Control de calidad en el laboratorio de bacteriología fase preanalítica y analítica

Sección 1 y 2

Introducción • La evaluación de la calidad en bacteriología difiere del

efectuado en otras secciones del laboratorio clínico en que los reportes no son números, sino la interpretación del microbiólogo a través de procesos estandarizados de las condiciones en que debe presentarse el paciente al laboratorio, la toma de muestras, el proceso de aislamiento, identificación sensibilidad a los antimicrobianos y el reporte de resultados; con el fin de minimizar errores.

• Es un proceso continuo que se extiende desde las materias primas, a través del productor hasta el producto final utilizado en el laboratorio.

Errores comunes en el área de bacteriología

• Muestra mal etiquetada• Mala identificación del microorganismo por

metodología inadecuada• Falta de mantenimiento periódico a los instrumentos

utilizados en el diagnóstico microbiológico• Toma de muestras inadecuadas• Condiciones inadecuadas del paciente para toma de

producto• Tratamiento actual con antimicrobianos

Niveles de bioseguridad

El nivel de bioseguridad laboral sigue siendo un área de especial interés para el que trabaja en el laboratorio de microbiología clínica

El manejo y procesado de las muestras clínicas implica el aislamiento de un gran número de agentes infecciosos, muchos de los cuales, sobre todo los hongos tienen gran facilidad para formar suspensión aérea a partir del medio de cultivo.

El determinante biológico más importante en el riesgo biológico es la patogenicidad del microorganismo

Cada agente infeccioso tiene un grupo de riesgoen función a su virulencia, su potencial epidémico, la dosis requeridapara iniciar infección, o transmisión, huéspedes susceptibles, reservorios o vectores, viabilidad en el laboratorioy su tratamiento.

CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTESBIOLÓGICOS POR SU GRUPO DE RIESGO

Certificación de la cabina • El proceso de certificación de las cabinas

de seguridad biológica está reglamentado por el:

Estándar NSF 49, el cual aplica a todas las cabinas Clase II. El mismo define materiales, criterios de diseño y construcción

CABINAS DE SEGURIDAD CLASE ILas cabinas de seguridad Clase I se caracterizan por suministrar protección: Al personal, al ambiente Su mayor desventaja reside en que no ofrecen protección al producto.

• Características:• La protección al personal se logra porque el flujo

de aire hacia la cabina tiene una velocidad como mínimo de 75 pies lineales por minuto (38,1 cm/s) a través de la apertura frontal.

• El aire de la habitación (sin filtrar) fluye directamente sobre la superficie de trabajo, razón por la que no brindan protección al producto.

• Se usan específicamente para aislar equipos como centrifugadoras, equipos de cultivo o pequeños fermentadores, igualmente, para airear cultivos, homogeneizar tejidos con potencial para generar aerosoles y también para pesar agentes químicos en forma de polvo.

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA CLASE II

• Es una cabina que se caracteriza por suministrar protección: al personal, al ambiente, al producto.

• Características: • Existen diversos tipos de cabinas de seguridad

biológica, Clase II. Los más comunes son los denominados tipo A, B1, B2 y B3.

• Estas cabinas disponen de dos rejillas, una frontal y una trasera, a través de las cuales es succionado el aire que circula sobre la superficie de trabajo.

• A través de la rejilla frontal es succionado el aire que proviene de la habitación y que pasa alrededor del trabajador a una determinada velocidad, aislándolo de los agentes existentes en el interior de la cabina.

• Se identifica la cabina como de tipo A, si se recicla el aire dentro del laboratorio. Si se extrae el aire hacia el exterior a través de un ducto, se identifica la cabina como de tipo B.

• Validas para el manejo de los grupos 1,2 y 3

CABINAS DE SEGURIDAD BIOLÓGICA CLASE III

• Características: • Es una cabina que se caracteriza por ser

totalmente cerrada. • Su construcción es sellada a los gases. Está

diseñada para trabajar con agentes microbiológicos clasificados en el nivel de bioseguridad 4.

• Suministran máxima protección al trabajador y al ambiente.

• La inyección y la extracción del aire a la cabina se realiza a través de filtros HEPA.

• El flujo de aire es mantenido a través de un sistema externo, independiente de la cabina, que mantiene el interior a una presión negativa de aproximadamente 0,5 pulgadas de agua (12,7 mm/H2O) comparada con el exterior.

• Estas cabinas son adecuadas para trabajar con agentes microbiológicos que requirieran contenciones/confinamientos de bioseguridad de niveles 1, 2, 3 ó 4.

1. Prueba de estanqueidad.2. Prueba de fugas de los filtros HEPA.3. Prueba de aumento de temperatura. 4. Prueba de ruido. 5. Prueba de intensidad luminosa. 6. Prueba de vibraciones. 7. Prueba de protección al personal, al producto y ensayos biológicos de contaminación cruzada. 8. Prueba de estabilidad. 9. Prueba de velocidad del flujo vertical. 10. Prueba de velocidad del flujo de ingreso. 11. Prueba de patrones de humo. 12. Prueba de fugas del drenaje. 13. Prueba de funcionamiento del sistema motor/ventilador. 14. Prueba del sistema eléctrico.

PRUEBAS DE CONTROL DE CALIDAD EN CABINAS DE SEGURIDAD BIOLOGICAS

CEPAS ATCC

Se clasifican en:1.- Cepas de referencia2.-Cepas de reserva3.- Cepas de trabajo

CEPAS DE REFERENCIA

• Son Cepas Certificadas• La colección certifica que se

suministra una determinada cepa, que es un cultivo puro.

• Las Cepas de referencia son almacenadas entre 2-8 ºC hasta su uso.

• En la siembra de la Cepas de referencia, se utilizan medios de cultivo de enriquecimiento.

CEPAS DE RESERVA• Son cepas idénticas logradas mediante un único subcultivo de

una cepa de referencia.

• Son cepas potencialmente peligrosas. Necesariamente? A qué se refieren?

• Cada vial debe estar identificado con nombre de la cepa, procedencia y fecha de congelación.

• Los métodos para la preservación y mantenimiento de cepas de reserva son la liofilización y la congelación a bajas temperaturas..

CEPAS DE TRABAJO

• Se obtienen por subcultivo de las Cepas de reserva

• Se subcultivan en medios sólidos de enriquecimiento apropiados para microrganismos.

• Se debe Verificar la calidad, pureza y morfología típica del subcultivo.

• Nunca subcultivarlas para sustituir a las cepas de reserva.

Se usa Cuál? generalmente para:

• Asegurar la exactitud de los resultados.• Calibrar equipos.• Evaluar la calidad de los medios de cultivo.• Validar métodos microbiológicos.

Se usa Cuál? generalmente para:

• Características Fenotípicas.– Son aquellas características que podemos

observar a simple vista.• Características Genotípicas.

– Son aquellas características que aun que no se ven a simple vista sabemos que el microorganismo la posee en su material genético.

Fase pre analítica

• Dar instrucciones al derechohabiente? antes de la muestra.(incluir aquí cuadro de toma de muestra) ?La toma de muestra debe estar bien descrita, deben incluir quien es el personal a cargo de la toma de muestra, el procedimiento en cada tipo de muestra (e.g. exudado faríngeo, vaginal, uretral…), etc.

Transporte de muestras

Transporte de muestras.• Deben de ser trasportadas

desde la Unidad de toma de muestras, o desde los servicios clínicos hasta el laboratorio en cajas herméticas o neveras de tipo Coleman Características? O que tiene de especial esta nevera?, o en capsulas de tubos neumáticos en el menor tiempo posible no máximo de 2hrs.

• Dentro de los contenedores las muestras se deben de ubicar de forma ordenada y segura en gradillas o receptáculos que impidan su volcamiento.

Transporte de muestras.

• Los contenedores deben de llevar en su fondo un material absorbente para que todo derrame involuntario pueda ser absorbido.

Transporte de muestras.

• Algunas muestras microbiológicas en particular en particular las que se toman con un hisopo pueden conservar durante el transporte sumergiéndolo en medios como Stuart Amies o Carly Blair, que son productos amortiguadores. En qué beneficia a la muestra? Por qué tienen la capacidad de mantenerlas?

Transporte de muestras.

• Se debe se checar que todo este en orden y que todo concuerde con el listado de respaldo.

• La auxiliar de enfermería, ordenara los tubos o frascos con las muestras en las gradillas de acuerdo a las condiciones de mantención preestablecidas.

• Estas gradillas serán guardadas en cajas aislantes, o refrigerador para posteriormente ser procesadas.

Transporte de muestras.

Importancia del especimen

• La muestra debe recogerse cuidadosamente para minimizar la contaminación con la Microbiota normal de la zona donde es tomada.

• La orina si no es procesada inmediatamente debe guardarse en refrigeración Por qué?.

• Los materiales recogidos con hisopos deben conservarse en medios de transporte adecuados, para prevenir el crecimiento de microrganismos contaminantes o a pérdida de patógenos viables.

• Para recuperar los microorganismos anaeróbicos, los líquidos tisulares deben transportarse en recipientes al vacío

• Los especímenes deben procesarse en un tiempo máximo de 2 a 4 horas, siendo preferible inmediatamente.

• La calidad de las muestras pueden asegurarse mediante el examen microscópico de los frotes teñidos por técnica de Ga, ???.

• Las muestras de orina que contienen gran número de células de epitelio vaginal y lactobacilos no son adecuadas para el examen bacteriológico y debe repetirse En qué intervienen esos elementos?

• Las muestras de espectoración que contienen más de 25 células de epitelio y menos de 25 leucocitos no son adecuadas para el estudio bacteriológico En qué intervienen esos elementos?

Control de esterilidad

• Aquí poner o de los procedimientos de eterilización Y el concepto, que es distinto de sanitización. También deben incluir el control de calidad de cada uno de los métodos

• Hisopos-Los hisopos estériles empleados en la toma de productos deberán ser muestreados al azar para la certificación de su esterilidad inoculando el algodón con BHI caldo e incubando 48 hrs, el resultado deberá ser negativo.

• Los frotis se harán rotando el hisopo suavemente sobre el portaobjeto, de tal forma que las células se observen integras después de la tinción.

Evaluación de la calidad de los medios de cultivo

• Aquí poner la clasificación y preparación de los medios Consideren también mencionar aquí la calidad del agua para la preparación de los medios y estudien los tipos de agua que existen.

• Incluir el control de calidad del medio, como promoción del crecimiento y prueba de selectividad

• Llevar registro de la recepción de los medios de cultivo, anotando marca, lote, fecha de caducidad además de la fecha de apertura y término de cada frasco en una carta control.

• Conservar los medios a una temperatura menor de 25°C, libre de humedad y sin recibir rayos de sol

Prueba de esterilidad medios de cultivo

• Debe verificarse a esterilidad en el 5 % de las placas preparadas por incubación a 35 °C 24 hrs.

• Inocular los medios con cepas de referencia. Ejemlos??

ReactivosColorantes

• Poner aquí la descripción de los colorantes utilizados en el área

• Se utilizarán cepas control con características tintoriales conocidas

• Técnica de Gram: Utilizar una cepa de Escherichia coli y una de Sthapylococcus aureus

• Técnica de Ziehl Nelsen: Utilizar una cepa de Mycobacterium

• Por favor!!! Aun que no lo incluyan en diapositivas, estudien bien la composición y estructura de cada tipo bacteriano, Gram +, Gram – y BAAR + y BAAR -

Falta

• Identificación de micoorganismos– Pruebas BQ’s– Sistemas automatizados (eg. Vitek)

• Prueba de resistencia a antimicrobianos (2 métodos)

• Tipos de siembra• Estándares de oro

BIBLIOGRAFÍA

✕ “Normas de Seguridad” Núria Borrell, Xavier Mesquida, Pedro Alomar. Revista Iberoamericana de Micología ISBN: 84-607-3050-6. 13 pp.

✕ PRIETO MENCHEROS, S. AMICH OLIVERAS, S. SACUE MARTINEZ, M.L.:”Laboratorio clínico. Principios Generales”. Editorial interamericana. McGraw-Hill. . Páginas 245 a 260. Año 1993.

✕ Federal Standard: FED-STD-209D: Salas Limpias y Estaciones de trabajo: Requerimientos y Controles Ambientales

¡Gracias!