DEHIDRASI & PENJERNIHAN

Dehidrasi proses menarik air dr jaringan dgn

mengg bhn-bhn kimia ttt

Bhn kimia yg digunakan hrs:

• Mampu mengusir air dr jar dan menggantikan

tempatnya

• Bs diganti/bs bercampur dgn zat penjernih

• Tdk mengganggu zat yg tlh difiksir, mis menjadi

lunak/memperkeras

• Proses dehidrasi bertahap, spy air bs terusir dr jaringan dgn sempurna

• Dehidrasi dilakukan sesdh fiksasi/pencucian

• Dehidrasi material tbhan utk mengeluarkan air dr dlm jar tbhan

• Proses memskkan pot bhn tnm ke dlm seri

larutan dehidran pengeluaran air scr berthp

2 jenis dehidran : 1. Dehidran bkn pelrt parafin

2. Dehidran yg sekaligus

pelarut parafin

1. Dehidran bkn pelrt parafin

a. Alkohol/etanol, paling umum digunakan alkohol teknis (95%) dan alkohol absolut (100%)

- Seri lrtan alkohol (5,10,15-80%) dibuat dr alkohol teknis

Pencucian:

• Material yg difiksasi dlm FAA alk. 50%

• Material yg difiksasi dlm lrtan Craf I dan II alk 5% atau 10%

• Material yg difiksasi dlm lrtan Craf III, IV, V alk. 20% atau 30%

Interval wkt dehidrasi ditentukan oleh faktor:

• Ukuran material/bhn

• Mcm/jenis material

• Daya lrt dehidran yg digunakan

Penggunaan isopropil alk-etanol, metanol tdk diinginkan scr luas, mengakibatkan keracunan & merusak struktur material

b. Aseton memberikan hsl yg sangat baik,

pemakaiannya spt etanol, mdh menguap

c. Gliserin digunakan utk algae/material lunak

Ttk didih tinggi memungkinkan pengeluaran air dgn

cara penguapan:

1. Oven suhu 35-40° C

2. Desikator suhu ruang atau 35-40°C

3. Oven vacum/desikator vakum

Dehidrasi yg berlangsung berthp mencgh Plasmolisis

2. Dehidran yg sekaligus pelrt parafin.

a. n-Butanol dpt berfs sbg dehidran

dan clearing reagent

Seri larutan dehidrasi dgn n-Butanol

Tingkatan Butanol (%) Alk.pa (%) Air (%)

I 10 20 70

II 15 25 60

III 25 30 45

IV 40 30 30

V 55 25 20

VI 70 20 10

VII 85 15 0

VIII 100 0 0

• Mat yg difiksasi dlm lrtan fiksatif mengd air mat dicuci dgn aquades, didehidrasi dg etanol 30% lar seri n-Butanol (tahap I-VIII)

• Mat yg difiksasi dgn lar FAA dicuci dgn alk 50% lar. seri n-butanol (tahap II-VIII)

b. Tertier Butil Alkohol (TBA)

- Lrtan ideal, memberikan hsl yg lbh baik drpd

dehidran lainnya (etanol, isoprofil alk, aseton

atau xylene), harga lbh mhl, harum

Seri larutan dehidrasi dengan TBA

Tingkatan Alk.teknis (%)

Alk. pa (%)

TBA (%) Air (%)

I 50 10 40

II 50 20 30

III 50 35 15

IV 50 50

VI 25 75

• Mat yg difiksasi dgn lrtan FAA dicuci dgn alk. 50% lar seri n-Butanol (tahap I-V)

• Interval wkt setiap thp ± 2 jam memberikan hsl ckp baik, mat yg lbh krs (kayu) interval diperpnjg

• Setlh slsai thp V TBA murni dgn 3 x pergantian infiltrasi

c. Dioksan (Dietilen dioksida)

• Sangat beracun, pengg dlm ruang asam. Hsl ckp baik, thp lbh singkat, proses dehidrasi dpt dgn interval yg pjg

Proses :

Mat difiksasi dgn FAA Dicuci dgn alk 50% 3 seri lar. dioksan yaitu :

1. dioksan (1/2) + air (1/2)

2. Dioksan (2/3) + air (1/3)

3. Dioksan absolut/anhidrous (2 x pergantian)

Interval wkt pd msng-msng tktan dioksan berkisar 4-12 jam

PENJERNIHAN

Penjernihan Usaha utk membuat jar menjadi transparanTujuan : menggantikan dehidran dg infiltran (zat pelarut parafin) atau pelarut perekat (kanada balsem, entellan) pd jaringan

Pemilihan seny penjernih, berdasar :• Kecepatan bercampur/penghilangan etanol (dehidran)• Kecepatan bercampur/dihilangkan dengan infiltran atau zat perekat• Bersifat ramah terhdp lingkungan

Penjernihan dilakukan dlm 2 thp:

• Sesdh dehidrasi

• Sesdh dilekatkan pd gelas obyek (sesudah diwarnai, seblm direkatkan dgn gelas penutup)

Waktu yg diperlukan utk penjernihan, tergantung pd:

• Ketebalan & kepadatan jaringan

• Jenis zat kimia yg dipakai

• Jenis jaringan yg diproses

Penjernihan utk material tbhan:

Tujuan :

• Menggantikan dehidran dlm jar dgn pelrt parafin sbg persiapan menjelang proses penanaman dlm parafin

• Proses lanjutan dr dehidrasi dgn dehidran bkn pelrt parafin

• Menjadikan jar lbh transparan

• Lrtannya: xylene/xilol,kloroform, benzene, toluen, trikloroetilene, cedar oil

Larutan Penjernih:

a. Xylene

• Paling umum digunakan, beracun, mrh, daya kerja cpt ttp jar menjadi lbh rapuh drpd penggunaan dgn kloroform

• Proses berthp, xylene (pa) dicampur dgn alk (pa)

Hasil yg baik bila dilakukan dgn 10 tingkatan:

Seri larutan dealkoholisasi dgn xylene

Tingkatan Alkohol pa (%) Xylene pa (%)

I 75 25

II 50 50

III 25 75

IV 15 85

V 10 90

VI 5 95

VII 2,5 97,5

VIII 0 100

IX 0 100

X 0 100

Seri larutan dealkoholisasi dgn xylene

Tingkatan Alkohol pa (%) Xylene pa (%)

I 75 25

II 50 50

III 25 75

IV 15 85

V 10 90

VI 5 95

VII 2,5 97,5

VIII 0 100

IX 0 100

X 0 100

Interval wkt : ± 30 mnt pot bhn berukuran kcl ± 3 jam pot bhn yang lbh bsr Kombinasi lar yg umum digunakan: tahapan

I,II,III,VIII

b. Aseton + Xylene, dpt digunakan spt kombinasi diatas, memberikan hsl yg ckp baik

c. Kloroform, dpt digunakan sbg pengganti xylene dgn seri tingkatan yg sama, lbh mhl, tdk merapuhkan jaringan

Tahapan larutan:

1. Alk. pa (2/3) + kloroform (1/3)

2. Alk. pa (1/3) + kloroform (2/3)

3. Kloroform murni (min 1x)

d. Trikloroetilen pelarut parafin yg baik, dpt menggantikan fungsi xilene, tdk mdh terbakar, dpt melarutkan kanada balsem ttp tdk mempengaruhi pewarnaan

e. Cedar oil larutan clearing yg baik setelah didehidrasi dgn etanol

Prosesnya :

Cedar oil dituang ke dlm vial alk absolut yg berisi material dituang diatas lap cedar oil pot bhn akan tenggelam dan jar menjadi bersih alk dibuang (dgn pipet) cedar oil dihilangkan dgn pemberian xylene bbrp x

f. Benzene dan toluene dpt digunakan dlm clearing ttp mdh terbkr

Reaksi mikrokimia:

Lignin +Anilin sulfat kuning

Lignin + Phloroglucin-HCl Merah

ungu

Lignin + Zn Cl-J kuning

Lignin + Anilin + H2SO4 kuning

Lignin + Fuchsin + As pikrat merah

Selulosa + ZnCl-J ungu

Suberin, lemak, kutikula + Sudan III merah

Suberin + ZnCl-J coklat

Suberin + KOH kuning

Hemiselulosa + ZnCl-J biru pucat

Putih telur +Mullons reagens merah

TUGAS Browsing : 1. cara pembuatan preparat (daun, batang, akar atau modifikasinya) sayatan/whole mount/squash/ potongan (cs/ls/rs)

2. Pendahuluan Tinjauan Pustaka Metodologi Hasil dan Pembahasan Kesimpulan & DP