BNA Real-time PCR Mutation Detection Kit

Extended RAS

迅速・高感度・簡単操作

BNA を利用した PCR クランピング技術により、迅速・高感度な解析を簡単な操作だけで行えます。- 1 時間 40 分 (Real-time PCR 工程のみ、抽出工程除く )- 検出感度 1 ～ 5%- DNA 抽出液とキット試薬との調液、Real-time PCR だけの簡単操作- FFPE サンプル用UNG(Uracil N-Glycosylase) 試薬もご用意

汎用 Real-time PCR 機器対応

exon2 G12 G13exon3 A59 Q61exon4 K117 A146

NRAS exon15 V600BRAF

RAS (3 遺伝子 , 計 13 コドン ) 全変異型 同時検出

exon2 G12 G13exon3 A59 Q61exon4 K117 A146

KRAS

Bio-Rad CFX96, Applied Biosystems StepOnePlus で適合確認。

codon 600Exon 15BRAF+

測定原理

使用手順

野生型アレル特異的なBNA Clamp が PCR 増幅を抑えます。

Primer BNA Clamp

Primer

Probe QF

BNAを用いた野生型遺伝子の増幅のみを抑制したPCR（PCRクランピング）により、変異型遺伝子のみを特異的に増幅させることが出来ます。

蛍光物質とクエンチャーで修飾したプローブがPCR増幅反応時に分解されるように設計されており、変異型遺伝子の増幅に合わせ蛍光が検出されます。

PCR 増幅が起こり、野生型／変異型共通プローブが分解され蛍光を発します。

Primer

Primer

BNA Clamp

野生型

変異型

ProbeQ

F

BNA Real-time PCR Mutation Detection KitExtended RAS

BNA Real-time PCR Mutation Detection Kit Extended RASSequencing Primer Set Extended RASBNA Real-time PCR UNG (Uracil N-Glycosylase)

40反応×9種10μM 50μL×9種100μL(~400反応 )

-20℃-20℃-20℃

製品番号製品名 包装 貯法希望小売価格￥200,000￥20,000￥24,000

A410A420A426

反応液調製 (反応液量25μL)DNA抽出サンプル(20-100ng) ～5µL10x Oligo mix (キット構成品) 2.5µL2x Master mix (キット構成品) 12.5µLUNG (別売品) *2 0.25µL＊ 13コドン全てを検出させる場合はOligo mixを 切り替え、9反応分の調製を行って下さい。

①FAM②HEX(またはVIC)③ROX (Reference 不要の機種であれば測定不要)

*2：ホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)組織ブロックの薄切標本を使用する場合は、反応時にBNA Real-time PCR UNG(Uracil-N-glycosylase)を添加して下さい。*3: 変異型を特定する場合は、別売りのSequencing Primer Set Extended RASを使用してシーケンス解析を行ってください。

増幅・蛍光検出 (Real-time PCR 1時間40分~)　50℃　3分 (UNGを添加した場合のみ)95℃ 2分95℃ 30秒60℃ 30秒

40サイクル

・KRAS 10x Oligo mix 4種 （Gly12/Gly13、Ala59/Gln61、Lys117、Ala146） ・・・ 各40反応・NRAS 10x Oligo mix 4種 （Gly12/Gly13、Ala59/Gln61、Lys117、Ala146） ・・・ 各40反応・BRAF 10x Oligo mix 1種 （Val600） ・・・ 各40反応・2x Master Mix ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 360反応

exon2 G12 G13exon3 A59 Q61exon4 K117 A146

NRASexon2 G12 G13exon3 A59 Q61exon4 K117 A146

KRAS

検出対象コドン 製品構成 (A410)

データ解析 *3

exon15 V600BRAF

蛍光測定設定

株式会社 BNA

Base

HO

HO

NO

O

R

2’4’

BNAの基本構造

BNAとは？Bridged Nucleic Acid (架橋化核酸, 以下BNA)は相補的な塩基配列構造の核酸分子と強く結び付き安定な二重鎖核酸を形成する特性を持つ人工核酸です。架橋化により糖部の5員環の立体構造の形状の自由度を制限し、高いDNA結合親和性と核酸分解酵素への耐性を実現しています。他の人工核酸Peptide Nucleic Acid (PNA)やLocked Nucleic Acid (LNA)に比べ、DNAとの結合力や1塩基識別能において優れています。

BNAは大阪大学名誉教授今西武先生が開発した人工核酸です。 本試薬は株式会社BNA(日本)とのライセンス契約に基づき、日本国内で製造されています。「BNA」は株式会社BNAの日本及びその他の国における商標又は登録商標です。

C07-001-18H-04

www.rikengenesis.jp

info2@rikengenesis.jp, 03-5759-6042