Click here to load reader

Cercetări fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L

  • View
    231

  • Download
    7

Embed Size (px)

Text of Cercetări fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L

  • UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE DIN CRAIOVA

    COALA DOCTORAL

    CERCETRI FIZICO CHIMICE ASUPRA SPECIEI Sambucus ebulus L.

    Rezumatul tezei de doctorat

    Conductor de doctorat, Prof. Univ. Dr. STELIAN RADU

    Student doctorand,

    LIVIU CHIRIGIU

    Craiova 2014

  • Liviu Chirigiu Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

    3

    CUPRINS CUPRINS ABREVIERI INTRODUCERE STADIUL ACTUAL AL CUNOATERII CAPITOLUL 1. CONSIDERAII GENERALE PRIVIND SPECIA Sambucus ebulus L. 1.1. ncadrare sistematic 1.2. Distribuia speciei Sambucus ebulus L. 1.3. Chemosistematic 1.4. Potenialul fitoterapeutic 1.4.1. Activitatea antiinflamatoare 1.4.2. Activitatea antioxidativ 1.4.3. Activitatea anti-Helicobacter pylori 1.4.4. Activitatea citotoxic i antiangiogenic CAPITOLUL 2. METODE DE EXTRACIE I DE ANALIZ A COMPUILOR CHIMICI CONINUI DE SPECIA Sambucus ebulus L. 2.1. Metode de extracie 2.1.1. Metoda Soxhlet 2.1.2. Extracia cu microunde 2.1.3. Extracia asistat cu ultrasunete 2.2. Metode de identificare i separare a metaboliilor secundari 2.2.1.Gaz-cromatografia cuplat cu spectrometria de mas 2.2.2. Cromatografia de lichide de nalt performan cuplat 2.2.3. Spectrometria de absorbie atomic CONTRIBUII ORIGINALE CAPITOLUL 3. IDENTIFICAREA I CARACTERIZAREA PRELIMINAR A SPECIEI 3.1. Caracteristici macroscopice 3.2. Caracteristici microscopice 3.3. Caracteristici microscopice ale pulberilor provenind de la produsele vegetale 3.4. Determinarea umiditii, substanei uscate i reziduului la calcinare pentru specia Sambucus ebulus 3.5. Extracia Soxhlet 3.6. Analiza prin spectroscopia IR cu transformat Fourier (FT-IR) 3.6.1. Materiale i metode folosite 3.6.2. Rezultate i discuii 3.7. Analiza cationilor metalici coninui de specia Sambucus ebulus L. prin SAA 3.7.1. Mineralizarea probelor 3.7.2. Materiale i metode 3.7.3. Rezultate i discuii CAPITOLUL 4. INVESTIGAII FITOCHIMICE ASUPRA SPECIEI Sambucus ebulus L. PRIN GC-MS I HPLC / HPLC -MS 4.1. Analiza prin gaz-cromatografie cuplat cu spectrometria de mas a compuilor coninui n extractele de Sambucus ebulus L. 4.1.1. Pregtirea probelor 4.1.2. Aparatur i condiii de lucru 4.1.3. Rezultate i discuii 4.2. Analiza unor clase de metabolii secundari din Sambucus ebulus prin HPLC i HPLC-MS 4.2.1. Analiza brassicasterolului, campesterolului i stigmasterolului 4.2.1.1. Pregtirea probelor 4.2.2. Separarea antocianilor 4.2.3. Separarea i -amirinului CAPITOLUL 5. EVALUAREA ACTIVITII BIOLOGICE A UNOR EXTRACTE DIN Sambucus ebulus L. 5.1. Evaluarea activitii antioxidante 5.1.1. Pregtirea probelor 5.1.2. Materiale i metode 5.1.2.1.Coninutul total de compui fenolici 5.1.2.2. Coninutul total de flavonoide 5.1.2.3. Determinarea permanganometric a coninutului n substane organice oxidabile din specia Sambucus ebulus L. 5.1.2.4. Studii de voltametrie ciclic 5.1.2.5. Determinarea capacitii chelatante a extractelor 5.1.3. Rezultate i discuii

  • Liviu Chirigiu Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

    4

    5.1.3.1.Coninutul total de compui fenolici i flavonoide 5.1.2.2. Determinarea permanganometric a coninutului n substane organice oxidabile din specia Sambucus ebulus L. 5.1.2.3. Studii de voltametrie ciclic 5.1.2.4. Determinarea capacitii chelatante a extractelor 5.2. Evaluarea fitotoxicitii 5.2.1. Pregtirea probelor 5.2.2. Materiale i metode 5.2.3. Rezultate i discuii 6. DETERMINAREA PIGMENILOR CLOROFILIENI, A CAROTENULUI, A AZOTULUI, A PROTEINEI, A FORSFORULUI, A POTASIULUI I A SUBSTANEI USCATE DIN SPECIA Sambucus ebulus L. 6.1. Aparatura folosit i metode de determinare 6.2. Ponderea diferiilor factori n variaia compoziiei chimice a plantei 6.3. Mineralizarea materialului vegetal 6.3.1. Mineralizare cu acid sulfuric (Metoda Kjendal) 6.4.Determinarea carotenului i a pigmenilor clorofilieni 6.5. Determinarea proteinei brute. Azotul total. 6.6. Determinarea fosforului 6.7. Determinarea K 7. CONCLUZII GENERALE I PERSPECTIVE DE CERCETARE BIBLIOGRAFIE LISTA LUCRRILOR PUBLICATE

    Cuvinte cheie: Sambucus ebulus L., GC, HPLC, MS.

    CAPITOLUL 1. CONSIDERAII GENERALE PRIVIND SPECIA Sambucus ebulus L.

    1.1. ncadrare sistematic

    Iniial genul Sambucus ebulus a aparinut familiei botanice Caprifoliaceae1, ns, dup ndelungi dezbateri taxonomice, att genul Sambucus ct i alte cteva genuri (Viburnum) au fost mutate n familia Adoxaceae de ctre Vernon, n 19872. Aceast familie botanic aparine ordinului Dipsacales, clasa Magnoliopsida subclasa Asteridae. Din genul Sambucus fac parte aproximativ 30 de specii, dintre care cele mai cunoscute sunt: Sambucus nigra, Sambucus racemosa, Sambucus palmensis, Sambucus canadensis i Sambucus ebulus.

    1.2. Distribuia speciei Sambucus ebulus L. Sambucus ebulus, similar speciei Sambucus nigra, este o specie larg rspndit, att n Europa Central i de Sud ct i n Asia, Nordul Africii i Statele Unite ale Americii.

    1.4. Potenialul fitoterapeutic Apar menionri n literatura de specialitate cu privire la utilizarea frunzelor, florilor i fructelor ca expectorant, diuretic sau purgativ, n diverse afeciuni inflamatorii precum: artrita reumatoid, febr, edem pulmonar, arsuri, sau diverse rni deschise, au aciune bacteriostatic i diuretic.

    1 Iaroenko P D (1962). Geobotanica, Ed. Academiei R.P.R., Bucureti. 2 Vernon H (1987). Flowering plants of the World. Andromeda Oxford LTD, Heywood.

  • Liviu Chirigiu Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

    5

    CAPITOLUL 2. METODE DE EXTRACIE I DE ANALIZ A COMPUILOR CHIMICI CONINUI DE SPECIA Sambucus

    ebulus L. Printre cele mai cunoscute metode de extracie se numr: metoda Soxhlet, extracia cu microunde, extracia cu ultrasunete, macerarea, hidrodistilarea3, turboextracia, vibroextracia etc. Dintre tehnicile de identificare i dozare a compuilor coninui n extractele obinute amintim: gaz cromatografia cuplat cu spectrometria de mas, (GC-MS), cromatografia n strat subire (TLC), cromatogra de lichide de nalt performan cuplat cu spectrometrie de mas (HPLC-MS), spectrometria de absorbie atomic (AAS), spectrometria n infrarou cu transformat Fourier (FT-IR).

    CONTRIBUII ORIGINALE

    CAPITOLUL 3. IDENTIFICAREA I CARACTERIZAREA PRELIMINAR A SPECIEI

    3.1. Caracteristici macroscopice n aceast prim etap a cercetrii au fost descrise caracteristicile morfologice i organoleptice ale organelor vegetale, s-a apreciat aspectul (interior, exterior) i particularitile caracteristice, dimensiunile, culoarea, mirosul.

    3.2. Caracteristici microscopice Prin caracterizarea microscopic s-a urmrit evidenierea elementelor structurale difereniale ale organelor vegetative provenind de la specia Sambucus ebulus. S-a lucrat pe un microscop Bel Photonics model BIO3 cu camera video Bel Photonics Model BVM-100 i soft Bel MicroImage Analzyer.

    3.4. Determinarea umiditii, substanei uscate i reziduului la calcinare pentru specia Sambucus ebulus L.

    Tabel 1. Umiditatea i cenua brut pentru specia Sambucus ebulus L.

    Nr. crt.

    Proba de Sambucus ebulus L.

    Masa iniial

    (g) Masa dup uscare (g)

    Umiditate (%)

    Reziduu calcinare

    Cenu brut (%)

    1. Rdcini 1,4216 1,2987 8,645 0,0989 6,956 2. Tulpini 2,1261 1,9463 8,456 0,0860 4,044 3. Flori 1,4758 1,3555 8.8749 0,1240 8,402 4. Fructe 2,9378 2,5349 13,7143 0,0931 3,169 5. Frunze 3.3317 3,0672 8.6235 0,2536 7,612

    Reacii fitochimice preliminare Pentru identificarea principalelor clase de principii active coninute de aceast specie, s-au folosit extractele obinute prin metoda Soxhlet. Pentru identificri au fost folosite metodele prescrise de Farmacopeea romn ed. X.

    3 Peres VF, Saffi J, Melecchi MI, Abad FC, Assis Jacques R, Martinez M, Conceic E Caramao EB(2006). Comparison of soxhlet, ultrasound-assisted and pressurized liquid extraction of terpenes, fatty acids and Vitamin E from Piper gaudichaudianum Kunth, Journal of Chromatography A, 1105:115118.

  • Liviu Chirigiu Cercetri fizico-chimice asupra speciei Sambucus ebulus L.

    6

    Tabel 2. Analiza fitochimic a extractelor eterice ale speciei Sambucus ebulus L.

    Reacie identificare Principii active Rdcin Frunz Fruct Tulpin Reacia Carr-Price carotenoide + + + -

    Metoda NeoClevenger uleiuri volatile + + + - Reacia Liebermann-Burchard steroli + + + +

    Hidroliz acizi grai + + + + Reacia cianidolului agliconi flavonici + + + -

    Reactivi Mayer, Bertrand, Ehrlich alcaloizi baze + + + - Reacia Borntranger emodoli + + + -

    + principii active prezente; - principii active absente.

    Tabel 3. Analiza fitochimic a extractelor alcoolice ale speciei Sambucus ebulus L.

    Reacie identificare Principii active Rdcin Frunz Fruct Tulpin Reacia cu FeCl3 taninuri catehice + + + - Reacia Fehling polifenoli + - - -

    Spumifiere, Reacia Liebermann-Burchard saponozide + + + - Ninhidrin aminoacizi + - + -

    Coloraie n mediu acid antocianozide + + + - Reacia Shibata flavonozide + - - -

    + principii active prezente; - principii active absente.

    3.6. Analiza prin spectroscopia IR cu transformat Fourier

    Pentru nregistrarea spectrelor reziduurilor etanolice i eterice a fost utilizat un aparat FT-IR NICOLET, n domeniul 4.000 400 cm-1, cu pastilare cu bromur de potasiu. Controlul aparatului i achiziia datelor s-a realizat cu ajutorul softului Omnic Spectra. Spectrele au fost trasate dup prealabila pastilare cu bromur de potasiu astfel: reziduu uscat a fost mojarat cu bromur de potasiu de puritate spectral.

    Tabel 4. Principalele frecvene IR (cm-1) obinute pentru pulberile fitofarmaceutice

    Proba / Frecvene caracteristice n IR (cm-1) Atribuire Rdcin Frunz Fruct Tulpin Pri aeriene