Clase 2 Métodos Fisicoquímicos y Microbiológicos Para Garantizar La Calidad Del Agua

7/25/2019 Clase 2 Mtodos Fisicoqumicos y Microbiolgicos Para Garantizar La Calidad Del Agua

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Microbiologa del aguaDr. Flix Daniel AnduezaFacultad de Farmacia y Bioanlisis

Universidad de los AndesMrida. Venezuela

Prometeo SENESCYTEscuela de Bioqumica y Farmacia

ESPOCH. Riobamba. Ecuador

San Jos de Costa Rica, Octubre 2014


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Anlisis Microbiolgico


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Mtodos de determinacin demicroorganismos

Siembra en profundidad.Siembra por extensin.

Mtodos del nmero ms probable(NMP).Mtodo por filtracin.Impedancia

Biologa molecular


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RECUENTO DE MICROORGANISMOSTOTALES Y VIVOS

10 ml 1 ml de naranja de acridina o0,2 ml del kit Baclight live/dead

5 min en la oscuridadfiltrar

Microscopio deepifluorescencia

Bacterias vivas:

Bacterias muertas:


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MICROORGANISMOSTOTALES Y VIVOS


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Bacterias aerobias mesfilas


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INCUBAR A 22 C POR 5 DAS INCUBAR A 37 C POR 2 DAS

AGAR R2A AGAR PCA

1 mL

RECUENTO DE BACTERIASAEROBIAS MESOFILAS


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1 ml c/u 1 ml c/u

RECUENTO DE BACTERIAS AEROBIASMESFILAS

PETRIFILM PETRIFILM



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AGAR R2A AGAR PCA

50 mL

RECUENTO DE BACTERIASHETERTROFAS


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250 mL

RECUENTO DE COLIFORMESTOTALES Y FECALES

AGAR CHAPMAN-LACTOSA-TRIFENIL-TETRAZOLIO

AGAR CHAPMAN-LACTOSA-TRIFENIL-TETRAZOLIO

INCUBAR A 30 C POR 24 - 48 h INCUBAR A 44,5 C POR 24 - 48 h


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1 ml c/u 1 ml c/u

RECUENTO DE COLIFORMESTOTALES Y FECALES

PETRIFILM PETRIFILM



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RECUENTO DE COLIFORMES TOTALESPOR EL METODO DEL NUMERO MAS PROBABLE

(NMP)

1 ml 1 ml

Caldo Lactosa Lauril sulfato

INCUBAR A 37 C POR 24-48 horas

SE REALIZA EL RECUENTODE TUBOS CON PRESENCIA

DE GAS


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RECUENTO DE COLIFORMES TOTALESPRUEBA CONFIRMATORIA

0,1 ml

Caldo Bilis Verde Brillante



DE GAS y SE BUSCA EL

NMP EN LA TABLA


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RECUENTO DE COLIFORMES FECALESPOR EL METODO DEL NUMERO MAS PROBABLE

(NMP)

1 ml 1 ml

Caldo Lactosa Lauril sulfato



DE GAS


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RECUENTO DE COLIFORMES FECALESPRUEBA CONFIRMATORIA

0,1 ml

Caldo E.C

INCUBAR A 44,5 C POR 24-48 horas


DE GAS y SE BUSCA EL

NMP EN LA TABLA


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RECUENTO DE ENTEROCOCOS

250 ML

AGAR GLUCOSA-FOSFATO-AZIDA-TRIFENIL TRIAZOLIO

INCUBAR A 37 CPOR 48 HORAS

CONFIRMARCOLONIAS

AGAR BILIS ESCULINAPRECALENTADO A 44 C

COLONIAS MARRONESO NEGRAS (+)



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RECUENTO DE ENTEROCOCOSPOR EL METODO DEL NUMERO MAS PROBABLE

(NMP)

1 ml 1 ml

CALDO AZIDA DEXTROSA



DE TURBIDEZ OPRECIPITADO


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RECUENTO DE ENTEROCOCOSPRUEBA CONFIRMATORIA

0,1 ml

Caldo Azida violeta de etilo



DE PRECIPITADO AZUL


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RECUENTO DE ESPORAS DECLOSTRIDIUM SULFITO-REDUCTORES

CALENTARA 80 C

POR 10MINUTOS

AGAR SULFITO DE HIERROA DOBLE CONCENTRACIN

10 ml c/u



(+)


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250 mL

DETECCIN DE AEROMONAS

AGAR ALMIDN-AMPICILINA AGAR ALMIDN-AMPICILINA

INCUBAR A 37 C POR 24 - 48 h INCUBAR A 37 C POR 24 - 48 h


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AGAR PRESTON

250 mL

INVESTIGACIN DE Campylobacter

Caldo Preston de enriquecimiento

INCUBAR A 42 CPOR 12 HORAS. MICROAEROFILIA

INCUBAR A 42 C POR 48 HORAS. MICROAEROFILIA

AISLAR E IDENTIFICAR
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100 mL

INVESTIGACIN DE Legionellapneumophila

AISLARE

IDENTIFICAR

(filtro)

Lavar con 2 ml

de agua estril

Tratamientocido

TratamientotrmicoAgar BCYE-

Incubar a 37 Cpor 15 das


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AGAR CETRIMIDA

250 mL

INVESTIGACIN DE Pseudomonasaeruginosa


AISLAREIDENTIFICAR


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AGAR BAIRD PARKER

INVESTIGACIN DE Staphylococcusaureus

INCUBAR A 37 C POR 48 HORAS

AISLAR E IDENTIFICAR1 ml de la muestra

muestra


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AGAR BAIRD PARKER

250 mL

INVESTIGACIN DE Staphylococcusaureus

CALDO CASEINA- SOJA





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250 mL

INVESTIGACIN DE Salmonella

CALDO CASEINA- SOJA

INCUBAR A 37CPOR 24 HORAS



tetrationato selenito

Agarbismutosulfito

AgarSS

Agar bilisverde brillante

Incubar a 37 C por 24 horas

Incubar a 37 Cpor 24 horas


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RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS

FILTRAR100 ml

FILTRAR10 ml

IDENTIFICACIN

AGAR SABOURAUD


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1 ml c/u 1 ml c/u

RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS

PETRIFILM MOHOS Y LEVADURAS PETRIFILM MOHOS Y LEVADURAS

INCUBAR A 25 C POR 7 DIAS INCUBAR A 25 C POR 7 DIAS


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ESPECIES DE MOHOS ENCONTRADASEN AGUAS

Penici l l ium sp p. Cladospor ium sp p. Curvular ia spp. Fusar ium spp .

Asperg i l lus s pp. Chrysospor ium spp. Cladospor ium sp p. Acremon ium s pp.

Microscopio de contraste

de fase. Objetivo 40 x

RECUENTO DE


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RECUENTO DEMICROORGANISMOS HALFILOS

MODERADOS

10 ml

100 ml

INCUBAR A 30 CPOR 10 DAS

AISLAR EIDENTIFICAR

AGAR HALFILO


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100 mL

INVESTIGACIN DE ALGAS YCIANOBACTERIAS

MEDIO PARA ALGASY CIANOBACTERIAS

INCUBAR A 24 CPOR 30 DAS CON

ILUMINACIN

OBSERVAR EIDENTIFICAR


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CIANOBACTERIAS Y ALGAS

Synechocyst is spp

Chlorococcum spp

Microscopio de contrastede fase y de fluorescencia.

Objetivo 40 x

TAPETES Y BIOFILMES


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Adaptacin fisiolgica inespecfica:

secreccin exopolmeros capacidad de dividirse

(SVNC)

patogenicidad

TAPETES Y BIOFILMES

Science 2000; 2905m

LTSEM-BSE, Microscopa Electronica de

Barrido a Bajas Temperaturas en lamodalidad de Electrones Retrodispersados

5m


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PCROf 16S

rDNA genes16S

rDNAamplicons

Ligation Transformation

InsertPCR

Analysis

Sequencing

Total DNA:

(Giuseppe dAuria)

Secuenciamiento genes ARN 16S


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E E E


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Ecosistemas de las aguas minerales muestran elevada diversidad microbianafenotpica y genotpica

DIVERSIDAD MICROBIANA Y ESPECIFICIDAD

16S rRNA

RFLPRestriction Fragment Length Polimorphism

Microbiota autctona deaguas minerales

890 cepas: 378 ribotipos

no

de polimorfismos con inequvoca resolucin de bandas en todosgrupos, sp en cepas productoras pigmentos fluorescentes: 174 cepas: 72 rbt


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Cabina de flujo laminar


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Identificacin de cepas microbianas

Observaciones de cultivo Observaciones microscpicas Evaluacin bioqumica Evaluacin fisiolgica


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Aguas de uso farmacutico


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Agua para uso farmacutico

Se basan en las farmacopeas Buenas prcticas de manufactura (GMP) Aseguramiento de la calidad


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Tipos de agua de uso farmacutico

Agua purificada Agua altamente purificada Agua para inyectables


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Limites microbiolgicos

Agua purificada BH Menor de 100 UFC/ml (USP 30-FE-2007) Endotoxina menor 0,25 EU/ml (FE-2007)

Agua para inyectables Menor de 10 UFC/ml (USP 30-FE-2007) Endotoxinas menor 0,25 EU/ml (USP 30-FE-2007)

Agua altamente purificada

Menor 10 UFC/ml (FE-2007) Endotoxina menor 0,25 EU/ml (FE-2007)


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Pirogenos

Prueba del LAL Test de coagulacin

a 37 C por 1 hora

Serie de dilucionesreactivo LAL(Lymulus amebocitelysate)

Test Pyrosate,Combrex y Pirgeno


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Limites microbiolgicos del agua en laindustria farmacutica

Ufc ml


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Tratamiento del agua

Aguacruda

Cribado Sedimentacin

Cmara demezcla del

floculante

Cmara defloculacin

Canales desedimentacin

Clarificador

Cloracin Almacenamiento Distribucin


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Desinfeccin de los sistemas de agua enla industria farmacutica


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Bibliografa

OMS (2004). Guapara la calidad delagua potable. OMS

WHO (2005). Good

manufacturingpractices. Serie(Report 39)

USP (2007).

Pharmacopeia.

EuropeanPharmacopeia. 6thedition, 2007

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