Upload
oussama-kriden
View
232
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
1/56
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
2/56
Stratgie de base de lamlioration des plantes (AP)Stratgie de base de lamlioration des plantes (AP)
-- explorer les sources de variabilit existantes (ressourcesexplorer les sources de variabilit existantes (ressourcesgntiques)gntiques)
-- construire des populations ou des individus associant desconstruire des populations ou des individus associant descombinaisons gntiques plus favorablescombinaisons gntiques plus favorables
-- runir dans une varit, population vgtale artificielle etrunir dans une varit, population vgtale artificielle etreproductible constitue dun ou de plusieurs gnotypes, unreproductible constitue dun ou de plusieurs gnotypes, unmaximum de gnes favorables pour les caractristiquesmaximum de gnes favorables pour les caractristiquesslectionnesslectionnes
== des innovations mthodologiques constantes avec les progrs desdes innovations mthodologiques constantes avec les progrs desconnaissancesconnaissances= des ruptures conceptuelles majeures et des changements de= des ruptures conceptuelles majeures et des changements de
paradigme (progrs gntique, agrobiodiversit, dveloppementparadigme (progrs gntique, agrobiodiversit, dveloppementdurable)durable)
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
3/56
XXme sicle: slection pour leXXme sicle: slection pour leprogrs gntiqueprogrs gntique
Consquences +Consquences + Efficacit et progrs gntique rapideEfficacit et progrs gntique rapide
Industrie performante : emploi et valeur ajouteIndustrie performante : emploi et valeur ajoute Diffusion du progrs gntique, conseil & valuationDiffusion du progrs gntique, conseil & valuation Adaptation aux volutions de l'agriculture,Adaptation aux volutions de l'agriculture, Ractivit forte la demande des acteurs de la filireRactivit forte la demande des acteurs de la filire
ConsquencesConsquences -- Simplification des rotations : diminution du nombre despcesSimplification des rotations : diminution du nombre despces
cultivescultives Une disparition des populations de pays (sauf dans les zonesUne disparition des populations de pays (sauf dans les zones
marginales) et problmatique des ressources gntiquesmarginales) et problmatique des ressources gntiques Disparition de lhtrognit gntique des varits & GrandesDisparition de lhtrognit gntique des varits & Grandes
surfaces avec le mme cultivarsurfaces avec le mme cultivar Homognet gntique : dveloppement dpidmiesHomognet gntique : dveloppement dpidmies Plus rcemment, mergence de questions autour des droits dePlus rcemment, mergence de questions autour des droits de
proprits intellectuellesproprits intellectuelles
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
4/56
Lvaluation agronomique des varits
Evaluation multisite et pluriannuelle des caractristiques varitalesdans diffrents environnements:
- exprimentation contrle : plans dexprience- interactions Gnotype x Environnement
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
5/56
Le progrs gntique en questionLe progrs gntique en question Concept varital HYCConcept varital HYC (intensif et Rvolution Verte)(intensif et Rvolution Verte)
-- indicateurs conomiquesindicateurs conomiques: productivit/ha, demande des: productivit/ha, demande desfiliresfilires
-- n cateurs agronom quesn cateurs agronom ques: r gu ar t pro uct on,: r gu ar t pro uct on,itinraires techniques simplifis et scurissitinraires techniques simplifis et scuriss
-- indicateurs cologiquesindicateurs cologiques: accroissement nitrates,: accroissement nitrates,
pesticidespesticidesrduction biodiversit, invasions biologiquesrduction biodiversit, invasions biologiques
=Responsabilits directe (conomie et systme=Responsabilits directe (conomie et systme
de production) et indirecte (varits)de production) et indirecte (varits)
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
6/56
Socio-conomistes
AgronomesSlectionneurs
Gntiquenom que
PhysiologieEcophysiologie
Maths-Info
Ethnobotanistes
JC Glaszmann
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
7/56
11-- Indicateurs de diversit gntique,Indicateurs de diversit gntique,
varits et gestion dynamiquevarits et gestion dynamique
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
8/56
Indicateurs de diversit gntiqueIndicateurs de diversit gntique
PaysagePaysage (fonctionnalit des(fonctionnalit des
cosystmes)cosystmes)
Mosaque espces/cultivarsMosaque espces/cultivars
(biodiversit)(biodiversit)
ParcelleParcelle (populations, comptition,(populations, comptition,slectionslection))
Rotation, associationRotation, association
Types varitauxTypes varitaux
PlantePlante (adaptation, plasticit,(adaptation, plasticit,symbiose)symbiose)
Caractres slectionnsCaractres slectionns
GnomeGnome (organisation et(organisation et
interactions gnes)interactions gnes)
Structure gntiqueStructure gntique
Carte gntiqueCarte gntique
GnesGnes Diversit allliqueDiversit allliqueDiversit nuclotidiqueDiversit nuclotidique
ADNADNSquences et nuclotidesSquences et nuclotides
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
9/56
Slection moderne(1900)
Varits lites
Forme sauvageancestrale
Domestication-10000/-8000
Forme
domestique
Populations de pays
Diffusion
Histoire dune plante cultive
Expansiondmographique
Slection
chantillonnageSlection
DiversificationAdaptation
Flux de gnesSauvage/Cultiv
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
10/56
10
15
20
25 Sauvage
Cultiv
Consquences de la domestication et de lamlioration desplantes : perte de diversit
Diversitnuclotidique
0
5
Orge Bl dur Mil Mas Luzerne Tournesol
la diversit utilise dans le pool cultiv est rduite
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
11/56
Variation agro-morphologique collections
mondiales
Sorgho Riz
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
12/56
Diversit mil (Niger)
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
13/56
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
14/56
Structure gntique des varitsStructure gntique des varitsVaritVarit AutogameAutogame AllogameAllogame X vegX veg
PopulationPopulation ++++ ++++++++ ++++
LigneLigne ++
Hyb 2vHyb 2v ++ ++Hyb4v/HCHyb4v/HC ++++
SynthSynth ++++++
CloneClone ++ ++ ++
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
15/56
22-- Evolution des outils au niveau ADN:Evolution des outils au niveau ADN:
gnes et gnomesgnes et gnomes
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
16/56
Squenage ADNSquenage ADNGnomes entiers vgtauxGnomes entiers vgtaux
Squences particuliresSquences particulires
Evolution des outils: X 1000Evolution des outils: X 1000
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
17/56
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
18/56
Marqueurs molculaires
Microsatellites
A
FLP
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
19/56
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
20/56
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
21/56
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
22/56
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
23/56
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
24/56
33-- Evolution des outils au niveau cellulaireEvolution des outils au niveau cellulaire
Reproduction conforme et sanitationReproduction conforme et sanitation Rgnration in vitro et variations somaclonalesRgnration in vitro et variations somaclonales
Fusions somatiquesFusions somatiques
Sauvetage dembryonsSauvetage dembryons HaplomthodesHaplomthodes
Combinaison gnomique/in vitro: TransgnseCombinaison gnomique/in vitro: Transgnse
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
25/56
44-- Evolutions des mthodologiesEvolutions des mthodologies
Slection assiste par marqueursSlection assiste par marqueurs(SAM)(SAM)
oo-- omest cat on, ase roa en ngomest cat on, ase roa en ng Nouveaux idotypes/critres deNouveaux idotypes/critres de
slectionslection
Structures varitalesStructures varitales
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
26/56
Approche phnotypique et statistique: bilan
Etudier les caractres complexes via une stratgie base sur leur valeurphnotypique:
Estimer la part gntique G de la variation phnotypique observeafin destimer des paramtres, en particulier h2, qui permettront de prdirele progrs gntique attendu dans les schmas damlioration varitale
Dcomposer le phnotype complexe en caractres plus simples afindaffiner et de rendre plus efficace lestimation de cette part gntique
Populationde dpart
Populationamliore
Slectionet intercroisement des
meilleurs plantes
non seulement sur leur valeur phnotypique mesuremais aussi sur leur valeur gntique estime
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
27/56
cartes gntiques et QTL
A li i d lh
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
28/56
Amlioration de lhva
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
29/56
recherche dune corrlation statistiqueentre une variation gntiqueetlexpression phnotypiquedun caractre.
aplotype
2
Principe de la gntique dassociation
A A T A C G A --------- T
A A T A C G A --------- T
A A T A C G A --------- T
---------
Diffrents alllesPopulation Haplotypes
H
Haplotype1
Phnotypes
G A T A C A A INDEL C
G A T A C A A INDEL CG A T A C A A INDEL C
G A T A C A A INDEL C
G A T A C A A INDEL C
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
30/56
Comparaison des mthodes dassociation
trait-polymorphisme nuclotidique (Yu et Buckler, 2006)
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
31/56
Introgression dallles favorablesIntrogression dallles favorables
ApprocheApproche Backcross (BC)Backcross (BC) PrePre--breeding, base broadeningbreeding, base broadening
Introgression cibleIntrogression cible Introgression massiveIntrogression massive
Amlioration ponctuelleAmlioration ponctuelle Restauration de diversitRestauration de diversit
Modification limiteModification limite Non cible, valeur globaleNon cible, valeur globale
Un caractre, un gnotypeUn caractre, un gnotype Gestion sous populationGestion sous population
Hrdit oligogniqueHrdit oligognique Gntique populationGntique population
Phnotypage ciblPhnotypage cibl Slection globaleSlection globale
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
32/56
Nombres darticles publis/anNombres darticles publis/anfromfrom Google Scholar (4 Aug. 2007)Google Scholar (4 Aug. 2007)
Yunbi Xu and J. H. Crouch, 2008
R
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
33/56
Retrocroisement et linkage drag
- 2
Craigella-Tm22
Vendor-VFT
Vendor-Tm22
L. peruvianum
12
20
11
Gnrati
ons de
BCVarits
Young & Tanksley 1988
Chromosome 9 : transfert dun gne chez la Tomate
La distance gntique entre TG18/ TG8 =80 cM
Carte RFLP
La zone transfre peut parfois tre trs large malgr un grand nombre de gnrations de
rtrocroisement (voir aussi cours dEric Jenczewski dans les cas de croisements interspcifiques)
VFNT-Cherry
Ohio-MR13
MocimorNova-Tm22 lah -
21
-
-
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
34/56
Utilisation des marqueurs pour rduire la taille de lintrogression?
Sans marqueur
Rcurrent Donneur
F1
Avec marqueur
Rcurrent Donneur
Plus dinformations pour acclrer le retour vers le parent rcurrent
BC 1
Utili ti d b k
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
35/56
Recherche des zones favorablesimpliques dans la variation : QTLPeu de zones sont impliques, allles effet majeurs, la plupart portes par leparent P2
Utilisation du back cross
suppose que P2 porte les formesfavorables
Conception du gnotype idal :Transfert de la zone favorable de P1
dans P2
Retour au parent P2 par rtrocroisement
Moreau et Charcosset, Euphytica, 2002
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
36/56
largir la base gntique cultive et brassage : nouvelles
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
37/56
Fabrication et gestion des populations
- Fondation des populations : formes sauvages, croisementsmultiples
introduction dune large diversit- Introduction de systmes de contrle du rgime de reproduction :
strilit mle, cytoplasme mle strile
a g a base g t que cu t e et b assage ou e esapproches
favoriser le brassage et la recombinaison
AllofcondationCroisement AllofcondationAllofcondation,
recombinaison etslection
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
38/56
la gestion dynamique
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
39/56
Les populations ont-elles volu ?- en fonction de leur composition gntique (directionnelle)- en fonction des milieux et du climat (multidirectionnelles)- en rponse aux pressions des pathognes (multidirectionnelles)
Leons tires de 20 ans de gestion dynamique
du bl tendre en France
Comment fonctionnent les populations ?- Relation entre leffectif dmographique et leffectif de drive (Nefaible)- Dans les populations autogames, quel est limpact du taux
rsiduel dallofcondation (maintien recombinaison)- Variation de la recombinaison le long du chromosome (+/-)- Rle de la mutation (exprimentation bl dur)
largir la base gntique cultive et brassage : nouvelles
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
40/56
Deux types dapplication des populations base large :
g g q gapproches
1. ro u re es nouve es com na sons a ques n o- omest cat on, pre
breeding, slection rcurrente)
2. De nouvelles structures varitales : varits populations, varitscomposites, synthtiques
- Mlanges de gnotypes performants pour diffrents caractres(gnes de rsistance)
- Rusticit, stabilit des rendements dans diffrents
environnements
c Elargir la base gntique cultive : nouvelles approches
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
41/56
Mthode :
Slection multicritres, dterminismes gntiques complexes=> slection rcurrente de population
Exemple : Le programme LIRA Slection de cultivars de piment multirsistants
pour diffrentes rgions intertropicales
g g q pp
Slection multi-locale
Caractres cibles de dterminisme connu : tests contrls (inoc.artificielles, isolats viraux locaux)
Caractres complexes moins connus : slection massale in situ-sur contraintes naturelles gnriques (climat/croissance)-sur contraintes spcifiques : Cuba = Xanthomonas
Guadeloupe = Ralstonia
c Elargir la base gntique cultive : nouvelles approches
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
42/56
pop1TMV & CMV
pop2PVY(1,2)
pop3TEV
pop4PVMV
PVY(1,2)test TEVtest PVMVtestCMVtestartificialinoculationintercrossing
resistant plants
Le programme LIRA : choix des gnotypes et dispositif de slection
14 gnotypes contrasts
lection Gnotypes
slectionns,pour tests
pp
Afrique
AsieAsie
Evaluation au champs(agronomie + virus)
Autofcondationdes meilleurs
individusCycled
e
c Elargir la base gntique cultive : nouvelles approches
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
43/56
Rsistance au CMV:
20
406080
100
sistantpla
nts
(%c
ontrol)
Rsultats : aprs 11 cycles de slection
control(YW,CW)
100
150
200
250Cycle 4Cycle 5Cycle 10
Taille du fruit:
0
Selection cycles
%
r
pop1 pop2 pop3 pop40
Populations cumulant des caractres dadaptation aux contraintes locales
(maladies, caractres agronomiques, ) Cumul : Fond gntique commun + critres locaux spcifiques
Slection en rseau multi-partenaires : Slection participative
Construction de gnotypes combinant diffrents caractres
Nouvelles varits
Intrt
S t d d ti i t
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
44/56
ECOLOGIQUEALIMENTAIRE
Augmenter laproduction
Maintenir laqualit et lascurit
Prendre en compte ladiversit et lexploiter
Systmes de productions innovants
ENVIRONNEMENTAL AUTRES USAGES
Prserver lescosystmes etles ressourcesnaturelles
Rduire les intrantset les cotsnergtiques
Revoir la hirarchie des critres de slection actuels
Eviter la comptitionalimentaire/nonalimentaire
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
45/56
Grenelle de lenvironnementGrenelle de lenvironnement
(G2) Prserver la biodiversit et les ressources naturelles(G2) Prserver la biodiversit et les ressources naturelles OGMOGM connaissances partagesconnaissances partages
(G3) Instaurer un environnement respectueux de la sant(G3) Instaurer un environnement respectueux de la sant
(G4) Adopter des modes de production et de consommation(G4) Adopter des modes de production et de consommationura es:ura es:
-- Aller vers 100% dagriculture durable (certification),Aller vers 100% dagriculture durable (certification),-- 6% de la SAU en Bio en 2010 (20% dans la restauration6% de la SAU en Bio en 2010 (20% dans la restauration
collective en 2012), interdiction de substance de traitementcollective en 2012), interdiction de substance de traitement+ rduction des intrants (50% en 10 ans?),+ rduction des intrants (50% en 10 ans?),
-- promotion des varits ayant une faible dpendance vis vispromotion des varits ayant une faible dpendance vis vis
des intrants (eau, pesticides, azote),des intrants (eau, pesticides, azote),-- restaurer la biodiversit et avoir des actions territorialesrestaurer la biodiversit et avoir des actions territoriales
cohrentes, formation des agriculteurs vers des modescohrentes, formation des agriculteurs vers des modesdagriculture durabledagriculture durable
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
46/56
Le progrs gntique en questionLe progrs gntique en question Durabilit en agriculture:Durabilit en agriculture: Nouvelle cohrence avec les impratifs socioNouvelle cohrence avec les impratifs socio--conomiques,conomiques,
environnementaux et agronomiquesenvironnementaux et agronomiques
Adaptation du processus de slection au nouveau paradigmeAdaptation du processus de slection au nouveau paradigme(rupture)(rupture)
Rvision des objectifs de slection: varits adaptes desRvision des objectifs de slection: varits adaptes dessystmes de culture conomes en intrants et une agriculturesystmes de culture conomes en intrants et une agriculturemultifonctionnellemultifonctionnelle
Rvision (hirarchie) des critres deRvision (hirarchie) des critres de
slection:slection:-- rsistances durables aux pathognes et ravageursrsistances durables aux pathognes et ravageurs-- comptitioncomptition-- fumure azote rduitefumure azote rduite
-- tolrance aux stress environnementaux (adaptabilit)tolrance aux stress environnementaux (adaptabilit)-- valeur pour des usages non alimentairesvaleur pour des usages non alimentaires
De nouvelles faons daborder la conception des idotypes
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
47/56
Adapter le milieu la plante
- Milieux standardiss (apports en intrants)- Slection pour le rendement et intensification
Environnements changeantsUn renouvellement dess stmes de roduction
- r u re e n ran
- milieux diversifis/marginaux
Adapter la plante au milieu
1. Prise en compte des variations environnementales Se placer linterface cophysiologie - gntique
2. Prise en compte des nouveaux systmes de production Approche pluridisciplinaire
Un modle de fonctionnement de la feuille pour MAP
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
48/56
A. Un modle Tx expansion foliaire :LER = ( T - T 0) (a + bVPD cY)
Ecophysiologie permet de dfinir: une variable cible : lexpansion foliaire (LER) de lexprimer en fonction de diffrents paramtres et variables
Tardieu, 2003, Reymond et al., 2003
Des variables du milieu contrlent le LERT : temprature du mristmeVDP : deficit de pression de vapeur (statut hydrique de lair) :potentiel hydrique du sol
Existe-t-il un contrle gntique de larponse ces facteurs du milieu ?
Variabilit de la rponse aux variables du milieu
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
49/56
B. Une variationentre les gnotypes
Rsultats pour 2lignes contrastes
10 20 30
C. Des QTL pour les variables-paramtres
Tardieu, 2003, Reymond et al., 2003
Tmprature du mristme (C)
VPD (kPa)
Prdire la valeur des gnotypescomme une somme deseffets chacun des QTL
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
50/56
TCdumristme
TCdum
ristme
Variations du milieu Variations du milieu
des
Proposition didotypes
Prdire le comportement de gnotypes dans diffrents milieuxChoisir la meilleure combinaison deffets aux QTL
LE
R
LER
Reymond et al., 2003
Rponse
gnotype
Observ Prdit
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
51/56
- Varits multirsistantes plusieurs races
- Mosaque de parcelles de plusieurs varits ayant desrsistances diffrentes
R1R2
R1 R3R2
Contournement rapide Pb: Gnes de rsistances = ressources rares
-Associations de varits ayant des rsistances diffrentes
R1 + R2 + R3
Ralentit la progression spatio-temporelle des maladiesAugmente la dure defficacit des gnes de rsistancesPb: critre de compatibilit sur le plan agronomiquePb: Inscription catalogue
Claude Pope
Cultures monovaritales et association de 4 varits
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
52/56
Effet association
Svrit dela septoriose
(%)
Rendement-1
30
20
10
0
a a
b
a a
bc
d
a
cd
ab
8,6
9,2
+ 0,32 t ha-1
- 6 %
(2 annes, 19 parcelles, 190 ha, 1 traitement fongicide)
MalaccaSomme Apache Virtuose Association varitale
Note depanification
(0- 300)
Teneuren protines
(%)
bc
ab ab
c
a
12,6
11,4
13,2
12,0
aa
a
b
a230
220
210
7,4
,
+ 0,54 %
NS
Belhaj Fraj et coll.,
Les associations varitales
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
53/56
Slejpner (S pure)
Slejpner + Arcane (1S : 2R)effets densit +prmunition
Slejpner + Estica (1S : 2R)effet densit
0
20
40
60
80
100
Svritsur
Slejpner
(S)
%
la rouille jaune du bl
semaines aprs l'inoculation
Vallavieille-Pope et Goyeau, 1995
Varit sensible Association varitale
En conclusion:En conclusion:
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
54/56
En conclusion:En conclusion:
Gestion des Ressources gntiquesGestion des Ressources gntiques
Interactions agrobiodiversitInteractions agrobiodiversit in situ etin situ etdynamiques agrodynamiques agro--environnementales;environnementales;
Evaluation des RG et dveloppement des bases de donnesEvaluation des RG et dveloppement des bases de donnesassocies;associes;
Intgration des approches de conservation et de slection varitaleIntgration des approches de conservation et de slection varitale
Bases gntiques de ladaptation des environnements contraintsBases gntiques de ladaptation des environnements contraints
Bases gntiques des interactions planteBases gntiques des interactions plante--pathognes et plantepathognes et plante--symbiontessymbiontes
Bases gntiques de la qualit des produitsBases gntiques de la qualit des produits
En conclusion: Stratgies innovantes en AP etEn conclusion: Stratgies innovantes en AP et
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
55/56
En conclusion: Stratgies innovantes en AP etEn conclusion: Stratgies innovantes en AP et
diffusion de linnovationdiffusion de linnovation
Dfinition didotypes et construction de gnotypes pour desDfinition didotypes et construction de gnotypes pour descaractres complexes et pour une amlioration multicaractres complexes et pour une amlioration multi--caractres assiste par marqueurs molculaires (SAM)caractres assiste par marqueurs molculaires (SAM)
Intgration des outils molculaires dans la cration et laIntgration des outils molculaires dans la cration et ladiffusion de varits dotes dune diversit fonctionnellediffusion de varits dotes dune diversit fonctionnelle
Dveloppement des biotechnologies drives de la biologieDveloppement des biotechnologies drives de la biologiecellulaire et de la gnomique pour lamlioration et lacellulaire et de la gnomique pour lamlioration et ladiffusion des varitsdiffusion des varits
Durabilit du dploiement de rsistances aux maladies etDurabilit du dploiement de rsistances aux maladies et
ravageursravageurs
Bioscurit, traabilit, flux de gnesBioscurit, traabilit, flux de gnes
7/31/2019 Charrie Amelioration Plantes
56/56
MERCIMERCI