Coloração CelularNeurofisiologia

2010/2011

Ciências Biomédicas Universidade da Beira Interior

UBI

Grupo 5:Alexandra Soares 24016Elisabete Costa 23460Paulo Machado 21598Raquel Fernandes 22771

• As estruturas celulares apresentam um fraco contraste óptico.

Observação muito difícil

• Alguns componentes celulares têm a capacidade de absorver certos corantes, enquanto que outros não.

• Destacar algumas estruturas celulares por contraste com as restantes.

SOLUÇÃO: Coloração Celular.

Corantes Orgânicos

( mais usados)

Corantes Naturais

• Carmim;• hematoxilina;• Orceína;

Ácidos

•Extraídos de animais ou plantas.Básicos

Neutros

Corantes Artificiais

• Eosina;• azul de metileno;

• Fucsina;• vermelho neutro;• verde iodo.

Ácidos•Sintetizados em laboratório a partir de derivados da anilina;

• Específicos para a coloração

de determinadas estruturas celulares.

Básicos

Neutros

Quaisquer dos componentes dos tecidos ou órgãos que reajam com um corante básico são chamados basófilos, que significa ter afinidade por bases. As estruturas que reagem

com um corante ácido são chamadas acidófilas, que significa ter afinidade por ácidos.

Os corantes ligam-se aos tecidos devido à presença de radicais aniónicos ou catiónicos nas moléculas do corante, que reagem com os radicais de carga oposta

presentes nos componentes celulares, através de interacções electrostáticas.

Corantes básicos interagem com os

componentes celulares ácidos(carga eléctrica

negativa)

Corantes básicos interagem com os

componentes celulares básicos(carga eléctrica

positiva)

•radicais fosfato dos ácidos nucléicos ( DNA e RNA ); •radicais fosfato e carboxila dos

proteoglicanos;•carboxilas presentes nos polissacarídeos

ácidos (ácido hialurônico);•proteínas ácidas.

•proteínas ricas em aminoácidos básicos.

COLORAÇÃO DE HEMATOXILINA E EOSINA• Coloração permanente;• Principal técnica de coloração de tecidos em histologia;

• Este tipo de coloração permite diferenciar: →partes basófilas (pela hematoxilina);→partes eosinófilas (pela eosina)

Hematoxilina tem atracção pelas substâncias ácidas dos tecidos, como as proteínas (ricas em radicais amina), como os núcleos e o retículo endoplasmático rugoso e

ácidos nucleicos.

Eosina, sendo acidófila, apresenta coloração predominante pelo citoplasma, fibras de colagénio e outras estruturas compostas de substâncias com carácter básico.

NOTA: Quando utilizado o corante ácido eosina nos cortes de tecidos, as substâncias coradas são muitas vezes referidas também como eosinófilas em alternância com o termo acidófilo.

• Coloração de cortes de tecidos por hematoxilina evidenciará com uma cor azul as estruturas celulares. (NÚCLEO)

• A coloração pela eosina evidenciará com uma cor rósea as estruturas celulares. (CITOPLASMA)

Cerebelo:1-camada granulosa;2-células de purkinje;3-camada molecular.

NÚCLEO

CITOPLASMA

COLORAÇÃO E MONTAGEM:

•Desparafinização•Re-hidratação•Coloração•Diferenciação•Desidratação•Clarificação•Montagem

Coloração CelularNeurofisiologia

2010/2011

Ciências Biomédicas Universidade da Beira Interior

UBI

Alexandra Soares 24016Elisabete Costa 23460Paulo Machado 21598Raquel Fernandes 22771

Antes do processo de coloração, na fase da impregnação ocorre a substituição do xilol pela parafina.

1.DESPARAFINAÇÃO:• Xilol

2.RE-HIDRATAÇÃO:• Etanol absoluto• Etanol 95%• Etanol 70%• Água

3.COLORAÇÃO e DIFERENCIAÇÃO:• Hematoxilina • Água• Diferenciador (etanol + HCl)• Água• Etanol 70%• Eosina

4.DESIDRATAÇÃO:• Etanol 70%• Etanol 95%• Etanol 100%

5.CLARIFICAÇÃO:• Xilol

6.MONTAGEM:• Colocar 1-2 gotas de meio de montagem sobre a fatia;• Colocar a lamela sobre o meio de montagem, exercendo uma ligeira pressão sobre ela;• Deixar secar.

CORPÚSCULOS DE NISSL:

• São acumulações basófilas, que se encontram no citoplasma de algumas células nervosas.

• Os corpúsculos de Nissl são constituídos por retículo endoplasmático rugoso e encontram-se no pericário e na primeira porção das dendrites, não é possível encontrá-los nos axónios .

Franz Nissl, neurólogo alemão (1860-1919)

• Têm uma grande afinidade com os corantes básicos, o que leva à obtenção de uma coloração intensa permitindo um bom estudo histológico.

COLORAÇÃO DE NISSL

Corpúsculos de NisslNúcleo

PericárioProlongamentos

Este tipo de coloraçãopermite visualizar:

Coloração selectiva desenvolvida por Nissl baseia-se na coloração por anilina usada para marcar grânulos extra nucleares de RNA.

Diferença entre coloração H&E e coloração de Nissl:

THE END