Ccayac Cr 01 Criterios Nmp

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1 . OBJETIVO.Establecer los lineamientos y criterios para realizar la evaluacin de desempeo de losmtodos de prueba por la tcnica del Nmero ms Probable,

ALCANCE,Estos criterios debern ser utilizados durante la evaluacin de los mtodos que tiene comofundamento la tcnica del Nmero ms Probable,Este documento contiene los requerimientos mnimos que debern ser aplicado por loslaboratorios de ensayo, aspirantes ante la COFEPRIS a ser terceros autorizados, para laevaluacin del desempeo de mtodos microbiolgicos basados en la tcnica del nmeroms probable,

POLITICAS DE OPERACIN NORMAS Y LINEAMIENTOS,3,1. El presente documento corresponde a una gua para la evaluacin del desempeo de los

mtodos de anlisis basados en la tcnica del nmero ms probable y corresponde a losrequerimientos mnimos que deben de ser considerados en los protocolos de evaluacin dedesempe0, que estn incluidos en el plan de validacin.

3.2, La aplicacin de estos criterios es prospectiva, Se otorga un periodo de transicin de 180das contados a partir de la fecha de publicacin para que los laboratorios que seencuentren autorizados o en proceso del mismo se apeguen a stos criterios.

3,3. Para los laboratorios que soliciten autorizacin posterior a la fecha de publicacin, deberncumplir con stos desde el inicio,

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MlcnoeloLcrcos poR LA rcuc DEL NUMERo MAs pRoBABLERev. 0Hoja :1 de 14

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CONTROL DE EMISIONElabor: Revis: Autoriz:

Nombre Liliana Areli Cano RamirezQumico Analista, , 4

Arturo Vargas Tapia PrandizQumico Analista

Csar Omar Glvez GonzlezGe rente gxrlilspayot to oe

P/ebas Microbiolooios

Firma MWE .; *4-z

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"Debe confirmarse su vigencia anes de hacer uso de esta versin"

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3.4. Estos criterios se aplicarn en todos los procesos de evaluacin que se realicen a los 180das naturales, a partir de la fecha de publicacin del documento en la pgina web de laCOFEPRIS.

3.5, LA CCAYAC, manifiesta su apertura para recibir comentarios al las presentes guas, lascuales deben ingresarse como sugerencias en la secretara tcnica de la misma,

3.6. Estrategia para la evaluacin del desempeo del los mtodos de pruebamicrobiolgicos basados en la tcnica del numero ms probable.Para cada mtodo de prueba que se implemente en el laboratorio, es necesario realizar lacomprobacin de los mismos, por lo que el laboratorio debe contar con un plan general odocumento maestro de validacin de mtodos microbiolgicos, en el que se deberndescribir las estrategias para alcanzar la validacin en las matrices de inters dellaboratorio, dicho documento debe incluir los parmetros y mtodos estadsticos utilizadospara valorar el desempeo del mtodo microbiolgico de alimentos, los cuales deberncumplir con por lo menos lo descrito en las guas para la evaluacin de mtodos emitidospor el Comit de Validacin de la CCAYAC y la Red Nacional de Laboratorios de SaludPublica.

El mencionado plan de validacin debe declarar que cada mtodo de anlisis a serevaluado debe tener un protocolo el cual deber ser emitido y aprobado antes de laejecucin del mismo. Adems de un Informe de la evaluacin en el cual se deber incluir ladescripcin de las actividades realizadas, la enumeracin de los materiales, medios,reactivos y equipos utilizados, su rastreabilidad y los resultados obtenidos, la aplicacin delos oarmetros definidos v la conclusin de la validacin.

La tcnica del Nmero ms Probable se fundamenta en la observacin de una reaccinpositiva, tal como formacin de gas, turbidez y fluorescencia, por lo que en principio se

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debera evaluar la capacidad del medio de cultivo para recuperar al microorganismo deinters aun en presencia de la matriz, tal como se hace para los mtodos cualitativos, Lainterpretacin numrica en la tcnica del nmero ms probable corresponde a laprobabilidad de detectar por lo menos una clula viable para obtener resultados positivosen una dilucin de la muestra, la combinacin de resultados positivos es interpretada comoun numero estadstico el cual se emite con cierto grado de confianza, este grado deconfianza usualmente es reportado en las tablas de los mtodos de referencia como elintervalo de confianza, en otras palabras, el resultado obtenido como NMP, no correspondea un valor determinado, sino que este se encuentra distribuido en el intervalo de confianza.

De lo anterior puede concluirse que la tcnica del nmero ms probable, no puede serevaluado como un mtodo cuantitativo, sin embargo si es conveniente evaluar parmetrosde precisin y exactitud que permitan demostrar la veracidad del los resultados emitidos.

4, DESCRIPCIU OE LAS ACTIVIDADES4.1. Seleccin de la matriz,

Convenientemente deben evaluarse el mtodo de prueba para cada uno de los grupos dealimentos de inters, evaluando al menos una de las matrices que lo conforman,

Para los fines de la evaluacin del desempeo de los mtodos microbiolgicos se hapropuesto la siguiente clasificacin de productos de inters sanitario, basada en laexperiencia de la RNLSP y lo sealado en la lS0 16140.

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pollo congelado

4,2. Seleccin del Inoculo.Para la inoculacin de muestras es necesario contar cepas perfectamente caracterizadasya sea procedentes de cultivos de referencia o aisladas en el laboratorio, las cualesdebern demostrar su identidad y pureza antes de ser utilizadas,El siguiente procedimiento solo es de carcter informativo, cada laboratorio deberestablecer su propio procedimiento para la estandarizacin del inoculo, si en algn casofuera imposible la realizacin de la propuesta en este procedimiento,

4.2.1. Estandarizacin del Inoculo,4.2.1.1, A partir de tubos con agar sangre inclinado de la cepa de prueba incubada a

35 t 20C durante 24 horas. Cosechar rasoando todo el crecimiento con gml

de Solucin Reguladora de fosfatos y/o solucin salina 0.85%, teniendocuidado de no llevar consigo el agar, regresar esta suspensin a un tuboestril a oartir del cual se realizaran diluciones seriadas hasta obtener ladilucin 10. De la dilucin 10 inocular por duplicado en cajas petri unvolumen igual a 1000rL y continuar de la misma manera para la dilucin 10rv 10-a'

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4,2.1.2,Incubar las placas por 24 h y seleccionar la dilucin de trabajo, la cualdeber cumplir con la siguiente caractersticas:La dilucin de trabajo deber aproximarse a 1000 UFC / mLPor lo anterior para la dilucin '1:10 de la muestra: por cada 25 g de muestraen225 mL de solucin se tendra una concentracin entre 10 y 100 UFC/mL,es decir que la probabilidad de obtener resultados positivos sea del 100%Para las diluciones posteriores 10-2,'10-3, la probabilidad seria de 10o/oy 1%respectivamente,

4,3. Preparacin de la muestra.Homogeneizar perfectamente la muestra, tomar porciones de 25 g de la matriz por cadaanlisis realizado, se recomienda iniciar inmediatamente el anlisis,

4.4, Fortificacin de la muestra.lnocular cada porcin de la muestra con una concentracin conocida del microorganismo,(Seguir como en el punto de estandarizacin del inoculo), As mismo inocular en cajas petriporduplicado cada una de las diluciones'10-1, '10-2, 10-3de 6 muestras para asegurarse deque la estandarizacin del inoculo fue correcta,

4.5, Controles,4,5.1. Control Positivo, Realizar la fortificacin con el inoculo conocido. sin adicionar la

matriz elegida para la validacin.4,5.2. Control Negativo. Realizar el mismo manejo de la muestra solo con los medios de

cultivo util izados.4-I

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Verificacin deltamao del inoculo

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Repetibilidad

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4.6. Criterios de Aceptacin

Al verificar el tamao del inoculo por lo menos seis veces en promedio se obtienen las siguientescuentas tericas:10-1 entre 10 y 100 UFC / mL10-2 entre 1 y 10 UFC / mL10 3 entre 1 y 0 UFC / mLNmero de repeticiones: 3

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5. DESCRIPCIU OC LAS ACTIVIDADES.5.1 Elaboracindel protocolo

5,2 Seleccin de laMatriz

5.3 Preparacindel inoculo

i Elabora el protocolo, cumpliendo con los requerimientos mnimosi indicados en el CCAYAC-P-062Selecciona l muestia con base en iitbros definidos n i pln Oevalid acin. Preferentemente muestras no contamin adas,Se asegura de contar con la cantidad de muestra necesaria paracompletar la evaluacin del desempe0,Cuantifica la presencia o ausencia del microorganismo(s) de inters

Siguiendo un mtodo comnmente utilizado por el laboratoriorealiza la estandarizacin del inoculo (puede consultarse el punto4.2.1de la presente gua),Durante la evaluacin del desempeo verifica el inoculo empleadoy lo identifica como valor de referencia,Nota: La verificacin del tamao de inoculo debe comprobarsedurante la ejecucin del protocolo para cada suspensin demicroorganismos empleada, Dicha verificacin deber realizarsepor lo menos por sextuplicado,

Responsable dela validacin

Responsable dela Validacin

Responsable dela validacin,

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5.4 Preparacin dela muestras

5.5 Ejecucin delprotocolo.

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Homogeniza la muestra perfectamente,Nota: se recomienda que las muestras perecederas seananalizadas de inmediato o en su defecto mantenerse enrefrigeracin.Fortificacin de la muestra,En condiciones aspticas pesa la muestra conforme al mtodo deprueba he inocula la muestra con el microorganismo de prueba.Alternativamente ouede inocularse la muestra antes de realizar lossub muestreos, procurando homogenizar perfectamente,

] Siguiendo el mtodo de prueba analiza la muestra el nmero dei veces que corresponde, segn los criterios de aceptacinEjemplo 1:Mtodos cuantitativosPara la preparacin del inoculo se debe usar por lo menos pero nolimitado un nivel de fortificacin, para fines de clculo es necesarioconsiderar las diluciones que se emplearan, para optimizar laorobabilidad de encontrar al menos 1 unidad viable en la ltimadilucin a probar. Por ejemplo: para la dilucin 1:10 la probabilidadsea un 100%, para las diluciones posteriores 1:100 y 1:'1000 laprobabilidad sea de 10% y 1% respectivamente.Nota: Todos los inculos deben ser verificados utilizando la tcnica0e

Ivaciado en placa, empleando por duplicado cajas petri para

Responsable dela validacin

Resoonsable dela validacin

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i cada dilucin en al menos 6 muestras,

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EgleptECOIIIS ON DE CONTROL ANAL|TICO Y AMPLIACIN DE COSERTURA

GUfi PARA LAVALUAC|-N DEL OESEIIPEO DE MFOOOS OE PRUEBAI]CROBOLC COS PORLAfCNLCAOELNIMEROMASPROBABLE

FECfiA DE PROXI IA REVSION:

RepelibllidadCa cular e og adlmo deL .esllado obten do en as lab as cores pondientes descrilas en el lod o

Caculared seglida e promed o que se epesa como la sumde Los logarlmos enl elnme.o ioialde

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COIIISJN OE COITROL ANAL|TICO Y AI\PLIAC ON DE CO8ERTURAN DEL OESMPEO DE METODOS OE PRUEBALA IECICA OEL NUMERO MAS PROBA8LE

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Sedebemecoa las fuentes de lnc0rl dumbreDslrbucn de os microoqan smos en E mues[a

Medicons h*adao ed cin d ! muer6):D uciones y volmenesi

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Calcular la !ncertidunbre combinadaPor ser u mlodocuanllaivo se caclla conlome a a Jomulade

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*uarnzas rotaes derepelibi dd Y reprodcibl ldad

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COI]I SIN DE CONfROL ANALhICO Y AT]IPLIAC N DE COBERTURA ].:: ::i| :;i :::-:r;i - ;_-.ipiiiB;

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COMISLON DE CONTROLANALICOYA

GliA PARA LA EVALUACIN OEL OESEIIIPEO DE MEIODOS OE PRUE8AMICROB OLGICOSPORTIECNICAOELNUMERO MASPROBA8LE

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O]\IS ON DE CONTOL ANALf ]CO Y A PARA LA EVALa]NE SEMP

FECHA OE PROXI'IIA REV SION:

Lmite de deteccin: Es e ero ms peqeo de microorganlsmos en lna mest qe pedese. deiecrdo baio las mnd cioes de an s s E mite m croblolgico de una pfueba delefmina apesenca o senca de icforgnlsos por elemplo ausenca de sa monella spp en 25 g de

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Mlodo Nonalzado Poceso de medicn robuslo donde peqeas vadacoes e eprocedmielo no deben prodrcr de foma mprcvsla gmndes vraciones en s resuladosMlodos inlernaconamele aceotados vva dadosNvel de forlficacin o lanao del lnculo: Es la canrdad conocida de croo4aisnos

Protocolo paa l ovaluacl deldesempeo:Documenloq0e descrbe los pasos a segu rdurantelaevauacn de desempe de u hlodo aa ilico microbogico, cuyo iundamento se encetradescf lo en e presenledocuenlo

Resuhado AberanterCorcspode a cqu ervaor exlremo que ocra duranle a eiec0ciD de aorueba. En mnos de 10/o de ls oruebas esos resulados oueden ocurf aealoramenle en

Evaluacin del desempeo: Es el poceso qe ea za un laboralorio para demosl.ar que unmtodo normalzado produce consslenlemele re$ Iados cofbes e as condiciones pa dicu a.esdel laboralodo. Contmacn mdanie aporlacn de eldecia oblelya de que un mtodoaailcovalidado nlemacionalmenle cumplemn $ propsb en as condicores pancuhres delaboEloro dode se.ealiza e aniss

Repetibilidd: Es e grado de concodanca enlre los resuliados anaiiicos vduaes oblendospor a p ccn de !n hismo prccedimienlo aa ilco, a d feies porciones de a m sma maldz e.as m smas condicones de an ss (analisla equ pam enlos aboratoo) e ntedlos corlos de

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Repoduclbilidad Es el qrado de concordnc enlre os resuLlados anaillcos ndivduaesoblen dos por a ap cacn de un m smo p.oced m enlo nalil diteenles porc ones de a misma

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COI]SINDECONTROLANAL ICOYAIIPLIACON OE CO8ERIURAFaRA ta EVALUAai-N oEL DESEMPEo 0E rEiooos0E PRUEBA

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B1 D c Toccbelo S. Curso.lerco prctm Va dadn de Mlodos M crcbogcos bajo Sslema de Asequramenlo de la Caidad sanla ctuz de a Ser Bolvia P'oyeclo TCC/Bo v .Mxico 2007

o2 uropean Coopemlon tu A@redilalion EAO4/i0 Accredtaliod for Mcboloscallaboralo es.2002

83 GA Leolta Chnen Vadacn de una lcnica de PcR mlpe para la deie6ron deEschench a coL prcdclo de lorina sh ga. Revisla AQenl na de M crcb o!q a Vo! 37 No1 2005

84CiadeValdac ldeMlodosAnai lcosColegioNaconadeQuimicosFaracursB looos de Mxlco. A C Edicn 2002

S5 ISO/C 2003 ln lemal iona SiandadlSO161402003(E) Mioboogvof ioodandanmafeed no stuls - Poloco for the va dlon ol alleralive meihods F 61 Ed l0

86 so,f 13843:2000 WlerQualilv-GudancenValdalionoiMcrobologlcalmelhodsI7 so 17994 2004 Waler Oa lv Crilera lor Estb shing Equ valence between

Mlcrob o oo cal elhods FnslEdton88 rhe Fhe; tu Ppose olanalvlcal Methods A Labolory Gude lo Melhod vaLidalion

and Re aled Topics Euchem Gude 1998. Dispoibe en' p Mt4"_oqq oespo v dod 'b_020 1r

89 Ph o E" lo - Cio. oe, la ^d l l F r a oA) dOAL 1e rora Velsodsc;irce cudelines lor Valdalon of Qua talve and Qualilalve Food M crcboog ca

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COMISIN DE CONTROL ANALIILCO Y AMPLIACIN DE COBERUFACONTROL DECAMB]OS DEOOCIIMENTOS DEL SISTEI1A DE GESfIN DE LA CAI.IDAD

2013-03 04

GU]A PARA LA EVALUAC!N DEL OESEMPEO DEI\ ETODOS OE PRU EBA 'IC RO BIOLOC LCOS POR LA

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