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1- Le tube digestif 2- Les cellules sanguines 3-Glandes annexes tube digestif, Glandes endocrines, Peau 4-Organes lymphoïdes, Poumon 5- Rein, Gonades Cahier de TP d’histologie Année A1 Nathalie Bourgès-Abella ECOLE NATIONALE VETERINAIRE DE TOULOUSE

Cahier de TP d’histologie - cours, examens · 2017. 5. 29. · TP 1 : LE TUBE DIGESTIF Vous disposez de 6 préparations histologiques de tube digestif colorées à l'hémalun-éosine

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1- Le tube digestif

2- Les cellules sanguines

3-Glandes annexes tube digestif, Glandes endocrines, Peau

4-Organes lymphoïdes, Poumon

5- Rein, Gonades

Cahier de TP d’histologie Année A1

Nathalie Bourgès-Abella ECOLE NATIONALE VETERINAIRE DE TOULOUSE

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TP 1 : LE TUBE DIGESTIF Vous disposez de 6 préparations histologiques de tube digestif colorées à l'hémalun-éosine (œsophage au colon).

Recommandations :

Prenez le temps de regarder les lames au faible grossissement (x40) pour définir l’histologie topographique. C’est une étape clé qui vous permettra presque toujours de faire la diagnose de l’organe. Le fort grossissement (x400) vous aidera à la confirmer.

Réaliser ces observations en vous aidant de la dernière diapositive conclusion de votre cours magistral sur le tube digestif

Etape 1 : Observer les lames 1 et 5 au faible grossissement (objectifs x4, x10). 1.1. Des tissus de nature différente sont présents sur chacune des préparations. Repérer les sections de tube digestif présentes sur chaque lame, en vous aidant pour la lame 1, de la nature de l’épithélium. Cette étape accomplie, seuls les prélèvements de tube digestif présents sur ces lames seront à examiner par la suite.

1.2. Lame 3 : travaillez uniquement sur le prélèvement central

Etape 2 : Comparer les lames 2, 3, 5 et 6

Observation faible grossissement (x4)

2.1. Légendez le schéma ci-dessous représentant le plan d'organisation commun à ces 4 organes.

1 : 2 : 3 : 4 : 5 : 6 :

Observation fort grossissement (x40)

2.2. Quel est le type d'épithélium bordant l'organe présent sur la lame 2?

Dessinez le :

2.3. Quel est le type d'épithélium bordant les organes des lames 3,5 et 7 ?

Lame 3 :

Lame 5 :

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2

Lame 7 :

Si vous ne parvenez pas à répondre à la question 2.3., allez directement à l’étape 3

Etape 3 : Comparer les lames 3,5 et 6

Observation faible/ moyen grossissement (x4, x10) :

3.1. Quel(s) organe(s) possède(nt) une muqueuse présentant des villosités ?

3.2. Quel(s) organe(s) possède(nt) une muqueuse entièrement glandulaire ?

3.3. Quel(s) critère(s) morphologique(s) pertinent(s) vous permet de différencier une villosité d’une glande ?

Etape 4 : Comparer les deux sections de tube digestif présentes sur la lame 5

4.1. Pouvez-vous énumérer leurs points communs ?

4.2. Quelle structure histologique spécifique vous permet de différencier les portions anatomiques des sections

d’organe présentes sur la lame?

Etape 5 : Observation des lames 3 et 6

Focalisez votre observation sur la muqueuse 5.1. Quel est leur point commun ?

5.2. Quel critère morphologique pertinent vous permet d'identifier formellement les deux organes ? Si vous ne parvenez pas à répondre, allez directement à la question 5.3.

5.3. Quels sont les types cellulaires constitutifs de l'épithélium pour chaque organe ?

5.4. Qu’en déduisez-vous quant à leur fonction respective ?

Etape 6 : Observation des lames 5 et 6 6.1. Pouvez-vous citer un critère morphologique pertinent qui vous permet d'identifier formellement les deux organes au faible grossissement? 6.2. Citer les types cellulaires constitutifs de l'épithélium de revêtement présent sur la lame 5?

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6.3. Sont-ils semblables aux types cellulaires épithéliaux présents sur l’organe de la lame 6 ? Si oui, est-ce que la proportion de chaque type cellulaire est comparable ? 6.4. Pouvez-vous établir une corrélation entre la structure histologique de la muqueuse/nature de l’épithélium et la fonction de chacun des organes ?

Etape 7 : Observation de la lame 7 7. Quels sont les 3 critères morphologiques qui vous permettent d'identifier formellement l'organe présent?

Etape 8 : Observation des lames 1 et 2 Focalisez votre observation sur la muqueuse et la sous-muqueuse des 2 organes 8.1. Quels sont leurs points communs?

8.2. Quels sont leurs différences?

8.3. Quels sont les 2 critères morphologiques qui vous ont permis d'identifier formellement les organes?

8.4. Quel critère morphologique pertinent vous permet d’émettre une hypothèse quant au mode alimentaire et

donc à l’espèce animale ?

DIAGNOSE FINALE :

1 =

2 (09-461(16))=

3 (14/684(7))=

5 (14/409(6))=

6 (13/1326(3b))=

7 (14/684(11))=

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TP 2 : CELLULES SANGUINES La formule leucocytaire La formule leucocytaire correspond à l'estimation du nombre relatif de leucocytes présents sur un étalement de sang circulant -ou frottis sanguin- coloré par la méthode de May-Grünwald et Giemsa (MGG). Les résultats sont exprimés: - en pourcentage des différentes catégories de leucocytes, - en nombre absolu (nombre/volume) calculé à partir des résultats de la numération leucocytaire * (lorsque ceux-ci sont connus). *résultat fourni par l'analyseur d’hématologie

La formule leucocytaire doit être, pour interprétation, replacée dans le cadre de l'hémogramme et couplée à la numération leucocytaire absolue (nombre/litre).

Objectifs 1/Identifier sur un étalement de sang coloré au MGG les principales catégories de leucocytes sanguins et réaliser une formule leucocytaire. 2/ Reconnaître l’espèce en fonction notamment de la formule sanguine et de la morphologie des cellules 3/Apprécier les variations quantitatives des différentes catégories de leucocytes. Réalisation d'une formule leucocytaire Examiner l'étalement de sang au grossissement moyen du microscope(x100, x200) pour apprécier la répartition des cellules sanguines en fonction de la région du frottis. 1/ Sélectionner la zone d'observation: il est important de savoir dans quelle région du frottis on se trouve car la morphologie des cellules (et leur répartition) varie. Vous devez apprécier la qualité du frottis et éviter les zones où l'étalement est trop épais (cellules mal étalées et modifiées) et la densité des cellules sanguines trop importante (tête) ou trop hétérogène (queue). Une bonne zone d’observation est constituée de cellules sanguines bien individualisées, équidistantes les

unes aux autres. Elle se situe généralement en fin de corps de frottis. zone d’observation (cellules individualisées) : formule

Tête corps queue zone riche en queue du frottis : lymphocytes - densité cellulaire hétérogène

- évaluation semi- quantitative - riche en monocytes et GNE 2/Placer une goutte d'huile sur la lame et disposer l'objectif à immersion (x 100) Attention ! Ne plus revenir en arrière pour éviter d'enduire les autres objectifs avec l'huile!!! 3/ Démarrer la formule : Identifier les leucocytes rencontrés en ne comptant pas plusieurs fois la même cellule (nécessité de lecture en créneaux) ni les cellules écrasées ou « abimées » qui s’apparentent parfois à des fantômes cellulaires (plages basophiles claires déformées).

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Comptage de 100 leucocytes par balayage systématique, en créneaux, dans la zone de lecture

L’identification morphologique tient compte:

- de la taille de la cellule, évaluée par comparaison avec le diamètre des globules rouges (grossièrement 7 m quelle que soit l'espèce animale), - la forme du noyau (ronde à ovale, lobé : lobation grossière ou très marquée), - la présence ou pas de granulations dans le cytoplasme (morphologie des granulations), - des affinités tinctoriales du noyau et du cytoplasme: l'acidophilie (éosinophilie) sera établie par comparaison avec la couleur des hématies, la basophilie avec la couleur des noyaux des leucocytes. Faire une estimation sur 100 globules blancs bien qu’en pratique, pour avoir une répartition plus proche de la réalité, 200 leucocytes sont évalués. N.B. : Ne pas oublier de comptabiliser le nombre total de cellules comptées (pour ne pas en compter plus ou moins) Comptabilisez uniquement les cellules que vous êtes aptes à reconnaître et sinon appelez à l’aide ! Calculer ensuite :

La répartition relative de chaque population de leucocytes (en pourcentage), puis

la numération de chaque population (en valeur absolue) en rapportant le pourcentage obtenu à la numération leucocytaire totale.

Tenter de reconnaître l'espèce animale en tenant compte des résultats de la formule propre à chaque espèce (tableaux présents dans votre polycopié de cours) et des critères morphologiques d'identification des cellules, en particulier des granulocytes éosinophiles.

Nombre de cellules

% cellules

Numération (x103/µL)

Intervalle de référence (x103/µL)

Appréciation quantitative (diminué,

normal, augmenté)

GNN

GNE

GNB

Lymphocytes

Monocytes

TOTAL 100

érythroblastes

Exemple de moyen de comptage de 5 cellules: ou Après usage nettoyer l'objectif à immersion et l'étalement de sang avec un papier doux imprégné d’alcool.

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Cas n°1 GB = 19,4.103/µL [Intervalle de Référence : 5,6 - 20,4.103/µL]

Nombre de cellules % cellules Numération (x103/µL)

Intervalle de référence (x103/µL)

Appréciation quantitative

GNN

2,9-13,6

GNE

0,1-1,5

GNB

0,0-0,1

Lymphocytes

1,1-5,3

Monocytes

0,4-1,6

100% Erythroblastes/100GB

Espèce : Conclusion : Cochez la case correspondante (une seule réponse possible) : chien normal chat normal bovin normal cheval normal si vous observez une neutrophilie, éosinophilie, basophilie, lymphocytose, monocytose, notez le : chien avec chat avec bovin avec cheval avec

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7

Cas n°2 GB = 7,1.103/µL [4,9-11,1.103/µL]

Nombre de cellules % cellules Numération

(x103/µL) Intervalle de référence (x103/µL)

Appréciation quantitative

GNN

2,5-6,9

GNE

0,0-0,8

GNB

0,0-0,1

Lymphocytes

1,5-5,1

Monocytes

0,2-0,6

100% Erythroblastes/100GB

Espèce : Conclusion : Cochez la case correspondante (une seule réponse possible) : chien normal chat normal bovin normal cheval normal si vous observez une neutrophilie, éosinophilie, basophilie, lymphocytose, monocytose, notez le : chien avec chat avec bovin avec cheval avec

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Cas n°3 GB = 16,1.103/µL [3,70-18,66.103/µL]

Nombre de cellules % cellules Numération

(x103/µL) Intervalle de référence (x103/µL)

Appréciation quantitative

GNN

1,5-9,6

GNE

0,2-1,8

GNB

0,0-0,1

Lymphocytes

1,2-10,4

Monocytes

0,1-0,8

100% Erythroblastes/100GB

Espèce : Conclusion : Cochez la case correspondante (une seule réponse possible) : chien normal chat normal bovin normal cheval normal si vous observez une neutrophilie, éosinophilie, basophilie, lymphocytose, monocytose, notez le : chien avec chat avec bovin avec cheval avec

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Cas n° 4 GB = 8,7.103/µL [5,1-13,3.103/µL]

Nombre de cellules % cellules Numération (x103/µL)

Intervalle de référence (x103/µL)

Appréciation quantitative

GNN

1,7-6,0

GNE

0,1-1,2

GNB

0,0-0,2

Lymphocytes

1,8-8,1

Monocytes

0,1-0,7

100% Erythroblastes/100GB

Espèce : Conclusion : Cochez la case correspondante (une seule réponse possible) : chien normal chat normal bovin normal cheval normal si vous observez une neutrophilie, éosinophilie, basophilie, lymphocytose, monocytose, notez le : chien avec chat avec bovin avec cheval avec

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TP 3 : GLANDES ANNEXES AU TUBE DIGESTIF GLANDES ENDOCRINES PEAU

Recommandations :

Utiliser le vocabulaire spécifique histologique pour répondre aux questions suivantes

Les glandes annexes au tube digestif Vous disposez de 3 préparations histologiques : 13/1382 (2) 14/684(21) 13/1017 (3) Foie

Recommandations : Vous disposez de 2 lames de foie. Sélectionner le foie de porc pour répondre aux 4 premières questions

1/Décrire et identifier à partir du modèle de foie de porc l'histologie topographique de l'organe.

2/Décrire et identifier la structure histologique du lobule hépatique: travées hépatocytaires, radiées et anastomosées, capillaires sinusoïdes.

3/Dessinez un hépatocyte. Comparer sa taille à celle d’un globule rouge.

4/ Décrire et identifier la structure histologique d’un espace porte. Dessinez les différentes structures observées :

5/ Citer les différences de structure histologique existant entre le foie du porc et celui de l’autres espèce de

mammifère domestique présente.

6/ Quel organe est présent à côté du prélèvement hépatique ?

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Pancréas

1/Identifier dans cette glande mixte, la composante exocrine (adénomères acineux et canaux excréteurs de différents calibres : intercalaire, intralobulaire et interlobulaire) et la composante endocrine (ilôts de Langerhans).

2/ Dessiner une cellule acineuse et expliquer la polarité de coloration marquée de cette cellule.

3/ Décrire la composition cellulaire d’un ilot de Langerhans. Ajouter sur le dessin ci-dessus une cellule endocrine en respectant l’échelle. Comparer.

DIAGNOSE FINALE :

13/1382(2)=

14/684(21)=

13/1017 (3)=

Les glandes endocrines Vous disposez de 2 préparations histologiques.

Pancréas La composante endocrine aura été traitée parallèlement à la composante exocrine. Thyroïde 1/Décrire et identifier l'organisation histologique topographique de la glande thyroïde. 2/Dessiner un follicule thyroïdien. 3/Décrire et identifier les cellules parafolliculaires (ou cellules claires, constituant les îlots de Wolfler). 4/Avancer une hypothèse sur la nature du tissu basophile intimement associé à la glande thyroïde.

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Glande surrénale 1/Citer l'origine embryologique mixte de la glande surrénale. 2/Décrire et identifier l'organisation histologique topographique de la glande surrénale. 3/Identifier les différents territoires du cortex et leur organisation tissulaire. 4/Décrire la cytologie caractéristique des cellules sécrétant des hormones stéroïdiennes. 5/Décrire et identifier les types cellulaires de la médullosurrénale.

DIAGNOSE FINALE :

17

14/505-7

La peau Vous disposez de 2 préparations histologiques : 99/85 et 05/26(4)

Observation faible grossissement (x4)

1/Décrire et identifier les tuniques constitutives de la peau. Localiser les annaexes cutanées (follicule pileux, glande sébacée et glandes sudoripares) 2/ Comparer les 2 prélèvements histologiques et en particulier l’aspect de chaque couche cutanée. Emettez une hypothèse quant à la localisation cutanée. Lame 99/85 : Lame 05/26 (4):

Cette première observation va vous permettre de choisir le prélèvement le plus approprié pour répondre aux objectifs suivants :

3/Dessinez l'épiderme et légendez ses différents couches .

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4/Citer les différents types cellulaires constitutifs de l'épiderme. 5/Identifier les mélanocytes de la peau. Exposer brièvement leurs caractéristiques morphologiques. 6/ Repérer les différentes couches épithéliales d’un follicule pileux. 7/Rechercher une glande sébacée et dessinez là. Citer son mode de sécrétion. 8/Rechercher une glande sudoripare épitrichiale (apocrine) et dessinez là. Citer un rôle assuré par son produit de sécrétion. 9/ Rechercher une glande sudoripare atrichiale (eccrine) et dessinez là. Citer un rôle assuré par son produit de sécrétion.

DIAGNOSE FINALE :

99/85=

05/26 (4)=

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TP 4 : ORGANES LYMPHOIDES POUMON Les organes et tissus lymphoïdes Vous disposez de 4 préparations histologiques.

Recommandations :

Réaliser ces observations en vous aidant de la dernière diapositive de votre cours « Tissu et organes lymphoïdes » intitulée « Comment identifier un organe lymphoïde ? »,

Observer la charpente conjonctive de chacun des organes

Utiliser le vocabulaire spécifique histologique pour répondre aux objectifs suivants

Etape 1 : Observer les 5 lames au faible grossissement (objectifs x4, x10). 1. Quel est le point commun à l’ensemble de ces organes ? 2.1. Y’a-t ’il un ou plusieurs tissus qui vous apparait sensiblement différent ? 2.2. si oui, lesquels et pourquoi ?

Etape 2 : Observer individuellement chaque lame en répondant au questionnaire associé.

Lame 11/409

Observation au faible grossissement (objectifs x4)

1. Quelle est l’organisation générale de l’organe ? Représentez-la sur un schéma légendé.

2. Y a-t’il une structure histologique spécifique qui apparait déjà à ce faible grossissement ?

3. Quel organe lymphoïde observez-vous ?

Observation au moyen et fort grossissements (objectifs x10, x40).

1.1. Quel type cellulaire majeur est rencontré ?

1.2. Observez-vous une différence dans la répartition de ces cellules ?

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2. Quel(s) type(s) cellulaire(s) n’arrivez-vous pas à observer ?

3. Quelle structure histologique épithéliale est spécifique de cet organe ? A quoi correspond-elle ?

Lame 14/652 (1a) Observation au faible grossissement (objectifs x4)

1. Quelle est l’organisation générale de l’organe ? Représentez-la sur un schéma légendé.

2. Arrivez-vous à distinguer des territoires histologiques différents ? Si oui lesquels ?

3. Quel organe lymphoïde observez-vous ?

Lame 9 Observation au faible grossissement (objectifs x4)

1. Quelle est l’organisation générale de l’organe ? Représentez-la sur un schéma légendé.

2. Arrivez-vous à distinguer des territoires histologiques différents ? Si oui lesquels ?

3.Quel organe lymphoïde observez-vous ?

4. Quel territoire histologique en particulier facilite la diagnose ?

Observation au moyen et fort grossissements (objectifs x10, x40).

1. En fonction de leur nature, dans quels territoires histologiques se répartissent les cellules lymphoïdes ?

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2. Cet organe a deux fonctions principales réalisées par deux types cellulaires distincts.

2.1. Quelles sont ces cellules et leurs fonctions?

2.2. Dans quel(s) territoire(s) histologique(s) les observer ?

Lame 11/409 (7)

Observation au faible grossissement (objectifs x4)

1. Quelle est l’organisation générale de l’organe ? Représentez-la sur un schéma légendé.

2. Arrivez-vous à distinguer des territoires histologiques différents ? Si oui lesquels ?

3. Quel organe lymphoïde observez-vous ?

4. Cet organe a une charpente conjonctive différente des autres organes lymphoïdes. Expliquer et identifier cette différence.

Observation au moyen et fort grossissements (objectifs x10, x40).

1. En fonction de leur nature, dans quel territoire histologique se répartissent les cellules lymphoïdes ?

2. Cet organe a deux fonctions principales réalisées par deux types cellulaires distincts.

2.1. Quelles sont ces cellules ?

2.2. Dans quel(s) territoire(s) histologique(s) les observer ?

3. Un troisième type cellulaire, visible dès le faible grossissement, confère une fonction supplémentaire à cet organe

chez certaines espèces animales ? Arrivez-vous à le visualiser sur la lame ?

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Lame 9953(2)

Observation au faible grossissement (objectifs x4)

1. Quelle est l’organisation générale de l’organe ?

2. Quel organe observez-vous?

3. Quelle est la localisation des cellules lymphoïdes ? Décrivez précisément.

DIAGNOSE FINALE :

11/409=

9 =

11/409(7) =

14/652(1a)=

9953(2)=

Le poumon Vous disposez d’une préparation histologique.

1/Reconnaître les éléments de structure composant le tissu pulmonaire (organisation concentrique en tuniques des voies aérophores et « dentelle » alvéolaire) et évaluer leur proportion respective.

2/ Identifier les différentes voies aérophores intrapulmonaires: bronches intrapulmonaires, bronchioles intra-lobulaires à la paroi continue, bronchioles terminales et respiratoires.

3/ Décrire et identifier les éléments de structure constituant la région respiratoire (muqueuse à épithélium pseudostratifié cilié; chorion, fusionné avec une sous muqueuse, riche en glandes tubuloacineuses mixtes ; présence d’une musculaire muqueuse ou « muscle de Reissessen » bien visible dans la bronchiole),

4/Expliquer la notion d'appareil mucociliaire,

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5/Connaitre et tenter d’identifier les types cellulaires constituant le revêtement alvéolaire (pneumocytes de type I et de type II) et leurs rôles respectifs,

6/Identifier les éléments intervenant dans la défense (spécifique ou non) de l'appareil respiratoire profond (BALT, macrophages alvéolaires ... )

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TP5 : REIN GONADES

Le rein Vous disposez de 2 lames histologiques de rein de 2 espèces animales différentes :

11/409 (4) : chat 12/1119(213) : rat Lame 11/409 (4) :

Observation au faible grossissement (objectifs x4)

1/Reconnaître l'architecture globale radiaire de l'organe et différencier cortex et medulla.

2/Repérer les territoires corticaux (labyrinthe et rayons médullaires) en citant les structures tubulaires présentes dans chacun d’eux. - labyrinthe :

-rayons :

3/Identifier l'organisation de base du néphron (structures glomérulaires et tubulaires)

Observation au moyen et fort grossissements (objectifs x10, x40)

4/ Identifier les structures constituant le corpuscule rénal visibles en microscopie photonique: - glomérule rénal - certaines structures de la capsule de Bowman (feuillet pariétal; lumière de la chambre glomérulaire)

5/ quelles cellules du corpuscule rénal n’arrivez-vous pas à identifier ?

6/ Bien que l’AJG soit associé à chaque corpuscule rénal, il est difficile, en microscopie photonique, d’identifier la totalité des structures le composant (macula densa, cellules myoépithélioïdes juxtaglomérulaires de l'artériole afférente, cellules mésangiales extra-glomérulaires du lacis). Après avoir observé plusieurs corpuscules rénaux, repérer la macula densa et dessiner là associée au corpuscule :

6/ Différencier morphologiquement un tube proximal d’un tube distal. Savoir expliquer la différence de structure histologique entre ces tubes.

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Lame 12/1119(213) :

Observation au faible grossissement (objectifs x4)

1/Reconnaître l'architecture globale radiaire de l'organe et différencier les éléments parenchymateux (cortex et medulla). 2/Préciser la nature de l’épithélium qui tapisse le bassinet.

LES GONADES

L’ovaire

1/Citer les deux fonctions majeures des gonades femelles ou ovaires. 2/Identifier sur une coupe histologique les structures suivantes de l'ovaire: l'épithélium germinatif de Balfour, l'albuginée, le cortex ovarien, la médulla ovarienne. 3/Identifier les différentes étapes du développement folliculaire et décrire la structure histologique des follicules primordiaux, primaires, secondaires, tertiaires et de De Graaf. 4/Définir les structures histologiques suivantes du follicule ovarien mature: la zone pellucide, la granulosa, l'antrum, le cumulus oophorus, la corona radiata, les thèques folliculaires. 5/identifier et décrire la structure histologique d’un corps jaune progestatif.

Le testicule 1/Citer les deux fonctions majeures des gonades mâles ou testicules. 2/Citer le nom des structures canalaires intra- et extra-testiculaires de l'appareil génital mâle qui assurent le transport des spermatozoïdes vers l'extérieur. 3/Identifier sur une coupe histologique les structures suivantes du testicule: la tunique albuginée, les septa conjonctifs qui délimitent les lobules. 4/Faire un schéma simple et légender les différents types cellulaires du tube séminifère. 5/Identifier les cellules de Leydig. 6/Repérer la localisation des canaux efférents, épididymaire et déférent.