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フローサイトメーター
CyFlow Cube 6/Cube 8
R&I事業本部 事業企画部 細胞計測事業推進課
http://www.sysmex-fcm.jp
*外観、仕様等については改良のため予告なしに変更することがあります。
CyFlow Cube 6
CyFlow Cube 8
G1601030_1412_1601Ⅲ
1 2
CyFlow Cube 6/Cube 8は豊富なレーザーオプションがあり、カスタマイズが可能な、コンパクトでコストパフォーマンスに優れたフローサイトメーターです。PCモニターがビルトインされた小型タイプで、スペースの限られた研究室、実験室でも場所を取らずにすっきりと設置できます。起動時のセットアップ、終了時のメンテナンスは自動ポップアップされる指示に従うだけで完了。初めてフローサイトメーターを使用されるお客様やアグロサイエンス分野で研究をされている方でも、難しい操作を必要とせず、ご利用いただけます。
コストパフォーマンス 自由度。
幅広いオプションから用途に合わせてカスタマイズが可能。
アナライザー
フローサイトメーター
A
B
+
フィルターもレーザーも豊富なオプションから自由に選択できます。
CyFlow Cube 8 with up to 8 optical parameters-6 colors
CyFlow Cube Sorter with up to 5 optical parameters
Excitation flexbility : up to 4 light sources simultaneously[available wavelengths see table below]
CyFlow Cube 8 Sorterは煩わしい設定をすることなく簡単に、目的細胞を高い純度で回収できるセルソーターです。最大の特徴はピエゾ素子を用いた独自のソーティング原理を採用したことです。ドロップレットを形成する従来方式とは異なり、細胞へのダメージを最小限に抑えられるため、細胞の形態やバイタリティーに影響を与えず、ダメージを受けやすい細胞や、プロトプラストのような壊れやすいものでもソーティング可能です。さらに、完全閉鎖型流路系を実現し、エアロゾルの発生がなく安全かつ安定して使用できます。目的細胞集団をゲーティングし、ソートボタンをクリックするだけで簡単にスタートしますので、設定の煩雑さもありません。
ソーティング原理(ピエゾ方式)ピエゾ素子の微細な振動により、目的となる細胞や粒子の流れる方向を変え、回収方向へと導きます。
レーザー光
廃液へピエゾ素子
細胞回収へ
CyFlow Cube 8は、ソーティングコントロールユニットを
搭載することで、CyFlow Cube 8 Sorterへ
アップグレードできます。
Sorting control unit
ダメージからの解放。
独自のピエゾ方式を採用。高純度のダメージレス・ソーティングを実現しました。
セルソーター
フローサイトメーター
CyFlow Cube 8 SorterCyFlow Cube 6/Cube 8
CyFlow Cube 8 Sorter
3 4
CyFlow Cube 6/Cube 8には細胞絶対数カウント機能(TVAC:True Volumetric Absolute Counting)が標準装備されています。従来から行われているビーズを使った間接的な絶対数カウントは、ビーズの凝集や濃度調整などの面から問題が生じることがあります。TVACシステムはコスト面でも気になるリファレンスビーズを使用することなく、搭載されている2本の電極を用いることで正確に、一定量(200 µL)のサンプル量を測定し細胞数をカウントすることができます。また、ソフトウエア上で測定したいサンプル量を入力するだけで希望のサンプル量の測定も可能です。
主な特長
・絶対細胞カウント:CV≦ 2%(VC electrodes)・リファレンスビーズの必要なし ⇒ 低コスト・ビーズ調整にかかる時間をセーブ
細胞分析の精度と正確さを保証
STOP電極に達するまで測定
STARTとSTOP電極によりきっかり200 µL測定
測定量は自分で指定する
リージョン中の測定細胞数を指定する
細胞絶対数カウント機能
フローサイトメーター
Precision &Accuracy
Analyze all
VC electrodes
VC of volume
Cell in Region
マニュアル測定以外に4つの測定モードがあります。多様な測定モード
Measure:Flow speed
Measure:Volume : 200 µLFlow speed
Measure:Flow speed
Clear data
Clear data
Clear data
Measure:Flow speed
End Criteria:Stop Electrode
End Criteria:Stop Electrode
End Criteria:Stop ElectrodeVolume
End Criteria:Stop ElectrodeVolume
End Criteria:Start Electrode
End Criteria:Volume
End Criteria:Volume
pre-Measure:Flow speed
pre-Measure:Flow speed
pre-Measure:Flow speed
TVAC : True Volumetric Absolute Counting
Computer Controlled Motor
c : particle concentrationn : counted number of cells/particlesv:given volume
Digital Velocity Meter Syringe Pump Start
Stop
Sample Tube
Flow Cuvette
Start Count Stop
Laser beam
c= nv
ミネラル飲料水中のバクテリア検出ミネラルウォーターを、SYBR Green I およびPIにて染色し、細胞絶対数カウントモード(VC electrodes)により、ミネラルウォーター中のバクテリア数を測定した。(CyFlow Cube 6/Cube 8による2カラー解析)
12000
10000
8000
6000
4000
2000
00 2000 4000 6000 8000 10000 12000
Dead
Live
実測値
理論値FL-1
R=0.99987
細胞絶対数カウントを用いたビーズ測定BD TruCOUNT Tubes (BD社 Cat.#340334, 54900 beads/tube)を、メーカーの指示書に従い、PBS(1mL)に懸濁したものを原液として、5、 10、 50および100倍希釈のビーズ含溶液を準備した。細胞絶対数カウントモード(VC electrodes)にて測定し、測定結果を理論値と比較した。(CyFlow Cube 6/Cube 8)
FL-2
TruCOUNTビーズ
上記は1mL中のバクテリア数を示す
Total events
Live
Dead
100550
66345
34205
上記のFlow speed、Volumeは、ご自身で数字を入力することができます。
102 103 104
104
103
102
5 6
CyFlow Cube 6/Cube 8のオプションとして、サンプルローディングシステムCyFlow Robby Autoloading Stationがあります。Autoloading Stationを装備することで、3つのタイプのサンプルローディングが可能になります。マルチタイタープレートでは、48-wellおよび96-wellからのサンプリングが可能で、最大同時にプレート2枚を測定できます。さらに、専用のチューブラックを使用することで、最大120本のチューブを連続測定可能です。最大120本のチューブを専用ラックにセットし、そのローディングを自動で行います。これにより実験および検査の作業効率を高めることができます。
実験・検査の作業効率が向上CyFlow Cube 6/Cube 8はWindowsベースのCyViewソフトウエアにより制御されています。 CyViewはデータ取得およびデータ解析(オンライン、オフライン)が可能です。オンラインだけでなく、オフラインでの蛍光補正も可能です。また、CyViewはイムノフェノタイピング、細胞周期、DNA定量、微生物、プロイディー解析など幅広いアプリケーションに対応した解析を可能にしています。取得されたデータはすべてFCSフォーマットで保存されるため、他のFCS解析ソフトウエアでのインポートも簡単に行えます。
初めてお使いの方でも安心な直観的ソフトウェア
自動サンプルローディングシステム
フローサイトメーター
CyFlow Robby 6/Robby 8 Autoloading Station
ソフトウェア
フローサイトメーター
CyView
3種類のローディングタイプが可能
48-well 96-well チューブラックリージョンごとのイベント数や統計データ
File Operator:一目で分かるアイコン操作
操作パネル:ワークプロセスはこの順番で
Instrument settings:一目で分かるタブ表示
結果表示
操作、エラーメッセージなどを表示
リアルタイム表示(流速、データメモリ)
想定したサンプルの量および時間を表示
サンプル、シース液、廃液の量、状態を表示
※本体購入後でもAutoloading Stationを装備できます。このローダー装備システムにおいても通常のシングルポートからのサンプルロードが可能です。(ソフトウェア上での切替による)
● flow cytometry standard file format (FCS 3.0) for storage of original and evaluated data● 64—4096 channels resolution for 1P histograms● 64/64—4096/4096 channels for 2P dotplots● linear | 3-decade logarithmic | 4-decade logarithmic scale (selectable)● compensation and XML configurations can be stored separately or included in the FCS file● connection to well plate/sample tube autoloader● multitube panel system with automated acquisition● automated data transfer to laboratory information systems (LIS)● support of 3rd party flow cytometry software (on request)
CyView Software Specifications
CyFlow Robby 8 Autoloading Station
CyFlow Robby 6 Autoloading Station
7 8
アプリケーションデータ
フローサイトメーター
CyFlow Cube 6/Cube 8
Agrosciences | Breeding | Aquaculture
_ Bioreactor Process Optimisation _ Particle Counting _ Pharmaceutical Industry _ Quality Control in Cosmetics _ Research _ Detection of Ploidy Level _ Plant Genome Size
_ DNA Analysis _ Detection of Apomixis and _ Reproduction Behavior _ Aneuploids and Allopolyploids _ Detection of Hybrids _ Polysomy _ Polysomaty and Plant Chimera Analysis
_ Gender Determination _ Cell Type Identification in Natural _ Populations _ Sperm Cell Counting _ Sperm Cell Viability _ Sperm Cell Function
幅広いアプリケーションに対応
_ Immunology_ HIV/AIDS_ Leukemia_ Lymphoma _ Hematology_ Pathology
_ Cell Sorting _ Cell Cycle Analysis _ Cell Proliferation_ Cytokines _ Platelet Counting _ Leukocyte Depletion
_ Viability_ Live/Dead Analysis _ Cell Counting_ Viability _ Live/Dead Analysis _ Cell Cycle Analysis _ Quality Control
_ Toxicology _ Quality Control in Dairy Industry & Milk Products _ Fermentation Process Control _ Detection of Microorganisms : Yeast/Bacteria/Viruses_ Biomonitoring_ Marine Biology & Algae
Medical Diagnostics | Research Microbiology | Industry Food & Beverage Industry
_ Cancer Research_ DNA Analysis _ Stem Cells _ Apoptosis_ Cell Cultures _ Absolute Cell Counting
10 µL中に含まれる細菌数を示す
細菌の生死判定細菌(生菌数107cfu/mLに調整した菌液)をSYBR Green I および PIにて染色、細胞絶対数カウントモード(VC of volume)により測定解析した。(上) (大腸菌, ATCC29522) (下) (黄色ブドウ球菌, ATCC29213) (CyFlow Cube 6/Cube 8による2カラー解析)
Live
Dead
event 数
26686
4255
10 µL中に含まれる細菌数を示す
Live
Dead
event 数
15392
10019
105
104
103
101
105
104
103
101
酵母の細胞周期の解析酵母の核酸DNA(RNAはRNase Aで分解させておきます)に結合するPIの量により、細胞周期(G0/G1もしくはG2/M)を解析し、発酵中の酵母の増殖状態などをモニターすることができます。グラフは酵母の増殖曲線のタイムポイントごとの細胞周期解析データを示しています。対数増殖期には分裂している細胞の割合が多くなっていますが、細胞密度が一定に保持される状態に達すると、増殖しない状態の細胞の割合が増えていきます。写真はPIで染色された酵母です。
紙パルプ中の粘着性粒子の解析再生紙や紙パルプからの製紙工程では、さまざまな種類の不均一な粘着性粒子が混入しています(例:製本に使用する糊など)。これらは「ピッチ」と呼ばれ、後のプロセスで断紙や穴あきなどに影響してくるため、ピッチコントロール剤の添加などにより分散、凝結もしくは非粘着化を行う必要があります。
希釈した古紙パルプのサンプルを50 µm のメッシュサイズのCellTricsでフィルトレーションし、粘着性粒子に結合するSticky Control Reagent (Nile Red)で染色の後、CyFlow Cube 6で測定しました。 ピッチ由来の蛍光強度や粒径の分布と粒子数を測定しながら、ピッチコントロール剤の添加量を調節していきます。
101 102 103 104 105
SSC
FSC
FSC
All events
101 102 103 104 105
SSC
All events
101 102 103 104 105
PI
SYBR Green Ⅰ
E.coliDead
Live
E.coli
105
104
103
102
101
102 103 104 105
PI
SYBR Green Ⅰ
S.aureus
S.aureus
Dead
Live
105
104
103
102
101
E. coli Escherichia coliS. aureus Staphylococcus aureus
本データはDr. Sommerより提供されました。参考文献:Sommer, S., Die gläserne Hefe, Das deutsche Weinmagazin, 22 (2007), 28-31
酵母の生死判定Yeast Controlキットを用い、酵母(Saccaromyces cerevis iae)の生死状態の解析を行いました。図のQ1領域は生細胞(Fluorescein Diacetateにより染色される細胞集団)、Q4領域は死細胞(Propidium Iodide(PI)より染色される細胞集団)を表しています。左から右のプロットに移行するにつれ、酵母の生存率は経過時間の影響を受けて低下し、死細胞の割合が増加しています。
Hydrophobicity
6000
4500
3000
1500
0102 103
ピッチ(粘着性粒子)由来と推定される蛍光
サンプルAサンプルBサンプルC
Viability
Mortality Mortality Mortality
Time
Viability Viability
FL1 F
DA
FL3 PL FL3 PL FL3 PL
FL1 F
DA
FL1 F
DA
1000
100
10
1
0.1
1000
100
10
1
0.1
1000
100
10
1
0.10.1 1 10 100 1000 0.1 1 10 100 1000 0.1 1 10 100 1000
9 10
主な仕様
CyFlow Cube 6 CyFlow Cube 8 CyFlow Cube 8 Sorter
< 100 MESF(FITC)< 50 MESF(PE)
CV ≦ 2%(DNA定量:CV ≦ 1%)0.1 µm
3/4-decade log電極およびシリンジによる細胞絶対数測定が可能
15 µm×100 µm(488 nm使用時)クォーツ製フローセル(350×200 µm)
8(FSC, SSC, 蛍光6)65,536 channels(16 bit)
15,000 events/sec0.1 - 20 µL/sec の間で調整可能
3.5 mL(55×12 mm)(CyFlow Robby Autoloading station使用時は96/48 well plate, チューブが可能)
-
-
AC100-240V(50Hz/60Hz)200VA以下15 - 30℃
20 - 85%(結露しないこと)CyViewソフトウェア
Flow Cytometry Standard(FCS)3.0Intel® CoreTM2 Duo CPU 2.53GHz
2
6(FSC, SSC, 蛍光4)
-
-
幅385×奥行282×高さ287(ディスプレイ開時:530 mm)
約18 kg15 インチTFT液晶
3(+ UV-LED) 2
5(FSC, SSC, 蛍光3)
完全密閉型ピエゾ方式
300 events/sec(純度 > 99%)
幅500×奥行470×高さ355(ディスプレイ開時:670 mm)
約40 kg19 インチTFT液晶
488 nm(50,100 mW):固体レーザー638 nm(25 mW):半導体レーザー640 nm(40 mW):半導体レーザー405 nm(100 mW):半導体レーザー355 nm(20,50,100 mW):半導体レーザー365 nm(~640 mW):LED375 nm(16 mW):半導体レーザー532 nm(30,100 mW):半導体励起固体レーザー561 nm(100 mW):固体レーザー594 nm(50 mW):固体 (その他のオプションに関してはお問い合わせください)
488 nm(50,100 mW):固体レーザー638 nm(25,40 mW):半導体レーザー (その他のオプションあり)
蛍光検出感度
蛍光検出分離能最小検出粒子径ダイナミックレンジ細胞カウント光学系搭載可能最大レーザー数
レーザー
ビーム形式光学測定部信号処理系同時取得可能パラメーター(最大)データ解像度流路系サンプル解析速度(最大)フローレート
サンプルチューブ
ソーティングソーティング方法
ソーティング速度/純度
本体・PC
寸法(mm)
重量PCモニター電源消費電力動作環境(temperature)動作環境(humidity)ソフトウェアデータ出力フォーマット処理機構
基本性能
488 nm
638 nm
640 nm
405 nm
561 nm
375 nm
UV-LED 365 mW
Green
Orange
Orange Red
Red Ⅰ
Red Ⅱ
Far Red
Red Ⅰ
Red Ⅱ
Far Red
Blue
Green
Orange Red
Red Ⅰ
Red Ⅱ
Far Red
Orange
Orange Red
Red Ⅰ
Red Ⅱ
Far Red
Blue
Green
Blue
FITCAlexa Fluor 488GFP
PE
PE-Texas RedPl
PE-Cy5PerCP
PerCP-Cy5.5
PE-Cy7
APCAlexa Fluor 647
Alexa Fluor 700
APC-Cy7APC-H7APC-eFluor 780
BV421Pacific BlueeFluor 450
BV510AmCyanFVD eFluor 507ZombieAqua
BV605ZombieYellow
BV650
BV711
BV785
PEmStrawberryDsRed
Alexa Fluor 594mCherryPl7-AAD
PE-Cy5mPlum
PE-Cy5.5
PE-Cy7
Hoechest33342DAPlIndo-1(Ca++ bound)
ZombieAquaIndo-1(Ca++ free)
DAPl
CyFlow Cube 6 CyFlow Cube 8
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蛍光色素モデル別対応表
RepresentativeFL-dyes
StandardfilterLaser
PMT # for FL
1 laser 1 laser2 laser 2 laser 3 light sources
3 4 4 3 4 6 6 6 6 6
●上記はあくまで典型的なカスタマイズの例ですので、その他のカスタマイズに関してはお問い合わせください。●多くのフィルターをご用意しておりますので、お問い合わせください。●CyFlow Cube 8では、最大で3レーザー+UV-LEDの使用が可能です。ただし蛍光検出器の数は最大6個になります。