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精子運動解析装置を用いた豚精液検査方法の確立
誌名誌名群馬県畜産試験場研究報告 = Bulletin of the Gunma Animal HusbandryExperiment Station
ISSNISSN 13409514
巻/号巻/号 17
掲載ページ掲載ページ p. 75-78
発行年月発行年月 2010年12月
農林水産省 農林水産技術会議事務局筑波産学連携支援センターTsukuba Business-Academia Cooperation Support Center, Agriculture, Forestry and Fisheries Research CouncilSecretariat
群馬畜試研報 第 17号 (2010)
群馬畜試研報第 17号 (2010)・75-78
キーワード JI家精液・精子運動解析装置・精液性状
精子運動解析装置を用いた豚精液検査方法の確立
山田 真・小材幸雄ネ
Sperm Motility Analysis System Use for Boar Semen
Makoto YAMADA and Yukio OZAl
要 ヒコ日
有現吾妻農業事務所家畜保健衛生課
豚精液の客観的な検査方法の確立を目的として、ヒトの精液検査で広く用いられ
ている精子運動解析装置(以下、 SMAS) を用い、自動出l球計算機(以下、血算機)
による精子数測定および従来の顕微鏡検査(以下、鏡検)による活力検査との比較
試験を行い、以下の結果を得た。
1 SMASにおいて、精子数 l倍、個以上/mlの規定濃度の精液では、担IJ定に時間
を要す上、精子数測定精度が低下し、測定に不向きであった。
2 規定濃度の精液を 5倍および 10倍に希釈し、検査に供することにより、測定
時間が短縮され、精子数測定精度も改善された。
3 鏡検で、の活力検査との相闘が認められ、 SMASを用し、た客観的な検査方法が
可能であることが示唆された。
緒 三三r仁コ
豚精i1!，tの活力検査は、顕微鏡を用いた検
査が一般的である。しかし、検査には習熟
を要し、測定者間での差も多く、安定した
検査を行うことは困難である。 そのため、
検査機器を)'1打、た客観的な検査方法の確立
が求められている。
一方、ヒトの泌尿器科領域では、コンピ
ュータの画像分析を応用した精子 自動分析
装置による精液検査法が普及しつつある。け
そこで今凶、国産品で使用方法が簡便な
SMAS (ディテクト社製 写真1)を用い、
従来の精液検査方法との比較を行った。
75
材料および方法
1 供試豚および供試精液
当場人工授精所繋養の種雄豚ランドレー
ス種 3頭、大ヨークシャ一種 4頭、デュロ
ック種 3頭の計 10頭から採精し、液状保存
した精液を供した。
2 試験期間
平成 21年 7月から平成 22年 3月までに
実施した。
3 SMASについて
本機は、精子観察用の顕微鏡と画像解析
用コン ピュータおよびモニターから構成さ
群馬畜試研報第 17号 (2010)
れている。検査には、チャンパータイ プの
専用スライドグラス(スライドガラスとカ
バーガラス間に 20μmの間隙を設けている
写真 2) を用いた。
検査の仕組みは、スライドグラスのチャ
ンバー内に被検精液を注入し、精子ーが観察
しやすい任意の視野(1/16万 ml相 当 写真
3) を選び、その視野内の各精子を画像解析
システムにより追尾および解析(写真 4)
し、精子数および精子運動率などを自動的
に測定するものである。
日
写真 1 精子運動解析装置全体
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い々と.、 ーヘ-・ -・Ih~ ーベ、L骨 J ノ 、品、-写真 3 精子検査画面
写真 4 精子追尾および解析画面
4 試験方法
1 )採精、精液調整および保存
擬牝台を使い、用手法により精液を採取
後、モデナ液にて精子数が l億個以上/ml
の規定濃度になるように調整した。
調整した精液の温度をインキュベーター
内にて 15ocまで漸次低下させ、 15ocにて
液状保存した。
2 )精液検査方法および調査区
保存精液を小試験管に約 2ml分注し、 37
ocの恒温水槽にて 15分間加温後、検査を行
写真 2 チャンパータイプの専用スライ iご った。
ガラス また、保存精液の希釈率により、無希釈
区、5倍希釈区、10倍希釈区を設けた。
5 調査項目
1) SMASでの測定時間
被検精i夜を SMAS用顕微鏡にセットし、
Fhu
ヴ
J
群馬畜試研報 第 17号 (2010)
精子の追尾および解析が終了するまでの時
間を計測した。
2 )総精子数
対照として、 mL算機(エノレマ社製 PA2000)
を用い、比較を行った。
3 )精子活力および運動率
SMASにおいては、精子運動率(以下、
運動率)を活力の目安として用いた。対照
として、家畜人工授精講習会テキスト 2)に
準拠し、顕微鏡による目視検査法を用い、
活力+++ (運動が激烈で活発な前進運動す
るもの)および++ (活発な前進運動するも
の)の合計値 (%)との比較を行っ た。
結果
1 SMASでの測定時間
l検体当たり平均担IJ定時間は無希釈区 3
分 23秒、 5倍希釈区 l分 15秒、 10倍希釈
区 l分 12秒であった(表 1)。
表 1 SMASによる 1検体当たり測定時間
区分
無希釈区
5倍希釈IR
10倍希釈区
3 総精子数
(n=15)
平均測定時間
3分 23秒
1分 15秒
l分 12秒
SMAS と血算機での精子数測定に関し、
し、ずれの区においても正の相関が認められ
た(無希釈区 r=0.835、5倍希釈区 r=0.969、10
倍希釈区 r=0.948、図 1~ 3)。しかしなが
ら、無希釈区においては他の区に比べ、相
関が低く、測定精度の低下がみられた。
2. 0
S 1. 5 乱f
A 1. 0 S
O. 5
0.0
二 O.ffix + 0.5
r = O.邸5
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
血期幾
図1 無希釈区の精子数(n二26)
2.0
al 5 A 1. 0 S
0.5
0.0 r = O. ffi9
O. 0 O. 5 1. 0 1. 5 2. 0
血算機
殴 5倍稀厄の精強(IF26)
2.0
S 1.5 おf
A 1.0
S 0.5
0.0
0.0
単位:儲固/ml
y=1.侃x+ O. 0
r = 0.948
0.5 1.0 1.5 2.0
血期幾
図3 10倍希釈区広精子数仇=26)
3 精子活力および運動率
SMASによる運動率と鏡検による活力判
定ではいずれの区において正の相関が認め
られた(無希釈区 r=0.959、 5倍希釈区
r=0.913、 10倍希釈区 r=0.933、図 4~ 6)。
また、各区間における相関関係に差は認め
られなかった。
77-
群馬畜試研報 第 Inき (2010)
S 100 |哨立:%
M 75 A
S 50 運
y三=1. 2Dx -26. 9 動 25率
r =0.96。。。 25 50 75 100
錨剣舌力
図4 無希釈区の活力(IF26)
S 1∞ ~ __ I哨立:%
A 75
S 運 日
動- Y 率 25
o. 9Sx + 3.8
r = 0.912 。。25 50 75 100
鏡樹舌力図5 5倍希釈区の活力Cn=~)
S 100
M 75 I噌立:%
A
S 50
運
‘ y 0.9lx十 80
r二 O.933
O
。25 日 75 1∞ 鋪貸肋
鴎 1C膳稀枢d舌力佐窃)
考察
当初、精子数 i億個以上/mlに調整した
保存精液を無希釈で供試したが、ヒトの平
均的な精子数 0.2億個/mlよりも高濃度な
ため、 SMASでの精子の追尾、測定に時間
がかかる上、精子同士の凝集などにより精
子数測定精度が低下し、正しい測定が困難
であった。
そのため、保存精液をさらに希釈し、検
査に供すことが必要であると考えられ、規
定濃度の精液を 5倍希釈、 10倍希釈したも
のを用いたところ、検査時間が短縮された。
これは、希釈後の精液の解析精子数が SMAS
の適正な解析範囲内にあったためと考えら
れ、希釈濃度の違いによる測定時間に差が
みられなかった要因とも言える。また、同
様に、精子数測定では血算機とも高い相関
が得られた。精子活力に関しでも鏡検での
惰力判定との相関が認められ、迅速かつ客
観的な検査が可能である。一方、精子数、
精子活力し吋えれにおいても、 5倍希釈区、 10
倍希釈区間に大きな差は認められなかった。
現状では、装置一式が高価な上、消耗l!日l
である SMAS専用のスライドグラスも i枚
約 700円と同様に高価であるため、 一般の
農家での利用は難しいと考えられる。しか
し、大規模養豚経営における G Pセンター
や精液販売を行う人工授精所では、一回の
検査で精子数、活力(運動率)が同時に測
定でき、検査作業の効率化と製品としての
豚精液の品質安定性の確保に十分寄与でき
る。
引用文献
1 )精液検査標準化ガイド‘ライン作成ワーキ
ンググループ編.精液検査標準化ガイド
ライン
2)日本家畜人工授精白Ii協会発行.家畜人工
授精講習会テキスト
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