1

Universitatea de Medicin i Farmacie

Carol Davila,, Bucureti

Facultatea de Farmacie

LUCRARE DE LICEN

Controlul calitii produsului farmaceutic

Movalis 15 mg/1,5 mL soluie injectabil

Coordonatori tiinifici:

Asist. Univ. Drd. Adina Cimpoieu

Conf. Dr. Maria Brc

Absolvent

Anca-Ioana Lpdat

- 2014 -

2

Cuprins

Introducere...............................................................................................................................4

I. Parte general......................................................................................................................6

I.1. Meloxicam proprieti fizico-chimice i farmacologice................................................6

I.1.1. Proprieti fizico-chimice....................................................................................6

I.1.2. Proprieti farmacologice....................................................................................6

I.1.2.1. Proprieti farmacocinetice..............................................................................6

I.1.2.2. Proprieti farmacodinamice............................................................................8

I.1.2.3. Proprieti farmacotoxicologice ......................................................................9

I.1.3. Prevederile Farmacopeei Britanice 2009 privind meloxicamul.........................12

I.1.4. Prevederile Farmacopeei Americane privind meloxicamul...............................16

I.2. Stadiul actual al cunoaterii privind analiza cantitativ a meloxicamului...................23

A. Metode spectrofotometrice.....................................................................................23

B. Metode HPLC.........................................................................................................27

C. Alte metode.............................................................................................................30

I.3. Metode spectrofotometrice UV-VIS n controlul medicamentului ............................32

I.3.1. Aspecte generale................................................................................................32

I.3.2. Aparatura............................................................................................................34

I.3.3. Aplicaii ale spectrofotometriei UV-VIS n controlul medicamentului.............36

I.4. Soluii injectabile - prevederi monografii FR X, Farmacopeea European 0520.........41

I.4.1. Farmacopeea Romn ediia X..........................................................................41

I.4.2. Farmacopeea European ediia 6.......................................................................44

II. Parte experimental............................................................................................................49

II.1. Soluii injectabile cu meloxicam nregistrate pe piaa farmaceutic internaional..49

II.2. Controlul calitii produsului farmaceutic Movalis 15 mg/1,5 mL soluie

injectabil.........................................................................................................................49

II.2.1. Determinarea aspectului soluiei injectabile de Movalis..................................50

II.2.2. Determinarea culorii soluiei injectabile de Movalis........................................51

II.2.3. Determinarea uniformitii volumului fiolelor cu soluie injectabil

de Movalis...................................................................................................................52

3

II.2.4. Identificarea meloxicamului din soluia injectabil de Movalis

15 mg/1,5 mL...............................................................................................................54

II.2.4.1. Identificarea meloxicamului prin spectrofotometrie n UV...............54

II.2.4.2. Identificarea meloxicamului prin reacia de culoare cu FeCl3 ........58

II.2.5. Verificarea influenei excipienilor asupra dozrii meloxicamului din

soluia injectabil de Movalis utiliznd metoda HPLC...............................................59

II.2.6. Dozarea meloxicamului din soluia injectabil de Movalis 15 mg/1,5 mL

prin spectrofotometrie n UV......................................................................................74

II.2.6.1. Determinarea linearitii i stabilirea domeniului de linearitate........74

II.2.6.2. Determinarea cantitativ a meloxicamului din soluia injectabil

de Movalis prin metoda spectrofotometric elaborat...................................77

II.2.6.3. Verificarea repetabilitii metodei elaborate......................................79

II.2.6.4. Determinarea stabilitii soluiilor obinute din meloxicam

substan de referin i respectiv din Movalis soluie injectabil..................81

Concluzii.................................................................................................................................90

Bibliografie.............................................................................................................................92

4

Introducere

Antiinflamatoarele reprezint una dintre cele mai frecvent utilizate clase de

medicamente. Studii statistice au artat c 15% din populaie folosete regulat

antiinflamatoare nesteroidiene. Prescrierile anuale de AINS sunt la valori nalte: 70 milioane

n SUA, 20 milioane n Anglia sau 10 milioane n Canada.

Utilizarea cronic a AINS crete de pn la 10 ori rata de apariie a complicaiilor,

spitalizrilor i deceselor datorate bolii ulceroase. n SUA peste 100.000 de pacieni sunt

spitalizai anual pentru complicaii digestive datorate utilizrii AINS, iar rata anual a

deceselor prin complicaii gastrointestinale este de peste 15.000.

Mecanismul de aciune principal al antiinflamatoarelor nesteroidiene este reprezentat

de blocarea ciclooxigenazei (COX), cu inhibarea sintezei de mediatori proinflamatori

(leucotriene, tromboxani, prostaglandine). Descoperirea ciclooxigenazei 2 (COX2) n 1991,

a contribuit la nelegerea i aprofundarea mecanismelor de aciune a antiinflamatoarelor

nesteroidiene. COX2 mediaz secreia de prostaglandin, spre deosebire de COX1, care

apare n secreia fiziologic iar inhibiia acestuia din urm este responsabil de efectele

adverse cum ar fi iritaia gastric i efectul toxic renal. La ora actual se caut

antiinflamatoare care s acioneze cu predilecie asupra COX2.

Meloxicamul este un antiinflamator nesteroidian de generaia a II-a care inhib selectiv

COX2. Este o enolcarboxamid din clasa oxicamilor cu proprieti antiinflamatoare,

analgezice, antipiretice i uricozurice.

S-a observat tendina de a evita administrarea antiinflamatoarelor pe cale oral datorit

efectelor adverse multiple i nlocuirea acestei ci pe ct posibil cu o alt cale de

administrare. De cele mai multe ori, de exemplu, pentru tratarea afeciunilor reumatismale

severe se prefer administrarea injectabil, astfel medicamentul este complet absorbit.

Biodisponibilitatea relativ a meloxicamului dup administrare intramuscular comparativ

cu administrarea pe cale oral este de aproximativ 100%. Meloxicamul injectabil se folosete

n tratamentul simptomatic iniial i de scurt durat al poliartritei reumatoide exacerbate

acut i spondilit anchilozant atunci cnd tratamentul nu poate fi administrat pe cale oral

sau rectal.

n lucrarea de fa ne-am propus controlul calitii produsului farmaceutic Movalis 15

mg/1,5 mL soluie injectabil, plecnd de la prevederile monografiei Iniectabilia din FR X.

Partea teoretic a lucrrii cuprinde date din literatura de specialitate cu privire la

proprietile fizico-chimice i farmacologice ale meloxicamului, stadiul actual al cunoaterii

5

privind analiza cantitativ a meloxicamului, dar i prevederile prevzute n Farmacopeea

Romn ediia a X-a i cea European ediia 6 privind preparatele injectabile.

Avnd n vedere faptul c meloxicamul n form injectabil nu are monografie, n

partea experimental am folosit datele din literatura de specialitate pentru elaborarea unor

metode noi de analiz care pot fi utilizate cu rezultate bune la determinarea calitativ i

cantitativ a substanei active analizate. Am efectuat urmtorii parametrii de control:

determinarea aspectului soluiei injectabile, determinarea uniformitii volumului fiolelor

soluiei injectabile de Movalis, identificarea i dozarea meloxicamului din soluia injectabil

prin spectrofotometrie n UV i verificarea influenei excipienilor din soluia injectabil

asupra dozrii meloxicamului folosind metoda HPLC.

6

I. Parte general

I.1. Meloxicam proprieti fizico-chimice i farmacologice

I.1.1. Proprieti fizico-chimice

Meloxicamul, un derivat de oxicam, este un AINS

cu grupare acid enolic. Denumirea chimic a

meloxicamului este 4-hidroxi-2-metil-N-(5-metil-2-

tiazolil)-2H-1,2-benzotiazin-3-carboxamid-1,1-dioxid.

Are masa molecular 351,4.

Formula sa empiric este C14H13N3O4S2.

Din punct de vedere al proprietilor fizice,

meloxicamul are structur cristalin, de culoare galben

deschis, practic insolubil n ap, cu o solubilitate crescut n acizi i baze puternice. Este

foarte puin solubil n metanol. Meloxicamul are un coeficient de partiie aparent (log P)app =

0.1 n n-octanol/tampon pH 7.4. Valorile pKa ale meloxicamului sunt 1.1 i 4.2

[http://www.rxlist.com/mobic-drug.htm].

Soluia injectabil este o soluie limpede, de culoare galben cu tent verde, fr

particule strine [RCP].

Soluiile stoc la -20C sunt stabile pentru cel puin 30 de zile. Aplicarea congelrii si

decongelrii nu pare s afecteze probele [Zang H, Choi HK 2008].

Probele de plasm nu au fost afectate de 3 cicluri de congelare-decongelare i au fost

stabile pentru cel puin 1 lun prin depozitare la -70C; decongelarea probelor i meninerea

lor la temperatura camerei timp de 6 ore nu a avut nici un efect [Bae JW et al. 2007].

Solubilitatea sczut a meloxicamului la pH acid poate sugera existena unor efecte

secundare gastrice mult diminuate in comparaie cu alte AINS. La pH-uri sczute,

meloxicamul este mult mai lipofilic decat AINS cele mai apropiate ca structur: piroxicamul

i tenoxicamul [Luger P. et al. 1996].

I.1.2. Proprieti farmacologice

I.1.2.1. Proprieti farmacocinetice

Absorbie

Dup administrare intramuscular, meloxicamul este complet absorbit.

Biodisponibilitatea relativ comparativ cu administrarea pe cale oral este de aproximativ

Figura 1. Structura chimic a

meloxicamului

7

100%. Nu este necesar ajustarea dozei la trecerea de la administrarea intramuscular la

administrarea oral. Absorbia dup administrare p.o. este puin influenat de alimente.

Dup injectarea intramuscular a unei doze de 15 mg meloxicam, concentraia plasmatic

maxim de aproximativ 1,6- 1,8 g/ml se atinge n 1 6 ore.

Distribuie

Meloxicamul este legat n proporie foarte mare de proteinele plasmatice, n special de

albumin (99%)(cu preferin n sange, ficat, rinichi). Acest procent mare de legare duce la

restricionarea volumului de distribuie. Meloxicamul trece n lichidul sinovial atingnd

concentraii cu valori de aproximativ jumtate din cele plasmatice. Volumul de distribuie

este mic, de exemplu aproximativ 11 L dup administrare i.m sau i.v. i arat o variaie

interindividual cuprins ntre 7 20%. Volumul de distribuie dup administrarea de doze

multiple de meloxicam administrate oral (7,5 mg i 15 mg) este de aproximativ 16 L, cu

coeficienii de variaie variind ntre 11-32% [RCP].

n literatur s-a observat o concentraie mai mare a meloxicamului n esutul inflamat

dect n zonele neafectate de inflamaie [Muller M. et al. 1997].

Biotransformare

Meloxicamul sufer biotransformare hepatic marcat. n urin au fost identificai

patru metabolii diferii, care sunt toi inactivi din punct de vedere farmacodinamic.

Principalul metabolit, 5-carboximeloxicam (60% din doz), se formeaz prin oxidarea

unui metabolit intermediar 5-hidroximetilmeloxicam, care este excretat, de asemenea, ntr-o

proporie mai mic (9% din doz). Studiile in vitro arat c CYP 2C9 joac un rol important

n aceast cale metabolic, cu o contribuie minor din partea izoenzimei CYP 3A4.

Activitatea peroxidazic a pacientului este probabil responsabil pentru ali doi metabolii,

care reprezint 16%, respectiv 4 % din doza administrat. [RCP]

Meloxicamul este metabolizat prin reacii din faza I, fr a fi detectai metabolii

conjugai ai acestuia [Hui X. et al. 2001].

Eliminare

Meloxicamul este excretat predominant sub form de metabolii care se elimin n

proporii egale prin urin i materiile fecale. Mai puin de 5% din doza zilnic se elimin

nemodificat prin materiile fecale, n timp ce prin urin se excret numai urme ale

compusului iniial.

8

Media timpului de njumtire plasmatic prin eliminare variaz ntre 13 i 25 ore

dup administrare oral, i.m. i i.v.

Valorile medii ale clearance-ului plasmatic total sunt ntre 7 - 12 mL/min, dup

administrarea oral, intravenoas sau rectal a unei doze unice.

Liniaritate/non-liniaritate

Dup administrare oral sau intramuscular, s-a dovedit c meloxicamul are proprieti

farmacocinetice liniare la doze terapeutice cuprinse ntre 7,5 mg pn la 15 mg [RCP].

Afeciunile care nsoesc procesul inflamator pot influena farmacocinetica

meloxicamului n oricare dintre etape n sensul grbirii sau ncetinirii proceselor, cu apariia

efectelor adverse sau toxice ori a pierderii efectului terapeutic [Turck D. et al. 1995; Schmid

J.et al. 1994].

I.1.2.2. Proprieti farmacodinamice

Meloxicamul este un medicament antiinflamator nesteroidian (AINS) din familia

oxicamilor cu proprieti antiinflamatoare, analgezice i antipiretice. Meloxicamul a

demonstrat o important activitate antiinflamatoare n toate modelele standard de inflamaie

[RCP].

Ca i n cazul altor AINS, mecanismul de aciune principal este reprezentat de blocarea

ciclooxigenazei (COX), cu inhibarea sintezei de mediatori proinflamatori (leucotrieneLT,

tromboxanTX, prostaglandinePG). Formarea mediatorilor proinflamatori pornete de la

hidrolizarea glicerofosfolipidelor membranare, sub aciunea fosfolipazei A2 PLA2 (dar i a

fosfolipazei C), care duce la formarea de acid arahidonic. Acidul arahidonic este ulterior

metabolizat pe dou ci: cea a ciclooxigenazei (COX) i cea a lipooxigenazei (LOX). COX

catalizeaz ciclizarea oxidativ a acidului arahidonic, cu formarea de precursori ai

prostaglandinelor i tromboxanilor. Aciunea LOX asupra acidului arahidonic determin

formarea de hidroperoxizi, din care se vor sintetiza ulterior leucotriene. Toi aceti mediatori

proinflamatori PG, LT, TX sunt grupai sub denumirea de eicosanoide.

Prin blocarea COX, AINS blocheaz formarea de PG, ceea ce explic efectul lor

antiinflamator, analgezic i antipiretic (inflamaia, durerea i febra fiind mediate de PG la

nivelul esuturilor inflamatorii, nocireceptorilor i respectiv hipotalamusului).

Majoritatea AINS sunt inhibitori neselectivi ai COX, ceea ce reprezint un dezavantaj

deoarece inhibarea COX-1 duce la apariia de efecte adverse. Meloxicamul este un inhibitor

9

puin selectiv COX-2 care prezint mai puine reacii adverse digestive, dar nu are efecte

antiagregante plachetare [http://www.mymed.ro/antiinflamatoarele-nesteroidiene-ains.html].

Indicaii terapeutice: n tratamentul simptomatic iniial i de scurt durat al poliartritei

reumatoide exacerbate acut, i spondilit anchilozant atunci cnd tratamentul nu poate fi

administrat pe cale oral sau rectal. [RCP]

Artroza (osteoartrit).

I.1.2.3. Proprieti farmacotoxicologice

Ca reacii adverse prezint la nivel:

SNC: ameeli, letargie, tremor, cefalee, nervozitate, stare de ru, oboseal, insomnie,

depresie, convulsii.

Cardio-vascular: hipertensiune, angin, insuficien cardiac, infarct de miocard,

hipotensiune, palpitaii, aritmii, tahicardie.

ORL: tinitus, pierderea auzului.

Gastro-intestinal: pancreatit, grea i vrsturi, colit, boal de reflux gastro-esofagian,

diaree, constipaie, dispepsie, crampe, xerostomie, rar poate produce ulceraii, perforaii

gastrointestinale, hemoragii.

Genito-urinar: nefrotoxicitate - disurie, hematurie, oligurie, azotemie.

Hematologice: discrazii sanguine, efect protrombotic, anemie, hemoragii prelungite.

Dermatologice: rash, urticarie, fotosensibilitate, eritem polimorf.

Sistemice: angioedeme, anafilaxie, creterea transaminazelor.

Tabelul I. Reacii adverse ale sol.inj. de Movalis n funcie de frecvena apariiei

Frecvena apariiei

Reacii adverse

Tulburri hematologice si

limfatice

Mai puin frecvente

anemie

Rare

modificri ale numrului celulelor sanguine (incluznd modificri ale formulei leucocitare), leucopenie, trombocitopenie

Foarte rare agranulocitoz

Tulburri ale sistemului imunitar

Mai puin frecvente

reacii alergice, altele dect reaciile anafilactice sau anfilactoide

10

Cu frecventa

necunoscut oc anafilactic, reacii anafilactice, reacii anafilactoide

Tulburri psihice

Rare tulburri ale dispoziiei, comaruri

Cu frecven necunoscut

stare confuzional, dezorientare

Tulburri ale sistemului nervos

Frecvente cefalee

Mai puin frecvente

ameeli, somnolen

Tulburri oculare Rare conjunctivite, tulburri de vedere, incluznd vedere nceoat

Tulburri acustice i vestibulare

Mai puin frecvente

vertij

Rare tinitus

Tulburri cardiace

Rare palpitaii

A fost raportat insuficien cardiac, asociat tratamentului cu AINS.

Tulburri vasculare Mai puin frecvente

hipertensiunea arterial, eritem tranzitor al feei

Tulburri respiratorii, toracice i mediastinale

Rare declanarea de crize de astm bronic la persoane cu alergie la aspirin sau la alte AINS.

Tulburri gastro-intestinale

Frecvente dispepsie, grea, vrsturi, dureri abdominale,, diaree

Mai puin frecvente

hemoragie gastro-intestinal ocult sau manifest, stomatit, gastrit, constipaie, flatulen, eructaii

Rare colit,ulcer gastroduodenal, esofagit

Foarte rare perforaii gastro-intestinale

Ulcerele, perforaiile sau hemoragiile gastro-intestinale pot fi uneori grave i au potenial letal mai ales la pacienii vrstnici

Tulburri hepatobiliare

Mai puin frecvente

modificri ale parametrilor funciei hepatice (cum sunt creterea valorilor serice ale transaminazelor sau ale bilirubinei)

Foarte rare hepatita

Afeciunii cutanate i ale esutului subcutanat

Mai puin frecvente

angioedem, prurit, erupii cutanate

Rare Stevens-Johnson, necroliz epidermic toxic, urticarie

Foarte rare dermatit de tip bulos, eritem multimorf

Cu frecven necunoscut

reacii de fotosensibilizare

Tulburri renale i ale cilor urinare

Mai puin frecvente

retenie de sodiu i de ap, hiperkaliemie, modificri ale parametrilor funciei renale (creteri ale creatininemiei i/sau ale concentraiei serice ale ureei)

Foarte rare insuficiena renal acut n special la pacienii care prezint factori de risc

Tulburri generale i la nivelul locului de

administrare

Frecvente induraie la locul injectrii, durere la locul injectrii

Mai puin frecvente

edeme, inclusiv edeme ale membrelor inferioare

11

Contraindicaii:

Acest medicament este contraindicat n urmtoarele situaii :

- sarcin n trimestrele II i III (poate provoca nchiderea prematur a canalului arterial),

alptare;

- copii i adolesceni cu vrsta sub 18 ani;

- hipersensibilitate la meloxicam sau la oricare dintre excipieni sau hipersensibilitate la

substane cu activitate similar, de exemplu AINS, aspirin. Meloxicamul nu trebuie

administrat pacienilor cu astm bronic, polipi nazali, edem angioneurotic sau urticarie ca

urmare a administrrii de acid acetilsalicilic sau alte AINS.

- hemoragie gastro-intestinal manifest sau perforaie, datorit unui tratament anterior cu

AINS;

- ulcer gastro-duodenal activ sau recent/perforat (evidenierea sau diagnosticarea a dou sau

mai multe episoade distincte de ulceraie sau hemoragie);

- insuficien hepatic sever;

- insuficien renal sever la pacieni netratai prin dializ;

- hemoragie gastro-intestinal manifest, sngerri recente cerebrovasculare sau evidenierea

unor tulburri hemoragice sistemice;

- insuficien cardiac sever

- tulburri ale hemostazei sau tratament concomitent cu anticoagulante (contraindicaie

legat de calea de administrare) [RCP].

Precauii: sarcin, copii, afeciuni hemoragice, afeciuni gastro-intestinale, afeciuni

hemoragice, hipersensibilitate la ali ageni antiinflamatori, vrstnici, CCR< 25 mL-min.

Interaciuni: meloxicamul crete concentraia litiului i crete aciunea aminoglicozidelor,

hidantoinelor, diureticelor, anticoagulantelor orale. Scade efectul inhibitor al

antihipertensivelor inhibitoare ale enzimei de conversie a angiotensinei i scade aciunea

beta-blocantelor. Colestiramina crete elimiarea meloxicamului. Cresc aciunea

meloxicamului: fenitoina, sulfonamide, salicilai. La asociere cu cilclosporina prezint

nefrotoxicitate.

Farmacografie: Administrare lent, intramuscular profund. O doz de 15 mg injectat o

dat pe zi. (Nu trebuie depit doza de 15 mg pe zi).

Mod de prezentare: Soluie injectabil 15 mg/1,5 mL, cutii cu 5 sau 10 fiole. [Cristea A.N.,

2012; Dobrescu D. et al, 2013; Negru M. et al, 2013]

12

I.1.3. Prevederile Farmacopeei Britanice privind meloxicamul din tablete

Structur

C14H13N3O4S2

Aciune si utilizri

Inhibitor de ciclooxigenaz, analgezic, antinflamator.

Preparare

Meloxicam tablete

Definiie

Meloxicam este 4-hidroxi-2-metil-N-(5-metil-1,3tiazol-2-il)-2H-1,2-benzotiazin-3-

carboxamid-1,1-dioxid.

Conine mai mult de 99,0% i mai puin de 100,5% din C14H13N3O4S2, calculat prin

raportare la substana uscat.

Caracteristici

Este o pulbere de culoare galben pal. Practic insolubil n ap, puin solubil n

aceton, solubil n dimetilformamid, foarte puin solubil n etanol (96%) i n metanol.

IDENTIFICARE

A. Spectrul de absorbie n infrarou (Anexa II A) trebuie s corespund cu spectrul de

referin al meloxicamului (RS 374).

B. Absorbia luminii (Anexa II B) n intervalul 240 nm - 450 nm a unei soluii 0,0015%

m/v n metanol indic un maxim de absorbie la 354 nm. Absorbana la lungimea de

und 354 nm este aproximativ 0,8.

DETERMINRI

Claritatea soluiei

O soluie 5% m/v n dimetilformamid trebuie sa fie limpede, Anexa IV A.

Substane nrudite

Se aplic metoda cromatografiei de lichide, Anexa III D, folosind urmatoarele

soluii:

(1) Se prepar o soluie 0,4% m/v din substanele de determinat n amestec cu 50 volume

de metanol (40 %) i 3 volume de hidroxid de sodiu 0,4 M i se dilueaz o parte din

aceast soluie cu un volum egal de metanol (40%).

13

(2) Se dilueaz 1 volum de soluie (1) la 100 de volume de metanol (40%) i apoi se

dilueaz 1 volum din aceast soluie la 10 volume cu metanol (40%).

(3) n acelai mod cu soluia (1) se prepar o soluie folosind standardul de impuriti al

meloxicamului BPCRS n locul substanei de determinat.

CONDIII CROMATOGRAFICE

a) Se folosete o coloana cromatografica de inox (15cm x 4,6mm) cu octadecilsilil

silicagel pentru cromatografie (5m) (InertsilODS2 este potrivit).

b) Se folosete un gradient de eluie liniar i faza mobil descris mai jos.

c) Se folosete un debit de eluie de 1 mL pe minut.

d) Se folosete o temperatur a coloanei de 45C.

e) Se folosete lungimea de und de detecie 260 i 350mn.

f) Se injecteaz 10 L din fiecare soluie.

g) Pentru soluia (1) se las cromatograful s funcioneze timp de 20 de minute sau pn

ce impurittile Chas au eluat.

FAZA MOBIL

Faza mobil A: o soluie 0,1% m/v de dihidrogen ortofosfat de potasiu adus la pH 6,0 cu

soluie diluat de hidroxid de sodiu.

Faza mobil B: metanol.

Tabelul II. Compoziia fazei mobile n funcie de timp

Timp (minute) Faza mobil A (% v/v) Faza mobil B (% v/v)

0 60 40

2,5 60 40

12 30 70

VALIDITATEA SISTEMULUI

Determinarea nu este valid dect dac, la fiecare lungime de und, cromatograma

obinut cu soluia (3) este similar cromatogramei corespondent dat de standardul pentru

impuriti al meloxicamului BPCRS.

LIMITE

n cromatograma obinut cu soluia (1) la 350 nm:

- aria oricror picururi ce corespund impuritaii A i impuritii C s nu fie mai mare dect

jumatate din aria picului din cromatograma obinut cu soluia (2) la 350 nm (0,1 % din

14

impuritatea A, lund n considerare factorul de corecie de 2,0 i 0,05% pentru

impuritatea C)

n cromatograma obinut cu soluia (1) la 260 nm:

- aria oricrui pic ce corespunde impuritaii B s nu fie mai mare dect aria picului din

cromatograma obinut cu soluia (2) la 350 nm (0,1 %)

n ambele cromatograme obinute cu soluia (1) la 350 nm i la 260 nm:

- aria oricror alte picuri secundare s nu fie mai mare dect aria picului din

cromatograma obinut din soluia (2) la 350 nm (0,1 %)

Se calculeaz procentajul coninut de impuritile A i C la 350 nm, procentajul coninut de

impuritatea B la 260 nm i procentajul obinut de oricare alte picuri secundare la lungimea

de und cu un rspuns mai nalt. Coninutul total al oricror astfel de impuriti nu trebuie s

fie mai mare de 0,3 %.

Metale grele

2,0 g corespund cu testul limit C pentru metale grele, Anexa VII (10 ppm).

Standardul se prepar folosind 2 mL din soluia standard principal (10 ppm Pb).

Pierdere prin uscare

Prin uscare la mas constant la 105 C nu trebuie s se piard mai mult de 0,5% din

greutate. Se folosesc 3 g.

Cenua sulfatat

Nu trebuie s fie mai mare de 0,1 %, Anexa IX A. Se folosete 1 g.

DOZARE

Se dizolv 0,25 g ntr-un amestec de 50 mL acid acetic anhidru i 5 mL acid formic

anhidru i se utilizeaz metoda titrarii n mediu anhidru, Anexa VIII A, determinand punctul

de echivalen potentiometric. Fiecare mL de acid percloric VS 0,1 M este echivalent cu

35,14 mg de C14H13N3O4S2 .

15

IMPURITI

A. 4-hidroxi-2-metil-2-H-1,2 benzotiazin-1,1-dioxid 3-carboxilat de etil

B. 5-metil-2-amino-1,3-tiazol

C. N-[(2Z)-3,5-dimetil-1,3-tiazol-2(3H)-iliden]-4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3-

carboxamid-1,1-dioxid

D. N-[(2Z)-3-etil-5-metil-1,3-tiazol-2(3H)-iliden]-4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3-

carboxamid-1,1doixid

E. 4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3-carboxilat de metil-1,1-dioxid

[British Pharmacopoeia, 2009]

16

I.1.4. Prevederile Farmacopeei Americane privind meloxicamul

USP- buletin revizuit

Oficial , 1 martie 2012

C14H13N3O4S2

Masa molecular: 351,40

4-hidroxi-2-metil-N-(5-metil-2-tiazolil)-2H-1,2-

benzotiazin-3-carboxamid-1,1-dioxid [71125-38-7].

DEFINIIE

Meloxicamul conine 99,0% NLT i 100,5% NMT din meloxicam (C14H13N3O4S2), calculat

cu raportare la substana uscat.

IDENTIFICARE

A. Absorbie n infrarou

B. Absorbie n ultraviolet

Lungimea de und: 240-450 nm

Soluia de prob: 10 g/mL n metanol

DOZARE

Mod de lucru:

Solutia A: amestec de soluie de acetat de amoniu 0,1% (m/v) ajustat cu soluie de

amoniac 10% la pH 9,1.

Faza mobil: metanol i Soluia A (21:29)

Solvent: metanol i hidroxid de sodiu 1 N (250:1)

Soluie pentru validarea sistemului: cte 0,08 mg/mL pentru fiecare dintre

Meloxicam USP RS si USP Compusul nrudit cu Meloxicamul A RS. Se prepar prin

dizolvarea in 50% din volumul balonului cotat cu Solvent i diluarea cu ap la volum.

Soluie standard: 0,2 mg/mL din Meloxicam USP RS. Se prepar prin dizolvarea n

50% din volumul balonului cotat cu Solvent i se dilueaz cu ap la volum.

Solutie de prob: 0,2 mg/mL din Meloxicam. Se prepar prin dizolvarea n 50% din

volumul balonului cotat cu Solvent i se dilueaz cu ap la volum.

17

Sistemul cromatografic

(vezi Cromatografie , Validarea sistemuli)

Metod: Cromatografie de lichide

Detector: UV 360 nm

Coloan: 4,6 mm x 15 cm;

Temperatura coloanei: 45 oC

Debit de eluie: 1mL/min

Volumul de injecie: 10 L

Validarea sistemului

Proba: Soluie de validare a sistemului

[Not: timpii de retenie relativi pentru Compusul nrudit cu meloxicamul A i pentru

meloxicam sunt 0,7 si respectiv 1,0]

Condiii de validare

Rezoluia: NLT 3,0 ntre compusul nrudit cu meloxicamul A i meloxicam

Factor de retenie: NMT 2,0 pentru picul meloxicamului.

Deviaia standard relativ: NMT 2,0 %.

Analiza

Probe: Soluie standard i Soluie de prob

Se calculeaz procentajul meloxicamului (C14H13N3O4S2) din poriunea de Meloxicam

analizat:

Rezultat = (rU /rS) x (CS/CU) x 100

rU = rspunsul picului pentru meloxicam din Soluia de prob

rS = rspunsul picului pentru meloxicam din Soluia standard

CS= concentraia Meloxicamului USP RS din Soluia standard (mg/mL)

CU = concentraia Soluiei de prob (mg/mL)

Criteriu de acceptare: 99,0 % - 100,5 % din substana uscat

IMPURITI

REZIDUU LA CALCINARE : NMT 0,1 %

METALE GRELE, Metoda II : NMT 10 ppm

IMPURITI ORGANICE, PROCEDEUL 1

18

Utilizai Procedeul 1 sau Procedeul 2, n funcie de procesul de fabircaie folosit.

Solutia A: soluie de fosfat monobazic de potasiu 0,1 % (m/v) adus la pH 6,0 cu

hidroxid de sodiu 1N

Solutia B: Metanol

Solvent: Metanol i hidroxid de sodiu 1N (50:3)

Faza mobil: vezi tabelul III

Tabelul III. Compoziia fazei mobile n funcie de timp

Timp (min) Soluie A (%) Soluie B (%)

0 60 40

2 60 40

10 30 70

15 30 70

15,1 60 40

18 60 40

Soluia de validare a sistemului: cte 0,08 mg/mL din Meloxicam USP RS, Compusul

nrudit cu meloxicamul A USP i Compusul nrudit cu meloxicamul B USP RS.

Se prepar prin dizolvarea in 10% din volumul balonului cotat cu Solvent si se

dilueaz cu ap la volum.

Soluie stoc standard: 0,6 mg/mL din Meloxicam USP RS.

Se prepar prin dizolvarea n 0,25% din volumul balonului cotat cu Solvent i se

dilueaz cu metanol la volum.

Soluie standard: 0,012 mg/mL din Meloxicam USP RS n metanol din Soluia

standard stoc.

Soluie prob: 4 mg/mL din Meloxicam. Se prepar prin dizolvarea n 25% din

volumul balonului cotat cu Solvent si se dilueaz cu metanol la volum.

Sistemul cromatografic:

Metod: Cromatografie de lichide

Detector: UV la 260 si 350 nm (lungime de und variabil sau detector cu ir de

diode)

Coloana: 4,6 mm x 15 cm; 5 m

Temperatura coloanei: 45 oC

Debit de eluie: 1mL / min

Volumul de injectie: 5 l

19

Validarea sistemului

Probe: Solutie de validare a sistemului si Solutie standard

[Nota: timpii relativi de retenie sunt prezentai in tabelul 2]

Condiii de validare

Rezolutie: NLT 3,0 intre Compusul nrudit cu meloxicamul A si meloxicam la 350

nm; NLT 3,0 intre Compusul nrudit cu meloxicamul B si meloxicam la 260 nm,

Solutie de validare a sistemului

Deviatia standard relativ: NMT 10%, Solutie standard

Analiza

Probe: Solutie standard si Solutie proba

Se calculeaz procentajul fiecarei impuritati in portiunea de Meloxicam analizat:

Rezultat = (rU /rS) x (CS/CU) x (1/F) x 100

rU = raspunsul picului pentru fiecare impuritate din Solutia proba

rS = raspunsul picului pentru meloxicam la 250 nm din Solutia standard

CS= concentratia Meloxicamului USP RS din Solutia standard (mg/mL)

CU = concentratia Solutiei de proba (mg/mL)

F = factorul relativ de rspuns (vezi tabelul 2)

Criteriu de acceptare: vezi tabelul IV.

Tabelul IV.

Substana

Timp de

retenie

relativ

Lungimea de

und (nm)

Factor de

rspuns

relativ

Criteriu de

acceptare, NMT

(%)

Compus nrudit cu

meloxicamul Ba

0,4 260 1,0 0,1

Meloxicam 1,0 260/350 - -

Compus nrudit cu

meloxicamul Ab

1,4 350 0,5 0,1

Metil-meloxicamc 1,7 350 1,0 0,05

Etil-meloxicamd 1,9 350 1,0 0,05

Impuritate individual

necunoscut - 260/350 1,0 0,1

Totalul impuritilor - - - 0,3

a 2-amino-5-metil-tiazol

b 4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3-carboxilat de etil-1,1-dioxid.

20

c N-[3,5-dimetil-tiazol-2(3H)-iliden]-4-hidroxi-2-metil-2H-benzo[e][1,2]tiazin-3-

carboxamid -1,1-dioxid

d N-[3-etil-5-metil-tiazol-2(3H)-iliden]-4-hidroxi-2-metil-2H-benzo[e][1,2]tiazin-3-

carboxamid-1,1doixid

IMPURITI ORGANICE, PROCEDEUL 2

Dac un produs corespunde cu acest test, etichetarea arat c ndeplinete condiiile de la

Impuriti organice, Procedeul 2.

Soluia A i soluia B: se procedeaz ca n indicaiile de la Procedeul 1.

Faza mobil: vezi tabelul V.

Tabelul V. Compoziia fazei mobile n funcie de timp

Timp (min) Soluia A (%) Soluia B (%)

0 45 55

25 45 55

30 30 70

40 30 70

45 45 55

50 45 55

Solventul B: metanol i ap (2:3)

Solventul A: Solventul B i hidroxid de sodiu 0,4 N (50:3)

Soluie standard A stoc: 50 g/mL din Meloxicam USP RS n Solventul A. Se dilueaz 2 mL

din aceast soluie cu Solventul B la 10 mL.

Soluie standard B stoc: se transfer cte 5 mg din Compusul nrudit cu meloxicamul B USP

RS i Compusul nrudit cu meloxicamul C USP RS ntr-un balon cotat de 100 mL. Se adaug

6 mL hidroxid de sodiu 0,4 N i se centrifugheaz n baia cu ultrasunete timp de 2 minute. Se

adaug 40 mL de metanol la soluia rezultat, se centrifugheaz n baia cu ultrasunete timp

de 2 minute i se dilueaz cu ap la volum.

Soluie standard: se transfer cte 1 mL din Soluia stoc standard A i Soluia stoc standard

B ntr-un balon cotat de 10 mL, se dilueaz cu Solventul B la volum i se amestec.

Soluie prob: se dizolv 20 mg Meloxicam n 10 mL de Solvent A i se dilueaz cu Solvent

B la 20 mL.

21

Sistemul cromatografic

(vezi Cromatografie , Validarea sistemului.)

Metod: cromatografie de lichide

Detector: UV cu lungime de unda variabil la 260 nm i 350 nm sau detector cu ir de

diode

Coloana: 4,6 mm x 25 cm; 5 m

Temperatura coloanei: 45 oC

Debit de eluie: 1mL/min

Volumul de injectie: 20 L

Validarea sistemului

Prob: Soluie standard

[Not: timpii de retenie relativi sunt prezentai n tabelul VI]

Condiii de validare

Deviatia standard relativ: NMT 5,0% pentru Compusul nrudit cu meloxicamul C la 350

nm i NMT 5,0% pentru Compusul nrudit cu meloxicamul B la 260 nm.

Analiza

Probe: Soluie standard si Soluie prob

Se calculeaz procentajul fiecarei impuritati in portiunea de Meloxicam analizat:

Rezultat = (rU /rS) x (CS/CU) x 100

rU = raspunsul picului pentru fiecare impuritate din Soluia prob

rS = raspunsul picului pentru Compusul nrudit cu meloxicamul corespunztor din Soluia

standard

CS = concentratia Compusul nrudit cu meloxicamul USP RS corespunztor din Soluia

standard (mg/mL). [Not: folosii concentraia Meloxicamului USP RS pentru

impuritile necunoscute.]

CU = concentratia Soluiei de prob (mg/mL)

Criteriu de acceptare: vezi tabelul VI.

22

Tabelul VI.

Substan Timp de retenie

relativ

Lungimea de und

(nm)

Criteriu de

acceptare, NMT

(%)

Meloxicam 1,0 260/350 -

Compus nrudit cu

meloxicamul Ba

0,8 260 0,1

Compus nrudit cu

meloxicamul Cb

3,2 350 0,1

Impuritate individual

necunoscut - 260/350 0,1

Toate impuritile - - 0,3

a 2-amino-5-metil-tiazol

b Izopropil-4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3-carboxilat-1,1-dioxid.

TESTE SPECIFICE

PIERDERE PRIN USCARE

Analiz: se usuc o prob la 105C timp de 4 ore.

Criteriu de acceptare: NMT 0,5%

CONDIII SUPLIMENTARE

STANDARDE DE REFERINE USP

Meloxicam USP RS

Compus nrudit cu Meloxicamul A USP RS

4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3- carboxilat de etil-1,1-dioxid.

Compus nrudit cu Meloxicamul B USP RS

2-amino-5-metil-tiazol.

Compus nrudit cu Meloxicamul C USP RS

Izopropil-4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3-carboxilat-1,1-dioxid.

[United States Pharmacopoeia, 2012]

23

I.2. Stadiul actual al cunoaterii privind analiza cantitativ a

meloxicamului

A. Metode spectrofotometrice

1. Dozarea spectrofotometric a meloxicamului din produse farmaceutice utiliznd

procedeul n flux continuu pe o serie de probe

Metodele se bazeaz pe formarea unui complex [2MX/Fe(III)] de culoare verde ntre

meloxicam (MX) si Fe(III), n mediu metanolic. Graficele de calibrare rezultate din

msurarea absorbanei la lungimea de und 570 nm sunt liniare pe domeniul 2,0-200 i 5,0-

250 mg/L, cu limita de detecie 0,47 mg/L, respectiv 0,72 mg/L. De asemenea, este

prezentat o metod spectrofotometric cu flux de injecie care presupune msurarea

absorbanei medicamentului n prezena NaOH 0,1 M la 362 nm. Curba de calibrare este

liniar pe domeniul 0,5-20 mg/L, avnd o limit de detecie de 0,04 mg/L. Metodele se

aplic analizei de rutin a meloxicamului din forme farmaceutice. [Garc a M.S. et al, 2000]

2. Dozarea spectrofotometric i fluorimetric a meloxicamului din forme dozate prin

formarea complexului cu safranina T

Metodele se bazeaz pe msurarea spectrelor de difereniere la lungimea de und 339,9-

384,7 nm (A) i pe formarea unui complex ntre meloxicam i safranina T cu msurarea

absobanei la 518 nm (C) i msurarea fluorescenei la 582 nm (D). Pentru a optimiza

formarea complexului au fost studiate toate variabilele. Legea Beer a fost respectat pe

domeniul de concentraie 2-10 g ml1 (metoda A), 1-10 g ml1 (metoda B), 4,0-12 g

ml1

(metoda C) i 0,4-1,2 g ml1 (metoda D). Limitele de detecie au fost 0,11; 0,07; 0,10;

0,33 i 8,74 103 g ml1 pentru metodele A,B,C, respectiv D. Metodele propuse au fost

aplicate cu succes n dozarea meloxicamului din tablete i supozitoare.[Ekram M.H., 2002]

3. Dozarea spectrofotometric a meloxicamului dup reacia cu FeCl3 (metoda A) i

reactivul Folin Cioclteu (metoda B)

Meloxicamul formeaz cu clorura feric i cu fericianura de potasiu un complex stabil

de culoare verde, prezentnd un maxim de absorbie la lungimea de und 770 nm (metoda

24

A), liniaritatea fiind verificat pe domeniul de concentraie 0,25-2,5 g mL1.Metoda B se

bazeaz pe formarea unui complex colorat n albastru la tratarea meloxicamului cu reactivul

Folin Cioclteu, prezentnd un maxim de absorbie la 740 nm. Complexul ce are n structur

gruparea cromofor, repect legea lui Beer n domeniul de concentraie 5-15 g ml1. [Reddy

M.N. et al, 2001]

4. Validarea unei metode spectrofotometrice n UV a meloxicamului din tablete

Pentru analiza meloxicamului din tablete a fost dezvoltat o metod

spectrofotometric UV simpl, exact i sensibil. Determinrile s-au fcut n tampon borat

100mM (pH 8,5), iar absorbana s-a msurat la 363 nm. Metoda dezvoltat a fost validat,

respectnd stabilitatea, linearitatea, precizia, exactitatea, selectivitatea, sensibitatea i

robusteea. Metoda a fost aplicat pentru determinarea meloxicamului din ase preparate

farmaceutice, incluznd dou forme dozate. Datele obinute prin aceast metod au fost

comparate cu datele din literatur obinute prin electroforez capilar. S-a concluzionat c

metoda dezvoltat a fost adecvat controlului calitii meloxicamului din preparatele

farmaceutice. [Nemutlu E., Kir S.2004]

5. Dozarea spectrofotometric UV-VIS a meloxicamului ca atare i din forme

farmaceutice

S-au dezvoltat dou metode simple, precise, rapide i sensibile pentru dozarea

meloxicamului ca atare i din tablete prin spectroscopie n UV (metoda A), n vizibil

(metoda B). n metoda A meloxicamul a fost analizat la 269 nm folosind ca solvent NaOH

0,1 M. Liniaritatea a fost determinat n domeniul de concentraie 5-30 g/mL cu un

coeficient de corelaie de 0,9995. n metoda B s-a folosit ca solvent soluia de NaOH 0,1 M

i ca agent cromogenic clorura feric 5%, iar cromogenul rezultat colorat n verde a fost

msurat la lungimea de und 476 nm, avnd domeniul de liniaritate 50-250 g/mL i

coeficientul de corelaie 0,9986. [Dhandapani B.et al.,2010]

6. Dezvoltarea i validarea unei metode spectrofotometrice pentru determinarea

cantitativ a meloxicamului ca atare i din forme farmaceutice dozate

Pentru determinarea cantitativ a meloxicamului ca atare i din forme farmaceutice

dozate au fost dezvoltate i validate dou metode UV simple, precise i economice.

25

Meloxicamul prezint un maxim de absorbie la 360 nm (Metoda A) i respectiv la 338 nm

(Metoda B). Legea Beer a fost respectat pe domeniul de concentraie 5-25 g/mL pentru

ambele metode. Metoda dezvoltat a fost validat innd cont de prevederile ICH

(International Conference on Harmonization), dovedindu-se a fi exact i precis. [Ananth V.

et al, 2011]

7. Dozarea spectrofotometric indirect a meloxicamului, tenoxicamului i

piroxicamului n forme farmaceutice

A fost propus o metod spectrofotometric indirect simpl i sensibil pentru

analiza meloxicamului (MX), tenoxicamului (TX) i piroxicamului (PX) n stare pur i din

preparate farmaceutice prin analiza cu flux de injecie. Metoda se bazeaz pe reacia de

oxidare a acestor medicamente cu un exces cunoscut de N-bromsuccinimid n mediu acid,

urmat de reacia cu acidul cloranilic. Valorile absorbanelor cresc liniar cu creterea

concentraiei medicamentelor. Sistemul a respectat legea Beer pe domeniul de concentraie

10-160, 20-200 i 10-160 g/mL pentru MX, TX i respectiv PX. Excipienii i aditivii nu au

interferat cu determinrile. Metoda a fost aplicat cu succes pentru dozarea MX, TX i PX n

diverse forme farmaceutice. Rezultatele obinute prin metoda propus au fost n concordan

cu cele gsite n metodele HPLC oficiale. [Al-Momani I.F., 2006]

8. Dozarea spectrofotometric a meloxicamului dup complexarea acestuia cu Al3+

Meloxicamul este un antiinflamator nesteroidian care are ca mecanism de aciune

inhibiia selectiv a ciclooxigenazei-2. Meloxicamul are proprieti antiinflamatoare,

analgezice i antipiretice. Pentru determinarea cantitativ, a fost dezvoltat o metod

spectrofotometric prin cuplarea meloxicamului cu Al3+ pentru a forma un compus colorat

stabil care prezint un maxim de absorbie la lungimea de und 375 nm. Metoda a prezentat

o bun liniaritate pe domeniul de concentraie 5-30 g/prob (coeficient de corelaie r =

0,9998). Limita de detecie (LD) a fost de 0,68 g/prob, iar limita de cuantificare (LQ) 2,25

g/prob. Au fost stabilite precizia sistemului (RSD =1,3794%), precizia metodei

(RSD=1,6045%) i exactitatea metodei (regsire medie 100,5% pe domeniul 97,7-102,7%).

[Mndrescu M. et al., 2009]

26

9. Dozarea spectrofluorimetric a meloxicamului i tenoxicamului n prezena

produilor lor de degradare

S-au dezvoltat, o metod spectrofotometric i una spectrofluorimetric pentru

determinarea meloxicamului (I) i tenoxicamului (II) n prezena produilor lor de

degradare: 5-metil-2-aminotiazol (III), acid benzotiazin carboxilic (IV) pentru meloxicam i

2-amino-piridin (V) i metil-4-hidroxi-2-metil-2H-tienol[2,3-e]-1,2-tiazin-3-carboxilat-1,1-

dioxid (VI) pentru tenoxicam. Ambele metode se bazeaz pe reacia de cuplare a acestor

medicamente cu clorhidratul de 3-metilbenzotiazolin hidrazona n prezena sulfatului de

amoniu ceric n mediu acid. Complecii rezultai sunt stabili i prezint un maxim de

absorbie la lungimea de und 450 nm pentru meloxicam i respectiv 465 nm pentru

tenoxicam. Metoda a fost aplicat pe domeniul de concentraie 2-20 g/mL. Metoda s-a

dovedit a fi indicatoare a stabilitii, deoarece nu s-au observat interacii cu produii de

degradare.

Pe aceelai principiu a fost dezvoltat o metoda fluorimetric pentru determinarea

meloxicamului i tenoxicamului n prezena produilor lor de degradare, intensitatea

fluorescenei fiind masurat la lungimea de und de 360 nm.

Aceasta metod a fost aplicat pe domeniul de concentraie 1-10 g/mL pentru

ambele medicamente, avnd acurateea medie de 99,880,49 i respectiv 99,901,02.

Metodele propuse au fost aplicate cu succes pentru dozarea celor doi oxicami, sub

forma de pulbere ca atare, din mixturi preparate n laborator coninnd procente diferite de

produi de degradare i din forme farmaceutice dozate. [Taha E.A. et al, 2002]

10. Determinarea spectrofotometric a meloxicamului i clorhidratului de tertacaina n

prezena produilor lor de degradare

Meloxicamul a fost determinat n prezena produilor si de degradare (5-metil-2-

aminotiazol)(III) i acid benzotiazin carboxilic (IV) prin dou metode. Aceste metode sunt

derivata spectrofotometric de ordinul nti la 338 nm i metoda densitometric TLC la 365

nm. Metodele au fost aplicabile pe domeniul de concentraie 5-20 g i 2-10 g, cu o

acuratee medie de 99,66 0,91% i respectiv 99,99 0,70%. [Bebawy L.I., 1998]

27

11. Determinarea spectrofotometric a meloxicamului ca atare i din formele sale

farmaceutice prin reacia cu nitroprusiatul de sodiu i 1,10-fenantrolina

Pentru determinarea cantitativ a meloxicamului ca atare i din formele sale

farmaceutice s-au dezvoltat dou metode spectrofotometrice simple i selective. Prima

metod se bazeaz pe reacia de transfer de electroni a meloxicamului cu nitroprusiatul de

sodiu n prezena tamponului amoniacal iar maximul de absorbie se nregistreaz la 363 nm

(Metoda A). A doua metod se bazeaz pe formarea unui complex cu clorura feric, urmat de

cuplarea cu 1,10-fenantrolina, iar maximul de absorbie se nregistreaz la 343 nm (Metoda

B). Ambele metode respect legea lui Beer pe domeniul de concentraie 4-20 g/mL pentru

Metoda A i respectiv 10-50 g/mL pentru Metoda B. Coeficienii de corelaie ntre

absorban i concentraiile corespunztoare de medicament au avut valori bune (0,9955-

0,9973). Deasememea au fost determinate limitele de detecie i de cuantificare pentru

ambele metode. S-a evaluat precizia n cadrul aceleiai zile i n zile diferite i acurateea

metodelor aplicate. [Gurupadayya B.M. et al.2013]

B. Metode HPLC

1. Dozarea meloxicamului din comprimate prin spectrofotometrie UV i cromatografie

de lichide de nalt performan

Pentru dozarea meloxicamului din comprimate s-au dezvoltat metode bazate pe

spectrofotometria UV i cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC). Metoda

HPLC a folosit o coloan C18 cu faz invers, avnd ca eluent un amestec de acid

trietanolacetic 0,05 M, tetrabutilamoniu i acetonitril cu detecie n UV la 360 nm, folosind

ca standard intern isoxicamul. Metoda UV s-a bazat pe determinarea absorbanei unei soluii

acide de medicament la 341 nm. S-au comparat parametrii: liniaritate, sensibilitate, precizie

i acuratee. Ambele metode au fost simple i rapide. Metoda HPLC a fost mai precis i cu

acuratee mai mare, n timp ce metoda UV a fost mai rapid. [ Joseph-Charles J.,Bertucat M.,

1999]

28

2. Metod HPLC indicatoare a stabilitii pentru determinarea meloxicamului ca atare

i din forme dozate

Scop: Prezentul studiu a fost realizat pentru a dezvolta o metod HPLC cu faza invers

indicatoare a stabilitii pentru determinarea meloxicamului din substana ca atare i din

preparate comerciale care s fie validat, rapid, simpl i economic.

Mod de lucru: analiza cromatografic cu faz invers s-a realizat pe o coloana C18 Hi Q Sil

cu acetonitril - ap - acid acetic glacial [55:40:5 (v/v/v)], debit de 1 mL/min cu detecie la

lungimea de und 355 nm. S-au efectuat teste de validare a sistemului, eseniale pentru a

asigura desfurarea eficient a metodei. Medicamentul a fost supus unor studii de degradare

accelerat n condiii de aciditate, bazicitate sau oxidative. Metoda a fost validat pentru

acuratee, precizie, reproductibilitate, specificitate, robustee, limit de detecie i limit de

cuantificare, conform cu prevederile ICH (International Conference on Harmonization).

Rezultate: Pentru meloxicam s-a obinut un singur pic avnd timpul de retenie 6,8 0,01

min. Valorile regresiei polinomiale pentru graficele de calibrare au demonstrat liniaritate

bun (r= 0,9995) pe domeniul de concentraie 4-20 g/ mL, iar ecuaia regresiei liniare a fost

y= 57257,38 x +3443,07. Acurateea a fost cuprins ntre 99,27 i 100,78%. Meloxicamul a

prezentat un pic de degradare mic n condiii de aciditate, cu timpul de retenie 2,24 min.

Limita de detecie a fost 360 ng/mL i limita de cuantificare 510 ng/mL.

Concluzie: metoda propus a avut o rezoluie bun pentru meloxicam i produii si de

degradare. Testele de validare a sistemului i analizele statistice fcute demonstreaz c

metoda este precis, exact i reproductibil deci poate fi folosit la analiza de rutin a

meloxicamului ca atare i din preparate farmaceutice. [Farzana S.B., Pradeep R.V., 2009]

Tabelul VII. Date din literatura de specialitate privind diferite metode HPLC

Nr.

Crt

Metoda

de

analiz

utilizat

Tip de prob

utilizat

Tip de

coloan

Faza mobil/ rata

fluxului

Detector,

lungimea

de und

Avantajele

metodei

Obs./

Referine

1.

HPLC cu

faz

invers

Meloxicam ca

atare i din

preparate

farmaceutice

C18 Hi Q

Sil

Acetonitril: ap:

acid acetic glacial

[55:40:5] (%v/v/v)

1mL/min

355 nm

Metod

rapid, simpl,

economic,

precis, exact

i

reproductibil

[Farzana

S.B.,

Pradeep

R.V.,

2009]

29

2.

HPLC cu

faz

invers

Meloxicam ca

atare, din forme

farmaceutice

dozate i din

plasm uman

C18 Hi Q

Sil

Acetonitril: ap:

acid acetic glacial

1%

[56:34:10]

(% v/v/v)

1mL/min

Detector

UV

362 nm

Metod

simpl,

economic,

sensibil i

selectiv,

precis,

reproductibil

[Shaji J.,

Varkey D.,

2012]

3.

HPLC cu

faz

invers

Meloxicam ca

atare i din

preparate

farmaceutice

C18 Hi Q

Sil

Metanol: ap: acid

ortofosforic [80:

19,9: 0,1] (% v/v/v)

1mL/min

360 nm

Metod

precis,

exact i

reproductibil

[Shaji J. et

al., 2011]

4.

HPLC cu

faz

invers

Meloxicam ca

atare i din

preparate

farmaceutice

Develosil

ODS

HG-5 RP

C18,

(15cm

4.6 mm,

i.d. 5m)

acetonitril: tampon

fosfat (pH 3,4)

[60:40]

1 mL/min

268 nm

Metod

simpl,

specific,

rapid, sigur,

reproductibil

i economic

[Sahoo

N.K. et al.

2014]

5.

HPLC cu

faz

invers

Meloxicam din

plasm uman

C18 cu

faz

invers

metanol: tampon

fosfat pH 3.2

[60:40]

v/v

346 nm

Metod

simpl, rapid,

specific i

sigur

[Abd

Elbary A.

et al.

2001]

6. LC-

MS/MS

Meloxicam din

plasm uman

folosind

piroxicamul ca

standard intern

C18

hypersil

gold,

(10 cm x

4.6 mm

i.d,

5 m)

metanol: ap- Milli-

Q: acid formic

[70:30:1] v/v/v

-

Metod

simpl, rapid,

selectiv i

sensibil

[ Ganesh

M. et al.

2013]

7.

HPLC

metod

isocratic

Analiza simultan

a tenoxicamului,

piroxicamului,

meloxicamului,

lornoxicamului

din preparate

farmaceutice

folosind ca

standard intern

isoxicamul

Coloan

Lichrosp

here

RP18

tampon acid

trietanolacetic:

reactiv

tetrabutilamoniu:tet

rahidrofuran:

acetonitril

detector

UV

360 nm

Metod

simpl i

rapid,

sensibil,

precis i

reproductibil

[ Joseph-

Charles J.,

Bertucat

M., 1999]

8. HPLC

Meloxicam din

probe biologice

folosind

piroxicamul ca

standard intern

Lichrocar

t RP-18

(125

4mm)

Metanol: acetonitril:

sol apoas de

diammonium

hidrogenorto-fosfat

(50 mM)

(4:1:5)

1 mL/min

Detector

UV

364 nm

Metod

simpl i

precis

[Velpandi

an T. et al.

2000]

30

C. Alte metode

1. Analiza meloxicamului din tablete prin electoforez capilar zonal

Pentru analiza meloxicamului a fost dezvoltat i validat o metod de dozare prin

electroforez capilar zonal. Influena concentraiei soluiei tampon, pH-ul soluiei tampon,

metanolul ca solvent, temperatura capilarului, voltajul aplicat i timpul de injectare au fost

investigate sistematic ntr-o coloan capilar cu silicagel (diametrul intern 50 m, lungime

44 cm). Rezultate optime s-au obinut folosind tampon borat 100 mM (pH 8,5) ce conine

5% metanol, temperatura capilarului de 25C, voltajul aplicat 20 kV i timpul de injectare de

3 secunde cu injecie hidrodinamic. Lungimea de und de detecie a fost setat la 205 nm.

Ca standard intern s-a folosit diflunisalul. Metoda a prezentat o bun selectivitate, acuratee,

precizie, liniaritate i sensibilitate, lund n considerare evaluarea parametrilor de validare.

Metoda a fost aplicat pentru dozarea a ase preparate farmaceutice incluznd dou forme

dozate. Deviaia standard relativ pentru 7 determinri repetate pentru fiecare prob a fost

mai mic de 0,66%. Rezultatele au fost comparate cu o metod spectrofotometric prezentat

n literatura de specialitate i nu s-au constatat diferene semnificative din punct de vedere

statistic. [Nemutlu E. et al., 2003]

2. Metod turbidimetric pentru determinarea meloxicamului folosind acidul acidul

fosfomolibdenic

Pentru determinarea meloxicamului s-a dezvoltat o metod turbidimetric, bazat pe

reacia meloxicamului cu acidul fosfomolibdenic n mediu de acid clorhidric, cu un maxim

de absorbie la 342 nm. Au fost stabilite condiiile practice de lucru. Metoda dezvoltat a fost

validat. Metoda prezint o bun liniaritate pe domeniul de concentraie 1,0 - 2,6 g/mL

(coeficient de corelaie r = 0,9995). Limita de detecie (LD) este de 0,29 g/mL, iar limita de

cuantificare (LQ) este de 0,95 g/mL. S-a stabilit precizia (RSD =1,79%) i exactitatea

(regsire medie 100,89% pe domeniul 98,45-103,22%). [Murarau A.E. et al., 2010]

31

3. Evaluarea activitatii citotoxice si antiproliferative a complecilor Co(II), Ni(II),

Cu(II) i Zn(II) cu meloxicamul la nivelul celulelor tumorale transformate de ctre

virusuri

Scopul acestui studiu fost de a evalua efectele complecilor Co(II), Ni(II), Cu(II) i

Zn(II) cu meloxicamul asupra viabilitii i proliferrii celulelor tumorale de cultur

transformate de ctre virusuri. Urmatoarele linii celulare permanente au fost folosite ca

sisteme de referin n acest studiu: LSCC-SF-Mc29 (hepatom transplantat la gin indus de

ctre virusul mielocitomatos Mc29) i LSR-SF-SR (sarcom transplantat la oarece indus de

virusul Rousa sarcomatulpina Schmidt-Ruppin). Studiul a presupus evaluarea citotoxicitatii

induse pe linia celular testat. Compuii testai au fost folosii ntr-un domeniu de

concentraie de 20-100 g/mL pentru 48 i 72 de ore. Rezultatele arat c aceti compui

scad semnificativ viabilitatea i proliferarea celulelor tratate, dependent de timp i

concentraie. [Culita C.D. et al., 2012]

4. Oxidarea electrochimic a meloxicamului i determinarea acestuia din tablete

Reacia oxidativ voltametric a meloxicamului la electrodul past de carbon a fost

studiat n prezena soluiilor tampon Britton-Robinson n domeniul de pH 2,0-11,5.

Meloxicamul a prezentat dou picuri voltametrice ce corespund oxidrii funciei amidice i

respectiv funciei enolice. Procesul de oxidare s-a dovedit a fi dependent de pH-ul

electrolitului suport. Folosind voltametria liniar, medicamentul a avut un rspuns

voltametric bine definit n prezena soluiei tampon Britton-Robinson la pH 3,0. Acest proces

a putut fi folosit la determinarea concentraiei meloxicamului n domeniul 5,0 x 10-7 5,0 x

10-5

M cu o limit de detecie de 1,6 x 10-7 M. Metoda a fost aplicat pentru determinarea

medicamentului din forme farmaceutice dozate, fr a interfera cu excipienii i a avut ca

rezultat o deviaie standard relativ acceptabil (RSD = 2,2%). [Radi A. et al. 2001]

32

I.3. Metode spectrofotometrice UV-VIS n controlul medicamentului

I.3.1. Aspecte generale

Spectrofotometria de absorbie n ultraviolet i vizibil este considerat ca una din

metodele clasice de analiz a medicamentelor, fiind o tehnic de analiz simpl, rapid i

relativ ieftin. Aceast metod are la baz absorbia radiaiilor luminoase din domeniul

ultraviolet i vizibil de ctre moleculele substanelor organice, absorbie care are ca rezultat

promovarea electronilor din orbitalii , sau n de la o stare inferioar de energie (de obicei

starea fundamental) la o stare excitat, mai bogat din punct de vedere energetic. Absorbia

luminii n UV-VIS are loc atunci cnd energia acesteia este suficient pentru a produce o

tranziie electronic care este asociat cu schimbri ale strii vibraionale i rotaionale ale

moleculei. Spectrele obinute prin absorbia acestor radiaii poart numele de spectre

electronice. n spectrofotometria de absorbie molecular se msoar absorbana unei probe

funcie de lungimea de und a radiaiei, cnd se obine un spectru care conine informaii

calitative i cantitative.

Din punct de vedere practic, semnificative pentru analiza structural organic sunt

domeniul ultraviolet cuprins ntre 180 i 400 nm i domeniul vizibil situat ntre 380 i 780

nm n care absorb substanele ce apar colorate ochiului uman.

Atunci cnd lumina strbate un strat de lungime l, ce conine o soluie de substan cu

concentraia c, intensitatea acesteia scade exponenial. (figura 2) [Boji M, 2004]

Figura 2. Atenuarea unui fascicul de radiaie I0 de ctre o soluie absorbant

33

Cantitativ, absorbia luminii este dat de legea Beer-Lambert care spune c

absorbana unei soluii este direct proporional cu grosimea stratului absorbant (l) i cu

concentraia soluiei (c).

A= log (I0/It) = = - log T

A = absorbana(extincie, densitate optic)

a = absorbtivitate sau coeficient de absorbie i este o constant pentru un sistem

substan-solvent

l = lungimea stratului absorbant (lungimea cuvei n care se afl soluia)

c = concentraia soluiei

I0 = intensitatea radiaiei incidente

It = intensitatea radiaiei transmise

T = transmitan = It/I0 = fraciunea fasciculului incident care nu este absorbit de

prob

Denumirea i valoarea lui a depind de unitatea de concentraie:

c = g/L A = acl unde a = absorbtivitate i a = g-1cm-1L

c = mol/L A = cl unde = absorbtivitate molar (coeficient molar de absorbie)

i = mol-1cm-1L

n analiza farmaceutic, concentraiile i cantitile sunt de regul exprimate n g sau

mg i mai puin n moli i de accea pentru determinri cantitative se lucreaz cu absorbana

specific (A1%1cm), care reprezint absorbana unei soluii cu concentraia de 1 g / 100 mL,

msurat n cuv de 1 cm.

Variaia liniar a absorbiei cu concentraia i cu grosimea stratului traversat explic

utilizarea legii Lambert-Beer n determinri cantitative.

Dac nu exist o dependen liniar ntre absorban i concentraie, condiiile de lucru

sau substana nu respect legea Lambert-Beer

La instituirea unei metode spectrofotometrice trebuie stabilit domeniul de concentraie

n care se respect legea Lambert-Beer (domeniul de liniaritate)

Condiii de aplicabilitate a legii Lambert-Beer:

lumina s fie monocromatic

concentraia substanei s fie mic (< 10-2 moli/L)

34

temperatura soluiei s fie constant pe timpul determinrii

dac absorbana nu este constant n timp trebuie stabilit intervalul de timp n care

intensitatea coloraiei a atins valoarea maxim i ct timp se menine constant

(citirea fcndu-se n acest interval de timp)

Legea Lambert- Beer nu poate fi aplicat atunci cnd pH-ul soluiei infueneaz

foarte mult absorbia

Legea Lambert-Beer nu se aplic la substane fluorescente sau la suspensii. [Brc

M, 2010]

I.3.2. Aparatura

Spectrele de absorbie se obin cu ajutorul spectrofotometrelor. n figura.....este

prezentat schematic un spectrofotometru de absorbie cu monofascicul, format din patru

componente principale: surs, monocromator, celul n care se introduce proba i detector.

Figura 3. Schema unui spectrofotometru de absorbie

O surs ideal ar trebui s emit o radiaie continu cu intensitate uniform pe un

domeniu larg de lungimi de und.

Elementele de dispersie au rolul de a descompune radiaia n componentele sale i pot

fi prisme, reele de difracie sau interferometre. Un dispozitiv special situat naintea

detectorului, ntrerupe fascicolul luminos i permite detectorului s msoare diferena ntre

cele dou semnale. Exist aparate cu doi detectori care msoar electronic diferena.

Celula (cuva) de absorbie are ferestre ce permit transmiterea radiaiilor fr s se

absoarb nmic.

35

Detectorul trebuie s fie sensibil la radiaia care cade pe el i s fie capabil s prezinte

spectrul pe un display sau un nregistrator. Spectrul poate fi nregistrat ca absorban sau

transmitan procentual n funcie de frecven, numere de und sau lungime de und.

Pentru domeniile UV apropiat i VIS sursele sunt lampa cu filament de tungsten pentru

vizibil i lampa cu descrcare n deuteriu, cu nveli de cuar pentru ultravioletul apropiat. O

surs foarte intes pentru ambele regiuni este lampa cu arc n xenon la nalt presiune.

Lampa produce radiaii pn la valori mai mici de 200 nm. Ferestrele cuvelor pentru probe

sunt din sticl Pyrex pentru vizibil i din cuar topit pentru vizibil i ultraviolet apropiat.

Elementele de dispersie pot fi prisme (din sticl pentru vizivil i din cuar pentru ultraviolet)

sau reele de difracie. Detectorii sunt fotomultiplicatori n care fotonii care cad pe suprafaa

unui metal, cum este cesiu, duc la emisia de electroni (fotoelectroni). Aceti electroni sunt

accelerai sub tensiune i cad pe suprafaa unui alt electrod, de unde n urma ciocnirilor cu

schimb de energie se emit un numr mai mare de electroni secundari, procesul repetndu-se

astfel nct se obine pe anod (ultimul electrod) un curent mare. Se mai pot folosi plci

fotografice sau detectori formai din iruri (barete) de fotodiode, care prezint avantajul de a

putea detecta un domeniu larg de lungimi de und n acelai timp. [Boji M, 2004]

Instrumentele cu care se efectueaz analiza spectral n UV-VIS sunt de mai multe tipuri:

Colorimetrele sunt dispozitive simple, de regul doar pentru domeniul vizibil, care

utilizeaz o singur surs de lumin. Selecia lungimii de und se face de regul manual i

poate fi continu (caz n care colorimetrul este adaptat cu un monocromator i un

dispozitiv de tip micrometric pentru selecia lungimii de und) sau n trepte (situaie n

care selecia se face cu filtre de tip trece band). Cu un colorimetru se pot face doar

citiri la lungime de und fix.

Spectrofotometrele monofascicul permit nregistrarea spectrelor de absorbie pentru o

singur prob. Spectrul de referin se obine prin nlocuirea cuvei cu prob cu o alt

cuv, identic din punctul de vedere al caracteristicilor, n care se afl soluia de referin

i nregistrarea noului spectru. n final, se scade din spectrul probei spectrul de referin.

Spectrofotometrele dublu-fascicul lumina trece simultan sau alternativ prin prob i

referin, fiind nregistrat n absorban diferena dintre cele dou cuve. Aceste

spectrofotometre opereaz dup principiul zero electronic: semnalele care parvin la

detector (cu lumina provenind de la prob, respectiv referin), dup amplificare, sunt

separate i transmise unui sistem poteniometric, care nregistreaz raportul intensitilor

36

lor (ceea ce se traduce, dup logaritmare, n diferena celor dou semnale).

Spectrofotometrele moderne fac aceast conversie printr-un microprocesor adecvat

ncorporat. Spectrofotometrele dublu-fascicul sunt dispozitive cu scheme complexe, care

de regul permit realizarea de analize de mare acuratee.

Figura 4. Schema bloc a unui spectofotometru UV-VIS cu dublu fascicul

S=surs; M=monocromator; P=prob; B=blank; D=detector

Seria V-500 este o serie de spectrofotometre cu dublu fascicul destinate msurtorilor de

absorban n domeniul: 190-1100 nm (V-530); 190-900 nm (V-550, V-560); 190-2500

nm (V-570).

Spectrofotometrele cu ir de diode sunt aparate de tip multicanal. Au avantajul de a

elimina prile mobile ale unui specrofofometru clasic i de a permite realizarea de

spectre simultan la toate lungimile de und. Dezavantajul lor const n faptul c puterea

de rezoluie este nc limitat la circa 2 nm (ceea ce mpiedic analiza benzilor foarte

nguste sau a structurii fine a substanelor). [Brc M., 2010]

I.3.3. Aplicaii ale spectrofotometriei UV-VIS n controlul medicamentului

Spectrofotometria de absorbie UV-VIS este utilizat n special pentru analiza

substanelor aduse n soluie (se recomand soluii diluate). n general, prin

spectrofotometrie de absorbie UV-VIS se realizeaz analize calitative (identificare i

puritate) i analize cantitative.

Pentru analize cantitative este aleas, de obicei, lungimea de und la care coeficientul

de absorbie al compusului de analizat este maxim.

S

37

Analiza calitiativ

Identificare

Identificarea substanelor se face dup curba de absorbie prin comparaie cu cea a unei

substane de referin, pe baza numrului maximelor i minimelor de absorbie i a lungimii

de und a acestor maxime i minime.

Cu ct spectrul are mai multe maxime i minime, cu att identificarea este mai sigur.

Determinarea trebuie completat cu teste chimice suplimentare (fizice, fizico-chimice)

deoarece spectrul singur nu constituie un mijloc sigur de identificare.

Determinarea puritii

Se poate efectua raportul absorbanelor sau diferena lor la dou lungimi de und

(apropiate) A1/A2 ; (A1 A2). Valoarea lor trebuie s fie cuprins ntre anumite valori

prevzute n monografia substanei respective.

Analiza cantitativ

Etapele analizei cantitative:

a) Alegerea solventului

Solvenii utilizai n spectroscopie trebuie s solubilizeze proba, s fie transpareni pentru

domeniul de lucru i s aibe o puritate avansat. Pentru fiecare solvent exist o lungime

de und limit de la care se poate folosi.

b) Selectarea lungimii de und - se face prin trasarea curbei care arat variaia

absorbanei funcie de lungimea de und.(fig.5)

Figura 5. Variaia absorbanei (A) funcie de lungimea de und ()

I. se prepar o soluie din solventul folosit+toi reactivii (fr substana de analizat) = Martor.

II. se prepar o soluie cu subst etalon (sr) de concentraie apropriat cu a soluiei de analizat.

III. se face o soluie etalon cu concentraie > dect a sol de analizat.

38

Se nregistreaz spectrele de absorbie ale celor 3 soluii.

Curbele de absorbie ale soluiilor II i III au aceeai alur cu maxim de absorbie la

aceeai la care solventul are absorbana minim.

c) Verificarea respectrii legii Lambert- Beer prin nregistrarea variaiei absorbanei n

funcie de concentraie

Se prepar soluii de diferite concentraii (C1- C6) cu substan etalon i se citesc

absorbanele (A1 A6) soluiilor la spectrofotometru (fig.6). Cu valorile absorbanei (A)

se traseaz curba etalon liniar.(fig.7)

Figura 6. nregistrarea spectrelor i determinarea absorbanelor

Figura 7. Curba etalon

C5 C6 C3 Cx C4 C2 C1

A1

A2

A4

Ax

A3

A5

A6

Concentraie

Absorban

C4

C3

C5

C6

max

C2

C1 A1

A2

A4

Ax

A3

A5

A6

Absorban

Lungime de

und

(nm)

39

Determinarea concentraiei analitului de interes

Dac se utilizeaz absorbana specific, notat cu , definit ca absorbana unui

strat de soluie cu grosimea de 1 cm, care conine 1 g de substan la 100 mL, se

poate calcula concentraia analitului dup formula:

C% (m/V) = A / ( 1)

X = concentraia soluiei prob, avnd absorbana A, la lungimea de und ,

n cuva de 1 cm

=absorbana specific (constant specific fiecrei substane la o

lungime de und dat).

Dac nu se utilizeaz absorbana specific, concentraia se poate determina prin

metoda standardului extern

X = concentraia soluiei prob, avnd absorbana Ap, la lungimea de und ,

n cuva de 1 cm

s = concentraia soluiei standard, avnd absorbana As, la lungimea de und

, n cuva de 1 cm

Uzual se folosesc urmtoarele formule de calcul:

Ap = absorban prob

Aet = absprban etalon

mp = mas prob luat n lucru

met = mas etalon luat n lucru

M20 = mas medie (determinat pe 20 de uniti dozate)

F = factor de diluie (dac este cazul)

40

Concentraia se mai poate determina cu ajutorul curbei etalon

Se prepar cel puin 6 soluii etalon de concentraii diferite, cunoscute, se citesc

absorbanele i se face curba etalon. Apoi se citete absorbana substanei de analizat (Ax),

iar prin interpolare se determin concentraia (Cx).(fig.8)

Cnd curba este o dreapt i trece prin origine, nseamn c se respect legea Lambert

Beer n domeniul de interes.[Brc M., 2010]

Figura 8. Determinarea concentraiei cu ajutorul curbei etalon

C5 C6 C3 Cx

C4

C2 C1

A1

A2

A4

Ax

A3

A5

A6

C

A

41

I.4. Soluii injectabile - prevederi monografii FR X,

Farmacopeea European 0520

I.4.1. Farmacopeea Romn ediia X

INIECTABILIA

Preparate injectabile

Preparatele injectabile sunt soluii, suspensii, emulsii sterile sau pulberi sterile care se

dizolv sau se suspend ntr-un solvent steril nainte de folosire; sunt repartizate n fiole sau

n flacoane i sunt administrate prin injectare.

Preparare. La preparare se iau precauiile necesare pentru asigurarea stabilitii

fizico-chimice, microbiologice i biologice.

Substanele active se prelucreaz sub form de soluii, suspensii sau emulsii

injectabile.

Pulberile pentru preparate injectabile se dizolv sau se disperseaz nainte de folosire

n volumul de solvent steril prevzut.

Solvenii folosii sunt apa, uleiul de floarea-soarelui i ali solveni neapoi miscibili

sau nu cu apa.

Apa folosit trebuie s corespund prevederilor monografiei Ap distilat pentru

preparate injectabile.

Uleiul de floarea-soarelui folosit trebuie s corespund prevederilor monografiei

Ulei de floarea-soarelui neutralizat.

Soluiile apoase injectabile care nu se pot steriliza n recipientul final se prepar pe

cale aseptic i pot conine un conservant antimicrobian potrivit.

Nu se admite adaosul conservanilor antimicrobieni n cazul preparatelor injectabile

folosite ntr-un volum mai mare de 10 mL, indiferent de modul de administrare, precum i n

cazul soluiilor care se administreaz intracisternal, intracardiac, peridural, intraocular,

intrarahidian, indiferent de volumul acestora.

Preparatele injectabile apoase se izotonizeaz prin adugarea clorurii de sodiu sau a

altor substane. Izotonizarea este obligatorie n cazul soluiilor injectabile care se

administreaz n volume de 5 mL sau mai mari. Soluiile coloidale injectabile nu se

izotonizeaz.

42

Preparatele injectabile se sterilizeaz printr-o metod adecvat conform prevederilor

de la monografia Sterilizare.

Recipientele i dopurile folosite trebuie s corespund condiiilor prevzute de

normele de calitate n vigoare.

Descriere. Aspect. Soluiile injectabile trebuie s fie limpezi, practic lipsite de

particule n suspensie. Determinarea se efectueaz pe 25 de fiole sau pe 10 flacoane care

conin pulbere pentru preparate injectabile dizolvat. Soluiile se examineaz dup cteva

rsturnri ale recipientelor n condiii de vizibilitate corespunztoare (n faa unui ecran de

50/50 cm jumtate alb, jumtate negru, ntr-un unghi perpendicular pe raza de lumin a unui

tub de neon sau a unui bec electric mat de 100 W).

Culoarea. O eventual coloraie nu trebuie s depeasc coloraia etalonului de

culoare prevzut n monografia respectiv.

Suspensiile injectabile dup agitare timp de 1-2 minute, trebuie s fie omogene.

Suspensiile injectabile trebuie s corespund probei de pasaj. Suspensia omogenizat prin

agitare se aspir n ntregime ntr-o sering de mrime adecvat, apoi se evacueaz ntr-un

recipient, sub forma unui jet continuu, prin acul de sering numrul 16. Dup 10 minute,

suspensia se agit din nou i se repet determinarea; volumul suspensiei trebuie s treac n

jet continuu prin acul de sering numrul 16.

Emulsiile injectabile trebuie s aiba un aspect omogen dup agitare i s nu prezinte

nici un semn de separare a fazelor.

pH. Se determin poteniometric.

Uniformitatea volumului. Volumul de lichid injectabil care trebuie introdus n fiole

este prevzut n tabelul VIII.

Tabelul VIII.

Volumul de lichid injectabil

declarat (mL)

Volumul de lichid care trebuie introdus n fiole (n mL)

i abaterea admis

Pentru lichide injectabile

apoase Pentru lichide vscoase

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

10,0

20,0

1,1 5%

2,2 5%

3,2 5%

4,25 5%

5,3 5%

10,5 3%

20,6 3%

1,2 5%

2,3 5%

3,3 5%

4,4 5%

5,5 5%

10,8 3%

21,0 3%

43

Excesul volumului de lichid injectabil adugat trebuie s asigure extragerea

volumului declarat.

Volumul de lichid se verific pe 10 fiole cu o sering potrivit.

Preparatele injectabile uleioase se nclzesc la 37 C naintea prelevrii coninutului

i se rcesc la 20 C naintea msurrii volumului.

Suspensiile injectabile trebuie agitate pn la omogenizare nainte de prelevarea

coninutului.

Uniformitatea masei. Se efectueaz n cazul pulberilor pentru preparate injectabile.

Se cntrete un flacon cu dop (fr armtura metalic) i se ndeprteaz pulberea

din flacon i de pe dop. Diferena dintre cele dou cntriri reprezint masa coninutului unui

flacon. Determinarea se repet pe nc nou flacoane i se calculeaz masa medie a

coninutului pe flacon.

Fa de masa medie calculat, masa individual a coninutului pe flacon poate s

reprezinte abaterile procentuale prevzute n tabelul IX, coloana A, pentru un singur flacon

se admit abaterile procentuale prevzute n coloana B.

Tabelul IX. Abateri de la masa medie a coninutului pe flacon

Masa medie a coninutului pe flacon Abatere admis

A B

Pna la 120 mg

120 mg pn la 300 mg 300 mg i mai mult de 300 mg

10%

7,5%

5%

20%

15%

10%

Impuriti pirogene. Dac n monografia respectiv se prevede controlul

impuritilor pirogene i se procedeaz conform prevederilor de la Impuriti pirogene

(IX.F.10).

Sterilitate. Preparatele injectabile trebuie s fie sterile. Se procedeaz conform

prevederilor de la Controlul sterilitii (IX.F.2).

Identificare. Conform monografiilor componentelor.

Dozare. n cazul soluiilor, suspensiilor i emulsiilor injectabile, dozarea se

efectueaz conform prevederilor din monografia respectiv. Pentru coninutul n substan

activ calculat procentual se admite o abatere de 5% fa de valoarea declarat, dac nu se

prevede altfel.

44

n cazul flacoanelor cu pulberi pentru preparate injectabile, dozarea se efectueaz

conform prevederilor din monografia substanei respective. Concentraia procentual n

substan activ se raporteaz la masa coninutului declarat. Pentru coninutul n substan

activ pe flacon se admit, fa de valoarea declarat, abaterile procentuale prevzute la

paragraful Uniformitatea masei.

Conservare. n recipiente nchise etan.

Observaie. La preparare toate operaiunile se efectueaz ntr-un ciclu continuu. [FR

X, 1993]

I.4.2. Farmacopeea european ediia 6.0, 0520

Preparate parenterale

Parenteralia

Cerinele monografiei nu se aplic neaprat produselor derivate din snge uman,

preparatelor imunologice sau celor radiofarmaceutice. Cerine speciale se pot aplica

preparatelor veterinare, n funcie de specia de animal pentru care este destinat preparatul.

DEFINIIE

Produsele parenterale sunt preparate sterile destinate administrrii prin injectare,

infuzie sau implantare n corpul uman sau animal.

Preparatele parenterale pot necesita folosirea de excipieni, de exemplu, pentru a face

preparatul izotonic cu sngele, pentru a ajusta pH-ul, pentru a mri solubilitatea, pentru a

preveni deteriorarea substanelor active sau pentru a furniza proprieti antimicrobiene

potrivite, dar nu pentru a afecta negativ aciunea medicinal destinat a preparatului, sau la

concentraia folosit, s cauzeze toxicitate sau iritaii locale nedorite.

Recipientele preparatelor parenterale sunt realizate din materiale care sunt suficient de

transparente pentru a permite inspecia vizual a coninutului, cu excepia implantelor sau n

alte cazuri justificate sau autorizate.

Acolo unde este cazul, recipientele pentru preparate parenterale corespund prevederilor

din Materiale utilizate pentru fabricarea recipientelor (3.1 si subseciuni) i Recipiente

(3.2 i subseciuni).

45

Preparatele parenterale sunt condiionate n recipiente de sticl (3.2.1) sau n alte

recipiente, cum ar fi recipientele din plastic (3.2.2, 3.2.2.1 i 3.2.9) i seringile preumplute.

Etaneitatea recipientului este asigurat prin mijloace adecvate. nchiderile asigur un sigiliu

bun, previn ptrunderea microorganismelor sau altor contaminani i de obicei permit

extragerea unei pri sau a ntregului coninut fr a nltura capacul. Materialele plastice sau

elastomerii (3.2.9) folosii pentru a fabrica sigiliile sunt suficient de stabile i elastice pentru

a permite ptrunderea unui ac, cu o scurgere de particule ct mai mic. Sigiliile pentru

preparatele multidoz sunt suficient de elastice pentru a asigura c puncia este resigilat

cnd acul este scos.

Se pot diferenia mai multe categorii de preparate parenterale:

- injecii

- infuzii

- concentrate pentru injecii sau infuzii

- pulberi pentru injectii sau infuzii

- geluri pentru injectii

- implanturi

PRODUCIE

n timpul fabricrii unui preparat parenteral, pentru formularea care conine un

consevant antimicrobian, eficacitatea consevantului ales trebuie s fie demonstrat la cererea

autoritii competente. O metod de testare adecvat mpreun cu criteriile de apreciere a

proprietilor conservantului din formulare sunt prevzute n Eficacitatea consevrii

antimicrobiene. (5.1.3).

Preparatele parenterale sunt fabricate utiliznd materiale i metode destinate s asigure

sterilitatea i s previn introducerea de contaminani i dezvoltarea microorganismelor.

Recomandrile privind aceste aspecte sunt prevazute n capitolul Metode de preparare a

produselor sterile (5.1.1).

Apa utilizat la prepararea produselor parenterale corespunde cerinelor apei pentru

preparate injectabile, stabilite n monografia Apa pentru preparate injectabile (0169).

TESTE

Contaminare cu particule: particule sub-vizibile (2.9.19)

Pentru preparatele de uz uman, soluiile pentru infuzii sau soluiile pentru injecii

corespund testului.

46

n cazul preparatelor injectabile cu administrare subcutanat sau intramuscular sunt

prevzute limite mai nalte. Preparatele radiofarmaceutice fac excepie de la aceste cerine.

Preparatele pe care eticheta menioneaz c produsul trebuie s fie folosit cu un filtru final

fac excepie de la cerine, cu condiia c s-a demonstrat c filtrul duce la formarea unei

soluii care corespunde cu testul.

Pentru preparatele pentru uz veterinar, cnd sunt furnizate n recipiente cu un coninut

nominal mai mare de 100 mL i cnd coninutul este echivalent cu o doz mai mare de 1,4

mL pe kilogram de masa corporal, soluiile pentru infuzii sau soluiile pentru injecii

corespund cu testul pentru contaminare cu particule: particule sub-vizibile.

Sterilitate (2.6.1)

Preparatele parenterale corespund cu testul pentru sterilitate.

CONSEVARE

n recipiente sterile, nchise etan, inviolabile.

ETICHETARE

Eticheta trebuie s menioneze:

- numele i concentraia oricrui consevant antimicrobian adugat,

- acolo unde este cazul, c soluia trebuie s fie utilizat n asociere cu un filtru final,

- acolo unde este cazul, c preparatul este lipsit de endotoxine bacteriene sau c este

apirogen.

Preparate injectabile

DEFINIIE

Preparatele injectabile sunt soluii, emulsii sau suspensii sterile. Sunt preparate prin

dizolvarea, emulsifierea sau suspendarea substanei/substanelor active i a tuturor

excipienilor adugai n ap, ntr-un solvent neapos corespunztor, care poate fi nesteril

unde este justificat, sau ntr-un amestec al acestor vehicule.

Soluiile pentru injecii, examinate n condiii corespunztoare de vizibilitate, sunt

limpezi i practic lipsite de particule.

Emulsiile pentru injecii nu prezint nici un senm de separare a fazelor. Suspensiile

pentru injecii pot prezenta un sediment care este uor dispersabil la agitare, formnd o

suspensie care ramne suficient timp stabil pentru a permite extragerea unei doze corecte.

47

Preparate multidoz

Injeciile apoase multidoz conin un conservant antimicrobian potrivit, la o

concentraie adecvat, cu excepia cazului cnd preparatul nsui are proprietai

antimicrobiene. Cnd un preparat pentru uz parenteral este prezentat ntr-un recipient

multidoz, sunt specificate precauiile care trebuie luate la administrare i, n mod particular,

la consevarea ntre dou administrri succesive.

Conservani antimicrobieni

Preparatele apoase care sunt preparate pe cale aseptic i care nu pot fi sterilizate la

final pot conine un consevant antimicrobian potrivit ntr-o concentraie adecvat.

Nu se adaug consevani antimicrobieni atunci cnd:

- volumul care se injecteaz ntr-o singur doz depaete 15 mL, dac nu se prevede altfel;

- preparatul este destinat pentru administrare pe ci pe care, din cauze medicale, un

conservant antimicrobian nu este acceptat, cum ar fi intracisternal, epidural, intratecal sau

pe orice cale care ofer acces la lichidul cerebrospinal, intra- sau retro-ocular.

Aceste preparate sunt condiionate n recipiente unidoz.

PRODUCIE

n fabricarea injeciilor ce conin particule dispersate, se iau msuri pentru a asigura o

dimensiune adecvat i controlat a particulelor, n ceea ce privete utilizarea destinat.

Preparate unidoz

Volumul injeciei dintr-un recipient unidoz este suficient pentru a permite extragerea

i administrarea dozei nominale, folosind o tehnic normal. (2.9.17)

TESTE

Uniformitatea unitailor de dozare

Suspensiile injectabile unidoz corespund cu testul pentru uniformitatea unitilor de

dozare (2.9.40) sau, unde este prevzut i autorizat, cu testul pentru uniformitatea

coninutului. Medicamentele i preparatele pe baz de plante prezente n forma de dozare nu

sunt subiectul dispoziiilor din acest paragraf.

Uniformitatea coninutului (2.9.6)

Suspensiile injectabile unidoz cu un coninut de substan activ mai mic de 2 mg sau

mai mic de 2% din masa total corespund cu testul A pentru uniformitatea coninutului

48

suspensiilor unidoz, cu exceptia cazului cnd este prescris sau justificat i autorizat altfel.

Dac preparatul conine mai mult de o substant activ, cerina se aplic doar acelor

substane care corespund condiiilor prevzute mai sus.

Endotoxine bacteriene pirogene

Se efectueaz testul pentru endotoxine bacteriene (2.6.14) sau, unde este justificat i

autorizat, testul pentru pirogene (2.6.8). Pentru limitele de endotoxinele bacteriene sunt date

recomandri n capitolul 2.6.14.

Preparate pentru uz uman