-SBF: Suero …………………………. Fetal.

Cámara de flujo: Tiene una cortina de aire el cual va a impedir el paso de partículas hacia la muestra que se está procesando.

-Las células que se ven en el cariotipo son los Linfocitos.

* Luego que ya sembramos la muestra y la tuvimos por 72 horas donde se alimentaron, crecieron y se dividieron se sigue con el otro paso que es la COSECHA, acá sacamos la muestra del incubador y le vamos a agregar un medio hipotónico. Al colocar a la célula en un medio hipotónico le entra agua a la célula, se hincha, se rompe y quedan los núcleos solos que es lo que nos interesa, todo lo demás se elimina.

Luego que agregamos la solución hipotónica se hacen unos centrifugados para eliminar los eritrocitos y se aplica Fijador (metanol, ac acético)

Cuando obtenemos el pelet de la muestra que esta fijado se hace el goteo, el pelet tiene que quedar en el portaobjeto, por lo tanto, ese pelet se diluye en el mismo fijador. Tomamos un portaobjeto y a la distancia se gotea, porque queremos que el núcleo se reviente entonces con la distancia se va a impactar. Se gotea de 3 a 5 gotas por paciente.

Se hace una Tripsina al 0,04%, se pasa el portaobjeto 1 minuto por los buffers, se deja 10 minutos en Giemsa y luego se lava de nuevo.

Diapo 2 :ESTRUCTURA DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS, ESTRUCTURA DE LA CROMATINA INTERFÁSICA Y METAFÁSICA

Tijio y Levan son como los padres de la citogenética, ya que ellos establecen y estandarizan el bandeo G.

La A-T tiene dos puentes de Hidrógeno y los enlaces de G-C tiene tres, por eso es más fuerte.

Esto afecta en la citogenética en el bandeo porque utilizamos la Tripsina (enzima que degrada) y lo que hace es romper los enlaces y los que rompe primero son los de A-T.

La Z es la más estable porque el alfa gira hacia la derecha y los giros que da son un poco más grandes, en cambio la Z gira hacia la izquierda y los espacios en cada giro son menores. La configuración Z la presentan algunas bacterias.

El ADN se replica y se transcribe, cuando se transcribe lo que queremos generar ARN para que codifique una proteína.

Se hace la replicación para duplicar la cantidad de ADN PERO NO EL NÚMERO CROMOSÓMICO, siempre tendremos un 2n y la cantidad es la que aumenta.

n= cantidad de cromosomas

Tenemos la doble hélice de ADN la cual se dividió en un origen de replicación para

generar la orquilla. Tenemos la hebra que se va transcribiendo (5’, 3’), esta va en buen sentido y se va generando en forma continua. Esta hebra en cambio no se va generando en forma continua porque va de 3’ a 5’, entonces lo que pasa es que se van generando pedacitos de ADN en forma paralela y esos pedacitos después se unen con una enzima LIGASA.

Por lo tanto, cuando empezamos a replicar la hebra desde 3’ a 5’ se generan los fragmentos de OKAZAKI. Cuando se empieza a formar el ADN de 5’ a 3’ es la forma correcta.

DNA polimerasa: Enzima que agarra a los nucleótidos y va generando la hebra complementaria, une las bases nitrogenadas.

Va generando los fragmentos de OKAZAKI.

DNA ligasa: Va uniendo los fragmentos para generar la hebra complementaria continua.

La hebra de DNA debemos empaquetarla, no la podemos tener libre. Para poder empaquetarlo debemos usar un conjunto de proteínas que son las Histonas, 8 Histonas las cuales actúan como soporte para que el ADN se envuelva en ellas, entonces el dna se va a ir superenrrollando. Esas histonas están unidas entre sí por otras histonas (histona 3 creo) y van generando como ese collar de perlas. Todo esto es por cargas, el ADN tiene carga (-), por lo tanto, las histonas son (+) para que se puedan unir.

Anteriormente, vimos que en la replicación solo se replicaba la hebra de adn, pero acá es lo funcional del adn (sintetizar proteínas). Las proteínas se sintetizan en el ribosoma, por lo tanto hay distintos tipos de ARN (ARNm, ARNr Y ARNt).

El ARNt es una molécula sencilla de nucleótidos A, G, C y U y el grupo fosfato.

El ¿ARNr?es una molécula de bastantes nucleótidos con forma de trébol, 3’ sitio de unión del aminoácido específico que se une al ARNm y lo lleva al ribosoma para que sintetice la proteína.

El ARNm sale del núcleo y se acopla al ARNr, y este tiene un sitio que es 3’ que actúa de unión específica para ese ARNm y lo lleva al ribosoma para que empiece a sintetizar la proteína.

Teníamos el ADN enrollado en las Histonas, lo primero que hacemos es desenrollar para poder elongar el ADN, luego se reconoce el sitio de inicio para la transcripción, luego se produce la elongación en dirección 3’-5’, se abre el adn, se empieza a generar la hebra y luego se produce el término, la ARN polimerasa reconoce los sitios de término

- Luego se produce un Splicing de ese RNAm y consiste en la elongación de los intrones dejando solamente los exones.

¿Cuál es la diferencia entre un Intrón y un Exón? : Los intrones no codifican nada, por lo tanto, los cortamos y los sacamos, Lo único que va a pasar al ribosoma para ser traducido y convertido en proteína es el Axón, porque el exón va a llevar lo que nosotros queremos de información para sintetizar nuestros aminoácidos.

Luego se genera el RNA maduro que va al citoplasma y ese RNA es sintetizado por los ribosomas para sintetizar las proteínas. Entonces este arn pasa por el citoplasma y se genera la proteína y cuando sale del núcleo ese ARNm y va hacia el ribosoma pasa a llamarse ARNt.

Pueden haber mutaciones en la transducción del adn, en la replicación y en la traducción y eso es lo que producen las enfermedades genéticas.