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CONTROL DE CALIDAD EN EL BTT
DIEGO ESPINOZA ORTIZ (Estudiante Biologia)Rotante Instituto Nacional de Enfermedades Neoplasicas
iquestQueacute es control de calidad El control de calidad es el sistema de
actividades teacutecnicas de medicioacuten de los atributos y el rendimiento de un proceso o tema en contra de determinadas normas para verificar si los requisitos establecidos se cumplen (ISBER 2005)
Gestioacuten de calidad en BT Cada BT debe tener un sistema de
gestioacuten de calidad que debe considerar procedimientos de
Mantenimiento y reparacioacuten de los equipos Registro de entrenamiento del personal Gestioacuten de datos El mantenimiento de registros Protocolos La calidad de material bioloacutegico
Control de calidad del material bioloacutegico
1 Calidad del material tisular
Diagnoacutestico histopatoloacutegico Representatividad del material Proceso de congelacioacuten y
sistemas de seguridad Mantenimiento de la
antigenicidad tisular Preservacioacuten de la integridad de
los aacutecidos nucleicos Enviacuteo de muestras en
condiciones que aseguren el estado de congelacioacuten
Roa I amp C Artigas 2008
Control de calidad del material bioloacutegico
Roa I amp C Artigas 2008
2 Calidad de la informacioacuten asociada a las muestras
ndash Adecuada identificacioacuten de eacutestas (coacutedigos de barras o numeacutericos indelebles)
ndash Introduccioacuten correcta de datos en la base informaacutetica
ndash Mantenimiento de anonimato ndash Acceso restringido a los datos
Calidad del material tisular en BTs
Proceso de congelacioacuten y seguridad Rapidez en la obtencioacuten de
la muestra
Periacuteodo de prefijacioacuten
Periacuteodo de isquemia desde
la oclusioacuten de los vasos
sanguiacuteneos hasta la
extraccioacuten del oacutergano
Factores ambientales (Tdeg
pH faacutermacos etc)
Calidad del material tisular en BTs
Mantenimiento de la antigenicidad tisular
TECNICAS DEINMUNOHISTOQUIMICA (IHQ)
Pasos de una Preparacioacuten HistoloacutegicaObtencioacuten
Fijacioacuten Inclusioacuten (OCT)
Corte Coloracioacuten
(IHQ)
Montaje
Preparacioacuten IHQ para tejidos en BT
Secciones en OCT de 3-4 micras Fijadas en acetona (refrigerada 5 ndash 10
minutos) Hidratacioacuten por bateria de alcohol No requiere recuperacioacuten antigenica
ACETONA ALCOHOL 100deg (X2) ALCOHOL 95deg (X2) ALCOHOL 90deg
BLOQUEO PEROXIDASA 1ER ANTICUERPO POLIMERO (ENVISION) (2DO ANTICUERPO +
ENZIMA) CROMOGENO (DAB) CONTRASTE CON HEMATOXILINA DESHIDRATACION MONTAJE ldquoLas especificaciones se indican en el Productordquo
Sistema de Streptoavidina - Biotina
Sistema Flex-EnVision
No olvidar quehellip Anticuerpos primarios
Los marcadores sugeridos
Vimentina proteiacutena citoplasmaacutetica de 57 kDa que se expresa en todas las ceacutelulas mesenquimales Forma parte de los filamentos intermedios
Ki-67 proteiacutena nuclear(345 395 kDa) activa en el ciclo celular(G1 S G2 y M)sirve para monitoreo de fracciones de ceacutelulas neoplaacutesicas en tejido normal
p53 regulador de expresioacuten geacutenica en el ciclo celular en el paso de G1 a S
HiacutegadoAmiacutegdala
Vimentina
Ki - 67
p53
Calidad del material tisular en BTs
INTEGRIDAD DE LOS ACIDOS NUCLEICOS
PROCEDIMIENTOS PARA CONTROL DE CALIDAD EN TEJIDO SOLIDO
bull RNA and DNA integrity mechanisms should be implemented to monitor RNA and DNA integrity and correlate with other features including time to freezing of original specimen storage conditions length of storage etc
bull DNA fingerprinting Random samples should be DNA fingerprinted and compared with matched blood samples to verify tissue identity
INTEGRIDAD DE DNA Y RNA
La reaccioacuten de PCR requiere 1048698 Agua libre de nucleasas 1048698 Catioacuten divalente (MgCl2) 1048698 Desoxinucleoacutetidos (dNTPacutes) 1048698 Sol amortiguadora y sales (Buffer
10X) 1048698 Oligonucleoacutetidos (Primers) 1048698 Enzima (Taq Polimerasa)
Fuente Morente et al (2006)
iquestQueacute es control de calidad El control de calidad es el sistema de
actividades teacutecnicas de medicioacuten de los atributos y el rendimiento de un proceso o tema en contra de determinadas normas para verificar si los requisitos establecidos se cumplen (ISBER 2005)
Gestioacuten de calidad en BT Cada BT debe tener un sistema de
gestioacuten de calidad que debe considerar procedimientos de
Mantenimiento y reparacioacuten de los equipos Registro de entrenamiento del personal Gestioacuten de datos El mantenimiento de registros Protocolos La calidad de material bioloacutegico
Control de calidad del material bioloacutegico
1 Calidad del material tisular
Diagnoacutestico histopatoloacutegico Representatividad del material Proceso de congelacioacuten y
sistemas de seguridad Mantenimiento de la
antigenicidad tisular Preservacioacuten de la integridad de
los aacutecidos nucleicos Enviacuteo de muestras en
condiciones que aseguren el estado de congelacioacuten
Roa I amp C Artigas 2008
Control de calidad del material bioloacutegico
Roa I amp C Artigas 2008
2 Calidad de la informacioacuten asociada a las muestras
ndash Adecuada identificacioacuten de eacutestas (coacutedigos de barras o numeacutericos indelebles)
ndash Introduccioacuten correcta de datos en la base informaacutetica
ndash Mantenimiento de anonimato ndash Acceso restringido a los datos
Calidad del material tisular en BTs
Proceso de congelacioacuten y seguridad Rapidez en la obtencioacuten de
la muestra
Periacuteodo de prefijacioacuten
Periacuteodo de isquemia desde
la oclusioacuten de los vasos
sanguiacuteneos hasta la
extraccioacuten del oacutergano
Factores ambientales (Tdeg
pH faacutermacos etc)
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Pasos de una Preparacioacuten HistoloacutegicaObtencioacuten
Fijacioacuten Inclusioacuten (OCT)
Corte Coloracioacuten
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Montaje
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Secciones en OCT de 3-4 micras Fijadas en acetona (refrigerada 5 ndash 10
minutos) Hidratacioacuten por bateria de alcohol No requiere recuperacioacuten antigenica
ACETONA ALCOHOL 100deg (X2) ALCOHOL 95deg (X2) ALCOHOL 90deg
BLOQUEO PEROXIDASA 1ER ANTICUERPO POLIMERO (ENVISION) (2DO ANTICUERPO +
ENZIMA) CROMOGENO (DAB) CONTRASTE CON HEMATOXILINA DESHIDRATACION MONTAJE ldquoLas especificaciones se indican en el Productordquo
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Sistema Flex-EnVision
No olvidar quehellip Anticuerpos primarios
Los marcadores sugeridos
Vimentina proteiacutena citoplasmaacutetica de 57 kDa que se expresa en todas las ceacutelulas mesenquimales Forma parte de los filamentos intermedios
Ki-67 proteiacutena nuclear(345 395 kDa) activa en el ciclo celular(G1 S G2 y M)sirve para monitoreo de fracciones de ceacutelulas neoplaacutesicas en tejido normal
p53 regulador de expresioacuten geacutenica en el ciclo celular en el paso de G1 a S
HiacutegadoAmiacutegdala
Vimentina
Ki - 67
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PROCEDIMIENTOS PARA CONTROL DE CALIDAD EN TEJIDO SOLIDO
bull RNA and DNA integrity mechanisms should be implemented to monitor RNA and DNA integrity and correlate with other features including time to freezing of original specimen storage conditions length of storage etc
bull DNA fingerprinting Random samples should be DNA fingerprinted and compared with matched blood samples to verify tissue identity
INTEGRIDAD DE DNA Y RNA
La reaccioacuten de PCR requiere 1048698 Agua libre de nucleasas 1048698 Catioacuten divalente (MgCl2) 1048698 Desoxinucleoacutetidos (dNTPacutes) 1048698 Sol amortiguadora y sales (Buffer
10X) 1048698 Oligonucleoacutetidos (Primers) 1048698 Enzima (Taq Polimerasa)
Fuente Morente et al (2006)
Gestioacuten de calidad en BT Cada BT debe tener un sistema de
gestioacuten de calidad que debe considerar procedimientos de
Mantenimiento y reparacioacuten de los equipos Registro de entrenamiento del personal Gestioacuten de datos El mantenimiento de registros Protocolos La calidad de material bioloacutegico
Control de calidad del material bioloacutegico
1 Calidad del material tisular
Diagnoacutestico histopatoloacutegico Representatividad del material Proceso de congelacioacuten y
sistemas de seguridad Mantenimiento de la
antigenicidad tisular Preservacioacuten de la integridad de
los aacutecidos nucleicos Enviacuteo de muestras en
condiciones que aseguren el estado de congelacioacuten
Roa I amp C Artigas 2008
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Roa I amp C Artigas 2008
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la muestra
Periacuteodo de prefijacioacuten
Periacuteodo de isquemia desde
la oclusioacuten de los vasos
sanguiacuteneos hasta la
extraccioacuten del oacutergano
Factores ambientales (Tdeg
pH faacutermacos etc)
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Pasos de una Preparacioacuten HistoloacutegicaObtencioacuten
Fijacioacuten Inclusioacuten (OCT)
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minutos) Hidratacioacuten por bateria de alcohol No requiere recuperacioacuten antigenica
ACETONA ALCOHOL 100deg (X2) ALCOHOL 95deg (X2) ALCOHOL 90deg
BLOQUEO PEROXIDASA 1ER ANTICUERPO POLIMERO (ENVISION) (2DO ANTICUERPO +
ENZIMA) CROMOGENO (DAB) CONTRASTE CON HEMATOXILINA DESHIDRATACION MONTAJE ldquoLas especificaciones se indican en el Productordquo
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Los marcadores sugeridos
Vimentina proteiacutena citoplasmaacutetica de 57 kDa que se expresa en todas las ceacutelulas mesenquimales Forma parte de los filamentos intermedios
Ki-67 proteiacutena nuclear(345 395 kDa) activa en el ciclo celular(G1 S G2 y M)sirve para monitoreo de fracciones de ceacutelulas neoplaacutesicas en tejido normal
p53 regulador de expresioacuten geacutenica en el ciclo celular en el paso de G1 a S
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INTEGRIDAD DE DNA Y RNA
La reaccioacuten de PCR requiere 1048698 Agua libre de nucleasas 1048698 Catioacuten divalente (MgCl2) 1048698 Desoxinucleoacutetidos (dNTPacutes) 1048698 Sol amortiguadora y sales (Buffer
10X) 1048698 Oligonucleoacutetidos (Primers) 1048698 Enzima (Taq Polimerasa)
Fuente Morente et al (2006)
Control de calidad del material bioloacutegico
1 Calidad del material tisular
Diagnoacutestico histopatoloacutegico Representatividad del material Proceso de congelacioacuten y
sistemas de seguridad Mantenimiento de la
antigenicidad tisular Preservacioacuten de la integridad de
los aacutecidos nucleicos Enviacuteo de muestras en
condiciones que aseguren el estado de congelacioacuten
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la muestra
Periacuteodo de prefijacioacuten
Periacuteodo de isquemia desde
la oclusioacuten de los vasos
sanguiacuteneos hasta la
extraccioacuten del oacutergano
Factores ambientales (Tdeg
pH faacutermacos etc)
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Fijacioacuten Inclusioacuten (OCT)
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Montaje
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minutos) Hidratacioacuten por bateria de alcohol No requiere recuperacioacuten antigenica
ACETONA ALCOHOL 100deg (X2) ALCOHOL 95deg (X2) ALCOHOL 90deg
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ENZIMA) CROMOGENO (DAB) CONTRASTE CON HEMATOXILINA DESHIDRATACION MONTAJE ldquoLas especificaciones se indican en el Productordquo
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INTEGRIDAD DE DNA Y RNA
La reaccioacuten de PCR requiere 1048698 Agua libre de nucleasas 1048698 Catioacuten divalente (MgCl2) 1048698 Desoxinucleoacutetidos (dNTPacutes) 1048698 Sol amortiguadora y sales (Buffer
10X) 1048698 Oligonucleoacutetidos (Primers) 1048698 Enzima (Taq Polimerasa)
Fuente Morente et al (2006)
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2 Calidad de la informacioacuten asociada a las muestras
ndash Adecuada identificacioacuten de eacutestas (coacutedigos de barras o numeacutericos indelebles)
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sanguiacuteneos hasta la
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pH faacutermacos etc)
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ENZIMA) CROMOGENO (DAB) CONTRASTE CON HEMATOXILINA DESHIDRATACION MONTAJE ldquoLas especificaciones se indican en el Productordquo
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La reaccioacuten de PCR requiere 1048698 Agua libre de nucleasas 1048698 Catioacuten divalente (MgCl2) 1048698 Desoxinucleoacutetidos (dNTPacutes) 1048698 Sol amortiguadora y sales (Buffer
10X) 1048698 Oligonucleoacutetidos (Primers) 1048698 Enzima (Taq Polimerasa)
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Calidad del material tisular en BTs
Proceso de congelacioacuten y seguridad Rapidez en la obtencioacuten de
la muestra
Periacuteodo de prefijacioacuten
Periacuteodo de isquemia desde
la oclusioacuten de los vasos
sanguiacuteneos hasta la
extraccioacuten del oacutergano
Factores ambientales (Tdeg
pH faacutermacos etc)
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Fijacioacuten Inclusioacuten (OCT)
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minutos) Hidratacioacuten por bateria de alcohol No requiere recuperacioacuten antigenica
ACETONA ALCOHOL 100deg (X2) ALCOHOL 95deg (X2) ALCOHOL 90deg
BLOQUEO PEROXIDASA 1ER ANTICUERPO POLIMERO (ENVISION) (2DO ANTICUERPO +
ENZIMA) CROMOGENO (DAB) CONTRASTE CON HEMATOXILINA DESHIDRATACION MONTAJE ldquoLas especificaciones se indican en el Productordquo
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Vimentina proteiacutena citoplasmaacutetica de 57 kDa que se expresa en todas las ceacutelulas mesenquimales Forma parte de los filamentos intermedios
Ki-67 proteiacutena nuclear(345 395 kDa) activa en el ciclo celular(G1 S G2 y M)sirve para monitoreo de fracciones de ceacutelulas neoplaacutesicas en tejido normal
p53 regulador de expresioacuten geacutenica en el ciclo celular en el paso de G1 a S
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bull RNA and DNA integrity mechanisms should be implemented to monitor RNA and DNA integrity and correlate with other features including time to freezing of original specimen storage conditions length of storage etc
bull DNA fingerprinting Random samples should be DNA fingerprinted and compared with matched blood samples to verify tissue identity
INTEGRIDAD DE DNA Y RNA
La reaccioacuten de PCR requiere 1048698 Agua libre de nucleasas 1048698 Catioacuten divalente (MgCl2) 1048698 Desoxinucleoacutetidos (dNTPacutes) 1048698 Sol amortiguadora y sales (Buffer
10X) 1048698 Oligonucleoacutetidos (Primers) 1048698 Enzima (Taq Polimerasa)
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Mantenimiento de la antigenicidad tisular
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Pasos de una Preparacioacuten HistoloacutegicaObtencioacuten
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Vimentina proteiacutena citoplasmaacutetica de 57 kDa que se expresa en todas las ceacutelulas mesenquimales Forma parte de los filamentos intermedios
Ki-67 proteiacutena nuclear(345 395 kDa) activa en el ciclo celular(G1 S G2 y M)sirve para monitoreo de fracciones de ceacutelulas neoplaacutesicas en tejido normal
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La reaccioacuten de PCR requiere 1048698 Agua libre de nucleasas 1048698 Catioacuten divalente (MgCl2) 1048698 Desoxinucleoacutetidos (dNTPacutes) 1048698 Sol amortiguadora y sales (Buffer
10X) 1048698 Oligonucleoacutetidos (Primers) 1048698 Enzima (Taq Polimerasa)
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La reaccioacuten de PCR requiere 1048698 Agua libre de nucleasas 1048698 Catioacuten divalente (MgCl2) 1048698 Desoxinucleoacutetidos (dNTPacutes) 1048698 Sol amortiguadora y sales (Buffer
10X) 1048698 Oligonucleoacutetidos (Primers) 1048698 Enzima (Taq Polimerasa)
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Secciones en OCT de 3-4 micras Fijadas en acetona (refrigerada 5 ndash 10
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INTEGRIDAD DE DNA Y RNA
La reaccioacuten de PCR requiere 1048698 Agua libre de nucleasas 1048698 Catioacuten divalente (MgCl2) 1048698 Desoxinucleoacutetidos (dNTPacutes) 1048698 Sol amortiguadora y sales (Buffer
10X) 1048698 Oligonucleoacutetidos (Primers) 1048698 Enzima (Taq Polimerasa)
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ACETONA ALCOHOL 100deg (X2) ALCOHOL 95deg (X2) ALCOHOL 90deg
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bull DNA fingerprinting Random samples should be DNA fingerprinted and compared with matched blood samples to verify tissue identity
INTEGRIDAD DE DNA Y RNA
La reaccioacuten de PCR requiere 1048698 Agua libre de nucleasas 1048698 Catioacuten divalente (MgCl2) 1048698 Desoxinucleoacutetidos (dNTPacutes) 1048698 Sol amortiguadora y sales (Buffer
10X) 1048698 Oligonucleoacutetidos (Primers) 1048698 Enzima (Taq Polimerasa)
Fuente Morente et al (2006)
BLOQUEO PEROXIDASA 1ER ANTICUERPO POLIMERO (ENVISION) (2DO ANTICUERPO +
ENZIMA) CROMOGENO (DAB) CONTRASTE CON HEMATOXILINA DESHIDRATACION MONTAJE ldquoLas especificaciones se indican en el Productordquo
Sistema de Streptoavidina - Biotina
Sistema Flex-EnVision
No olvidar quehellip Anticuerpos primarios
Los marcadores sugeridos
Vimentina proteiacutena citoplasmaacutetica de 57 kDa que se expresa en todas las ceacutelulas mesenquimales Forma parte de los filamentos intermedios
Ki-67 proteiacutena nuclear(345 395 kDa) activa en el ciclo celular(G1 S G2 y M)sirve para monitoreo de fracciones de ceacutelulas neoplaacutesicas en tejido normal
p53 regulador de expresioacuten geacutenica en el ciclo celular en el paso de G1 a S
HiacutegadoAmiacutegdala
Vimentina
Ki - 67
p53
Calidad del material tisular en BTs
INTEGRIDAD DE LOS ACIDOS NUCLEICOS
PROCEDIMIENTOS PARA CONTROL DE CALIDAD EN TEJIDO SOLIDO
bull RNA and DNA integrity mechanisms should be implemented to monitor RNA and DNA integrity and correlate with other features including time to freezing of original specimen storage conditions length of storage etc
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La reaccioacuten de PCR requiere 1048698 Agua libre de nucleasas 1048698 Catioacuten divalente (MgCl2) 1048698 Desoxinucleoacutetidos (dNTPacutes) 1048698 Sol amortiguadora y sales (Buffer
10X) 1048698 Oligonucleoacutetidos (Primers) 1048698 Enzima (Taq Polimerasa)
Fuente Morente et al (2006)
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Fuente Morente et al (2006)
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Fuente Morente et al (2006)
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