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HemosIL™

Instrumentation Laboratory Company - Lexington, MA 02421-3125 (USA)Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)

Limitações/interferênciasConcentrações de hemoglobina até 50 mg/dL, de bilirrubina até 5 mg/dL, delípidos até 1000 mg/dL e de factor reumatóide até 60 UI/mL não afectam osresultados de D-Dímero nos Sistemas ACL, ACL Futura e ACL Advance.Concentrações de hemoglobina até 100 mg/dL, de bilirrubina até 10 mg/dL e detriglicéridos até 1500 mg/dL não afectam os resultados de D-Dímero no ACL TOP.A presença de factor reumatóide na amostra pode originar resultados falsamentepositivos.O anticorpo monoclonal (MA-8D3) utilizado no Reagente Látex D-Dímer, temespecificidade principalmente pelo domínio D-Dímero dos produtos dedegradação da fibrina entrelaçada. Observou-se uma ligeira reacção-cruzadacom produtos de degradação do fibrinogénio em amostras de plasma, às quaisse juntou mais de 20 µg/mL dos fragmentos purificados D e E.

Os anticorpos humanos anti-ratinho (HAMA) em amostras podem causar umasobre-estimação dos níveis de D-dímeros.

Valores EsperadosEfectuou-se um estudo do limite de normalidade utilizando 30 amostras dedadores saudáveis do banco de sangue analisadas com vários lotes dereagentes D-Dimero e de calibrado. O número total de determinações foi de 240(8 vezes 30) para cada aparelho.

Sistema N Limite Superior do Intervalo (unidades)Familia ACL 240 255 (ng/mL)

ACL Futura/ACL Advance 240 278 (ng/mL)Num estudo separado com 231 amostras individuais de dadores do banco desangue, obtiveram-se os seguintes resultados:

Sistema N Limite Superior do Intervalo (unidades)ACL TOP 231 232 (ng/mL)

Devido a várias variáveis que podem afectar os resultados (incluíndo a idade dapopulação),25,27 cada laboratório deve estabelecer os seus intervalos de valoresnormais. Para estabelecer um diagnóstico, os resultados da análise devem serutilizados em conjunto com a restante informação, incluindo a história clínica.

Características técnicasPrecisão:A precisão foi avaliada, intra e na totalidade (de análise para análise e de diapara dia), ao longo de vários ensaios.Familia ACL Média (ng/mL) CV% (Intra-ensaio) CV% (Total)Controlo D-Dímero Baixo 310 6,01 7,18Controlo D-Dímero Alto 732 2,42 2,99Calibrador D-Dímero 1055 1,31 2,23ACL Futura/ACL Advance Média (ng/mL) CV% (Intra-ensaio) CV% (Total)Controlo D-Dímero Baixo 304 11,82 13,58Controlo D-Dímero Alto 813 3,59 4,94Calibrador D-Dímero 1051 1,94 2,66ACL TOP Média (ng/mL) CV% (Intra-ensaio) CV% (Total)Controlo D-Dímero Baixo 340 4,6 7,7Controlo D-Dímero Alto 729 2,5 4,5Correlação:23

Sistema declive intersecção r Método de referênciaFamilia ACL 1,26 240,4 0,998 EIA D-DímeroACL Futura/ACL Advance 1,48 199,7 0,998 EIA D-DímeroACL TOP 1,12 -16,0 0,993 HemosIL D-Dimer

em ACL Advance

Aplicação PrevistaImunoensaio automatizado para a determinação quantitativa de D-Dímero emplasma humano citratado por turbidimetria com partículas de látex, nos Sistemasde Coagulação da IL como um auxiliar no diagnóstico do tromboembolismo venoso(TEV) [tromboembolismo venoso profundo (TVP) e embolismo pulmonar (EP)].

Resumo e PríncipioA degradação da fibrina estabilizada pelo Factor XIIIa por plasmina, cria umasérie de derivados solúveis que contêm D-Dímero (XDP).1 Quando a plasmina,uma protease sérica, não está em presença de inibidores digere a fibrinaentrelaçada criando uma grande variedade de derivados solúveis cujos pesosmoleculares dependem da extensão da digestão. Estes produtos solúveis dadegradação contêm um neo-antigénio (domínio D-Dímero) que não está presentena molécula original de fibrinogénio, nos seus produtos de degradação nem nafibrina solúvel.2,3 A determinação de D-Dímero é cada vez mais utilizada para odiagnóstico de trombose e para a monitorização de terapias trombolíticas.4

Observam-se nívesi elevados de D-dímeros na trombose venosa profunda (TVP),no embolismo pulmonar (EP) e na coagulação vascular disseminada (SCID)”.5

Durante uma gravidez normal os níveis de D-Dímero aumentam, mas muitomenos do que numa gravidez associada a complicações.6 Um resultado deD-Dímero negativo, associado a uma avaliação clínica de baixa probabilidadepré-teste, demonstrou ter um valor preditivo negativo elevado para TVP ou EP.7-15

O Reagente Látex D-Dímero é uma suspensão de partículas de látex depoliestireno de tamanho uniforme, às quais se juntou um anticorpo monoclonalaltamente específico contra o domínio D-Dímero contido nos derivados solúveisda fibrina. Quando se mistura um plasma, que contenha D-Dímero, com oReagente Látex e o Tampão de Reacção, as partículas aglutinam. O grau deaglutinação é directamente proporcional à concentração de D-Dímero presenteno plasma. Os agregados provocam uma descida da luz transmitida a 405 nm decomprimento de onda (imunoensaio turbidimétrico).16

ComposiçãoO kit D-Dimer (D-Dímero) é composto por:R Latex Reagent (Núm. Cat.0020008520): recipientes 4 x 3 mL de uma

suspensão de partículas de látex de poliestereno, às quais se juntou umanti-corpo monoclonal (MA-8D3) específico contra o D-Dímero. Apresenta-seliofilizado. Contém albumina de soro bovino, tampão, estabilizadores econservante.

B Reaction Buffer (Núm. Cat.0020008521): recipientes 4 x 9 mL de um tampãofosfato que contém albumina de soro bovino, estabilizadores e conservante.

C D-Dimer Calibrator (Núm. Cat.0020008522): recipientes 2 x 1 mL de umadissolução de D-Dímero parcialmente purificado a partir de fibrina humanadigerida com plasmina. Apresenta-se liofilizado.Contém albumina de sorobovino, conservante e estabilizadores.

AVISOS E PRECAUÇÕES:O material utilizado neste produto foi analisado com testes aprovados pela FDA everificou-se a ausência de reacção ao Antigénio de Superfície da Hepatite B(HBsAg), aos anticorpos anti-HCV e anti-HIV 1/2. No entanto, deve-se manipularcom precaução, como potencialmente infeccioso.17

Todos os reagentes contêm azida sódica (0,1%), que pode provocar reacçõescom os tubos metálicos, dando lugar a azidas altamente explosivas. Tomar asdevidas precauções quando se proceder à sua eliminação.Evitar o contacto com a pele e os olhos (S 24/25). Não deitar os resíduos noesgoto (S 29). Usar vestuário de protecção adequado (S 36).Para uso em diagnóstico in vitro.

PreparaçãoLatex Reagent: Dissolver o conteúdo do recipiente com 3 mL de água tipo II deacordo com a CLSI (anteriormente NCCLS) ou equivalente.18 Tapar o recipiente ehomogeneizar suavemente. Verificar se o produto fica completamente dissolvido.Conservar o reagente entre 15-25°C durante 30 minutos. Misturar invertendosuavemente o recipiente antes de utilizar. Não agitar.Reaction Buffer: Misturar invertendo suavemente o recipiente. O reagente estápronto a ser utilizado. Não agitar.D-Dimer Calibrator: Dissolver o conteúdo do recipiente com 1 mL de água tipo IIde acordo com a CLSI (anteriormente NCCLS) ou equivalente.18 Tapar o recipientee homogeneizar suavemente. Verificar se o produto fica completamentedissolvido. Conservar o reagente entre 15-25°C durante 30 minutos. Misturarinvertendo suavemente o recipiente antes de utilizar. Não agitar.

Nota: Evitar a formação de espuma quando proceder à homogeneização dosreagentes e do calibrador reconstituídos. Bolhas no cimo do líquido, podeminterferir com os sensores de líquido do aparelho.

Conservação e estabilidade dos reagentesOs reagentes fechados, que ainda não foram utilizados, são estáveis até ao finaldo prazo de validade, que consta no rótulo, desde que conservados entre 2-8°C.Latex Reagent - Estabilidade após reconstituição: 1 mês a 2-8°C no recipienteoriginal, 1 dia a 15°C no ACL® ELITE/ELITE PRO 8/9/10000, 6 horas a 15°C noACL 6000/7000, 1 semana a 15°C nos Sistemas ACL Futura/ACL Advance ou2 dias a 15°C no ACL TOP. Não congelar.Reaction Buffer - O reagente aberto é estável durante 1 mês a 2-8°C norecipiente original, 1 dia a 15-25°C no ACL ELITE/ELITE PRO 8/9/10000, 6 horasa 15-25°C no ACL 6000/7000, 1 semana a 15°C nos Sistemas ACL Futura/ACLAdvance ou 2 dias a 15°C no ACL TOP.D-Dimer Calibrator - Estabilidade após reconstituição: 3 dias a 15-25°C, 1 mês a2-8°C ou 2 meses a -20°C no recipiente original. O calibrador pode ser descongeladoa 37°C. Homogeneizar suavemente antes de utilizar. Não voltar a congelar.Para obter uma estabilidade óptima retire os reagentes do aparelho e conserve-oentre 2-8°C, nos recipientes originais.

Método de ensaioSeguir as instruções da técnica de acordo com o Manual do Operador e/ou com oManual de Aplicações dos Instrumentos IL.

Recolha e preparação da amostraAdicionar nove partes de sangue extraído recentemente por punção venosa auma parte de citrato trissódico. Para efectuar a recolha, o manuseamento e aconservação da amostra devem seguir-se as recomendações referidas nodocumento H21-A4 da CLSI.19 Caso as amostras tenham sido congeladas,deverão ser descongeladas rapidamente a 37°C e deverão ser centrifugadasantes de serem analisadas. O ensaio deverá ser efectuado antes de terempassado 2 horas da sua descongelação e centrifugação.

Reagentes adicionais e plasmas de controloEste kit não inclui os produtos abaixo mencionados, pelo que deverão serpedidos em separado:Controlos de D-Dímero Núm. Cat. 0020008610Diluente de factores Núm. Cat. 0009757600

Controlo de QualidadePara realizar um programa completo de Controlo de Qualidade, recomenda-se autilização de dois níveis de controlo.20 Os controlos adequados para esteprograma são D-Dímero Controlos Baixo e Alto. Cada laboratório deveestabelecer a sua própria média e desvio padrão e deve efectuar um programade controlo de qualidade para monitorizar os seus resultados. Os controlosdevem ser analisados uma vez em cada turno de 8 horas, de acordo com anorma vigente no Laboratório. Ver Manual do Operador para mais informações.Consultar a publicação de Westgard e col. para identificar e solucionar situaçõesanormais do Controlo de Qualidade.21

Rastreabilidade dos calibradores e materiais de controloOs valores referidos foram determinados através de diversas análises efectuadasnos Sistemas de Coagulação da IL, utilizando um lote específico de reagente ecomparando com um Padrão interno da IL. Como o Padrão Internacional D-Dímero(D-Dimer International Standard), não se encontra actualmente disponível, estepadrão do Laboratório foi atríbuido de acordo com o critério de harmonizaçãoproposto por W. Niewenhuizen.22,23

ResultadosOs resultados de D-Dímero são expressos em ng/mL. Para mais informaçõesconsultar o Manual do Utilizador.Nota: Devido à inexistência de um Padrão Internacional de Referência, algunsfabricantes expressam os resultados do D-Dímero em FEU (FibrinogenEquivalent Unit). A equivalência entre estas 2 unidades de medição é deaproximadamente 2 FEU = 1 ng/mL.24

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Num estudo clínico adicional, comparou-se o este kit D-Dímer com um kit EIAD-Dímero comercial. Foram analisadas amostras de 67 doentes (10 normais,38 com CID, 9 com TVP e 10 com diversos estados da doença). Obteve-se umacorrelação (r) de 0,958 no ACL (n=67) e de 0,903 no ACL Futura/ACL Advance(n=58). Foram encontrados níveis elevados de D-Dímero em doentes com umdiagnóstico clínico de TVP e de CID.Foi realizado um estudo de resultados com 300 amostras congeladas dedoentes consecutivamente admitidos numa unidade de urgência, com suspeitade EP ou TVP (frequência de doença de tromboembolismo venoso: 26%). Das300 amostras, 78 foram confirmadas como TEV positivas (47 EP e 31 TVP) portestes padrão objectivos e as restantes 222 foram confirmadas como negativas.As amostras com resultados afectados por erros do aparelho não foramincluídas nos cálculos.Os resultados a seguir resumidos, baseiam-se num cut-off de 230 ng/mL:Aparelho: Sensibilidade Especificidade Valor PreditivoNegativoSistema N (95% C.I.) (95% C.I.) (95% C.I.)ACL ELITE/ 297 100% 38% 100%ELITE PRO (95,2% - 100%) (31,4% - 44,6%) (95,7% - 100%)8/9/10000ACL TOP 294 100% 36% 100%

(95,1% - 100%) (29,6% - 42,6%) (95,4% - 100%)Estes resultados de precisão e de correlação foram obtidos utilizando lotesespecíficos, de reagente e de controlo.Limite de detecção:SistemaFamilia ACL 140 ng/mLACL Futura/ACL Advance 156 ng/mLACL TOP 69 ng/mLLineariedade:SistemaFamilia ACL, ACL Futura/ACL Advance e ACL TOP 200 - 1050 ng/mLEste ensaio não demonstra efeito de prózona (i.e. excesso de antigénio) até20000 ng/mL no Familia ACL e até 100000 ng/mL no ACL Futura/ACL Advancee ACL TOP.Amostras com resultados acima de 1050 ng/mL devem ser diluídas a 1:5 comDiluente de factores (50 µL de amostra + 200 µL de Diluente), e devem sernovamente analisadas. Este procedimento deve ser repetido caso o resultadoseja novamente acima de 1050 ng/mL. Os resultados impressos devem sermultiplicados por 5, 25 ou 125 (dependendo do número de diluições efectuadas)a fim de corregir a diluição. Os instrumentos com capacidade de activar a funçãoAuto Rerun, realizam automaticamente a diluição 1:5 alargando o intervalo doteste a 5250 ng/mL. Amostras com valores superiores a este, devem ser diluídasmanualmente a 1:25 ou 1:125, reanalisadas com o ensaio padrão e osresultados obtidos multiplicados pelo factor de diluição correspondente.

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ACL, ACL Futura and ACL TOP are trademarks of Instrumentation Laboratory.©1997 Instrumentation LaboratoryIssued December 2007

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