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CasaabRrtadtienpa
t/ Nombre:
Te 1 €fono :
Matrícula:
Clave: -
JCa r rera :
Trimestre:
Horas Semana:
Lugar donde se llevó a cabo:
Fecha de inicio: i
Fecha de Terminacion: 1 ;Tutor: Proyecto :
/
K g e A. Palacios Lobato
Marzo 30, 1988.
JORGE ARTURO PALACIOS LOBATO
91 -272-568-23
83324309
23.3.98.07
ING. BIOQUIMICA INDUSTRIAL
08- I
20
Laboratorio 254, Edif. "T" Depto. de Ing. de Procesos e Hidráulica de la Division de C.B.I. de la üni versidad Autbnoma Metropolitana- lztapal apa.
15 de julio de 1987.
I5 de marzo de 1 9 w
DR. SERGIO REVAH MOISEEV PROF. TITULAR "B" DEPTO. DE ING. DE PROCESOS E HlDRAULlCA
PROOUCCION DE PROTEASAS EN FERMENTACION
-
- - - SOLIDA MEDIANTE ASPERGILLUS NIGER POR EL METODO KOJI.
Or.
Oepto. de log. de Procesos
Av. Michoach y Puririrni. Col Vir8nIina. IRip.1wi. O.F. C.P. 09340. Tel. 68603-22
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INDICE :
Introduccibn Objetivo. Fletas Descripción' d e l sistema de ?ará:fietrr>s lia t e r ia l F%todo Esquema de t raoa jo riálculo s ~ e s u l c a d o s .
a. - ia fernen tac isn curva p a t r t a
0.-2 ieraenLacibn curva patrSn muestre0
c.-3" fermentacitia
. mes t r e o a
curva : a t r b n 1 nues t r e o
Discusibn de resul.taCBos conclusiones Sesumen qeferencias
1 5 5
rerneatación 0 7 d 10 13 15 17 18 23 24 2.5 30 31 32 37 38 39 40 4 1 42
-
.
II?T?ODUCCION. La f e r n e n t s c i h sb l i da puede sdr i e f i n i d a cai.io
e l crec imiento de mlcroorgdnlsmos y l a formación de productos que ocurre en l a s u p e r f i c i e de sus t ra tos sb i idos , con bajo con ten ido de .humedad, .(Mudgett, l&).
la ' feruentacibn s ó l i a a no etj ulr proceso nuevo, ya que h i venido siendo u t i l i z a d a desde hace v a r i o s siglos en los pa í ses o r i e n t a l e s ?ara l a producción de algunus a l imentos fernentados a b i s e de sSya, a r roz , e t c . L:n l a my, l r l a de e s t o s grocesos in t e r v i enen e!izinss ex t race lu la r es , l a s cuales pudie- rm obtenerse meüiante ope rac imes s e n c i l l a s de se:x?racijn y secado [Ca r r i z s l e s , i/iJZ). Los ~ i c r o a r ~ s n i s m c oue i s t e r v i enen en es tos y-ocesos, peder : u t i l i z a r s e como punto de part ida pa- . ra l a producción de ?roteasas I'!elsm, i g b ? ) , a:zilasas (:Telson 1967; "rood, 1/75; Nat l . iicad. Sci., 1?79), ce lu lasas (;ray, 19 70), lipsas ('ray, 1973; Shahani, 1/75), e tc .
7836: erLtenüers2 que un s is t -na s5iido es más c,mplo$o que e l suo:ergiiio en v i r tud de que 12 i n t e r r e h c i 5 c anbiente-Sustrato-nicroorganicmo t i e n e d i ve rsas 1 i J A t a c i s n e s f f s i c a s y , en csnsecuencis, e l sistema reaccionante pmsenta
i grad ientes de temperatura, pFi, tun:edad, e tc . ; q u i z f e c tan a1
sisterca. %tas 1iini:taciones fislels se acenzúan en c u l t i v o s SO l i dos es zá t i cos .
iioy en di,?. e ran cant iaad de enzinas extracelu- l a r e s que son producidas comerciainente se otnienen a r ravés d e l c u l t i v o & l i d o janones llamado "k'oji**. i:oji es e l nombre que se l e da a l a prepsr i c ibn de h m r o s Tilamentosos c r ec idos en salvado u utros sus t ra tos con3 t r i s o , arroz, e tc . Zste es un praceso riuy ant fguo y const i tuye l a base d-¿. l a :'::bricacibn de sziké, salsa de soya, miso, t e
- ?n este proceso se u t i l i z a n las e tan i s s i gu i e g t es : a).- acmci ic ionaaiento d e l s u s v a t o ; 3?.- e e i e r i i i z a c i b n ; c J .- inocui-c ión; d) .- incuosci6n; e: .- ex t r zcc ión acuosz ; f ,'. - f i l traci5:- y alescensmiento. '.:n algunos casos e l sustrato f e z mentzio es u t i l i z a d o direct~i lc-nte s i n 1-i extr;ccibn de 1s enzi m i , corno~sueie s c u r r i r en 13s Frscesas <e 3riducci5n 26: oroi--
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das fersentadas a p s r t i r 96 mater ia l es sini láceos l a l a i n , Ago/ 5 ) . ia fermentacibn k o j i ha s i d o r ea l i z ada en di--
versos sistemas como bande jas, l e chos f i jos , tambores rotato-- rios, etc.- Tn genera l , e:l mater ia l (granular o f lbroso) es c3-, locado en forma as6pt i ca en la% bandejas e incubado a una tea- peratura adecuada. Cuando se usan tirbores, e s t o s son mezcla-- dos continua e intermitentemente.
i n l o s ?a lces a r i en ta l e s , para l a e l a b o r a c i h de a l i i w n t s s fermentados, s e u t i l i z a eener i lnente l a bandeja. $ n i v e l i n d u s t r i a l e s t e inism ?roceso se r e a l i z a en bandejas rriuchs 125s grandes, COL? e:L fondo aguje:erido en donde l a hune..:ad y l a ten-erstura s e 9ueiii.n con t ro l a r sat is factor iar .ente (:afi--
ne1 y mo-ysung, 1339). M r a la yoducc i ón de algunos y x d u c t o s ferz.eg
tados se han suger ido sistemas más con2 le joe como l o s tanDores r o t a t o r i ? s , l o s cuales perxiiten un adecuado ihezciaos. ZstoÉ ú~ tin'3s c i s t enas h3n sido su;eri,ios por ciiversos inves t i gaaores (L in:enfe lcer , 197>; Pa;:;:irnt, 1978; ürant, 1973; L.equerica, 12 7 7 ) , y algunos s i encuenrran bajo uso i ndus t r i a l (3annel y r!3@
Para le r e . ~ i i z i ~ i b n de c u l t i v o s a n i ve l de la- b o r a t o r i o se emplean !xitraces y/o bandejas, l a s cuales pueden s e r , co locadas en incuoüdc?rrs con con t ro l de tern-eratura y hurne dad!
-
-Young, ii:.ao,.
3 e l presente t r aoa j o l a técnica k o j i s e ha im-lsEentado en c o l u m i r de v i d r i o , empacadas con e l sustrata
+ ya inoculado. Cada una de e s tas columnas se encuentra conectn- da a un humidi f icadsr, a t ravks d e l cual s e hace c i r c u l a r a i r e para mn t ene r un contenido de humedad en e l sustrato , adecusdo y para remaver e l c a l a r generado duri lnte l a fermentacisn. Todo este s i s t ena se enciieiitrst surner&ido en un bano ae agua a tempg ratura controlaaa (gaimoault e t . a l . , l y t j 5 i .
In 1s f~rrnentaci6n k o j i , l a s prote ínas y e l al rr.idC>n del sust ra t3 S ~ L niUrol iz%oo.: z ~ p l a c enzi!;ias de ; % c ~ e r f i - - l lus or:íms empleado. :. s t i ~lc:;ri:?.ci4n oe Is$ co3ct i tuyentes i e l syscra to , presui2iolec;rte sür . -n t i l a i i s e r t i c i l i d a ? de 12s
ai inientoc I z e s s e l t i n e , lp.12'.
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rara e s t e e s t u d i o se dispone ae una cepa de ng p e r c i l l u s n i n e r hiperproductora de p r o t e a s a ácida. lsta cepa fué o o t e n i d a en l o s l a b o r a t o r i o s de o i o t e c n o l o g f a de l a univer s i t e de %%chnologle de compiegne, d e s a r r o l l a d a por el 'doctor chow y produce una p r o t e a s a cuyos batimos son: pH de 2.5 y . t e - p e r z t u r a de 4'1 grados c e n t f p s d o s .
Los p r o d u c t o r e s de enzimas f u n g a l e s muchas ve- c e s l i n i t - i n 12 d e s c r i p c i h de sus productos c m t k r e i n o s como "fungali* o i * b a c t e r i a l ' * sin e s p e c i f i c a r l a n a t u r a l e z a de l o s or Sariisnios. Ts, s i n embargo, bien c m ? c i d o que 3 . s n e r c i l l u s oryza - e y ~ ? ~ s u e r ~ i i i u s han c iao las f u e n t e s más grancienente ex- plotaí ias , a h cuando e s p e c i e s de Kucor, " h i z o p s , P e n i c i l l u m y o t r o s - i c r o u r ~ ~ . n i s ~ o s han s i d o ensayadas.
Las p r o t e a s a s o p 6 2 t i d o h i ó r o l a s a s s i n enzimas que h i a r o l i z a n l o s e n l a c e s ? e r . t i d i c o s i e p r o t e f u a s * s - & - t i l o s y de i c u a l m n e m aue iir trnziras a m i i o i í t i c a s , ; e ( t i n o ; í t l c a s y c e l u i o i í t i c i ~ ; y i d r i i se>: o. iv~ '~ iuaz : en ezd2-e:.zir;:as, que
yrxi,i.cen at2.quer: tizntro d; 13s c i d en : ; ~ ;le l a c : ~ ~ c r r v z a l & c u l a s , y en e m - e z i m s , que h i 5 r o l i z a c fuer i be e l l a s , -3 l o s m i n o -
.. . . . .
5 titi 3s ;í: .+mi2 :,~ s . Lzs ? r o t e a s a s inicrobianas t a m i e n se d i v i a e n
en t r e s t i p o s 2-5 para e l ,rru?c~ t i c i d o , pf! 7 ?ara e l grupo i ieutro y pti 9.5- 1G.p rmra ;1 s rupo 2 . l c a l i n o .
Lzs p r o t e a s a s ácidas c o m e r c i a l e s son p r i n c i p a l - mente de o r i s e n fungal . Las microorganismos que han s I d o más sstudiauor; y ii-is usados como f u e n t e de e s t a s enzimas s o n : Ai-- p e r r r i l l u s O F . J ? . ~ P , - $.. -, -. Sai to i , warnetes sanzuineara y
!.uc->r m s i l l u s (Kea; e t . a l . , 1972). Las ? r o t e a s a s f u n g a l e s nan encontrado a?lica--
c i b n p r i n c i p a i n - n t e er. 10. jm:ustria a i i m n t a r i o y , e s t o e s paz t l c u i a r m e n t e c i e r t o en e l caso ae las p r o t e a s a s itciaas, las c u a l e s e n t r e o t r a s i u n c i 3 n e s pueaen s e r s u s t i t u t o s , en a l g u n o s c a s o s , de l a p e ? s i n a , r e n i n 3 y papaina.
Finaierla. 'Ueoido a que producen una reciuccibn en l a v i s c o s i - -
acuerdo a su 'H bptimo, los c u a l e s s o n : pH
l a s p r o t e a s a s fungales son taaDian usadas en
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dad y en e l tiempo de mezclado; en l a produccibn de h i d r o l i z a - dos protéicos y, además, dan estaa i l idad contra e l frio a l a
cerveza emooteliada, ya que cuando l a cerveza s e somete a en-- fnamiento, se forma un precipitado por l a interaccibn de las proteinas jr caninos presentes.
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09J””’PIW. E1 o b j e t i v o de este p r o y e c t o es e l e s t u d i o de
la producción de p r o t e a s a s acidds por A S D f i T ñ i l l U e u soore d i f e r e n t e s s u s t r a t o s (cereales y otros) .
M?T: 9 I 2 > . . .
1.- h n p l e z e n t a r en e l i a t m r s t o r i s la t é c n i c a
2.- s e l e c c i o n a r un s u c t r a t o qge de a l t o s ren-
3.- Establecer l a s c o n d i c i s n e s a n o i c r i t a l e s que
kaji parr la p r o a u i c i 5 n de p r o t e a s a áci4s .
di : i ientos d s la enzima. - f a w P e z c a n l a s o b r e p r o d u c c i h de la enzims ..
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Z?Si'IPCIO>T 9ZL' S1,qTVA !J? g?p!;2!*Tlc?T-.
.El s i s t e r a de fermentacibn s e i n i c i a con un fiu j o de a ire que pasa a traves de un f i l t r o , conectado e s t e , a un r e g u l a d 3 r de f l u j o ; enseguida se tiene un pre-humidif icador d e l c u s l s a l e e l a i r e para pasar a un sistema de vt i lvulas co-- n o c t s d a s en serie . Cada una de estas válvulas , conduct- a un h g m i d i f i c a l o r de v i d r i o , en e l cual s e e n c u e n t r a conectada una columnj tamaien de v i d r i o . %tos ú l t i m o s , hurnid i i i caaor y co-- lumna, se encuentr . in sumergidas en un Daño a temperatura csnc- t 3 n t c , siyza cor un regulac!or de temperatura. SdenAs s e dis-one de un r o t á n e t r o - p r a c a l i o r a r e l f l u j : , de a i r e en c.ida coluninn
1. c o n t i n u a c i ó n s e p r e s s n t a un di.iL;r.;ma d e l sig tema ae fermentación.
. .
r e g u l a d o r de
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c a i i t r r i Lie telrperd turj.
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Columnas de v i d r i o (long. 20 em., diam. i n t . 2 cm.) humidi f icadores de v i d r i o (long. i0 em., d i m . i n t . 2 G I ; )
pesera (60Á35X45 CA.)
c on t r o l de temperatura fiaake e52 termone tro válvulas de bronce rotáitietro Cole-P:ili.ier re-ulador de flu,jo Coilhose Pneumatics f i l t r o p r a a i r e Co i lhose Pneumatics tapones ae hule n3. Q
-.4conaicionaniento ao sustrato y c e p
camices malla 10 y LU
l i e uaaora oa lanza grana t a r i a esp4 tu i a s p ipe tas de 5 a l . microscopio cámara de fieuoauer incubadora autocLave
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matraces Erlenmeyer de 1000, 500 y 2 5 0 ml.
probetas de 252, 100 y 25 m l . c r i s t a l i z a d o r e s p ipe tas oe 25, 1 0 y 1 ml.
tuoos de ensaye incuoadora
- IJ aforados de 100 ml.
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parriiia con ag i tac ibn magnética espectrofotbmetro Spectronic mini 20 potencibmetro Corning termo ba lanza balanza an a l í t i c a macerador U l f r a turrax balanza granataria
HC1 Ch3COü;ia 1.ia-CO ..
r > KaOH 2cidc t r ia loroacEt ico r eac t i i u oe % l i n Ciocaiteai; ca-euia t irosina
! aest i lada
f c c f c c c c c c c c f c c t c c
-?reyaración del sutjtraco
- i rs+ració i i ue la co l ' ,rima
-Trataniento de las rnua6t;ras
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j I c /c ' c ' C f i: f E: f f c f c c e: ' C
- 9 e t e r m i n a c i h de , a c t i v i d a d p r o t e a s i c a .
1.- preparar las s i g u i e n t e s s o l u c i o n e s : a).- s o i u c i b n estandar, de c a s e i n a a l 2 %, pH 2.7 0 ) .- I1 11 1' t i r o s i n a 1.3.12 ng/1. en
c).- buf fer de a c e t á t o de s o d i o O.i4!., pY 2.7 a) .- & i d o t r i c l o r o a c é t i c o 5.4 p;. e).- !!a CO, 0.4 I:.
¿ 2 f) .- r e a c t i v o de F o l i n c i i iuido 1/2 en agua d i s t .
I f C l d.2 x.
2.- p r e s d r a r Id s iE ;uient= curva - iatrSn: E$ t i r o s i n a s t d c ~ n c e c t r a c i ó n
t u 0 0 (131) (U1) (%,../l) c ( L ( n i O l / U
1 19 u u J
2 3 2 5.62 2J
D 4 7.L+ 4; 64
3 i 4 J l,.o>a, 3 2 5 . 14. qs ¿3u 6 3 10 Ij.lU . %lb,J
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G a r a cada t u u ü e l .nisrm t r a ¿ x ; i e n t s que a las niiias- 4 tras, u t i l i z a n d o como oiünco e l t w o L.
3.- a 1 n i l . de s o l u c i ó n a e caseinu s e l e a d i c i o n a 1 ml. ue s o l u c i ó n e n z i m a t i c a (si es n e c e s a r i o se r i i l u i e con b u f f e r d e a c e t a t o a e sodio) , y se incuoa. por 1d rein. a 31;' 2 .
4.- s e concluye la r e a c c i ó n por. la a d i c i ú n de 2 n l . di!
úc. t r i c i o r o a c é t i c s d.4 E:. 5.- s e f i l t r a a trav5s de papel '.liiatrsan no. 2 .
L.- a i i i L . ciel f i l t r á d a s e l e a 2 i c i o i i h n 5 I L ~ . de ::a--- . d c ""5
J.4 u. y 1 c.1. d e r e a c t i v o de F o l i n , niántecizn,s 3 34 Z diir;l&
t e la - .$icim.
7.- s e mantiene en o o s c u r i d k d p a r 3ij iiiu.
5.- s e lie 1- a b s o r b a n c i a a 6óG nil. ( l e c t u r a 1).
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It 9.- a 1 de ác.'triclor
10.- se
peí ':'hatman no
11.- a 1 3.4 N. y 1 m l .
rante la adici
1;i.se' ma
13.- se
Lit.- al pondiente a 8:.
@no debido 3
l e c t u r i
15.- la se iihcfi toisand e s ~ o f l r i i ~ L ca e quiv i len La ri
i,iezclií de aige
* los pul tra de cada UI tiempo de fer: nitrbgeno 6311
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c fernen tacian sustrato no. de column ag ..
1 trigo 3 2 arroz 3 soya
-Muestreo para cada fernientacióri. c f c c c c c f c. f f f c c e:
::o. de c o l a í,
1 2 3
. . - iarairrie t r o s .
3 3
2.. te.iiperatura ......................... 33 p;. .................................. 5.5 f l u j s de a i r e canticiau empscadj. ................... 12 gr . .
0- inoculo 1l;iii hunedad ............................. 3~ I
....................... .i., l / d i i .
............................. s e c o - .
tamiio ue p a r t i c u h ..................... aiia 1~/2b I
a c t i v i d a d p r o t e k s i c a
-Crsnozrania.
a c t i v i d a d a).- inoctiiaciSn 0 ) .- nueotreo c ) . - a n z i i s i s
&& 1
2.3 4
a).- inocuiacióa
b) .- muestre0 110. de colup-e
O , O 1 ' 1 2 1 3 ¿
I
c) .- üdiisis actividau prote&sicci
' i :
jc I [
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c c c c c - c f . c c c c
CA LCULOS.
Para hacer loas c&lculos de las diferentes cantida- des se empieardn las siguientes ecuaciones, para: Cantidad de suatrata seco:
R = S(O.5) cionde :
S=caiit ic iad de sus t ra to quí: se desea l l e v a r a una hume-- 8 - dad d e l 50 /., con un pn de 5.5 y 1x10
gr ,
i ;mt iGnd c i ~ cust ra to f r e s c o a eniplear:
donde :
. ? Sl= '.<.e iiumedad i r 1 sustra o. ,
.. j
.:.:uü t o t a l ad i c i ona l para oo t ene i un 50 ._ de hu e da d :
1.7 . = j - p;
: c i
' f !
' [
c c f c c
c c
>e l ac ecuaciones anteriores se outir i ie :
; v s k l El + x donae :
?;;=cantidad de agua necesaria para a jus ta r l a humedad al 50 L
J
f
r L
c c k:
c c c c a c - c t c c c
vo l . de HC1 0.01 N tidiciDzad3 - - suitrato QH wra obtener un RH de >d
t r i g o 6.1 2.3 ml.
arroz . 6.5 2.0 'I
Soya ó ..5 3 . Y ?ara 10 ,r ; a sustrato en 53 ml. de agua Üestiladz.
c
-ia farmentacibn.
conteo de esporas:
esporas prom. p o r cuadro 250 d i luc ión 7
&&.gQ cantidad de sustrato seco:
cantidad de sustrato f resco :
a g a to ta l adicional':
:'J=15 - 8.17j= 6.825 ml.
cantidad de HC1 0.01 X:
tanaño d e l inócuio :
cantidad de agua para a j u s t a r humedad :
a r r o z canticiaci de sustrato seco:
10
c t c c f c
I c ; [ I
f C ' c I: c. c c c c c r L
c f cantidad de HC1 C.01 N :
C ' t t c L h: c f f c c. C c c c c
tamaño d e l inóculo:
El L 7.5( 1XiO8)/25O(25XlO4)7 = 1.714 m i .
cantidad de agua para ajustar numedad:
Nr6.945 - 4.5 - 1.714s 0.731 m l .
cantidades para 3 columnas rnás 15 gr. para l a muestra al tiem- po o.
N - sus tra to P; t r i g o 32.7 15 6.85 5.44 \
arroz 32-7 12 6-85 8.44
soya 32 22 18 6.85 2.92
f
~. . i ' 8 8
21 c c 1" ferrientación.
c curva patrón:
zcuación : y = O.O75C;.X
muestreo: 1
arroz 3 '3.22 2.22 U.3d 24 J.ló 3.16 0.U3
36 0.22 5.l8 3.04
48 9.23 3.16 3.19
O 0.28 3.27 Q.dl
c c- c soya
c - c
24 0.42 ü.3d G.crL, 3.d5 2.38 2.47 36
48 1 . 5 ~ 3 .36 1.u
-
c c
c C L
I: c f c e: c c c c f t
c
conversión de uniaüdes: concentración urildades de
tiernwí hr) ( m R / l ) Gmol/l) actividad sustrato - trigo O O O O
9 O 3 24 36 7.11 39.26 5- 32
7-64 42.23 4.22 48
arroz
soya
3 2 J O O O 3 24 0.52 2 . ~ 7 .io 3ó
4d 1.31 7-23 3.72
o 9.13 3.71 3.07
24 jó 6.19 37.13 4u 14-75 a1.43 8.lY
9.52 2.87 0.28 . ,5.41
I
c c L
c f
c c c c f c c c t c c c c c c f c c f
-za fermentacibn.
conteo de esporas:
esporas prom. por cuadro 268 d i luc ión 7
26a(25xio'+n = 4.69~10 8- nl,
t r i g o cantidad de sustrato seco:
C, = 15(d.5) 5 7.5 ir.
canticud de sustrato fresco :
agua tc> tal a i i c i s n a l :
... - i ., - 15 - 8.17; =~.ó .325 LA..
i i
cantidad de sustrato seco:
c
cant idad de sustrato fresco:
. Mr7.5(1 t O.Oqi)=8.175 gr.
agua t o t a l a d i c i o n a l :
B = 15 - 8.173 -8.&25 ml.
cantidad de H C l ü.01 i;:
tamaño dei tnjcuio:
e caritidad de s u s t r a t o seco :
cantidad de sustrato f r a s c o :
,
taniafio del i n s c u l o :
21 = 7 .5( 1~~10'))/2o0( 25X1S4)7 - 1.599 ml.
cant idad de aaua pard ajustar humeaad:
i7só.945 - 4.5 - 1 . 5 9 g = J . 8 4 6 io l .
c .-
ir
c c c
c
cant iuaues para 3 columnas iiAs 15 "r. para l a uiuestra ai tieci-
PO o.
c t
. c i
c c c C c c C r
curva patr5n:
muestre,, :
sustrkti, t i e i i w ( n r ) 1i.ct 1 i e c t 2 i e c t i - 2 t r i o o cj 13.66 3.3j 3.23
24 2.51 J .3$ 0.23 36 3.bY G . 3 % J.23 46 1.03 0.31 0.ó9
arroz u G.04 0.02 c.32 24 9.20 0.18 0.02
0.22 0.1s 3.J4 36 48 S.32 Q.16 0.84
^5
s3yu 3 3.34 u.33 0.34
24 0.67 2.37 ".>Y
39 9-95 0.37 0.5s
> -
48 1.1a ij .37 *9.7j
L
c .
29 r i
r I i
c c
c f c '. c c
: c c
canversión de unidades : concen trircidn uni íwies de
sus t r a to tiernPo í h r) ( U d 1 íumoi/l) a c t i v idad trigo O 0.29 , 1.60 0.16
24 1-97 io. a8 1.08 36 - 2.87 15 85 1.5& 48 6.a 37.73 3.77
arroz
soya
O
24 36
,43
O 24 3ó 43
3.19 0.19
2-39 1.38
0.39 ¿.9ó 5.74 7.22
1.U4 1.04 2.15 7.02
c c c c c
c c
'I: f c c c c c c f c c c
c c c
1 c
1
i I
1 # I
?
i i f I b
-3a f e r t e n t a c i ó ~ .
cmteo de esporas:
esporas porn p o r cuadro 258 dilÚciSri 7
283 (25x1;') 7 = 5.04X10 a m t i l .
c a n t i c a d íie s u s t r a t o seco!:
32
3=13(0.5) =7.5 g r .
cantiaad de sustrato f r e s c o :
ügua t o t a l a u i c i o m l :
.
c c L c c c c c c c c c c c t c c c c
cantidad de sustrato f r e sco :
agua w- . a l ad i c i ona l :
<:!si5 - a.175 4 . 6 2 5 131.
crntidad de HCl 0.3'1 I i :
1 ' cantidad de, bustrats seco :
car,tiaaU de 'sustr-ito fresco :
i : - 7.5(1 + 0.974) 68.Ojj gr.
agua t o t a l adicisnctl :
,7515 - 8.055 4.5745 nl.
c c c c f c c c c c c c c c c c c c c
cantidad de HC1 3.01 I?:
A l = (3)15/10 - 4.5 rnl.
tamafio del in6euio;
EL= 7.5(i~10a)/288(2sXlo4)7 = 1.488 ml.
cantidad de agua para ajustar huríiedad:
2 sÓ.345 - Lt.5 - 1.488 t0.957 al.
cantidades g i ra 3 cohumas más 15 gr, -ara la muestra a l tieu-
po 3.
7 sustrato j i ’ A1 A 1 5-
arroz 32.7 12 5.952 3.348
soya 32.22 18 5e.9.52 3.828
’ 32.7 15 5 952 ó.348 1 t r igo
. ..
>5
3" fermóntación.
curva g t r ó n :
concentración i m n / i ) ( A PI0 l!l) a n s í l ) aós(2) I aQs( D M p l )
O 0 i) 0 O 3.52 23 5.25 0.27 0.26
7-24 40 u.ór 0.05 3.635 13.66 60 1.10 1.09 1. J95
18.10 13u 2. .JJ 1.62 1.91 14.48 Oü 1.53 1.53 1.50
- acuac i j n : y = 0.dy63:<
m e s t r e s :
s uü tri. to ti e'i im I iir > l e c t 1 lect - 2 l e c t i-2 trig3 o 3.94 3.G3 3.01
! 24 3.36 9.31 3.37
36 c.50 3.31 J.13 48 3.93 d.31 0.59
I I
!
. arroz
soya
u 3.92 2.32 9.23
24 S.19 0.17 ' 3.ü2 3ó 5.22 0.17 0.25
43 0.21, 0.17 3.07
u 24 36 48
I: c
,[
' c c
' C : c ' C c c c c - c c c c c r
I
L
conversión ae unidades: conceniraciSn ünidadLs de
í m i d i 1 (rrinnol/l) a c t i v i d a d sus t r a to tiemDo(hr) - 0.10 0.5~ s.u.5
24 0.71 3-92 3.33 t r i d o O
1 4 2 13.63 1.3b
5-98 33.33 3.3d 36 48
arroz O s 5
2.2s l.lú 4.11
s.50 2.76 J.27
5 ' 24
36 48 0.71 3.92 7. j ; r
soya J 24
I 30 46
í)
1.72 2.23 6.19
-4
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~ tros invoi
f c c c c c c
c c c c c. c c c c c c
1.- Ki método k o j i en CObX iW48 empacadas es h C t i -
b le de r ea l i z a r a n i v e l iaooratorio.
2.- ia soya es e l sustrdto que proporciow. una ma- yor ?roducci6n de proteasas acidas.
3.- La producci6n de l a erizlaa, en e l t r i go ü i f i e - r e eii proraellio, 18.8 a l a s 48 hr., con respecto a la produc- ción e. s.)ya, 1 3 cual puede pasar a segunao término, de?snuieg d~ de l ~ i s circunstdncias, para la seleccibn de l sustrato( pu- diendo considerarse o t ros c r i t e r i o s , carno los costos de cadd - sustrat3.
4.L '1 arroz, p e d e ser un mejor sustrato que' e l tri,: o 1:: suja, en la -roducciós de ,amilasas pero no en l a -~roci ; iccih de proteasas.
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La producción de proteasas en fermentación c&lida - generalmente se rea l i za en charolas o bandejas, sin emoargo l a implementación de éste método en columus empacada8 e6 fac t i b l e de rea l i zarse ya que e s t e sistema ofrece un control aceptable de l o s parámetros invo~ucrados. -
La selección de l sustrato tnns'adecuado para l a prQ d u c c i b ~ üe una enzima, involucra además de otros factores., l a Ffodi ict ividaG de l sustrato siendo en este caso e l único c r i t e rio de selección.
4
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