r-'10

j\d(~i)()\'i;-USUf'l pnt~?rOVirq~~l,.nll\!riS} .. \I'\~-"us (~oxsdckfe A2.tl:.;1 t;nt(.-:-roV'lrus 70Infecii ale tractusului digestiv I/'.d{-:,n()v!nJ'-.lur~ ( c~O.'41), astrcvrr.rsuri. calicivirusut f(virusul l"J();-wclk i i1tjE:nii r~on\(alk-!ike! farni!!(=} ueovinoee,rjt-TlU\ Rctsviruc , Caloi"ia\j;rU~~i..jrii(~\/irU';lln!e h~pcltitlce A. i EInfecii ale tractusutui urina .f,ci(~no ...uusurt (serottpun }.1! 21).!"t'ecr[ ale rr actu sulul genital

LYj

VIRUSOLOGIE GENERAtA

296Motto: "Infecia (boale mozaicului

297 tutunului) nu este produs de microbi, ci de un

principiu infecios ftuid."297

( Beijennck) .

298\/HS2! f;1r \!tiSlInfecii virale cu tr an srrut ere parenter al imanifestare sistemiclnfe{~~~ cu HIV/S'tD/\Vir:j.:.;uri hepatltice cu transuutere predorninant parenterat(\.1'18: VHD; VH(~; Vi'(;; TT\!J \llru:-u! S,r.,,!~j/;{)r1(\!'1ur:.h::clza inf~~(tio(:S2 (VEG)f fi! ~;~~i~l Ci i \'1:-1 L:,)\.i1Oi;)f'Qi311r\/Iru';,::.!riie f!;-h;clor nemoraoice

Scurt Istoric299300

-,r n")_.1\,'.;

In raport cu aparitia vieii pe pmnt i dovezile indirecte

acumulate, se poate afirma c virusul rabiei era cunoscut nc din

antichitate (r'.rlstotel i Cornelius Celsius). Variola ar fi fost cunoscutnc dm ChilVI antic (2500 .e.n.). iar un basoreuer eC)iptean datat

1500 i.e.n., l reprezint pe preotul Ral1ma, cu pIciorul drept nequinu, o imagine tipic pentru un caz ele poliomielit.

De~;i dovezi ale leztunilor varloloase apar la mumiile eCJiptene i n

documentele strvechi chinezeti, nici vlrusul variolei, niCi cel al

rujeolei nu par a fi fost cunoscute ele Hipoerat ('-1CiO-377). Totui,

apariia oreionulut i a virusulul gripei Dare (l fi iocaliza.t5 n acea

perioada, n insula Thosai.

-;04~05

IV. ;~"~etode tie diagnost~c 'i'n i!1fecdfe vir alef1i(;O~;~~UP!delectr'onicS~.)~t:Pct('H:';.a~~enonHJluiviral1?ol';11't3'd virusurlior.Di,3UflU'-tlcui seroloqic in infeciile viraleTf~hni('l (je difuzie ~n qeiP~-:'clctia de fi>~an::3 C' (r,~f:C;::~!:l:1~:U~;d~:: inhdj!~e .~ henlag!utin2fi! (R1H)! f (Ii !(!(ltiu~)reS(endr~t-"""1(~~ij de-,pcuL: dZdr-e (Ri\J)'u";~(i~ de a'Ji~,ltinr.i-2 ind~recr;)n{:,,-~\ __:t:J ra.nc.munotoorcer!."!l!ij(; :r:-Jl;r;cenZIf"i)aUee n d1ognosticu! ....-irusotoqtc

."3093}]31231633J3323~~53603'703763863f>7388

Pe de alt pa/te, rspandirea 'lariolei- i a gripei n Imperiul Roman

a contribuit, probabil, la declinui acestuia; aceleai boii ar fi afectat

Imperiut Aztec i Inca n America de Sud, dup ce au circlIl.Jllli Europa.

Primeie ncercri de oreventie a boltlot viralc (\

",1""1,,, """"",\,1 (1(, Vi1CClII(I"f' pellt.1U \@l"iO!i) 1n 1721. Unii copii ali

!)III 1', ,1", 11',11'" Il.lIc,,', ilii ,If!l'i'.\vicl;IJit.

,.",,:',1,' 1>1,11111;,.1devenit: mai rspndit din 1740, cnd copiii

" ,i ", I.d,' .: 11111111"1,III rosi, vaccillai cu succes, Dup moartea lui

\ "~'li', ,!I, 'J 1,'", !f,' Vdll(l!:I, '11\1774, tratamentul cu pustule varioloase

, 1'>',1 ,'jI (,'pL'11 '..111111',111\:;1,in!' n SUA, George Wasllingtofl a inslituit

"., 1,1"'1'''"' .1, 1111)( uldle fi soldaulor (1.776),

1', 1i:;I, (Ii Ion d(~ ilni inaintea descoperirii naturii virusurilor,

,1 ",.i " ""I' I fi ol):;(:II/;,ll di persoanele care au fcut "boala

" ,!!I 11;i,II' 1" r ' '111.1(.1 o rOl"ln~j medie ele variol, fiind protejai fati de

'1",'11\ 1 il 11111111)1 ,1','.llurlj'JC, I\ceste observatu au dus la vacc.narea cu." ,.i "".!,," illil,lliiil dlll Hcllielul pustulelor determillalc de JCC'jtill '" \11,>1\1I'"."! IIl,lIl sirnptome 1

"2 Originea virusurilor 3 ilStructura vtrusur llor i anatomie funcional

F.ste' evident c virusurile sunt mkroorqanisme tonrte avoluate

care continu s evalueze i n prezent,

Ci1 rrucroorqanisrne obliqator parazite intracetular, dei au lIll

(jerlO!l1 ele rmo dimensiuni, ele fac parte dintre cele mai eficiente forme

ele via,

) teOI"j(! PVnltltlc'i n.:oresive -" presupune [3 vi"ruslJrilc ar fOI Iormc

Conceptul de virus

Virusurile reprezinta o categorie specific, diferit de alti ageni

infecioi. Mult timp au fost caractenzati prin caractere cum ar fi:

filtralJIIitatea, dimensiunile foarte mici, paraziusmul obligatoriu

mtracelular. inacnvarea prin cldur; aceste criterii nu erau definitorii

i, deci, rlediscrimmatorii n raport cu alti agen~i infecioi (in special

bacteriile),

Definiii

Lwoff (1957): "Virusurile sunt entiti potenial patoqene care au

o fazinfe.cioils, posed un singur tip de acid nuclelc. multiplic sub

form de material genetic, nu cresc. nu se divid i sunt lipsite de

sistem t.ipprnanu."

'"

Hi'ljol itdl!:?d cercettoi ilor admit di originea vlrusunlor coincide

cu

"!,-""

:\'I

,1-1 ,

Iili 1!Il,ItICII' ,1111111:11 vu louul, ('i i !\RNl\ ~i proleinele virale care pot lipsI

II! lil\,11 tllll ';\II!' 1111',1 vn iouulul

:']e1l1(.d,ltl1", ',i' rlr',llll(j vlrusurt in,'

l'lIIII,i rit' ulilllli ti St1U bastona: riqid sau flexibil (ex, vrvlT sau1:1(111 I d, II 1 li'l \1C1:,I);it '1 ;111 ',11'1 iC,d (rzornetnc):f'lllll.! ,,{, '1 n:rI,di1: virusul qripat, aclenovirusurile;fllllllJ rnonocatenar poate

servi ca ARN mesager, Virusurile cu polaritate (-): pentru a servi ca

ARNm, trebuie sintetizat o caten complementar cu ajutorul unei

transrriptaze.

(3) Compoziia n baze a qenornului este variabil:

_ ia virusurile ARN, variaz ntre 36% pentru guanin i citozln

(poxvirusuri) i 7Q% (herpesvirusuri),

(4) 1'-1oleculele ele legare: unele ADN virusuri (ex. poxvirusurt) au

legturi ntre cele dou catene ("cross-liking") i mult: acizi nucleici

(ex. picornavirusuri) sunt legai covalent.

In ansarnb!u. putem descr-ie:

(a) pentru virusurile ADN - 7 tipuri principale ele structuri: de

interes pentru patologia uman sunt virusurile cu genom:

* monocatenar linear (parvovirusuri);

I1;"iiI

\Ijfldld 'Plld)C'l,:I;

l' ) 1,\1 pllll' 1~)lsCIVi1le direct (form, aspect structural):

111,1lI,' 1.11\1;, \\ .. 11>1dlllK'II';llIlli v

,.,

, qeuorn ciublu-cateuar (d.c.jrepetttiv terminal (adeiloviruslll-i);

, qellorn d.c.. circular, Inch,is covalent, care duce la formarea unei

:"ilo:cc:ule,super-rsuclte (ex. polvomavirusuri S,iU slmlanvirus - ~:)V40);

(l)) vi rusuru !\RN pot fi de mai multe tipuri, dar ele interes

medical sunt:

" virUSII! ile eli qenom segmentat mvxovirusurl (8 segmente) si

reovrrusurilo (10 ~,C91\\ente),

l.i; rill1rJlll 101, virusurtte cu genorn segmentat pot fi ele 2 tipuri:

la) virusuri In Gm:. CnpSida virnl2i inveteste mai multe segmenle ce

;\[

c,illd!lp' d,'l(~n,'illlrJnUi antigerllci fat, de care qazda vertebrat\1,,'( i.!i:i prin rspuns imun, inclusiv formare de !~c

',i;I~('j!;(,li 1;llL: 'r'n cazul \!inJsLJ!~i!o!- nenvclitc (nude) au rol protector;!" [: r('d' I,iiic /\U'-/\c, folosind seruri imune cunoscute, se poate face;fi, 'III illlrC

~, o o" ' ","",""":;'~'" '\T-!::i'.--""'''--C:-:;i~''.~':~'' _~.-~,::c,._ ~~..;~'~::~'.~:'~':~ :~,S'.:,-.;c-,~:!

Wiblli... M~m.iMi..AiiW#44A@ -Gi~~~~~~}~h .,fi,"5:~~~~~~~~;n~72,?~;":~"!.~v,'.r'.~.~~~,;",.\ .---..,.~

h~g~tlJ(ie\Jaf8ctoz~1 ~ acid N - acetilneuraminic i

f'[:~~~f!!~i:!;j~;~7~l~~~~~i;:1~,~f~i{)Jg(na ha rid lce:ci n iilllbera rea virionifor din celula care i-a format." AHN dependent, numit transcriptaz revers

.. 1{l)i o regsHn la retrovirusuri (transcrie ARNm.c.

(\I)N -LI! transcris se integreaz n genomul celulei

Taxonomie viral 4 11lii!,1

~

.!/'

~il;H:i(Hmi: infecios parazit obligatoriu intracelular.)~"r;'.t;/,FC.ICllJ lnf~ctlos care include o faz n care agentul este,c;'t~~~:;1Jn~sau mai multe particule inerte (virtonul sau

;)~j~~d!.n una sau mai multe molecule de acid nuctek: De:..~; '..

iC~l(~fitcfe un nveli alctuit din una sau mai multe

,_.: .:-,"IJ"'V~~Jn_r,I't}'fJJit-;Ullel~ cazurt, de o membran care contine lipide i

~~l!{.~~~.k~;.::~:::n~,"tefi transmis unu: ga,dereceptive')r:;;,~:{t:VkK1jCIYm~t;tiJ:,6f;tI'f.tlr;iCI vutonutu: este stocat fie n molecula de ARN,

AOI,j; '1'1 interiorul celulei gazd, genomul viral

'F

/CIT\! a publicat 6 rapoarte privind "The CJassification and

Nomencleture of Viruses" ncepnd cu anul 1970 de la reuniunea de la

Mexico City din 1970,

AI aselea raport, publicat n 1995 considera un singur ordin

respectivt-tononeaeviretes '(care reunete familii asemntoare,

virusuri ARN, cu genom negativ); i ulterior ci fost validat de ordinulNtdovlretes (care reunete virusurile nenvelite sau nude), Primul ordin

deja definit reuneste 71 de familii, 11 subfami!ii, 164 genuri, inclusiv

multe genuri "flotante" i peste 4000 de virusuri, Desigur, sute de

virusuri, sunt 'nc neclasificate datorit lipsei datelor.CITV cuprinde apte subcomitete care se ocup de virusurile

vertebratelor, nevertebratelor, plantelor, bacteriilor,

subcorrutetut pentru proprieti i date despre virusuri noi i

fungi/or,

subcorrutetut de coordonare.

R.ecomandarea iniial, valabil nc, consider virionul ca

element de baz al oricrei taxonornu.

Urmtoarele criterii, ftztco-chtrruce ale vinonllor stau la baza

clasificE!rii vi;usuriior n famil;'i:

natura chimic el acidu/ui nuc/eic;

simetria capsidei;

prezena sau absena nveliulul pericapsidar;

dia metrul capsidei pentru virusurile cu simetrie helical i

numrul de capsomere pentru cele cu simetrie icosaedric.

Pe baza naturii chimice a genomului viral, phvtum vira se mparte n 2

subohvte: dezoxtvirz i ritiovirs pentru virusurile ADN respectiv, ARN.

In funcie' de simetria capsidei, virusurile se grupeaz n clase:

aezoxmettce i dezoxtcabice, respectiv ribohefica i rtbocubtce-

In continuare, clasificarea actual se limiteaz numai la definirea

familiilor, genurilor i speciilor cu respectarea urmtoarelor reguli de

';:-;:-~-:.r:.,:~~~.:;:.:~.~:~;.:::;':~'{-;;-:.r;(:":"'-:;

,_. -,-, "",-,y_.; , "i.':j'!?:':..\'~:;';"""c":!.:1,:";~:,.~l.I;";:,)),,- ,(;~!(f'.";;?~~l}~"~.\~;.;~,-;!t({~~'~'~'Xi;;~SZt~~'F:if~~~~!~~~1:~~:~~~;:~g....

'"

Tabel 3: Virusuri ADN 'mplicate n infecii umaneTabel 3: Virusuri ARN implicate n infectii umane

Picomavirjdile-'TEnte"oY;;~OIiOVIrUS' '---1-3Itp,;rl: meningit iI I aseptic, pollorulelit I-.--.---.-.--...-----j-- ..-------.----~EcHOViru5--------- To..a:ii~~.~;meni.n9it-li---j

r

. .' .-- --------------.- .. - 2?~Fl!~..!E.~.:.. iVirusui Coxsackie 30 tipuri; men,,'git. I

F--------------Hei)ato\Xius----1 :i~~hepatltic(ie-t4)-A-' ~~~~fk;9~~~;~~------1______ _ . ~~p.~'!!r:'e_~S.2!:~.ral)"_!Rl1inovirLis Rhinovirusuri umane > 115 tip,lI"l; rceal II

Comun. .~=~t;.afCiviridae __ ;=: Callclvlrus __ ~l!.?ul N~'.~ Boal 9.astro inlQ..s.!!Di'J.!I__.!

paramy;wviridae p,ramVXOVlrUS-+:lrUSUI gnpal 1 tipuri: rcealA Il comun, brontollr..______________________ __ ~_umonle -------1I Rubulavirus Vlrusul urlien , Oreion; parotidit, II meningit aseptlc (rar,...-------- 1~ -----t------------2L!llt,eJ- encefalite ). .J1

' ~1orblilvinl5 Vlrusul rujeolei RUJco!',; febr, rest: I(el'cefclllt PESS) j

-------:--- pnell!1)O\ll(US-

jVlrusu! 7esplratcr ----- -l.R-ce~"G-'~;;-;-;-I-l~j----SIIlCl~ral (dClull), Olonloht, I

I-----------i--------- i )neum~>.'.~~Jr~(J"p'_'I!,,).'__-jOrthoniixoviridee. Vlrusul Gripal A i Virusul gripal A Febr;i, n1ialg,,~, tuse, i

.pncu~onie .--1virusul gripal 8 Virusul gri pal 8 Febr, mialgie, tuse, I

1-_. I.---------r,-c J).!2.~~rnoni.:::e.,-_.....,._-,-_R/r"bdoviridae Lyssavirus Vlrusul rabie RaIJ;e:incubaie IUr19~j

I ~ afeetare nervoas, .

Im~~

M_ Fllov;ridaf: ~o~lrus virusul Ebola i virusut r:eb";;-"j:lemoraglct'\: . !1--iJo;;;a,,;;idae - --B~)r~avir~5-'---~~;~,;Sfrus--..----_l!ii;~~7;r:,egatdc--- ../II schizofrenie la unele

1- I?etroviridae t- Deltaret~o;,;:us Vlrusul--u,'-an~forfoplc -f~:Y.f~i';;adull:ul,i/Cu""l

l de tip 1 cctule T, parapareza d___________ +_--::__ ' .. ~e!E:~~sric~. _____________ ~[fI~?. Virusui SDl/mOS l'!>!_~...c:".!2.0SC boli __1, . t.ermvrrus Vlrusul .rnunodeftclener ln[(:Cle HIV, SIDA, I..,__ . umane tip 1 1!.2 ._~I~f9!:.~~.!'..?~~ J

l roaevtriaoe I Rublvin~s Virusul rubeolm, Exantem, boli J___ . .,.... +--__ ---,,.- ...,.,,....,..-~1.ill'~1~---____ _ _~havlrlls, Virusuri(WEE EEE VEE) En

\.

~~f;~~~~)f~~~~Y,~~~2'~~'.;')fiVm~~~~Je7~Wp~,~~}~~;~~~.q(~::~M~1~fi)fi'liWrG~~~r$~I"~~";'~-'~'~~~"1'~-''''~'''-~~''-'''.

:~~

..\._~.-- . ,~...o,#_-~-~'-f~_4./ > 5 ~,II-' ",V~'\r::--

,-:;;.:.

1.Ata~afe2. Penetrare3. Decapsldare4. Transcriere I/sau

translale5. Rep!fc~re genom6. Asamblare7. Eliberare

:."1';9. 7: etapele repficrfl unui virus

Penetra ma;Virusurile nude (rar cele nvelite) ptrund prin pinocitoz

(receptoroependent), cu includerea virionilor n endozorni. .) .

Picornavirusurile i papovavirusurile pot intra prin translocarea

direct amembranei citoplasmatice (viropexie). Virusurile "nveute

ptrund prin fuziune i eliberarea NC direct n citoplasm. Virusurile

nvelit;; pot penetra i prin endocitoz, fenomen nsoit de decapsidare.. .' -.

Decapsida,ea

Are loc sub actiunea enzimelor lizozornale sau direct n~ .' .~,citoplasm. Genornu}."ajunge .Ia sediul repticru pentru a deveniaccesibil transcripttet.

2~25

'"",

f"'~;:;;t;;~1-:;-'1

-t. iJl\C(h',ltc,'... Lg P~CCOl'.:'t~mAn:N ' ".._-..-.,..,-,,~

')~

"l/\i!;"t.n:-_:;:~-;;U!t,ry:~~~

Ci:l'" Il: ADN 111,Y;iWil!~\k..,

"::-';;:r".::"",~~:O::;S.];;~:'"Y;:''''~''''''''''~;-.:i''''~--'''O-:z::.'tC.r-->.==.,~_~="",-::,.,;.~~_,,,~.~-_...-.,.~ ....,~",~. ~-". '!P-"~':=?'"-'~:;-~'?-':~~-:_-=-_;~~~~~~~"'~;

iiHitlcrtJj'fJ.la IJlriollului. Virusurtle nude sunt eliberate cel mai

"ffC("\/f:it!: l'u'Jnllt.a celulr~i gazd, Virusurile cu nveli sunt eliberate

.. rjn;jql't!~iYi nudeocapsidele nrnuquresc prin zone ale membrane!

(.t~IJiff.1j;(! '\'n ctH;e au fost rnserate glicoproteine vtrale, Enzirne virale,t~UJ'11 lt~to rH';!lIrm:nnidaza virusului gripal, particip la aceast etap,

Vlrll~urHe, care inmuquresc la nivelul membranelor intra-

dti:'I)I{1!~ln,'ltlce pot fi eliberate prin exocitoz dar i prin liz, Virusurile

r'!~\f:,1(1t,(,\ in medtut extracetular sunt responsabile de iniierea unor noi

lfl(e~crll. U;1ele herpesvirusuri, retrovirusuri i paramixovirusuri pot

Ul!i,K&lla',lfli!.@~~~1:f';!\'I;::"''fv.;;:-~'P,>'l1~2;r.:"~R;id,g,;."P',"'c.+,;,::"",,,~,~o,::,,,;,,,~,=:?,V;""~"~"'__-

-nveli heli~al

Fig. 9: Reprezentarea schematic a unui bacteriofag

"

Ciclul de multiplicare.

Adsorbia: fagul se fixeaz pe receptorii bacterieni specifici, mai

nti reverslbil, prin fibrele cozii, apoi ireversibil, prin croetele plcii

bazale; receptorii bacterieni pot fi prezeni pe peretele bacterian, pe

f!ageli sau pe pili sexuali.

Penetrarea: enzirna muralltlc fagic depohmerizeaz

mucocomplexul peretelui, ceea ce determin scderea rezistenei

peretelui; prin ,contracia manonulul, canalul axial a! cozii traverseaz

peretele alterat i se oprete la nivelul membranei cltoplasrnattce. ADN

fagic este injectat in celul prin canalul axial, n timp ce nveliul fagic

rmne n afara celulei.

n continuare, exista dou posibiltti:

- ADN fagic posed gene veetetive, prin care controleazreplica rea -acizilor nucleici proprii, sinteza proteinelor de nveli i

morfogeneza a numeroase copil de vlrtoru maturi care sunt eliberai

prin liza celulei, i reprezint fagii viruleni. Ulterior, are loc biosinteza

'fl , 1

~11 Principii ale diagnosticuiui viruSOlogic

Scopul diagnosticuiui virusologic: datele anamnestice,

simptomatologia i "sezonalitatea" evolutiei unei afeciuni nu ofer, de

cele mai multe ori date patognOmOnice; diagnosticul de laborator prindatele sale, mai ales cele Sj1ecificeofer:

un diagnostic de acuratee;indic terapia adecvat n funcie de etiologia bectenan sau virala;ajut la formularea prognosticului. '

Tabel 8: Produse patologice pentru diilgnosticui virusoiogic (W!z i C.'I'- IV)------------------.--~--------- ----------1---------------,--- ".---.,IVirsurile cel mai frecvent I Produse patologice Comlpoate fi eVlder.\lill I,'/ VCM '--------L-------------.-

r3!..l aS'Ii1pto",alic~ !I 1nfectll oCUla re I

I Cl Adeno- Io Raclat conJlIIlct,val sau Ruc/ujtll cor 0"0i, :i o VHS . corneean Impune o t0!1r"cilalTipuri de laboratoal"e destinate diagnosticului virusologic:

laborator clinic;

laborator al unui Institut de Sntate Public; Laborator deCercetare, etc.

t~ategii de diagnostic;

izolarea i identificarea virusului considerat agent etiologie sauprecizarea "statutului" izolatului (ex. purttor sntos, convalescent,etc.),evidentierea de proteine vira le;

}" evidenierea aclzilor nucleici virali;." citologie i microscopie electronic;: diagnostic indirect, serologie.

Etapele diagnosticului viruso!ogic:

COoperarea clinician/ epiderniolog - medic de laborator;alegerea celui mai potrivit test i'n funcie de contextul clinico-epidemiologic;produse patologice :

tipul, n functie de momentul bolii (tabel 8);Oportllnitatea prelevrii; .

alegerea metodei de recoltare i asigurrii conditiilor optime detransport.

6'1

65

_., kll)!J!$iQl tU i4",::;;+_~~=":''"'''''~':''''''~''C"''-"'C

4

HE~,;ot)f::lilE {)'lf,GNOSTIC sunt detaliate in capitolul m. Detectarea avizi lor nucleici:;... Hibridizarea acizi lor nucleici nearnplificai;};- Reacia de amplificare genic (PCR polymerase cnein Reaction);j_ "Branarea" ADN (branched DNA)._t~oh;l'"'1fii idontifk"rea virusurilor (t,:ItJel 9)

.;..t1f!fb'lile"i!li'lbiHt'te semnificaiei izolatului;i.!~ij\'~Lnlf;'ltQ{lj standard, de referin;; ,- p\l:!'t"i1lI:t1 lilU@ de rez.isten ale tulpinilorfa de antiviralele

.uHlHrmeidll(;t~ la descoperirea ele noi virusuri;f'OIQ$61t~ca sisteme de diagnostic:v, ,[iqlfriJ~l p~ anlrnale de laborator sensibile;{,(l4iUv/H'ea pe embrioni, 'in dezvoltare;

-._ i-o. _".---- .. _~--------\ -------- nscut .._:1Y'J)~lWVl!.~__".jl-..L-I-L---.- ....I....!.----.-.---i-2- + \ -- ~--------;'1, t, .It, .!. , l- 1+ I --- I --- --- I". -)'~_'"""v -1-""- _ .. -----' .--.-----, -~------ --------;(,"~."HJkfQ A , - - , --- ' --- + + -+ I1Jf1Jti':I. i;\'hT:,' j -'1 ----- ----h----------:+ ++---+-=----- ..~-.:-;:-----.!Ivr~'" "'~-I-i..-"-"..(I.{MDT;:-+"+----i+7-- ---~~--- --I-I-':-------i\ ... , .. !~M;'!LU" \ ! IHA 1~~~~~1}?4~t--~E~~t~=~-\! VWi ! + / - 1 ++ + \ ++ I ++ . ++ + ;_\!._~. -,.,~-,.t.,-...---_.-.---+__:;--, \=: . __ LiP.0cksun) \1

'1\1:. _ ..... , :1..0'-_ __ ". __ o \ .:.'~.:.Ll-3.ll-" -----------.\-~=------- -~-----I V'"f'\ ,... 1--1- l!.:l 5\ ,--- I --- -- - .. (;;\lO;j~f!f-t~i'G;;nFm\":-"e;-;-lagh.lini1r~H~\D " hemadsorbie, s - sptmni, ECP-'Lin~t:tt.ltopatJC

Microscopie electronic:~ coloraie negativ;e imunelectronomicroscopie,

Citologie:-/ de regul realizat n laboratoare de anatomie patologic;-/ evideniaz modificrile histologice;,/ evidenierea de ineluzii vlrale (ex. corpusculii Babe-Negri din

turbare, corpusculi tip Cowdry A n infecia cu VHS sau VVZ);-/ metode imunohistochimice,

Diagnosticul serologie: detectarea anticcirpilor specifici cu

interpretarea rezultatelor n funcie de criteriile de semnificaie clinic

(vezi 3.).

1. Reeoltarea, transportul i conservarea produselorpatologice la laboratorul de virusologie

De regul, fiecare laborator i formuleaz propriile reguli de

recoltare i prelucrare pentru produsele patologice destinate izolrii i

Identificrii virusurilor elabornd procedurile de recolta re pentru fiecare

produs n parte. In suspicillnea unei etiologii virale trebuie luat

legtura cu laboratorul specializat pentru acest diagnostiC i trebuie

avut n vedere parazitismul strict intracelular al virusuri lor deci se

caut creterea anselor izolrii prin scortarea timpului Intre recolta rea

produsului patologiC i tnoculare pe qazde vii, receptive,

Temperatura de stocare:_ probele nu trebuie menjnute la temperatura camerei;

de regul exist un interval de cteva zile ntre recolta re iinocula re i de aceea prezervarea probei la temperal-uri de - 70C

este obligatorie;r'Jidontl';1I'lYi de an\:lqene - cel mai frecvent prin'.1 11' "

'f1l\~!J;!~}(ag:I~ltinar(~

67

66

\'.\t.~i\ 1 '.'i\ \; i, .> \.p.11,Illl

ILi, li\\11,1,~ :1

II~

lil\"u .;,i I 1~~i! ;,1i )'! ~ iF'l'1,1;0 l'H':I~.;l!!I~;~~::\';!I\1 \1itli ;;\::

iililUi~l;i~;1

\[\:1\, "

1 li!

-multe virusuri i pierd' infectivitateala - 15"C - 20CC i de aceea nuse pstreaz niciodat astfel de probe n c:ongelatorul frigiderelorobinuite ci numai n congelatoare destinate special acestui scop;

- dac un virus este sensibil la congelare se va resuspenda produsulpatologic n solutie de sucroz, la pH neutru.

jVledii de transport- destinate prezervrii viabilitii virusuri lorsunt furnizate de ctre laborator mpreun cu detaliile de recolta re,prezervare i transport.

2. !;;::o~areavirusurtlor

2.:ll.. Culturi de celule: presupun utilizarea diferitelor tipuri de celule:

;,.. cutturt primare obinute direct din organul prelevat de la

animale sau om, cu variate surse (vezi capitolul III).

Descriere: celule embrionare dau adulte, de tip fibroblastic sau

epitelial care pstreaz cariotipul celulei normale i prezint fenomenul

inhlbiiei de contact, multrolicarea lor nceteaz cnd filmul celular estecomplet.

Exemple: culturi de rinichi de maimu.

:,;..(,;~..dturi discontlnue:

Descriere: obinute prin subcultivarea limitat (aproximativ 50

de ori) a culturilor primare; prezint caracterele culturilor primare.

Exemple: culturi diploide de celule renale de embrion uman.

> cu.Htl,.wi continui sau linii permanente.Descriere: se obin utiliznd celule neoplaztce sau celule diploide

iniia! normele la care transformarea de tip neoplazie este spontan sau

Indus (prin tratarea cu virusuri transformante, ageni cancerigeni).

E;{emple: Hela, vero, Hep2, LLC-MK2, tIjDCK.

Efectele cultivrii vlrusurllor pe Ce:

.. pentru unele virusuri, se noteaz apariia efectului citopatic

(ECP), consecina mllltipllcrii virusulul, tradus prin modificri ale

morfologiel celulelor cu variate evolutn, pn la desprinderea filmului

celular de pe suport;

of!

~-., ...~::e

~-= .._'L."i12MJ LS.U.. _ .~...,."",~

,--'.-:--c--~--~-"":.---~~y"~~:"e:~,."';~~?!_"-~-~~_'''':'?~~:~f.~;;3':~9.~;'~~9J~~~~~:J~~.$~*;~*;;t\ti~~

~

13~ Profilaxia specific antivirar

i3. 1. IProfilaxia activ prin vaccina re.

vaccmunle antivirale utilizate n practic stimuleaz producerea

de Ac IgA, IgM sau IgG, primele dou clase fiind mai abundente n

secreiile respiratorii i intestinale, iar IgG n cantitate mai mare n

circulaie, De asemenea, pot fi stimulate limfocitele T care sunt

suportul rspunsului imun celular. Pentru a realiza un vaccin eficient,

trebuie cunoscute unele particulariti ale infeqiei respective, una

dintre acestea fiind poarta de intrare:

- infeciile de la nivelul tractusului respirator sau intestrnal:

- infeciI ale suprafeei mucoaselor, urmate de rspndirea

Dezavantaje:

a) rnutale.a reversiei virulenei (major);

b) nu pot fi admintstrate la irnunodepresatl:

e) rspndire posibil la contact (poate constitui un avantaj pentru

colectivitate) ;

d) dificulti de transport n zonele calde.

2, Vaccinurile inactivate sunt obinute prin tratament fizic

(c!dur, iradiere cu UV) sau chimic (formal, beta-propiolacton) al

preparatelor de virus slbatic. Inactivarea urmrete etirninarea

infectivitii cu conservarea imunogenitii.

Avantaje:

a) tmunitate umoral eficient dup rapeluri;

b) nu are risc de reversie ii virulenei;

c) pot fi utilizate la rmunodepresatt:

el) nu pun probleme de conservare legate de ternperaturile ridicate.

Dezavantaje:

a) multe nu determin un rspuns imun eficient;

b) sunt necesare admtntstrn repetate;e) nu stimuleaz imunitatea local (important);

d) pret tie cost ridicat.

3. Vaccinuri recombinate, obinute prin inginerie genetic:

sunt exprimate cu ajutorul unui vector (ex. fungi, E.coli) acele fraciuniantigenice ce induc Ac neutrallzant.

4. Peptide sintetice, care sunt mult mai mici dect proteinele

virale originale, stimuleaz IgG, dar nu la Un nivel eficient.

Efecte adverse secundare vaccinrii

Reaciile adverse post-vaccinale (RAP) sunt manifestrile care

survin secundar unei vaccinri. Accidentele vaccina le propriu-zise sunt

rare i sunt mai ales determinata de vaccinuri antibacteriene.

sisternic pe cale sangvin sau nervoas spre organe tint;

- infecii prin nepturi sau prin injecii.

IgA mediaz imunitatea local, eficient n primele dou situatii.

Exist un mic exces prin Ac circulani dac virusul se i'C'plic la

nivelul mucoasei respiratorii, cncJ r: secretori au roi primordial.iepuri de vaccinuri

1. Vaccinurble vii atenuate sunt obinute prin pasaj pe gazde

strine (ex. ou embrionate sau culturi de celule). Dintre numeroi

rnutani (n special /l.RN), unii vor fi selectai n noua gazd (au capacitatea

de a crete mai bine n gazda strin), dar au o virulent mai sczut

pentru gazda natural (ex. virusul Sabin, prin pasaje rapide pe culturi de

riniclli de mairnuil CI devenit un nou virus, care nu mai crete n Si'lC).Avantaje:

a) activeaz toate fazele rspunsului imun;

b) induc o durdl? mal mare a imunitii;

c) pot ~Iirlii,v; ('WClliil~iavlrusutu' slbatic n comunitate;

d) pre de COSlIQCJLJS,

8l

',:

S:S::"'. iii";:::o:;s::tie;c;:;:::as;:~!:&.:::see!.A!Qtf41'i:::;as. __ . =.-~~----__.

i>

E~en~laI Il mducerea RAr' este natura vaccin ului. Din acestpunct; de vedere, vaccinurile au fost claslficate in "anodine" (vaccin

Ilntipolio) i "Cl\jresive" (rnajorttatea sunt ra~d de bacterii).

Manifesthrile HAP depind i 'de reactivitatea gazdei.

RAI' secundar administrrii \IVA sunt, n general, de natur

infecioas i survin mai trziu comparativ cu reaciile dup VAO

(Vin:ln Cli agenti omortl), care sunt imediate i au la baz

!Tlt?f,jinisrne de hipersensibiltzare, fiind frecvent de natur toxic.

. nf.WC\;iileadverse pot fi:

Tabel 10: Reacii minore i moderate secundare vaccinrilorr=----- -------.----:------r:------------------------.-q[ Reac~~~~~~~e :~uO1od~ra>t~~cconuri implicate (\ti~ale i bacterienc)I Episoade febrile II . precoce: (pnmele 1-3 zile) I o anatoxtne (DT), vaccin anti- II tuse convulsiv, anti-febr II ,tifoic1a corpuscular, I! tardive (5-11 zile) ! VRantiVH~: !. VVV: rlljeola ---1~on~UISij (hiperterrnice la copil) .~~ntirU}~OI~-_-_-.~ ..-.--.- ..-.iI Exantem I .' _. II alergic (precoce) I vaccm cu ageni omorau I1_ infe9!Q~Jtar:.~ vaccin.ani-,,-,!j~.!~ __ .-----l, Artralgii (aduli) I Vaccin anti.-ubeolos, antiVHB IL-.- I

minere (episoade febrile precoce sau tardive, 1

~-----..--..,- ---_._-----

',,,,,,,111: Reacii majore nregistrate dup diferitele tip ud de vaccinurl.-----------'-----------I Vaccin anti- I NaotUl'''' reaciilor advarseI ----..L _D! P + ant!poIig l' fenomene anafilacticeI dar i DTPI anti tuse convulsiv oc anafllacttc, encefalopatii,I oc, convulsii,febr, disconfort,II complicatii acute, sechele,decesrRujeQ!. -- fenomene anafilacticeRubeoii oc anafilactic

J-Iidentificarea i anQli~area difl ItV~-1 v , liprogramului, urmate d 1 ICU a,1ar aparute In ap icarea

Eficiena preveni _ e remedierea acestora.

epidemiologice i imunol el .Prin vaccinare se poate aprecia prin testeOg'Ce.

Pe lng testele d

produs biologic, se fac tes:elaborator obligatorii legate de vaccin ca

raport de ,rspunsul imu pentru verificarea eficienei vaccinrilor nnOlo '

scop, se folosete n ey glc provocat la gazda uman, In acest, Clllln

epidemiologic. Pentru St ' le populaionale, testul sau indicatorulobllire

laturi/grupuri de persoan a acestui indicator se seiecttoneaz

I . e SUfiCient d ' v v "expunerea CI Infecii ct ' '1 e man, asemanatoare, atat pnnI Pri '

ar putea influena rSPllh n varst sau particulariti fiziologice care',sUI'

, ImUnologie.la nivelul populaiei (

n general, prin studiul generale, eficiena Imunizrii se apreciaz,t11Otb'd' v

experimental i la lotUl I Itaii, comparnd rezultatele la grupastatistic a datelor. Se Cal martor dup prelucrarea matematic i

, d' CUleaz - d' I d f" v , vraportul Intre propori::. In rce e e e lcien, care reprezinta" de '

Preparatui vaccinal SUPll IrnbOlnviri la vaccina i i la nevaccinatl.S test" ,

valoarea acestui raport est arlt va fi cu att mai eficient cu cte mai Oar

Studiul curbei morbid' v e.evaluri! n timp ,i spaiu Itaii post-vaccina le ofer posibilitatea

enctentet programelor de CI tendinelor unor boli transmisibile i aVacr--

~~ifAii,4l@,...W _~_,"".._ .~#:;g;. _!W .>.,-.-~~,,:r~;;,~.OA---:-""

1il'' .

..,

Eficienta vacctnrtt se poate aprecia i prin punerea n eviden a

IllOdifiCdlor- irnunoloqice specifice, respectiv evidentierea titrului AC

inr:lu50 de un anumit vaccin. In acest scop, se titreaz Ac din serul

persoanelor vaccrnate i rezultatele se analizeaz n comparaie cu cele

lnreqistrate anterior aciunii de vaccina re sau se fac studii cornparattve

pe toturt de vaconati i nevaccinatt.

VIRUSOlOGIE SPECIAL - principalele familii II

impficate n patologia uman

VIRUSUfU ARN

Evaluarea sero-epiderniologic a eficienei unui program de

vaccmare este important pentru elaborarea i adaptarea calendarului

vacctnrtlor, alegerea preparatutut vaccinal, stabilirea asocierii

vnccinunlor i asigurarea unei protecii specifice pe termen lung.

Familia Picornaviridae 14~.'itil,.t;IiIli:j.'

;:1

l1'!

13. 2. Profilaxia pasiv

Preparatele de Imunoolobuune (Ig) reprezint seroprontaxta i,

ocazlonal, seroterapra. Profilaxia pasiv este indicat n urmtoarele

t.ltuaii:

) dind a avut loc expunerea viral sau este de ateptat c va avea loc

kl(jlte curnd, iar perioada scurt de incubaie nu permite vaccinarea:

b) cnd nu exist vaccin;

ci cnd o afectiune asociat nu permite un rspuns satisfctor lavaccmare

Picornavirusurile sunt mici virusuri ARN, nenvellte, cu simetrie

icosaedric i genom pozitiv.

Clasificare - de interes pentru patologia uman sunt genurile:

r. Enterovirusu. RhinovtrusUl. neoernevtrus: gen separat pentru virusul hepatitei A (VHA).

Vezi capitolul 22.

Seroprofilaxia poate folosi seruri heterotoqe: ns n ultunn ani,

',e folosesc mai ales produse de provenien uman: Ig standard, care

'I(;nt arnestecurt de Ig provenite de la sute de donator; (conin AC fattir! un numar de virusuri mai frecvente) i 19 specifice, care provin de

la rtonatort care au un tttru n Ac ridicat fa de anumite virusuri, dup

ununtzarea cu un anumit vaccin.

(a) .Enterovirusurile: virusuri acid-rezistente ce ptrund pe

cale dtqestiv, replicndu-se cel mai bine n condiii de pH sczut, la

37 C. In acest fel depesc bariera acid gastric.

Fiind virusuri nenvellte, deci mai rezistente, nu sunt afectate de

aciune srurtlor biliare.

Principalul mod de transmitere: fecal oral (impticati! mai ales

privind mecanismul patogenetic i prevenia). Pentru fiecare gen au

fost descrtse mai multe tipuri:

1. Poliovirusurile: tipurile 1, 2, i 3.2. Virusurile Coxsackie A (cu 24 serotipuri) i B (6 serotlpuri).3. ECHO virusurile (enteric cvtooetiioaenic human orohen -

virusuri izolate de la om, ce determinau pe culturi de celuleefect cttopattc, dar fr legtur, iniial cu vreo afectiune):inibal 34 serotipuri, n prezent 30 serotipurt.

4. Enterovirusuri noi: 68- 72 (72 este VHA care a fost recentclasificat ca Heparnavirus).

8G R7