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8/17/2019 CPK y LDH
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UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLESERVICIOS DE LABORATORIO: ANALISIS
CLINICO IIELABOPRADO POR: BIOQUIMICA MARLENE MEDRANO GUZMANGUIA
PRÁCTICA – mayo de 20!
CPK
1. OBJETIVO: Determinar cuantitativamente la actividad de la
creatina
quinasa (CK) por el método cinético en suero o plasma.
2. DEFINICIONES:
• CP": Enzima que se encuentra en el organismo, especialmente en
el músculo
estriado, presenta 3 izoenzimas CK-MM, CK-BB, CK-MB, Niveles
aumentados en infarto de miocardio pero notable incremento en
distrofia
muscular progresiva, se eleva desde 3 rs! las " oras
post-infarto,
concentraciones m#$imas son a las %&-&' rs!
recuper#ndose los valores
normales entre las &' ( )& rs!
3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:
3.1.Fundamento: La CK cataliza la desfosforilacion de la
creatina fosfato
para producir adenosina trifosfato (ATP) que reacciona con la
!lucosa en
presencia de la "e#oquinasa ($K) formando !lucosa%&%fosfato.
'n
presencia de la !lucosa%&%fosfato des"idro!enasa
(%&%PD$) la !lucosa%
&%fosfato es o#idada a &%fosfo!luconato (&%P) reduce
el *AD a*ADP$. La velocidad de incremento en la a+sor+ancia en ,-
nm es
proporcional a la actividad del CK en la muestra.
Creatina /osfato 0 ADP C Creatina 0 ATP
ATP 0 lucosa ! ADP 0 lucosa%&%fosfato
lucosa%&%fosfato 0 *ADP "#$#PD! &%P 0 *ADP$
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3.2.Mue%t&a: 1uero o plasma con 'DTA o $eparina.
3.2.1.Cant'dad: 2 ul
3.2.2.Re(u'%'to%: *o "emolizado limpio fresco.
3.3.E(u')o%* mate&'a+e% , &ea-t'o%:
3.3.1.E(u')o%:
Centrifuga• Espectrofot*metro +tat a$ .
• Ba/o mar0a a 3)1C
• 2orte$
3.3.2.Mate&'a+e%:
• 3icropipetas :4 a 454 a 4 ul
• Tu+os de "emolisis (tu+os de 1tat fa#)
• 6elo7 marcador
3.3.3.Rea-t'o%:
• 6eactivos 4
• 6eactivo 2
3./.P&o-ed'm'ento: 'numerar los tu+os de la si!uiente
forma:
REACTIVOS BLANCO STANDAR
DESCONOCIDO
Rea-t'o de
t&a0ao
4 ml 4 ml
Mue%t&a % 2 ul
• reincubar & min a 3)1C!
• 4eer en el 565 678 N1 de prueba 99!!#• Mezclar inmediatamente
en el vorte$ ( disparar el cronometro!
• 5iempo de reacci*n : min +4eer absorbancias a 3'; nm cada ";
seg +' intervalos.!
• 4 &: a %)& =>4
6dolescentes 8 3' a %') =>4 &? a %'& =>4
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$# %ORMULARIOS & REGISTROS: L
Para valores superiores diluir con 1ol. /isiol=!ica repetir
la
determinaci=n. 3ultiplicar el resultado por el factor de
diluci=n
empleado.E%ta0'+'dad , -ond'-'one% de a+ma-enam'ento:
El reactivo de trabao es estable por % d0a entre %:- &: C (
%' d0as entre &-?
C, manteniendo el recipiente cerrado, mientras no suceda
contaminaci*n
qu0mica o microbiana!
ara preservar su desempe/o el reactivo debe permanecer fuera del
frigor0fico
únicamente el tiempo necesario para obtenerse el volumen a ser
utilizado!
Evitar e$posici*n a la luz solar directa!=na vez abiertos no
deben permanecer destapados ( fuera del refrigerador
durante lapsos prolongados!Evitar e$posici*n a la luz solar
directa, durante el manipuleo los reactivos est#n
suetos a contaminaciones de naturaleza qu0mica ( microbiana que
puedan
provocar disminuci*n de la estabilidad!
A+ma-enam'ento , e%ta0'+'dad de+ %ue&o:
La actividad enzim
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UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLESERVICIOS DE LABORATORIO: ANALISIS
CLINICO IIELABOPRADO POR: BIOQUIMICA MARLENE MEDRANO GUZMANGUIA
PRÁCTICA – mayo de 20!
LACTACTO
DES!IDRO"ENASA # LD!
%! Determinar la concentraci*n de 4actato Desidrogenasa en
sangre por el mtodo
cintico enzim#tico!
&! DE%INICIONES:
LD: Es una enzima inespec0fica que se eleva notablemente en el
carcinoma
diseminado, en las anemias emol0ticas ( megalobl#stica por
perdida por
perdida de esta enzima en los eritrocitos! 5iene : izo
enzimasF la fracci*n
4DG: se encuentra en el 0gado ( músculo estriado, 4DG% en el
miocardio (
eritrocitos, en el infarto de miocardio su nivel se eleva entre
%& ( &' Grs! post
infarto ( tiene su m#$ima concentraci*n entre & ( ' d0as
despus,
permaneciendo elevada entre ? ( %' d0as!
1# DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:%,dame/o8 lactato desidrogenasa
cataliza la o$idaci*n de lactato a piruvato
simult#neamente la reducci*n del N6D o$idado a N6D reducido con
incrementode las absorbancias a 3'; nm!
4-4actato H N6DH 6lcalino 4DG iruvato H N6DG H GH
1## M,e-/.a: uero o plasma con eparina o ED561#2# Ca/3dad:
:; ul!1#1# Re4,3-3/o-: No emolizado, limpio ( fresco!1#$#
E4,35o-6 ma/e.3a*e- y .ea+/37o-:
1#$## E4,35o-: Centrifuga
• Espectrofot*metro +tat a$.
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• Ba/o mar0a a 3)1C
• 2orte$
1#$#2# Ma/e.3a*e-:• Micropipetas 8%; a %;;F%;; a %;;; ul
• 5ubos de emolisis +tubos de tat fa$.
•
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ara valores superiores, diluir la muestra original
%8& con ol! isiol*gica (
repetir la determinaci*n! Multiplicar el resultado por el factor
de diluci*n
empleado!Ae;o 1:P.e5a.a+34 @ diferencia de 6bs > min $
factor
%a+/o. 3!3)"
!# CONCLUCIONES E INTERPRETACION
