Determinacin de Triglicridos en Suero-Para empezar con la prctica se necesita un paciente en ayunas (Rojas) para la extraccin de sangre con el Vacutainer. Y obtener una muestra.Esta muestra de sangre extrada del paciente ser centrifugada y se separara el suero.

-Posteriormente a esto se homogeniza la muestra antes de usar.-Colocar 3 tubos de ensayo marcados: B (Blanco), S (Standard) y M (Muestra) colocar en los 3 tubos lo siguientes:TubosBlancoStandardMuestra

Muestra------10 uL

Standard---10 uL---

Reactivo de Trabajo1 ml1 ml1 ml

Incubar 5 minutos en Bao Mara a 37C.Enfriar y leer en el espectrofotmetro a 515 nm.

Resultados experimentales

Para la lectura e interpretar los resultados se debe hacer un procedimiento antes en el cual se tiene que calibrar el tubo BLANCO en el espectrofotmetro para obtener la absorbancia. Teniendo como resultado 0.593.Posteriormente se debe de llevar el espectrofotmetro el tubo MUESTRA para obtener como resultado 0.150.Aadiendo a esto que el Reactivo de trabajo tiene un standard de 200 mg%.Para hallar la concentracin de triglicridos en el suero problema, se debe utilizar el mtodo del factor de calibracin.Triglicridos (mg%) = M x Fc.0.150 x 200 / 0.593 = 50.59 mg/dL.Dando un resultado de 50.59 mg/dL.

Discusiones de las observaciones y resultados

Teniendo un resultado de 50.59 mg/dL. Segn los expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) este resultado est dentro de los valores Deseables siendo < 150 mg% lo Normal.

Conclusiones

Los triglicridos son un tipo de grasa que se encuentra en nuestra sangre. El cuerpo produce parte y el resto proviene de muchos de los alimentos que comemos. Son las grasas ms comunes en nuestro organismo y una de las fuentes de energa ms importantes.

Cuestionario

1) Describa las caractersticas principales de los lpidos y su clasificacin

Caractersticas: . Son sustancias de composicin qumica extremadamente variable.. Tienen la particularidad de ser insolubles en agua.. Son energticos, las grasas se utilizan en su mayor parte para aportar energa al organismo.. Aislante trmico

Clasificacin:Lpidos sencillos . Mantecas, ceras, aceites, grasas, triglicridosLpidos compuestos . Fosfolpidos, lipoprotenas, glucolipidosLpidos derivados . Aceites no comestibles (hidrocarburos), cidos biliares, colesterol, vitaminas liposolubles.

2) Explique la importancia biolgica de los triglicridos.

Los triglicridos, est compuesto por 1 molcula de glicerol ms 3 molculas de cidos grasos. Los triglicridos lo obtenemos de los alimentos, los cuales nos sirven para la produccin de energa, degradndolos metablicamente.Constituyen la principal reserva energtica del organismo animal (comograsas) y en los vegetales (aceites). El exceso delpidosse almacena en grandes depsitos en los animales, en tejidos adiposos.Son productores de calor metablico, durante su degradacin. Un gramo de grasa produce 9,4 kilocaloras. En las reacciones metablicas de oxidacin, los prtidos yglcidosproducen 4.1 Kcal.Dan proteccin mecnica, como los constituyentes de los tejidos adiposos que estn situados en la planta del pie, en la palma de la mano y rodeando el rin (acolchndolo y evitando su desprendimiento).

3) Cmo se produce la digestin y absorcin de los triglicridos?

La grasa de la dieta est constituido por triglicridos de cadena larga(LCT). Cuando llega al duodeno estimula la secrecin de colecistocinina (CCK). La CCK retarda la evacuacin del estmago, produce contraccin de la vescula biliar, y secrecin pancretica. Los LCT son hidrolizados por la lipasa pancretica en el yeyuno en el ambiente alcalino del jugo pancretico. La colipasa pancretica produce adherencia de la lipasa a las gotitas de aceite.4) Mencione la proporcin de triglicridos dentro de las lipoprotenas y la accin de la lipasa lipoproteica.

Laslipoprotenasson complejos macromoleculares compuestos por protenas y lpidos que transportan masivamente las grasas por todo el organismo. Son esfricas, hidrosolubles, formadas por un ncleo delpidos apolares (colesterol esterificadoy triglicridos) cubiertos con una capa externa polarde 2 nm formada a su vez porapoproteinas,fosfolpidosy colesterol libre. Muchas enzimas,antgenosy toxinas son lipoprotenas. La lipasa lipoproteica muestra una regulacin especfica para el tejido, la actividad de esta enzima controla el flujo de cidos grasos libres hacia diferentes tejidos, que pueden repartirse entre el almacenamiento y obtencin de energa.

5) Enumere los diferentes mtodos tanto qumicos como enzimticos para el dosaje de triglicridos.

- Descomposicin de los triglicridos por una lipasa en cidos grasos libres y glicerol.TG LPL Glicerol + cidos grasos libres- Fosfoliracin del glicerol catalizada por la glicerol quinasa (GK).Glicerol + ATP GK Glicerol-3-P + ADP- Oxidacin del glicerol-3-fosfato catalizada por la glicerol fosfato oxidasa.Glicerol-3-P + O2 GPO Dihidroxiacetona fosfato + H2O2Reactivo:Tampn Pipes 42mM (pH 7.5)Adenosina trifosfato (ATP) 1mM4-aminoantipirina 0.5 mMLipoprotena Lipasa (LPL) > 50 *kat/LGlicerol quinasa (GK) > 13 *kat/LGlicerol fosfato oxidasa >25 *kat/LPeroxidasa > 5 *kat/L