UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLESERVICIOS DE LABORATORIO: ANALISIS CLINICO IIELABOPRADO POR: BIOQUIMICA MARLENE MEDRANO GUZMANGUIA PRÁCTICA – ABRIL de 2016

CREATININCINASA MB CK-MB

1. OBJETIVOS Determinar cuantitativamente la actividad de la isoenzima MB de la Creatina quinasa (CK-MB) por el método cinético en suero.

2. DEFINICIONES: CPK-MB: Isoenzima que predomina en el miocardio y sus niveles se elevan

cuando existe proceso necrótico del músculo cardiaco aumentando progresivamente según su extensión y evolución clínica, aparece a las 3-6 hrs., máxima intensidad 12-24 hrs. Declinando 24-72 hrs.

3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO: 3.1. Fundamento: : La CK-MB cataliza la desfosforilación de la creatina fosfato para

producir adenosina trifosfato (ATP), que reacciona con la glucosa en presencia de la hexoquinasa (HK) formando glucosa-6-fosfato esta en presencia de la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G-6-PDH), es oxidada a 6-fosfogluconato (6-PG) y reduce el NAD a NADPH. La velocidad de incremento en la absorbancia en 340 nm es proporcional a la actividad del CK-MB en la muestra.

Creatina Fosfato + ADP CK-B Creatina + ATP

ATP + Glucosa HK ADP + Glucosa-6-fosfato

Glucosa-6-fosfato + NADP G-6-PDH 6-PG + NADPH

3.2. Muestra: Suero 3.2.1. Cantidad: 50 ul.3.2.2. Requisitos: No hemolizado, limpio y fresco.

3.3. Equipos, materiales y reactivos: 3.3.1. Equipos:

Centrifuga Espectrofotómetro (Stat Fax) Baño maría a 37ºC Vortex

3.3.2. Materiales: Micropipetas :10 a 100;100 a 1000 ul Tubos de hemolisis (tubos de Stat fax)

Reloj marcador 3.3.3. Reactivos:

Reactivos 1 Reactivo 2

3.4. Procedimiento: Enumerar los tubos de la siguiente forma: REACTIVOS BLANCO STANDAR

DESCONOCIDO

Reactivo de trabajo

1 ml 1 ml

Muestra - 50 ul

Preincubar 2 min a 37ºC. Leer en el STAT FAX: Nº de prueba …………. Mezclar inmediatamente en el vortex y disparar el cronometro. Tiempo de reacción 5 min (Leer absorbancias a 340 nm cada 60 seg (4 intervalos). Registrar los resultados e informar.

3.5. Valores de referencia:

Hombres y mujeres : 0 - 24 U/L

4. ANEXOS: Anexo 1: Sustancias interferentes conocidas:

Valores de bilirrubina 25 mg/dl, triglicéridos hasta 600 mg/dl y hemoglobina hasta 120 mg/dl no producen interferencias significativas.

Valores de triglicéridos mayores a 600 mg/dl producen resultados falsamente disminuidos.

Valores de hemoglobina hasta 22.5 mg/dl no producen interferencias significativas, muestras con valores superiores pueden dar resultados falsamente elevados.Suero o plasma con hemólisis visible o intensa.

Anexo 2:Linealidad: La reacción es lineal hasta 600 U/L Para valores superiores, diluir con Sol. Fisiológica y repetir la determinación.

Multiplicar el resultado por el factor de dilución empleado.

Anexo 3:Preparación de reactivos de trabajo: Usar Reactivo de trabajo: Para cada determinación disolver: mezclando 4

partes Rvo. 1 (800 ul) + 1 parte del Rvo. 2 (200 ul). Estabilidad y condiciones de almacenamiento:

El reactivo de trabajo es estable por 1 día entre 15- 25 °C y 14 días entre 2-8 °C, manteniendo el recipiente cerrado, mientras no suceda contaminación química o microbiana.

Para preservar su desempeño el reactivo debe permanecer fuera del frigorífico únicamente el tiempo necesario para obtenerse el volumen a ser utilizado. Evitar exposición a la luz solar directa.

Una vez abiertos no deben permanecer destapados y fuera del refrigerador durante lapsos prolongados.

Evitar exposición a la luz solar directa, durante el manipuleo los reactivos están sujetos a contaminaciones de naturaleza química y microbiana que puedan provocar disminución de la estabilidad.

Anexo 4: Almacenamiento y estabilidad del suero: La actividad enzimática del CPK-MB es estable 8 hrs. Entre 15 – 25

°C, 5 días entre 2-8°C y 4 semanas entre 15-25°C. La muestra debe ser protegida de la acción de la luz

5. Cálculos de los resultados:

CPK-MB U/L = diferencia de Abs / min x factor

Factor a 37 ºC = 1340

6. CONCLUCIONES E INTERPRETACION

7. CUESTIONARIO:1. CUAL ES LA ISOENZIMA CK EN EL SUERO MAS ABUNDANTE EN

UN INFARTO DE MIOCARDIO?2. CUAL ES LA SECUENCIA HABITUAL DE APARICION DE

ENZIMAS SERICAS DESPUES DE UN INFARTO DE MIOCARDIO?

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GUIA PRÁCTICA – ABRIL de 2016

TROPONINA

1. OBJETIVO: Determinar cualitativamente la Troponina cTnI cardiaca en sangre por inmunocromatografía prueba rápida un solo paso en cassette.

2. DEFINICIONES: Troponina: Es una proteína que se encuentra en el músculo cardiaco,

después que ocurre la lesión cardiaca la troponina I es liberada en la sangre entre 4 a 6Hrs. después del cuadro de dolor, permanece elevada de 6-10 días. Marcador para el infarto del miocardio.

3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO: Fundamento: Inmunoensayo cualitativo de membrana esta pre cubierta de anticuerpos anti-c-tnI, la mezcla migra hacia arriba de la membrana cromatográfica por acción capilar para reaccionar con el reactivo de captura en la membrana y generar una línea coloreada. La presencia de esta línea de color en la región de la banda del examen indica un resultado positivo, mientras que su ausencia indica negativo. Como control una línea de color siempre aparecerá en la región de la banda de control indicando que el volumen es el adecuado y que la reacción de la membrana ha ocurrido.

3.1.Muestra: Sangre total, suero o plasma. 3.2.Cantidad: 100 ul.3.3.Requisitos: No hemolizado, limpio y fresco.

4. Equipos, materiales y reactivos: 4.1.1. Equipos:

Centrifuga Lancetas

4.1.2. Materiales: Micropipetas :10 a 100ul Tubos de hemolisis (tubos de Stat fax) Placas Cuentagotas Reloj marcador

4.1.3. Reactivos: Buffer Reactivo de captura cubierto en la membrana (cassette)

4.2. Procedimiento: Abrir el sobre que contiene el dispositivo, retire el dispositivo el examen del sobre

Sellado y utilizarlo inmediatamente.

Coloque el dispositivo en una superficie limpia y nivelada Para suero o plasma :Sostenga el gotero verticalmente y transferir 2 gotas de suero

o plasma (50 ul )al pozo del espécimen S y empiece a tomar el tiempo.

Para sangre total venosa o punción dactilar: dejar caer 3 gotas colgantes (75 ul) al pozo del espécimen S , luego añadir 1 gota (40 ul) de buffer.

Controlar el tiempo y espere por la aparición de línea roja C (control). Los resultados deben ser leídos en 10 mim. .No leer el resultado después de 20 min.

4.3. Interpretación de los resultados:

Positivo: Aparición de 2 líneas rojas distintas, una línea debe estar en la región de la línea de control (C) y la otra línea roja debe estar en la región de la línea de prueba (T).

Negativo: Una línea roja aparece en la región de la línea de control (C). No aparece ninguna línea aparentemente ni roja ni rosada en la región de la línea de prueba (T).

NO valido: La línea de control (T) no aparece. Las razones mas probables para que falle la línea de control de control es que el volumen de la muestra sea insuficiente, uso de mala técnica y repita con un nuevo cassette.

Nota: la intensidad de color rojo en la región de prueba (T) variara dependiendo de

la concentración de troponina presente.

cTn1(+) cTn1(-)

5. ANEXOS:

Sustancias interferentes conocidas:

Suero o plasma con hemólisis visible o intensa.Valores de bilirrubina 6 mg/ml, triglicéridos 15 mg/ml y hemoglobina hasta 10 mg/ml y albumina 110 mg/ml no producen interferencias.

Limitaciones de la prueba:

Esta prueba rápida solo indica el nivel cualitativo de cTnI no debe ser usado como único criterio para el diagnostico de miocardio.No puede detectar valores menores de 0.5 ng/ml, resultado negativo no excluye la posibilidad de infarto de miocardio.

Preparación de reactivos de trabajo:

Permita que el dispositivo del examen, espécimen, buffer y/o controles adquieran temperatura ambiente (15-30°C) antes del examen.

Estabilidad y condiciones de almacenamiento:

Almacene de la forma que viene empacado a temperatura ambiente o refrigerada a (2-30 ° C).La prueba se puede realizar siempre y cuando se cumpla con la fecha indicada en el empaque, la prueba debe permanecer sellada hasta su uso.No congelar, no se debe utilizar después de la fecha de vencimiento.Una vez abiertos no deben permanecer destapados y fuera del refrigerador usar inmediatamente.Evitar exposición a la luz solar directa, durante el manipuleo los reactivos están sujetos a contaminaciones de naturaleza química y microbiana que puedan provocar disminución de la estabilidad

Almacenamiento y estabilidad del suero:

Suero o plasma puede ser almacenado entre 2 a 8°C hasta por 3 días, para tiempos prolongados deben ser mantenidos a-20°C.La sangre total obtenida por punción venosa debe ser almacenada entre 2-8°C por 2 días de la colección.

La sangre total obtenida del dedo debe ser procesada inmediatamente