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Universidad de La Salle Universidad de La Salle
Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle
Ingeniería Ambiental y Sanitaria Facultad de Ingeniería
1-1-2009
Determinación de la concentración de inhibición media Determinación de la concentración de inhibición media
(CE50-120) del bario, hierro y manganeso mediante bioensayos (CE50-120) del bario, hierro y manganeso mediante bioensayos
de toxicidad acuática sobre semillas de lechuga (lactuca sativa l.) de toxicidad acuática sobre semillas de lechuga (lactuca sativa l.)
Karen Andrea Sánchez Ortiz Universidad de La Salle, Bogotá
Lina María Sánchez Melo Universidad de La Salle, Bogotá
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Citación recomendada Citación recomendada Sánchez Ortiz, K. A., & Sánchez Melo, L. M. (2009). Determinación de la concentración de inhibición media (CE50-120) del bario, hierro y manganeso mediante bioensayos de toxicidad acuática sobre semillas de lechuga (lactuca sativa l.). Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/ing_ambiental_sanitaria/61
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1
DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE INHIBICIÓN MEDIA (CE50-120)
DEL BARIO, HIERRO Y MANGANESO MEDIANTE BIOENSAYOS DE
TOXICIDAD ACUÁTICA SOBRE SEMILLAS DE LECHUGA (LACTUCA SATIVA
L.)
KAREN ANDREA SÁNCHEZ ORTIZ
LINA MARÍA SÁNCHEZ MELO
UNIVERSIDAD DE LA SALLE
FACULTAD DE INGENIERÍA, PROGRAMA DE AMBIENTAL Y SANITARIA
BOGOTÁ D.C.
2009
2
DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE INHIBICIÓN MEDIA (CE50-120)
DEL BARIO, HIERRO Y MANGANESO MEDIANTE BIOENSAYOS DE
TOXICIDAD ACUÁTICA SOBRE SEMILLAS DE LECHUGA (LACTUCA SATIVA
L.)
KAREN ANDREA SÁNCHEZ ORTIZ 41032141
LINA MARÍA SÁNCHEZ MELO 41032119
Tesis de Grado para Optar al Título de
Ingeniero (a) Ambiental y Sanitario (a)
Director
PEDRO MIGUEL ESCOBAR MALAVER
ING. QUÍMICO INDUSTRIAL
LIC. QUÍMICA Y BIOLOGÍA
UNIVERSIDAD DE LA SALLE
FACULTAD DE INGENIERÍA, PROGRAMA DE AMBIENTAL Y SANITARIA
BOGOTÁ D.C.
2009
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Nota de aceptación:
____________________________________
____________________________________
____________________________________
____________________________________
____________________________________
Firma de Director
____________________________________
Firma Jurado
____________________________________
Firma Jurado
Bogotá D.C., Diciembre de 2009
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Aquí y Ahora otra meta se ha cumplido con éxito, nuestro trabajo de grado es un
hecho, otra gran Bendición me ha sido dada, por eso quiero dar gracias a mi
Padre – Madre Dios, al Universo maravilloso y eterno porque ahora y siempre
recibo sus más grandes y poderosas Bendiciones, también quiero agradecer
infinitamente a mis Padres Liliana y Wilfredo por su apoyo incondicional, por su
gran respaldo en todos los sentidos, por incentivarme siempre a seguir adelante,
soy consciente del gran esfuerzo que hacen todos los días para que tengamos
siempre lo mejor.
A mi hermana Pau, a mis abuelitas y a toda mi familia y amigos por sus buenos
deseos y ayuda desinteresada, a Lina y Daniel por su gran colaboración desde el
comienzo de este proyecto, a los dos por ser mi apoyo y mi compañía, les deseo
grandes cosas.
Karen Andrea Sánchez Ortiz
5
Después de muchos esfuerzos para sacar adelante mi trabajo de grado le doy
gracias a Dios por darme la oportunidad de vivir, a la vida por darme la
oportunidad de tener una familia maravillosa, a mi madre por darme la oportunidad
de estudiar esta carrera en esta Universidad y darme el apoyo económico para
ello, a la Universidad por tener excelentes profesores de los cuales aprendí lo
valioso. A mis compañeros quienes siempre me ayudaron en los momentos
buenos pero sobretodo en los malos; para todos aquellos que no me veían cumplir
está meta.
A mis hermanos Kike y Diego gracias por todo; a Dany por su apoyo incondicional
y su entera confianza en mí.
Para mis amigos y compañeros, me llevare buenos recuerdos.
Lina María Sánchez Melo
6
AGRADECIMIENTOS
Las autoras expresan sus agradecimientos a:
Las personas por su apoyo en el transcurso de la investigación en especial al Ing.
Pedro Miguel Escobar quien fue la guía a lo largo de este trayecto; a nuestros
compañeros también tesistas del área de bioensayos quienes siempre
compartieron sus conocimientos para realimentar el trabajo y a quienes nos
permitieron la entrada a su empresa para la toma de la muestra sobre todo al
señor Lino Benavidez, punto clave para la realización del proyecto y conclusión de
la tesis.
Gracias a los estudiantes de intercambio Anina, Jonas y La polaca, quienes
colaboraron para hacer de este trabajo tanto un intercambio cultural como un
intercambio de conocimientos, fueron de gran ayuda dentro de todo el proceso
pues sin ellos no hubiéramos tenido la oportunidad de transmitir lo que esta
investigación significa para nosotras como estudiantes y el aporte que le brinda a
la legislación ambiental Colombiana, además de ser un gran refuerzo cuando nos
veíamos alcanzadas de tiempo.
Karen Andrea Sánchez Ortiz y Lina María Sánchez Melo
7
GLOSARIO
Agua residual: Desecho líquido proveniente de residencias, edificios,
instituciones, fábricas o industrias. (RAS 2000, título A, Capítulo A.12).
Bario: Metalurgia, industria del motor, cerámica y vidrio, industria química
(jabones, insecticidas, rodenticidas, contrastes radiológicos, etc.).
Toxicidad: debilidad muscular, hipertensión arterial, arritmias cardiacas, etc.
Bioensayo: Se emplean como herramientas para generar diagnósticos sobre los
efectos que puede generar un agente toxico sobre un organismo definido. Bajo
condiciones experimentales específicas y controladas. Esta relación se puede
determinar por (muerte, crecimiento, proliferación, multiplicación, cambios
morfológicos, fisiológicos o histológicos).
Carta control: Gráfico utilizado para seguir cambios a través del tiempo del punto
final medido para un compuesto tóxico de referencia. En el eje X se gráfica el
número de ensayo, y en el eje Y, la concentración tóxica efectiva.
CE50/CI50: Concentración efectiva o de inhibición media. Concentración del
material en agua, suelo o sedimento que se estima afecta al 50% de los
organismos de ensayo. La CE50 y sus límites de confianza (95%) son usualmente
derivados de análisis estadístico.
Contaminante: Se determina como una sustancia extraña, presente en un
sistema natural en una concentración más elevada de lo normal por causa de
actividad antrópica directa o indirecta. También se le define como la presencia de
cualquier agente físico, químico o biológico, en lugares, formas, concentraciones y
con una duración que sean nocivos para la salud, la seguridad o bienestar de la
población, o perjudiciales para la vida animal y vegetal.
8
Control positivo: Evaluación de la respuesta tóxica con una sustancia de
referencia, utilizada para controlar la sensibilidad de los organismos al momento
en el cual se evalúa el material problema.
Dosis letal 50 (DL50): Es la dosis única obtenida estadísticamente de una
sustancia de la que cabe esperarse que, administrada por vía oral, cause la
muerte a la mitad de un grupo de organismos en un tiempo determinado.
Fitotoxicidad: Se refiere a tóxicos que afectan a los vegetales. Efectos de
toxicidad en especies vegetales sensible.
Germinación: Se genera por medio del crecimiento del embrión una vez superado
el periodo de latencia y cuando las condiciones de temperatura, luz, disponibilidad
de oxígeno y agua son las adecuadas se desarrolla la plántula y da comienzo el
ciclo de vida.
Hierro: Utilizar su potencial magnético, productos siderúrgicos.
Toxicidad: El hierro en exceso se acumula en el hígado y provoca daños en este
órgano.
Hipocótilo: Porción del tallo de un embrión o de la plántula situado entre los
cotiledones y la radícula.
Lactuca sativa L. (Lechuga): Planta herbácea hortícola, propia de las regiones
templadas, comestible que tiene una alta sensibilidad a la presencia de agentes
extraños.
Manganeso: Como un agente desecante o catalizador en pinturas y barnices y
como decolorante en la fabricación de vidrio y en pilas secas. Se emplea como
blanqueador para decoloración de aceites y como un agente oxidante en química
analítica y preparativa.
9
Toxicidad: El manganeso en exceso es tóxico. Exposiciones prolongadas a
compuestos de manganeso, de forma inhalada u oral, pueden provocar efectos
adversos en el sistema nervioso, respiratorio, y otros.
Polutante: Es una sustancia que causa contaminación y por definición puede
causar algún efecto peligroso.
Radícula: Extremo basal del eje embrionario, raíz originada en la semilla y que
dará la raíz primaria.
Sulfato de Zinc (ZnSO4): Es un compuesto químico cristalino, incoloro y soluble
en agua, aunque siempre va acompañado de un determinado número de
moléculas de agua de hidratación.
Toxicaridad: Se menciona como la posibilidad de que produzca toxicidad, así
como el riesgo o peligrosidad, determinado por la probabilidad de que ocurra una
acción toxica.
Toxicidad aguda: Efecto adverso (letal o subletal) expuesto a los organismos de
ensayo en pruebas durante un periodo de exposición (usualmente de pocos días)
del material de ensayo.
Tóxico: Sustancia química que dependiendo de la concentración y tiempo de
exposición produce alteraciones bioquímicas, fisiológicas, estructurales o la
inhibición del organismo expuesto.
Tóxico de referencia: Compuesto químico orgánico o inorgánico utilizado en
pruebas de toxicidad con fines de control de calidad analítica de los organismos a
utilizar en las pruebas.
10
Toxicología Ambiental: La toxicología ambiental estudia los daños causados al
organismo por la exposición a los tóxicos que se encuentran en el medio
ambiente.
El objetivo principal de la toxicología ambiental es evaluar los impactos que
producen en la salud pública la exposición de la población a los tóxicos
ambientales presentes en un sitio contaminado. Es conveniente recalcar que se
estudian los efectos sobre los humanos, aunque pudieran existir, en el sitio de
estudio, otros blancos de los tóxicos tales como microorganismos, plantas,
animales, etc.
11
RESUMEN
En el presente trabajo de grado investigativa se desarrolló el estudio de los efectos
fitotóxicos que pueden generar los vertimientos de una empresa galvánica,
específicamente los vertimiento de Hierro y de Manganeso frente a un sistema de
organismos específicos como lo es la semilla de lechuga (Lactuca sativa L.), por
medio de baterías de ensayos, las cuales simularán el medio de impacto con el
agente toxico y los organismos expuestos.
Para establecer las características fitotóxicas que pueden desarrollar los
bioindicadores por la presencia de un agente tóxico se emplearon 20 pruebas
iníciales con Sulfato de Zinc (ZnSO4), para un tipo especifico de organismos como
son las semillas de lechuga (Lactuca sativa L.), con el propósito de determinar la
sensibilidad de las semillas al momento de exponer el organismo al agente tóxico
ya mencionado. Por medio de estas pruebas se obtuvieron diferentes promedios
de germinación en las semillas el cual fue menor que el propuesto dentro de sus
características, dándose un crecimiento menor del 85% evidenciando que la
exposición con el agente tóxico redujo más de un 15% la germinación de las
semillas. Así mismo, se comprueba que la semilla (Lactuca sativa L.) es un
organismo propicio para este tipo de estudios por su fragilidad a varianzas dentro
de su medio de desarrollo.
Antes de comenzar se determinó si las semillas tenían mejor germinación
lavándolas o sin lavar; se comprobó mediante 40 pruebas, 20 para semillas
lavadas y 20 para semillas sin lavar.
Las diferentes pruebas de esta investigación determinan los efectos tóxicos que
desarrollan los vertimientos de una empresa galvánica, se manejaron de la
siguiente forma: se realizaron 120 bioensayos durante el desarrollo del trabajo
investigativo, los cuales fueron divididos en tres fases, el primero con 20 pruebas
de sensibilidad, estas pruebas se desarrollaron con Sulfato de Zinc para
determinar el nivel de inhibición de los organismos expuestos. El segundo contó
con 10 pruebas para cada uno de los contaminantes estudiados, se emplearon
estas pruebas para obtener el nivel de inhibición con las sustancias puras para
12
cada una de ellas. La tercera empleó 5 pruebas con los vertimientos, los cuales se
realizaron para obtener la concentración de inhibición CE50 en que se encuentran
los vertimientos analizados.
Con el desarrollo de la investigación, se determinó la CE50 para el Sulfato de Zinc,
sustancias puras, vertimientos de Hierro y Manganeso, desarrollada por medio de
bioensayos; fue el más adecuado por la eficiencia que emplean los organismos
utilizados dentro de la investigación, así mismo los datos recopilados en cada una
de las pruebas las cuales toman un tiempo de 120 horas que era el tiempo de
exposición del agente tóxico, se convierte en una herramienta muy útil en el
control y verificación de la concentración tóxica de los vertimientos industriales, ya
que brinda resultados de manera inmediata y tienen un bajo costo al momento de
ser implementados para el reconocimiento de estos efectos perjudiciales.
13
ABSTRACT
In this thesis work is investigative study phytotoxic effects that can generate the
inputs of an electroplating company, specifically the dumping of iron and
manganese compared to a system of specific agencies such as the seeds of
lettuce (Lactuca sativa), in half battery of tests which assimilate the impact of toxic
agents and with the exposed organisms.
To set the feature can be phytotoxic to develop biomarkers for the presence of a
toxic agent used 20 initial tests with Zinc Sulfate (ZnSO4), for a specific type of
organisms such as seeds of lettuce (Lactuca sativa L.), with to determine the
sensitivity of the seeds when exposing the body to toxic agents mentioned above.
Through these tests was the average germination of seeds which was lower than
the one proposed in their characteristics, with a growth of 85% showing that
exposure to toxic agents reduced by nearly 15% germination of seeds. It also
found that the seed (Lactuca sativa) is an agency for such studies to their frailty
variances within their development environment.
Before it was determined whether the seeds had better germination washing or
unwashed, was checked by 40 test, 20 for seeds and 20 seed washed and
unwashed.
The different tests of this investigation to determine the toxic effects of discharges
develop an electroplating company, they were managed as follows. 120 bioassays
were performed during the development of research, which were divided into three
phases or steps. The first included 20 tests for sensitivity tests were conducted
with Zinc Sulfate to determine the level of inhibition of exposed organisms. The
second included 10 tests for each of the pollutants studied, these tests were used
to obtain the level of inhibition with the pure substances to each of them. The third
had 5 tests discharges which were made for inhibition concentration CE50 that
dumping is analyzed.
With the development of the investigation, the CE50 for Zinc Sulfate, pure
substances, dumping of iron and manganese, that the approach to research
conducted by Bioassays. It was the best for the efficiency employing agencies
14
used in research, as well as data collected in each of the tests which took a while
for that 120 hours was the time of exposure of toxic agents. And becomes a useful
tool in monitoring and verification of the concentration of toxic industrial dumping,
as it provides immediate results and have a low cost at the time of being
implemented for the recognition of these toxic effects.
15
LISTA DE TABLAS
Tabla 1. Legislación ambiental. 72
Tabla 2. Cuadro comparativo de trabajos hechos con control positivo
de ZnSO4 con CEmg/L. 77
Tabla 3. Características de la semilla Lactuca sativa L. 81
Tabla 4. Material empleado para los bioensayos realizados con Lactuca
sativa L. 83
Tabla 5. Resultados del CE50 de las pruebas de sensibilidad con ZnSO4. 95
Tabla 6. Pruebas de sensibilidad. 98
Tabla 7. Tratamientos ANOVA para las pruebas de sensibilidad. 98
Tabla 8. Resultados ANOVA para las pruebas de sensibilidad. 98
Tabla 9. Resultados ANOVA para todas las pruebas de sensibilidad. 99
Tabla 10. Porcentaje de germinación dosis-respuesta. 100
Tabla 11. Mediciones del crecimiento para la radícula y el hipocótilo
en las pruebas de sensibilidad (mm). 102
Tabla 12. La CE50 registrada con las pruebas de Bario. 104
Tabla 13. Pruebas de Bario a partir de la sustancia pura. 107
Tabla 14. Tratamientos ANOVA para las pruebas de Bario con sustancia
pura. 107
Tabla 15. Resultados ANOVA para las pruebas de Bario con sustancia
pura. 107
Tabla 16. Resultados ANOVA para todas las pruebas de Bario a partir
de la sustancia pura. 108
Tabla 17. Paralelo de concentración Vs geminación. 108
Tabla 18. Mediciones del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en
pruebas de Bario a partir de la sustancia pura (mm). 111
Tabla 19. Inhibición media de la población afectada con Hierro a partir
de la sustancia pura. 114
Tabla 20. Pruebas de Hierro a partir de la sustancia pura. 114
Tabla 21. Tratamientos ANOVA para las pruebas de Hierro con sustancia
16
pura. 114
Tabla 22. Resultados ANOVA para pruebas de Hierro a partir de la
sustancia pura. 115
Tabla 23. Resultados ANOVA para todas las pruebas de Hierro a partir
de la sustancia pura. 115
Tabla 24. Porcentaje de germinación Vs concentración. 117
Tabla 25. Mediciones del crecimiento de la radícula y el hipocótilo en las
pruebas con Hierro a partir de la sustancia pura. 119
Tabla 26. Inhibición media de la población afectada con Manganeso a
partir de la sustancia pura. 122
Tabla 27. Pruebas de Manganeso a partir de la sustancia pura. 122
Tabla 28. Tratamientos ANOVA para las pruebas de Manganeso con
sustancia pura. 122
Tabla 29. Resultados ANOVA para pruebas de Manganeso a partir de
la sustancia pura. 123
Tabla 30. Resultados ANOVA para todas las pruebas de Manganeso
a partir de la sustancia pura. 123
Tabla 31. Porcentajes de germinación Vs concentración. 123
Tabla 32. Mediciones del crecimiento de la radícula y el hipocótilo en las
pruebas con Manganeso a partir de la sustancia pura. 127
Tabla 33. Inhibición media para el vertimiento de Hierro. 129
Tabla 34. Pruebas del vertimiento de Hierro provenientes de la industria. 129
Tabla 35. Tratamientos ANOVA para pruebas del vertimiento de Hierro. 129
Tabla 36. Resultados ANOVA para pruebas del vertimiento de Hierro. 130
Tabla 37. Resultados ANOVA para todas las pruebas del vertimiento de
Hierro. 130
Tabla 38. Porcentaje de germinación Vs concentración. 130
Tabla 39. Mediciones del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en
pruebas del vertimiento de Hierro. 132
Tabla 40. Inhibición media de la población para pruebas del
vertimiento de Manganeso. 133
17
Tabla 41. Pruebas del vertimiento de Manganeso proveniente de la industria. 136
Tabla 42. Tratamientos ANOVA para pruebas del vertimiento de Manganeso. 136
Tabla 43. Resultados ANOVA para pruebas del vertimiento de Manganeso. 137
Tabla 44. Resultados ANOVA para todas las pruebas del
vertimiento de Manganeso. 137
Tabla 45. Porcentaje de germinación Vs concentración. 137
Tabla 46. Mediciones del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en
pruebas con el vertimiento de Manganeso. 139
Tabla 47. Mediciones de los parámetros fisicoquímicos para cada una
de las concentraciones manejadas en las pruebas. 142
Tabla 48. Resumen resultados de pruebas de sensibilidad con ZnSO4. 143
Tabla 49. Resumen resultados de pruebas de Hierro para la sustancia pura. 143
Tabla 50. Resumen resultados de pruebas de Bario para la sustancia pura. 143
Tabla 51. Resumen resultados de pruebas de Manganeso para la sustancia
pura. 143
Tabla 52. Resumen resultados de pruebas del vertimiento de Hierro. 143
Tabla 53. Resumen resultados de pruebas del vertimiento de Manganeso. 144
18
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Procesos de germinación. 36
Figura 2. Tabla usada para determinar la varianza. 70
Figura 3. Estructura de la prueba de toxicidad utilizando semilla de lechuga. 78
Figura 4. Retomada de: BULUS ROSSINI, Gustavo Daniel; DÍAZ BAEZ,
María Consuelo; PICA GRANADOS, Yolanda, Capítulo 4. Protocolos de
Ensayo. Diciembre de 2004. 80
Figura 5. Esquema de plántula de Lactuca sativa L. al finalizar el
periodo de exposición. 93
19
LISTA DE GRÁFICAS
Gráfica 1. Carta control para el Sulfato de Zinc. 97
Gráfica 2. Comparación dosis-respuesta con Sulfatos de Zinc. 100
Gráfica 3. Medición del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en las
pruebas de sensibilidad. 103
Gráfica 4. Carta control para el Bario a partir de la sustancia pura. 106
Gráfica 5. Dosis-respuesta. 109
Gráfica 6. Medición del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en
pruebas de Bario a partir de la sustancia pura (mm). 110
Gráfica 7. Carta control para Hierro a partir de la sustancia pura. 113
Gráfica 8. Dosis-respuesta del Hierro a partir de la sustancia pura. 116
Gráfica 9. Medición del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en
pruebas de Hierro a partir de la sustancia pura. 118
Gráfica 10. Carta control para Manganeso a partir de la sustancia pura. 121
Gráfica 11. Dosis-respuesta del manganeso a partir de la sustancia pura. 124
Gráfica 12. Medición del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en
pruebas de Manganeso a partir de la sustancia pura. 126
Gráfica 13. Carta control para el vertimiento de Hierro. 128
Gráfica 14. Dosis-respuesta en pruebas con vertimiento de Hierro. 131
Gráfica 15. Paralelo de la elongación en las diferentes pruebas con el
vertimiento de Hierro. 132
Gráfica 16. Carta control para el vertimiento de Manganeso. 135
Gráfica 17. Dosis-respuesta del vertimiento de Manganeso. 138
Gráfica 18. Medición del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en
pruebas del vertimiento de Manganeso. 140
20
LISTA DE FOTOGRAFÍAS
Foto 1. Semillas Lactuca sativa L. germinadas. 32
Foto 2. Germinación en pruebas toxicas. 35
Foto 3. Montaje pruebas de sensibilidad. 84
Foto 4. Elaboración y montaje de la siembra. 86
Foto 5. Medición de los efectos en los organismos. 87
Foto 6. Montaje de sustancias puras. 87
21
LISTA DE DIAGRAMAS
Diagrama 1. Preparación de las diluciones. 85
Diagrama 2. Diluciones de las sustancias puras. 88
Diagrama 3. Diagrama de flujo de la metodología. 90
22
LISTA DE ANEXOS
Anexo A. Análisis De Resultados, Mediante El Método De Probit para el ZnSO4 153
Anexo B. Análisis De Resultados, Mediante El Método De Probit para el BaCl2 174
Anexo C. Análisis De Resultados, Mediante El Método De Probit para el FeCl2 185
Anexo D. Análisis De Resultados, Mediante El Método De Probit para el MnO2 196
Anexo E. Análisis De Resultados, Mediante El Método De Probit para el
Vertimiento de Hierro. 207
Anexo F. Análisis De Resultados, Mediante El Método De Probit para el
Vertimiento de Manganeso. 213
Anexo G. Informe de resultados de la medición de la concentración de los
metales en el laboratorio certificado. 219
23
TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCIÓN 27
JUSTIFICACIÓN 28
OBJETIVOS 30
OBJETIVO GENERAL 30
OBJETIVOS ESPECIFICOS 30
1. MARCO TEÓRICO 31
1.1 INVESTIGACIONES EN EL ORDEN AMBIENTAL 31
1.2 PLANTAS INVOLUCRADAS (ESPECIES BIOLOGICAS) EN EL MANEJO DE LA
INVESTIGACIÓN 31 1.2.1 Lactuca sativa L. (Lechuga) 32 1.2.2 Semillas y su comportamiento 33 1.2.3 Germinación de las plantas 34 1.2.4 Introducción a la germinación 35 1.2.5 Formación de la plántula 37
1.3 TÓXICOLOGIA 37 1.3.1 Compuesto tóxico 38 1.3.2 Dosis letal media (DL50) 38 1.3.3 Concentración Letal Media (CL50) 38 1.3.4 Concentración de Inhibición letal media (CE50) 38 1.3.5 Clasificación de los agentes tóxicos 39
1.3.5.1 Por su origen 39 1.3.5.2 Por su estado físico 39 1.3.5.3 Por su estructura química 39 1.3.5.4 Por efecto que produce en la semilla 39
1.3.6 Tipos de exposición 40 1.3.6.1 Exposición aguda 40 1.3.6.2 Exposición repetitiva 41
1.4 ECOTÓXICOLOGÍA AMBIENTAL 41
1.5 ENSAYOS DE TOXICIDAD O BIOENSAYOS 44 1.5.1 Criterios generales de selección 47 1.5.2 Bioensayos en el medio ambiente 47 1.5.3 Manejo del tóxico de referencia 48 1.5.4 Pruebas de sensibilidad 49 1.5.5 Carta control 49 1.5.6 Evaluación de aspectos (CL50/CE50/CI50, NOEC, LOEC) 50 1.5.7 Curva dosis-respuesta 51
1.6 BIOENSAYOS CON PLANTAS 52
24
1.6.1 Fitotoxicidad en plantas 54 1.6.2 Bioconcentración 54 1.6.3 Bioacumulación 55 1.6.4 Biomagnificación 55 1.6.5 Bioestimulación 55 1.6.6 Necrosis 56 1.6.7 Ensayo de toxicidad con semillas de lechuga Batavia (Lactuca Sativa L.) 56
1.7 CONTAMINACIÓN DEL MEDIO ACUÁTICO 57 1.7.1 Tipos de contaminantes acuáticos 58
1.7.1.1 Contaminantes físicos 58 1.7.1.2 Contaminantes químicos 58 1.7.1.3 Índice de calidad 59
1.7.2 Toxicidad de efluentes 60 1.7.2.1 Bario 60
1.7.2.1.1 Efectos del Bario sobre la salud 62 1.7.2.1.2 Efectos ambientales del Bario 62
1.7.2.2 Hierro 63 1.7.2.2.1 Efectos del Hierro sobre la salud 65 1.7.2.2.2 Efectos ambientales del Hierro 65
1.7.2.3 Manganeso 65 1.7.2.3.1 Efectos del Manganeso sobre la salud 66 1.7.2.3.2 Efectos ambientales del Manganeso 67
1.8.1 Análisis por método PROBIT 69 1.8.2 Análisis de varianza (ANOVA) 70
1.9 INDUSTRIA GALVANICA 71 1.9.1 Descripción del sector galvánico 71 1.9.2 El proceso galvánico 72
1.10 MARCO NORMATIVO 72
2. ANTECEDENTES 75
3. METODOLOGÍA 78
3.1 PRIMERA ETAPA 78 3.1.1 Diseño general de las pruebas eco-toxicológicas 78
3.1.1.1 Variable independiente 79 3.1.1.2 Variables dependientes 79 3.1.1.3 Constantes 79
3.1.2 Esquema general del procedimiento de prueba de toxicidad con semillas 79 3.1.3 Reactivos y materiales 80
3.1.3.1 Selección de material biológico 80 3.1.3.2 Tóxico de referencia 81 3.1.3.3 Material de laboratorio seleccionado 82
3.1.4 Montaje de las pruebas de sensibilidad 84 3.1.4.1 Preparación de las diluciones 85 3.1.4.2 Siembra de semillas 86 3.1.4.3 Mediciones de efecto 86
3.2 SEGUNDA ETAPA 87
25
3.3 TERCERA ETAPA 87 3.3.1 Montaje de las pruebas de sustancias puras 87 3.3.2 Preparación de las diluciones 88 3.3.3 Siembra de semillas 88 3.3.4 Mediciones de efecto 89 3.3.5 Caracterización del vertimiento 89 3.3.6 Montaje de Pruebas del vertimiento 89 3.3.7 Preparación de las diluciones 89 3.3.8 Siembra de semillas 90 3.3.9 Mediciones del efecto tóxico 90
3.4.1 RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS 93 3.4.1.1 Pruebas De Sensibilidad Con Sulfato De Zinc (ZnSO4) 94 3.4.1.2 Sensibilidad Valor de la concentración efectiva media (CE50) 94 3.4.1.3 Carta control para el Sulfato de Zinc 95 3.4.1.4 Análisis ANOVA para las pruebas fitotóxicas con Sulfato de Zinc 98 3.4.1.5 Relación Dosis-Respuesta con Sulfato de Zinc (ZnSO4) 100 3.4.1.6 Medición de la radícula y hipocótilo para pruebas de Sulfato de Zinc (ZnSO4) 101
3.4.2 ANÁLISIS DE PRUEBAS TÓXICOLÓGICAS DE BARIO, HIERRO Y MANGANESO A
PARTIR DE CLORURO DE BARIO, CLORURO FERROSO Y ÓXIDO DE MANGANESO 103 3.4.2.1 Bioensayos realizados con sustancias puras 104
3.4.3 VALOR DE LA CONCENTRACIÓN MEDIA DE INHIBICION (CE50) PARA EL BARIO A
PARTIR DE LA SUSTANCIA PURA (BaCl2) 104 3.4.3.1 Carta de control para Bario a partir de la sustancia pura 105 3.4.3.2 ANOVA de Bario a partir de la sustancia pura 107 3.4.3.3 Relación dosis-respuesta para el Bario 108 3.4.3.4 Mediciones de la longitud de la radícula y el hipocótilo para el Bario 109
3.4.4 VALOR DE LA CONCENTRACIÓN MEDIA DE INHIBICION (CE50) PARA EL HIERRO A
PARTIR DE LA SUSTANCIA PURA (FeCl2) 111 3.4.4.1 Carta de control del Hierro a partir de la sustancia pura 112 3.4.4.2 ANOVA de Hierro a partir de la sustancia pura 114 3.4.4.3 Relación dosis-respuesta para Hierro 115 3.4.4.4 Mediciones de la longitud de la radícula y el hipocótilo para el Hierro a partir de la
sustancia pura 116
3.4.5 VALOR DE LA CONCENTRACIÓN MEDIA DE INHIBICION (CE50) PARA EL MANGANESO
A PARTIR DE LA SUSTANCIA PURA (MnO2) 118 3.4.5.1 Carta de control del Manganeso a partir de la sustancia pura 119 3.4.5.2 ANOVA de Manganeso a partir de la sustancia pura 122 3.4.5.3 Relación dosis-respuesta para Manganeso 123 3.4.5.4 Mediciones de la longitud de la radícula y el hipocótilo para el Manganeso a partir de la
sustancia pura 124
3.4.6 VALOR DE LA CONCENTRACIÓN EFECTIVA MEDIA (CE50) PARA EL VERTIMIENTO DE
HIERRO 126 3.4.6.1 Carta de control para el vertimiento de Hierro de la Industria Galvánica 127 3.4.6.2 ANOVA para el vertimiento de Hierro 129 3.4.6.3 Relación dosis-respuesta para vertimiento de Hierro 130 3.4.6.4 Medición de la Longitud de la radícula y el hipocótilo para vertimiento de Hierro 131
26
3.4.7 VALOR DE LA CONCENTRACIÓN EFECTIVA MEDIA (CE50) PARA EL VERTIMIENTO DE
MANGANESO 133 3.4.7.1 Carta de control para el vertimiento de Manganeso de la Industria Galvánica 133 3.4.7.2 ANOVA para el vertimiento de Manganeso 136 3.4.7.3 Relación dosis-respuesta para vertimiento de Manganeso 137 3.4.7.4 Medición de la longitud de la radícula y el hipocótilo para el vertimiento de Manganeso 138
3.4.8 DETERMINACIÓN DEL ÍNDICE DE EFECTO TÓXICO POTENCIAL 140 3.4.8.1 Índice Toxicológico del Vertimiento de Hierro 140 3.4.8.2 Índice Toxicológico del Vertimiento de Manganeso 141
CONCLUSIONES 145
RECOMENDACIONES 148
BIBLIOGRAFIA 149
ANEXOS 152
27
INTRODUCCIÓN
El desarrollo industrial cada día es mayor para satisfacer las necesidades de los
seres humano; este tipo de desarrollo solo se puede realizar con una fuente de
materia prima la cual impacta la mayoría de las veces en los recursos naturales;
con el incremento y uso irracional de los recursos naturales durante la fabricación
de diferentes elementos los cuales degradan el medio y por su mal manejo y
disposición final impactan recursos fundamentales como el agua, suelo con los
vertimientos y el aire con las emisiones atmosféricas.
Con la contaminación generada en estos procesos se han establecido diferencias
en el ambiente que preocupan a la población y exigen medidas de control y
prevención con el fin de reducir los efectos en el medio, para asegurar un futuro a
las generaciones venideras.
Como proceso de prevención y control se establecieron los bioensayos de
toxicidad los cuales son pruebas en las que un organismo o grupo de organismos
son utilizados como agentes para determinar la potencia de cualquier sustancia
fisiológicamente activa. Estos ensayos permiten hallar la toxicidad de diferentes
compuestos y conocer la sensibilidad de las diversas especies, determinando los
efectos de las sustancias ensayadas (Alcázar, 1988). Los bioensayos utilizando
cepas de semillas son un importante indicador de toxicidad, ya que evidencia de
una forma rápida y clara los posibles efectos fitotóxicos que una sustancia puede
llegar a causar en organismos vegetales.
Con la presente investigación se determina la Concentración de inhibición media
(CE50) durante la exposición con los diferentes agentes tóxicos con los que se
estableció esta investigación frente al bioindicador determinado por sus cualidades
de germinación y pureza denominado semilla de lechuga Batavia (Lactuca sativa
L.). Se establecen las diferencias durante cada una de las fases y se encuentran
los índices de efecto tóxico con cada uno de los agentes tóxicos como son el
Sulfato de Zinc, Cloruro Ferroso, Cloruro de Bario, Óxido de Manganeso,
vertimiento de Hierro y vertimiento de Manganeso.
28
JUSTIFICACIÓN
Este proyecto se genera con la necesidad de darle prioridad a temas de
ingeniería ambiental, ya que la presencia de metales y sustancias orgánicas
complejas potencialmente tóxicas han creado innumerables situaciones en las
cuales los ecosistemas acuáticos y la salud pública en general han sufrido
grandes impactos.
Con el desarrollo del presente proyecto guiado por el docente Pedro Miguel
Escobar de la Universidad de la Salle, se pretende evidenciar la grave
problemática, principalmente el incremento en las descargas de los vertimientos
con diferentes mezclas de contaminantes como son los metales pesados de
procesos industriales los cuales son vertidos en alcantarillado público o en
cuerpos de agua o medios de afectación por su biodiversidad en fauna y flora,
generan daños inmediatos, mutaciones y llegan a la inhibición de las semillas
presentes en el medio.
Una de las principales problemáticas ambientales más importantes en el país se
refiere al uso indiscriminado de precursores químicos en actividades industriales,
las cuales generan vertimientos inadecuados y no tratadas, lo anterior, ha llevado
a que la contaminación química dentro de los ecosistemas acuáticos constituya
graves alteraciones para los aspectos ambientales, sociales y económicos del
país.
Sin embargo, es insuficiente el conocimiento que se tiene en el país de la
problemática generada por la contaminación de los cuerpos de agua con la
disposición final de contaminantes químicos y su impacto sobre el recurso hídrico,
el deterioro de ecosistemas y la salud humana.
Por medio del proyecto se pretende obtener las concentraciones de Hierro, Bario y
Manganeso en los vertimientos de las industrias y determinar los niveles de
inhibición de las semillas de lechuga (Lactuca sativa L.) evitando la posible
afectación a los cuerpos de agua.
En Latino América existe las diversas reglamentaciones para la protección del
medio ambiente, pero lamentablemente la gestión institucional no se ha encargado
29
de hacerla cumplir efectivamente, de igual forma el énfasis establecido en base a
los residuos, se enfocando a la contaminación orgánica y a los organismos
patógenos, mientras que las descargas de compuestos tóxicos empiezan a tomar
auge; causa de esto es la falta de experiencia y de investigación sobre el tema.
Con el fin de garantizar la protección de estos medios y las semillas expuestas en
los mismos, se establece el potencial tóxico de las sustancias estudiadas durante
esta investigación; se desarrollaron 120 bioensayos con las respectivas sustancias
de la investigación y los bioindicadores, estos generan efectos visibles en el
desarrollo de los bioindicadores durante la exposición indicando hasta cuales
niveles los ecosistemas pueden soportar la influencia de los contaminantes sin
generar una inhibición de más del 50% de las semillas expuestas.
El resultado final de este proyecto de investigación determino la fitotoxicidad de
compuestos puros sobre el proceso de germinación de las semillas y el desarrollo
de las plántulas durante los primeros días de crecimiento; se determina la
inhibición de la germinación y la elongación de la radícula y del hipocótilo (Díaz-
Báez, Bustos y Espinosa 2004).
De esta manera con la realización de este estudio se forjan nuevas líneas de
investigación para identificar, definir y proponer instrumentos de seguimiento y
control de la calidad del agua por contaminación de metales.
Dadas las características mencionadas en el bioensayo con semillas de Lactuca
sativa L., se observa que pueden ser aplicadas para la evaluación de la toxicidad
en compuestos puros solubles como los de aguas superficiales, aguas
subterráneas, aguas para consumo humano, aguas residuales domésticas e
industriales además de lixiviados de suelos, sedimentos u otras matrices sólidas.
Procurando aplicar la teoría mencionada a una problemática ambiental, se
propone utilizar semillas como agente evaluador de la toxicidad del vertimiento del
agua residual en una industria tipo; debido al manejo en los procesos productivos
más contaminantes por el empleo de tóxicos como el Hierro, Bario y Manganeso;
con el fin de obtener la concentración media de la inhibición en la semilla durante
los ensayos toxicológicos.
30
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Determinar la Concentración de inhibición Media (CE50-120) producida por el
Hierro (Fe), Bario (Ba) y el Manganeso (Mn) en la especie de semillas de
lechuga (Lactuca sativa L.)
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Determinar la sensibilidad de la especie de semillas de lechuga (Lactuca
sativa L.) utilizando control positivo de Sulfato de Zinc (Zn+2).
Determinar la Concentración de inhibición (CE50-120) del Hierro, Bario y
Manganeso sobre la especie de semillas de lechuga (Lactuca sativa L.)
siguiendo procedimientos establecidos.
Determinar la Concentración de inhibición (CE50-120) del Hierro y el
Manganeso sobre la especie de semillas de lechuga (Lactuca sativa L.), en
un vertimiento industrial.
Determinar el índice de efecto tóxico potencial de los vertimientos de Hierro
y Manganeso en una industria tipo.
31
1. MARCO TEÓRICO
1.1 INVESTIGACIONES EN EL ORDEN AMBIENTAL
Por medio de la relación establecida entre el ecosistema y cultura, se desarrollan
las investigaciones en el orden de la fitotoxicidad, para determinar las diferencias
que pueden desarrollar las semillas del medio, donde se incluyen el aire, el agua,
el suelo, los recursos naturales, las flores, la fauna, los seres humanos, y su
interrelación.
El medio ambiente se refiere a todo lo que rodea a los seres vivos pero este puede
generar afectaciones directas o indirectas, que incluyen los impactos establecidos
por el desarrollo económico e industrial. El desarrollo de las industrias en las
grandes ciudades y en las cabeceras municipales ha generado que las entidades
ambientales, instituciones y laboratorios desarrollen nuevas investigaciones para
determinar los niveles máximos permisibles que pueda verter una industria al
medio ambiente sin provocar daños inmediatos o potenciales que puedan
degradar un recurso natural.
Una de las investigaciones utilizadas para la determinación de estos niveles es el
manejo de prueba por medio de bioensayos o pruebas de Fitotoxicidad para los
diferentes contaminantes provenientes de diversas actividades industriales, la
sensibilidad de las semillas utilizadas dentro de estas pruebas son fundamentales
ya que se toma material biológico, con una alta sensibilidad garantizando el éxito
de las mismas.
1.2 PLANTAS INVOLUCRADAS (ESPECIES BIOLOGICAS) EN EL MANEJO DE
LA INVESTIGACIÓN
El manejo de las plantas, como se observa en las recientes investigaciones, se
manifiesta como una opción representativa, de tal modo que las plantas forman
parte de bioindicadores, sensibles a los cambios ambientales presentados por
contaminantes en el entorno y a su vez forjando posibles daños dentro de su
32
estructura física además de llegar a la posible inhibición total de la planta, por la
absorción de estos contaminantes a través del medio acuático generando un
indicador visual.
1.2.1 Lactuca sativa L. (Lechuga)
Foto 1. Semillas Lactuca sativa L. germinadas.
Fuente: Autoras (2009).
Es una planta herbácea donde sus principales características son los tallos, hojas
verdes prolongadas redonda y crujiente que forma un cogollo compacto. Se van
haciendo variedades más resistentes que pueden cultivarse en lugares de clima
frio o templado. Dentro de su taxonomía se identifican:1
- Raíz: Es la primera de las partes embrionarias que se desarrolla durante la
germinación de la semilla; se distingue primero con una porción poco
diferenciada la radícula, con una cubierta en su punta la coleorhiza, esto
forma la raíz en su parte inicial.
- Hojas: Órgano de las plantas especializado en la fotosíntesis que crece en
las ramas o el tallo, generalmente de color verde, ligera, plana y delgada, y
que puede tener diversas formas dependiendo de la especie.
- Tallo: Este tiene una formación cilíndrica y ramificada de poca longitud
debido a la parte genética de la especie.
- Semillas: Es la pepita cuyo nombre es espermatofitas las cuales están
provistas con todo el material genético que debe emplear el desarrollo de
una planta.2
1 http:// www.euroresidentes.com/Alimentos/lechuga.htm.
2 http://www.infoagro.com/hortalizas/lechuga.htm.
33
1.2.2 Semillas y su comportamiento
La semilla es una unidad de diseminación y reproducción sexual que se desarrolla
a partir de los óvulos. Para que una semilla se desarrolle debe producirse en
primer lugar una polinización, llegada del grano de polen al estigma de la flor,
seguida de la fecundación del óvulo se forma una envoltura seminal donde se
encuentran las semillas. A través de este proceso se traspasa toda la información
genética, protección a medios adversos y el alimento principal para generar las
fases iníciales de la planta.
La estructura de las semillas en su parte exterior presenta las siguientes
cualidades, una corteza fuerte leñosa y sólida, con esta estructura se protege el
embrión. La mayoría de las semillas solo tiene un embrión pero algunas plantas
como lo son los cítricos poseen más de uno. Esto da a lugar al desarrollo de la
fertilización del huevo dentro del ovulo y los tamaños de la semilla puede ser
diferente dependiendo de la información genética de la especie fertilizada, el
tamaño puede estar entre una cabeza de alfiler en un girasol o la enorme semilla
del aguacate: las semillas según su especie pueden variar cualidades como son el
olor, color, textura y forma.
El manejo de las semillas es importante como fuente de transporte para la
reproducción de las plantas. La semilla presente una planta en miniatura (embrión)
que a su vez se divide en epicolito e hipocótilo. El epicolito formará todas las
partes inferiores del tallo y las raíces. El embrión se rodea de alimento
almacenada (cotiledón en los frijoles o judías endospermo en el maíz), y de una
cubierta envolvente final denominada envoltura seminal. El hecho de que todas las
semillas dispongan de un suministro tan importante de nutrientes almacenados,
explica el valor tan alto que se le da para la alimentación humana y animal. La
dura cubierta de la semilla protege a la diminuta planta que hay en su interior para
hacer frente a las adversidades físicas y a la perdida de humedad.3
3 Pinto Vargas, Laura Cristina; Determinación de la concentración de inhibición media (CE50) de Cromo para
la semilla LACTUCA SATIVA L. mediante ensayos de toxicidad en la ciudad de Bogotá 2009, Unisalle
Facultad De Ingeniería Ambiental y Sanitaria.
34
1.2.3 Germinación de las plantas
Con la germinación de la planta se da el rompimiento de la envoltura seminal, por
medio de factores ajenos a la planta, como lo es la humedad y la temperatura; las
cuales generan un espacio adecuado para su germinación. La semilla sirve como
recipiente de almacenamiento del embrión y su alimento, con los cuales se
alimentara el embrión en su inicio. De igual forma el epicolito crece en forma
ascendente, por fuera del suelo, con el objetivo de dar forma a la planta en su
parte exterior con su tallo y hojas, al mismo tiempo se presenta el crecimiento del
epicolito en la parte superior; de igual forma sucede en la parte inferior con el
hipocótilo desarrollándose a profundidad y reproduciendo así las raíces de esta
planta; se determina que el hipocótilo responde negativamente a la gravedad.
Para llegar a la formación de la planta el embrión debe sobre pasar las siguientes
fases:
1. Fase de hidratación: La absorción de agua es el primer paso de la
germinación, sin el cual el proceso no puede darse. Durante esta fase se
produce una intensa absorción de agua por parte de los distintos tejidos
que forman la semilla. Dicho incremento va acompañado de un aumento
proporcional en la actividad respiratoria.
2. Fase de germinación: Representa el verdadero proceso de la germinación.
En ella se producen las transformaciones metabólicas, necesarias para el
correcto desarrollo de la plántula. En esta fase la absorción de agua se
reduce considerablemente, llegando incluso a detenerse.
3. Fase de crecimiento: Es la última fase de la germinación y se asocia con
la emergencia de la radícula (cambio morfológico visible). Esta fase se
caracteriza porque la absorción de agua vuelve a aumentar, así como la
actividad respiratoria.
35
Foto 2. Germinación en pruebas toxicas.
Fuente: Autoras (2009).
La duración de cada una de estas fases depende de ciertas propiedades de las
semillas, como su contenido en compuestos hidratables y la permeabilidad de las
cubiertas al agua y al oxígeno. Estas fases también están afectadas por las
condiciones del medio, como el nivel de humedad, las características y
composición del sustrato, la temperatura, etc. Otro aspecto interesante es la
relación de estas fases con el metabolismo de la semilla. La primera fase se
produce tanto en semillas vivas y muertas y, por tanto, es independiente de la
actividad metabólica de la semilla. Sin embargo, en las semillas viables, su
metabolismo se activa por la hidratación. La segunda fase constituye un período
de metabolismo activo previo a la germinación en las semillas viables o de inicio
en las semillas muertas. La tercera fase se produce sólo en las semillas que
germinan y obviamente se asocia a una fuerte actividad metabólica que
comprende el inicio del crecimiento de la plántula y la movilización de las reservas.
Por tanto los factores externos que activan el metabolismo, como la temperatura,
tienen un efecto estimulante en la última fase.
1.2.4 Introducción a la germinación
Para que el proceso de germinación, es decir, la recuperación de la actividad
biológica por parte de la semilla, tenga lugar, es necesario que se den una serie
de condiciones ambientales favorables como son: un sustrato húmedo, suficiente
disponibilidad de oxígeno que permita la respiración aerobia y, una temperatura
adecuada para los distintos procesos metabólicos y para el desarrollo de la
plántula.
36
La absorción de agua por la semilla desencadena una secuencia de cambios
metabólicos, que incluyen la respiración, la síntesis proteica y la movilización de
reservas. A su vez la división y el alargamiento celular en el embrión provocan la
ruptura de las cubiertas seminales, que generalmente se produce por la
emergencia de la radícula. Sin embargo, las semillas de muchas especies son
incapaces de germinar, incluso cuando se encuentran en condiciones favorables.
Esto es debido a que las semillas se encuentran en estado de latencia. Por ello,
mientras no se den las condiciones adecuadas para la germinación, la semilla se
mantendrá latente durante un tiempo variable, dependiendo de la especie, hasta
que llegado un momento, pierda su capacidad de germinar.
Cuando una semilla germina, la primera estructura que emerge, de la mayoría de
las especies, después de la rehidratación de los diferentes tejidos es la radícula.
En aquellas semillas, en las que la radícula no es el primer acontecimiento
morfológico, se consideran otros criterios para definir la germinación como: la
emergencia del coleóptilo en granos de cereales; la obtención de plantas
normales; o el aumento de la actividad enzimática, tras la rehidratación de los
tejidos. 4
Figura 1. Procesos de Germinación.
Fuente: http://www.educared.net/aprende/anavegar8/profes/unidades/.
4 www.etsmre.upv.es.
37
1.2.5 Formación de la plántula
Se define plántula a la aparición de la primera hoja que emerge de la semilla
germinada; inicia la generación de funciones adecuadas por cada una de las
partes recién formadas de la nueva planta, como es la absorción de nutrientes por
la raíz y la fotosíntesis por parte de las hojas con la cual la plántula podrá elaborar
su alimento además de mantener un desarrollo adecuado.
En el proceso de la planta puede llegar a presentarse, dos puntos críticos,
denominados: hipogea o epigea, en el primero se da el crecimiento por debajo de
la superficie y en el segundo el crecimiento se da en un punto superior a la
superficie del suelo; la raíz es parte importante de la plántula por las diversas
funciones que desempeña, como son la absorción de los nutrientes y agua, el
anclaje de la planta al suelo son funciones necesarias para el pleno desarrollo de
la planta.5
1.3 TÓXICOLOGIA
El desarrollo extremadamente rápido de la toxicología y del la ecotoxicología
apareció a partir de los años 1960 al mismo tiempo la toxicología experimental se
ha beneficiado de los avances de la química analítica, que actualmente permiten
medir concentraciones del orden de partes por millón. De aquí han surgido nuevas
ramas como es la química ambiental y la química ambiental analítica, cuyo apoyo
es esencial para la toxicología ambiental.
La mayor atención que se presentan en estos temas ha permitido descubrir
nuevos agentes tóxicos, nuevos mecanismos de acción y, en general, ha dado un
impulso importante a la toxicología como un todo, igualmente se ha desarrollado el
interés en la prevención y control de los accidentes industriales que pueden
afectar a las personas.
Se reconoce que las sustancias químicas tiene efectos químicos, físicos y
biológicos sobre el ambiente y los seres vivos, que estos efectos pueden ser
directos o indirectos y que, muchas veces, son el resultado de exposición crónica
5 Pinto Vargas, Laura Cristina; Determinación de la concentración de inhibición media (CE50) de Cromo para
la semilla LACTUCA SATIVA L. mediante ensayos de toxicidad en la ciudad de Bogotá 2009, Universidad
De La Salle Facultad De Ingeniería Ambiental y Sanitaria.
38
a cantidades muy bajas, por lo cual no pueden detectarse de inmediato o por los
métodos usuales. Esto ha tenido como consecuencia que se desarrolle y que se
acepte como regla para las acciones de la industria y los gobiernos el principio de
precaución y a que en muchos países, se establezca políticas oficiales para la
producción, uso y manejo de sustancias químicas. Aunque dichas políticas
reconocen la importancia de estas sustancias para la economía actual, también
toma sus múltiples riesgos y parte de ellos para mejorar el control de estas
sustancias.6
1.3.1 Compuesto tóxico
Es aquel capaz de dañar un sistema biológico, interfiriendo su funcionamiento
normal o provocando su muerte. Sin embargo, esta definición por sí misma podría
extenderse a cualquier sustancia, ya que todas las sustancias poseen la
capacidad de dañar un sistema biológico, si la dosis es suficientemente alta. Por
consiguiente, la propia definición de compuesto tóxico debe incluir un componente
cuantitativo que permita diferenciar su potencia para causar efectos adversos en
los sistemas biológicos expuestos.
1.3.2 Dosis letal media (DL50)
Calculada estadísticamente, de un agente químico o físico que se espera que
mate el 50% de las semillas de una población bajo un conjunto de condiciones
definidas.
1.3.3 Concentración Letal Media (CL50)
Concentración, calculada estadísticamente, de una sustancia en el medio, que se
espera que mate el 50% de las semillas de una población bajo el conjunto de
condiciones definidas.
1.3.4 Concentración de Inhibición letal media (CE50)
Concentración estadísticamente derivada de una sustancia química en el que,
según se puede pronosticar, causará un efecto no letal definido del 50% de una
6 Centro Panamericano De Ecología Humana y Salud División de Salud Ambiental; (2003) Introducción a la
Toxicología Ambiental. ED. Dra. Lilia, Albert.
39
población dada de semillas bajo un conjunto definido de condiciones
experimentales.
1.3.5 Clasificación de los agentes tóxicos
Los agentes tóxicos se pueden clasificar de varias maneras:
1.3.5.1 Por su origen
Vegetales: El reino vegetal está lleno de muchos y variados tóxicos entre ellos
tenemos: la nicotina y morfina.
Animales: Entre los venenos de animales figuran entre otros, el veneno de la
serpiente, de insectos y anfibios.
Los tóxicos ambientales pueden igualmente clasificarse de acuerdo con su origen
en:
- Vegetales: Algas y polen.
- Animales: Excremento humano y animales.
- Minerales: Metales, asbesto presente en las minas, nitratos en las aguas.
1.3.5.2 Por su estado físico
Gases, vapores, nieblas; gas natural, gas propano, acetileno, entre otros; líquidos
volátiles y no volátiles. La mayoría de solventes son volátiles; sólidos; polvos,
partículas; semi-lodos por ultimo lodos.
1.3.5.3 Por su estructura química
De acuerdo con su estructura química, es decir, se tiene en cuenta su función
química, ácidos, álcalis, alcoholes, aminas, aldehídos, éteres, hidrocarburos,
fenoles, etc.
1.3.5.4 Por efecto que produce en la semilla
De efecto local: Es aquel que se produce al primer contacto con la semilla; el daño
está circunscrito al lugar de contacto entre la semilla y el agente tóxico.
Generalmente son tóxicos gaseosos, vapores de líquidos volátiles o sustancias
altamente corrosivas las que producen alteraciones de la piel.
De efecto sistémico: Ocurre en distintos lugares de aquel por el que el agente
tóxico penetro en el cuerpo, es decir, deberá ingresar al interior de la semilla a
40
través de las diferentes vías; requiere absorción de distribución del tóxico en la
semilla.7
1.3.6 Tipos de exposición
La exposición ambiental a un contaminante se caracteriza por la ruta de
administración y la dosis recibida, que depende de la concentración del
contaminante, la frecuencia y la duración del contacto. Las principales rutas de
administración con relevancia medioambiental son la vía oral, la inhalación y la
penetración cutánea.
Las rutas de administración pueden influir considerablemente sobre la toxicidad
del compuesto, pues de ellas depende la concentración que éste alcanza en el
órgano en el que ejerce sus efectos tóxicos.
La comparación de la dosis y el grado de absorción; letal media, LD50 se observa
por distintas rutas de administración para un mismo compuesto; sirve para
identificar diferencias entre ellos.
Otro factor a considerar en la definición de la exposición de la forma de
administración, es decir, el disolvente en el que se encuentra disuelto el
contaminante, en las exposiciones medioambientales; el medio de administración
es prácticamente siempre el agua. Es necesario tener en cuenta, sin embargo,
cual es la vía de administración en los ensayos de toxicidad empleados para
caracterizar el contaminante, ya que las diferencias entre el medio pueden
repercutir significativamente sobre el grado de absorción.
Por lo que respecta a la duración y frecuencia de la exposición, puede distinguirse
entre exposición aguda y repetida, que a su vez puede ser sub-aguda, sub-crónica
y crónica.
1.3.6.1 Exposición aguda
Con una duración inferior a veinticuatro horas, consiste por lo general en una
única administración del compuesto. Según la ruta de administración pueden
existir distintas modalidades de exposición aguda. En la ruta por inhalación, la
exposición aguda consiste en la administración continua del compuesto durante un
7 Vallejo, B; María, C (2007) Toxicología Ambiental; (pág.); ED. Grupo Empresarial Wills Ltda.
41
periodo de duración inferior a 24 hrs. En la vía oral, la exposición aguda suele
consistir en la administración de una sola dosis por alimentación o suministro
forzado en animales o especies de ensayo, mientras que en la vía cutánea la
exposición aguda consiste en la aplicación directa sobre la piel del agente
estudiado.
1.3.6.2 Exposición repetitiva
De la sustancia de ensayo, cuando se administra más de una vez durante un
periodo variable, en función del cual puede distinguirse entre las categorías de
exposición sub-aguda, sub-crónica y crónica.
La exposición sub-aguda corresponde a la repetición de la exposición de la
sustancia de ensayos durante un periodo de tiempo relativamente breve, de una
duración de un mes o inferior. La exposición sub-crónica tiene lugar durante un
periodo de uno a tres meses, mientras que la exposición crónica tiene una
duración superior a tres meses.
Estas definiciones se refieren a las condiciones de exposición de animales en
ensayos de laboratorio, para trasladar estos términos a la exposición de personas
suele hablarse de exposiciones agudas para iniciar aquellas correspondientes a
un hecho aislado, mientras que la exposición crónica y sub-crónica se refiere a
exposiciones repetidas en un periodo de duración superior e inferior a siete años,
respectivamente.8
1.4 ECOTÓXICOLOGÍA AMBIENTAL
Es definida como la ciencia que estudia la polución, su origen, evolución e
interacciones con las moléculas que integran dinámicamente los ecosistemas, sus
acciones y efectos sobre los seres vivos que forman estos ecosistemas, con su
evaluación, como determinantes de criteriología y profilaxis biológica o
socioeconómica (Sanz Sánchez, 1974).
La ecotoxicología tiene como materia fundamental de estudio la polución sobre los
sistemas bióticos en forma de toxicidad, alteración de especies, reducción de una
8 Moreno, M (2003) Toxicología Ambiental Evaluación de riesgo para la salud humana. Pág. 4-5 ED.
McGraw-Hill.
42
determinada productividad, etc., puesto que no siempre un polutante se comporta
como un tóxico neto, sino que puede suponer sólo la creación de un nivel
indeseable en un determinado ecosistema.
Considerando al polutante como un agente físico o una sustancia química que se
encuentra en el ambiente y que tiene un efecto deletéreo sobre las semillas, se
puede destacar la obra de Moriarty (1985), porque ya resalta la existencia de
autores que distinguen entre contaminante y polutante; contaminante sería la
sustancia generalmente resultante de la actividad humana sin que sea necesario
que tenga efectos biológicos, mientras que se reserva el término polutante para la
sustancia química que abarca ambas características, es decir, aparece como
antropogénico y nociva (Moriarty, 1985).
En la ecotoxicología, los agentes físicos y los compuestos químicos se estudian
más por su peligrosidad potencial que por su toxicidad relativa, aplicados a
determinadas condiciones de exposición, para que tenga significado. Por ello, al
hablar de nocividad, aparte del concepto semántico de toxicidad propiedad
inherente a un agente físico o un compuesto químico de producir efectos
indeseables cuando alcanza una concentración determinada en un lugar de
semillas vivo), se debe tener en cuenta el concepto de toxicidad, es decir, la
posibilidad de que produzca toxicidad, así como el riesgo o peligrosidad,
determinado por la probabilidad de que ocurra una acción toxica.
La ecotoxicología, como se ha señalado anteriormente, es un hecho
antropogénico, y como tal está íntimamente ligado al hombre y su dinámica.
Los estudios ecotoxicológicos se componen de tres secuencias (Truhaut, 1975):
1. La liberación del polutante, su formación y la génesis en esas fuentes de
polución, los medios y vías de transporte (suelo, aire, agua, alimentos, etc.),
los factores que influyen en su difusión, sus absorciones geológicas y las
posibles alteraciones de sus propiedades fisicoquímicas debidas a los
diversos componentes abióticos del ecosistema que dan lugar a su
acumulación o degradación, puesto que siempre debe tenerse presente que
las transformaciones de las sustancias químicas son funciones que realizan
los ecosistemas, lo cual ha servido para que el hombre haya considerado el
43
medio ambiente que lo rodea como una gran cloaca donde libera todas las
sustancias residuales de su actividad, basándose en su capacidad de
autodepuración, y que en los momentos actuales sabemos que es limitada.
2. El ingreso de los polutantes en el medio biológico, esto es, su entrada en
las cadenas biológicas, alimentarias, de comunidad, etc., con cinéticas
propias. Una vez ocurrida la contaminación, el flujo de un polutante dentro
de los ecosistemas está condicionado por varios factores bióticos y
abióticos con características especiales que condicionan su disipación,
acumulación o destrucción; por lo tanto se puede afirmar que la reacción
biológica frente a los polutantes puede ocasionar también una readaptación
del ecosistema por incremento de resistencias o tolerancias a ciertas
semillas.
3. Calificación y cuantificación de los efectos patológicos sobre los seres vivos
y sus ecosistemas, con las consiguientes deducciones epidemiológicas y
profilácticas.
Constituye la ecotoxicidad propiamente dicha, es decir, la consecuencia de la
acción originada por el polutante sobre los seres vivos que forman los
ecosistemas, sin considerar que dicho polutante pueda hacer desaparecer a la
mitad de los individuos de una especie (lo que puede tener significación
ecológica), sino determinar el impacto ecológico que produce, ya que muchos
polutantes no tienen efecto sobre las semillas individualmente, pero su resultado
ecológico es digno de tenerse en cuenta.
La ecotoxicología también se caracteriza por llevar a cabo un diagnóstico
evaluativo, que tiende a la predicción y que se fundamenta en tres parámetros:
1. La determinación de la dosis del ambiente,
2. la evaluación de la carga y
3. la predicción del riesgo.
Como su fin primordial, la ecotoxicología busca el bienestar del hombre. Por ello,
su misión es, tanto informar y alertar de la peligrosidad de las alternativas del
desarrollo y la degradación del medio ambiente, como prevenir, aportando datos
44
para la toma de decisiones con arreglo al cociente beneficio/riesgo, que siempre
va ligado con la calidad de vida.9
1.5 ENSAYOS DE TOXICIDAD O BIOENSAYOS
Los ensayos biológicos son herramientas de diagnóstico adecuadas para
determinar el efecto de agentes físicos y químicos sobre semillas de prueba bajo
condiciones experimentales específicas y controladas. Estos efectos pueden ser
tanto de inhibición como de magnificación, evaluados por la reacción de los
semillas, tales como muerte, crecimiento, proliferación, multiplicación, cambios
morfológicos, fisiológicos o histológicos.
De manera general, los ensayos, también llamados pruebas de toxicidad, pueden
ser definidos de acuerdo con:
- Su duración: corto, mediano o largo plazo.
- El método utilizado para incorporar la muestra al sistema de ensayo:
estático, con renovación, de flujo continuo.
- El propósito para el cual son utilizados: control de calidad de vertidos,
evaluación de compuestos específicos, toxicidad relativa, sensibilidad
relativa, etcétera.
Los efectos pueden manifestarse a diferentes niveles, desde estructuras sub-
celulares o sistemas de enzimas, hasta semillas completas, poblaciones o
comunidades. Por tanto, la toxicidad será la capacidad de una sustancia para
ejercer un efecto nocivo sobre las semillas o la biocenosis, y dependerá tanto de
las propiedades químicas del compuesto como de su concentración, según sea la
duración y frecuencia de la exposición al tóxico, y su relación con el ciclo de vida
de la semilla; las pruebas podrán ser de tipo agudo o crónico.
Los resultados de los bioensayos se refieren, en primer lugar, a las semillas
usadas en el ensayo y las condiciones estipuladas en el procedimiento de prueba.
Un efecto nocivo evaluado por medio de ensayos biológicos normalizados puede
indicar niveles de peligrosidad trasladable y asimilable a semillas que forman parte
de los sistemas naturales y la biocenosis.
9 Capo M (2002) Principios de la Toxicología, Diagnostico, Tratamiento y Gestión del Medio Ambiente; ED.
McGraw-Hill.
45
En principio, se debe considerar que no existe ninguna semilla ni biocenosis que
pueda ser usado para evaluar todos los efectos posibles sobre el ecosistema bajo
las diversas condiciones abióticas y bióticas presentes.
En la práctica, solamente unas pocas especies (especies modelo), que
representen funciones ecológicas relevantes, pueden ser ensayadas.10
Para la realización de una prueba de toxicidad se involucra un agente o estímulo
(pesticidas, metales pesados o una muestras ambientales con contaminantes), el
cual se aplica a un grupo de semillas (cultivo bacterial, algas, animales o plantas)
estas semillas que son expuestas, evaluando una respuesta preseleccionada.
Los efectos tóxicos a evaluar pueden ser: mortalidad, inmovilidad, inhibición del
crecimiento de la población, alteración del comportamiento, etc. Se determinan
distintas variables como, por ejemplo, la concentración letal 50 (CL50), que es la
concentración letal para el 50% de los individuos expuestos. Las condiciones de
los cultivos y los ensayos deben estar altamente estandarizadas para permitir la
comparación de los resultados.11
La respuesta del sujeto se valora mediante la cuantificación final de alguna
característica, cambio de estas o por la ocurrencia o no de un determinado
fenómeno (peso del cuerpo, cambios físicos, en el caso de semillas se determina
el proceso de germinación y crecimiento de las raíces).12
Teniendo en cuenta que la magnitud o la frecuencia de la respuesta dependerán
de la dosis aplicada, las pruebas de toxicidad suelen diseñarse utilizando distintas
dosis. La información obtenida de este tipo de ensayos permite la cuantificación de
la relación entre las dos variables (dosis y respuesta), caracterizando toxicológica
o ecotoxicológicamente al compuesto.
En la realización de pruebas de toxicidad o bioensayos se pueden llegar a
encontrar tres clases de variables a determinar, estas son: cualitativas,
cuantitativas discretas y por último las cuantitativas continuas. Las cualitativas
10
Castillo, G (2004) Ensayos Toxicológicos y Método de Evaluación de Calidad de Aguas; ED. México
IMTA. 11
López, J; Bayona, A (2007) Ensayo de Toxicidad Aguda al Influente la PTAR de la Calera Mediante la
Utilización de Semilla Lactuca Sativa L, y Propuesta para su Utilización como Agua de riego para cultivos.
Unisalle. 12
Rossini, D; Díaz, M; Pica, Y. (2004) Conceptos Generales.
46
evalúan aspectos como: clases de especies que mueren por la exposición o las
que viven a esas condiciones de toxicidad. Por otra parte las cuantitativas
discretas determinan variables de las semillas expuestas como número de
especies que llegan a morir o porcentaje de especies muertas. Por último están
las cuantitativas continuas, en esta se determina la reducción del crecimiento en
longitud o peso. En el caso de las variables cualitativas, debido a sus
características, es muy difícil establecer relaciones cuantitativas con la dosis y, en
general, se diseñan los experimentos de manera tal para evaluar respuestas
cuantitativas.
Las respuestas que entregan estas pruebas de laboratorio pueden ser clasificadas
en dos grupos:
- Agudas o letales, en este caso las semillas son sometidos a diferentes
concentraciones del contaminante. Al realizar este procedimiento se
espera obtener repuestas con base a mortalidades que permitan indicar
el grado de toxicidad del elemento o compuesto, para la especie
utilizada, expresada como CL50 o CE50, estas se refieren a la
concentración que provoca un efecto en el 50% de las semillas
expuestos en el ensayo.
- Crónicas o sub-letales, son pruebas que tienen como finalidad evidenciar
repuestas que no implican la muerte de la semilla ensayada, en este
ensayo se determinan factores como la conducta del semilla, fecundidad,
desarrollo y Bioacumulación entre otras.13
Se puede utilizar tres formas de evaluación tóxica, las cuales se emplean de las
siguientes formas: observación, estudio de exposiciones ocupacionales y
accidentales, manejo experimental y procesos de bioensayos con semillas
expuestas a los agentes tóxicos.
Observando las mediciones de efectos tóxicos por sustancias químicas en los
humanos se generan complejas investigaciones prospectivas o retrospectivas, es
importante mencionar lo esencial de la información epidemiológica, a nivel
13
López, J; Bayona, A (2007) Ensayo de Toxicidad Aguda al Influente la PTAR de la Calera Mediante la
Utilización de Semilla Lactuca Sativa L, y Propuesta para su Utilización como Agua de riego para cultivos.
Unisalle.
47
ambiental se utiliza la experimentación con diferentes semillas pertenecientes al
medio acuáticos, generalmente representantes importantes de la cadena trófica.
1.5.1 Criterios generales de selección
La selección de material biológico (semillas), se efectúa directamente de las
opciones requeridas en la toxicológica, la información genética de las semillas,
características de cada una de las especies y el manejo adecuado de equipos con
su respectiva capacitación para el adecuado análisis.
Los ensayos de toxicidad son de gran importancia ya que son relativamente
simples, rápidos y económicos, también permiten establecer los límites permitidos
para los distintos contaminantes, evaluar el impacto de mezclas sobre las
comunidades de los ambientes que las reciben y comparar la sensibilidad de una
o más especies a distintos tóxicos o a diferentes condiciones para el mismo tóxico.
Es útil para la investigación básica del fenómeno de toxicidad, establecer criterios
o patrones de calidad de aguas superficiales o efluentes, la evaluación del impacto
ambiental y del riesgo ecológico así como el monitoreo de las condiciones de un
cuerpo de agua. Además se necesitan implementar estos ensayos biológicos para
obtener información adicional sobre riesgos potenciales, incluyendo efectos
tóxicos como generación de cáncer, malformaciones, desórdenes de conducta,
efectos acumulativos, antagonismos y sinergismos.
1.5.2 Bioensayos en el medio ambiente
Como los contaminantes suelen actuar mezclados y entre ellos existen
interacciones, la determinación por medios químicos de sus cantidades no suele
aclarar sus posibles efectos biológicos. En un bioensayo se controlan con
minuciosidad las condiciones ambientales para que la respuesta de una semilla de
prueba ante los contaminantes específicos se pueda definir inequívocamente,
aunque la extrapolación de los resultados obtenidos en un bioensayo a situaciones
reales puede originar confusiones. ¿Por consiguiente, los bioensayos no deben
excluir las observaciones en el campo y los experimentos in situ si se pretende
entender todas las repercusiones de un problema de contaminación?
48
La selección de una semilla adecuada para bioensayos rutinarios depende de
varios factores (American Public Health Association, 1976):
1. La semilla debe ser sensible a los factores ambientales o materiales en
cuestión.
2. Su distribución tiene que ser amplia y su disponibilidad.
3. Debe ser importante desde el punto de vista económico, recreativo o
ecológico, tanto si es local como nacional.
4. Se debe poder cultivar fácilmente en el laboratorio.
5. Tiene que hallarse en buenas condiciones, libre de parásitos o
enfermedades.
6. Debe ser compatible con las técnicas de bioensayo.14
1.5.3 Manejo del tóxico de referencia
Se refiere a un compuesto químico orgánico o inorgánico, con el cual se pretende
medir la exactitud de los resultados obtenidos dentro de las pruebas de
toxicológicas del laboratorio.
Aunque en la literatura se mencionan muchos compuestos, la USEPA (1994)
recomienda como tóxicos de referencia las siguientes sustancias: Cloruro de
Sodio (NaCl), Cloruro de Potasio (KCl), Cloruro de Cadmio (CdCl2), Sulfato de
Cobre (CuSO4), Sulfato de Sodio (SDS (NaSO4)) y Dicromato de Potasio
(K2Cr2O7). Otras agencias como Environment Canadá recomiendan Zinc (Zn+2)
como tóxico de referencia inorgánica y fenol para sustancias orgánicas. Sin
embargo, estos compuestos pueden sustituirse por otros dependiendo de la
especie de prueba, la matriz utilizada y los puntos finales medidos.
Para la preparación de los tóxicos de referencia, cada laboratorio debe conocer el
patrón de respuesta de sus semillas, lo que permitirá determinar las
concentraciones óptimas para elaborar la curva de dosis-respuesta. Preparando
inicialmente una solución de concentración alta para a partir de esta elaborar
soluciones menos concentradas, es decir, mas diluidas.
14
Bulus Rossini, Gustavo Daniel; Díaz Báez, María Consuelo; Pica Granados, Yolanda; Aseguramiento y
Control de Calidad de Bioensayos. Capitulo 6. Pág. 145, Diciembre 2006.
49
1.5.4 Pruebas de sensibilidad
Los cambios en el estado fisiológico del cultivo pueden ser detectados mediante la
evaluación periódica de la respuesta de los individuos a un determinado tóxico de
referencia. Aunque existen varios tóxicos recomendados, uno de los más
utilizados es el Zinc (Zn+2) a partir de Sulfato de Zinc (ZnSO4). Para determinar si
la sensibilidad del cultivo es la adecuada, es necesario, previo a iniciar las pruebas
rutinarias, evaluar la respuesta de las semillas ante la exposición al tóxico de
referencia. La concentración en la cual se produce la muerte del 50% de la
población (CL50/CE50) deberá encontrase dentro del intervalo previamente
establecido. Para definir este intervalo es necesario realizar por lo menos 5
pruebas con el tóxico de referencia. Con estos datos se inicia la construcción de la
carta control, que deberá completarse con la información generada en nuevas
evaluaciones. A partir de estos resultados, se determina la CL50 promedio para la
sustancia, así como la desviación estándar (σ) de la CL50. Los límites superior
(Promedio + 2σ) e inferior (Promedio – 2σ), corresponderán al intervalo de
concentración en el cual varía la respuesta de las semillas al tóxico
seleccionado.15
1.5.5 Carta control
El manejo de las cartas control como herramienta gráfica para la evaluación del
estado fisiológico de las semillas utilizado dentro de las pruebas de toxicidad,
permiten establecer cambios en las semillas frente a los diferentes tóxicos de
referencia.
La carta control se genera a partir de los resultados de pruebas sucesivas al tóxico
de referencia seleccionado, para el cual se obtiene el valor de la concentración de
efecto medio CL50/CE50. Inicialmente ésta puede ser construida con un mínimo de
cinco datos y posteriormente se debe continuar realizando ensayos con el tóxico
para ingresar mensualmente nuevos valores hasta completar una serie de veinte
resultados.
15
Bulus Rossini, Gustavo Daniel; Díaz Báez, María Consuelo; Pica Granados, Yolanda; Aseguramiento y
Control de Calidad de Bioensayos. Capitulo 6. Pág. 132, Diciembre 2006.
50
Los valores se van situando a manera de puntos en un gráfico que relaciona el
número de ensayos, ubicado en el eje X o abscisa, y en el eje Y u ordenada, el
valor de la concentración de efecto medio CL50/CE50. Seguido de esto se
determina el valor promedio y la desviación estándar (σ) de la población de datos
mediante los valores descritos anteriormente. Con estos parámetros estadísticos
se calculan los valores límite (superior e inferior) que definen el intervalo de
variación aceptable o intervalos de confianza (95%) en el que deberán encontrarse
los valores de CL50/CE50 obtenidos para futuros ensayos con el tóxico de
referencia.
Para la elaboración de las cartas control, se debe preparar una solución estándar
del tóxico de referencia seleccionado. Con la solución estándar del tóxico, se
preparan diluciones para obtener una serie de concentraciones, de manera que se
logre obtener al menos dos valores de efecto mayor al 50% y dos más, menores a
dicho porcentaje. En general, es de esperar que la serie de concentraciones
utilizada produzca a través del tiempo la misma respuesta en cada concentración;
se procede a calcular el punto final de la prueba (CL50/CE50) utilizando cualquiera
de las técnicas estadísticas recomendadas.
La carta control es utilizada para evaluar la tendencia de los resultados, por lo que
el promedio acumulado y los límites de confianza son repeticiones de los
calculados con cada nuevo dato obtenido.
Si durante las pruebas se obtienen valores de CL50/CE50 fuera del intervalo
establecido, ¿se indica de algún cambio en la consistencia metodológica o de
alteración de la sensibilidad de las semillas? En el caso de análisis de puntos
finales de CL50/CE50, se espera que sólo uno de por lo menos veinte ensayos
caiga fuera de los límites establecidos.
1.5.6 Evaluación de aspectos (CL50/CE50/CI50, NOEC, LOEC)
El objetivo de un ensayo de toxicidad en una muestra de agua, efluente o
compuesto puro, es estimar la concentración segura o concentración a la cual no
se observa efecto; sin embargo, este término es más un concepto biológico que un
resultado estadístico, por lo que los resultados aquí utilizados serán: la
concentración más alta a la cual no se observa efecto (NOEC); la concentración
51
más baja a la que se observa efecto (LOEC); la concentración efectiva (CE)
correspondiente a una estimación de la concentración del tóxico que puede causar
un efecto adverso observable, mediante una respuesta discreta en un porcentaje
dado de semillas; concentración letal (CL), la cual corresponde a la concentración
del tóxico o efluente o muestra que causa la muerte a un determinado porcentaje
de la población expuesta; y concentración inhibitoria (CI), la cual corresponde a la
concentración del tóxico o muestra o efluente que puede producir una reducción
de una respuesta biológica en una población expuesta.
El valor de la CL50/CE50/CI50 se debe obtener tanto para el tóxico de referencia
como para las muestras simples o duplicadas. Para el cálculo de la CL50/CE50/CI50
se pueden utilizar técnicas de estimación de punto, tales como los métodos Probit,
Spearman - Karber, gráfico, etc.16
1.5.7 Curva dosis-respuesta
La relación dosis-respuesta es la medida de la proporción o porcentaje de una
población que experimenta efectos adversos como consecuencia de la exposición
a un compuesto tóxico. Esta relación se obtiene habitualmente en forma gráfica,
representando el porcentaje de población afectado en ordenadas, frente a la dosis
en abscisas.
La obtención de la curva dosis-respuesta descansa en una serie de supuestos
básicos, el primero de los cuales es que la respuesta observada es consecuencia
de la exposición al agente químico administrado, es decir, que existe una
asociación causal entre ambas. Por otra parte, la magnitud de la respuesta debe
depender de la dosis, lo que implica la existencia de un receptor o receptores
moleculares con los que el agente administrado interacciona para desencadenar la
respuesta tóxica, de forma que la magnitud de la respuesta dependerá de la
concentración alcanzada por el agente en el tejido donde se encuentra el receptor;
concentración que a su vez depende de la dosis administrada. El último requisito
16
Bulus Rossini, Gustavo Daniel; Díaz Báez, María Consuelo; Pica Granados, Yolanda; Aseguramiento y
Control de Calidad de Bioensayos. Diciembre 2006.
52
para obtener la relación dosis-respuesta es definir un método para cuantificar y
expresar de forma preciso la toxicidad.17
1.6 BIOENSAYOS CON PLANTAS
Las sustancias tóxicas pueden afectar el desarrollo normal de las plantas,
principalmente en sus etapas tempranas (germinación y desarrollo de las raíces).
Al observar y medir la longitud de raíces jóvenes, y comparar estas longitudes con
un control normal, podemos determinar la posible presencia de productos
químicos tóxicos en el medio ambiente. Cualquier semilla que entre en contacto
con el agua tenderá a brotar, pero esta germinación puede ser afectada por el
nivel de contaminación presente en el agua. Si el agua está muy contaminada sólo
algunas semillas - o ninguna - lograrán germinar. El agua contaminada puede
también afectar el desarrollo de la raíz.
En las últimas décadas, se han desarrollado bioensayos rápidos con el empleo de
plantas como semillas de prueba, las que funcionan como buenas herramientas de
trabajo para el monitoreo ambiental. En Cuba, se tienen algunas experiencias con
el empleo de las plantas en la evaluación de la toxicidad de sustancias tóxicas y
muestras ambientales.
Como parte integral del ecosistema, las plantas superiores son ampliamente
utilizadas por ser semillas eucarióticas, y por lo tanto más comparables a la
mayoría de las especies de la flora y la fauna superiores, y constituyen una
eficiente herramienta en el orden ambiental, además de poseer las siguientes
ventajas:
- Las plantas son más sensibles al estrés ambiental que otros sistemas de
ensayos disponibles.
- Fácil manipulación y almacenaje.
- Bajo costo.
- Buena correlación con otros sistemas de pruebas.
Entre las pruebas a corto plazo con plantas que más se han utilizado para la
evaluación toxicológica ambiental se encuentran:
17
Moreno Grau, María Dolores; Toxicología Ambiental Evaluación de Riesgo para la Salud Humana,
McGraw-Hill 2003 Pág. 8 y 9.
53
1. Prueba de toxicidad a corto plazo de la prolongación de la raíz de un
vegetal.
La justificación para realizar este bioensayo radica en la importancia de eventos
de desarrollo temprano en el crecimiento y supervivencia de las plantas. La
prolongación de la raíz es inhibida a concentraciones más bajas de las sustancias
tóxicas que para el caso de la germinación de las semillas; por lo tanto, puede ser
un indicador más sensible de efectos biológicos. Este bioensayo puede ser
ejecutado con cualquier número de especies, las cuales resulten económicamente
importantes, sean fácilmente disponibles, germinen y crezcan rápidamente. Una
de las semillas más comúnmente utilizadas en esta prueba son las semillas de
Lactuca sativa L., semilla de lechuga por su grado de sensibilidad.
El bioensayo con semillas de lechuga (Lactuca sativa L.) es un ensayo estático de
toxicidad aguda (120 horas de exposición) en el que se evalúan los efectos
fitotóxicos de un compuesto puro o de una mezcla compleja en el proceso de
germinación de las semillas y en el desarrollo de las plántulas durante los primeros
días del crecimiento. Como puntos finales para la evaluación de los efectos
fitotóxicos, se determina la inhibición en la germinación y la inhibición en la
prolongación de la radícula y del hipocótilo. A diferencia del bioensayo tradicional
de germinación de las semillas, la evaluación del efecto en la prolongación de la
radícula y del hipocótilo de las plántulas permite la evaluación del efecto tóxico de
compuestos solubles presentes en concentraciones tan bajas que no son
suficientes para inhibir la germinación, pero que sí pueden retardar o inhibir
completamente los procesos de prolongación de la raíz o del hipocótilo, lo que
depende del modo y sitio de acción de los contaminantes generados para cada
uno de los medios expuestos en los ensayos fitotóxicos.
Este ensayo evalúa los constituyentes solubles del agua (aguas superficiales,
aguas subterráneas, suelos o sedimentos y lixiviados), teniendo en cuenta para el
resultado la cantidad de semillas germinadas y la media del crecimiento de la raíz.
Se calcula la CE50 que no es más que la concentración que reduce la longitud de
la raíz en un 50 % en relación con el control y la obtención de datos.
54
2. Bioensayo para la estimación de la toxicidad por la medición de la media
del crecimiento de la raíz de cebollas (Allium cepa L.).
Este método es una herramienta fácil y sensible para la medición de la toxicidad
total causada por tratamientos de sustancias químicas. Los resultados de este
ensayo se ajustan bien a una batería de pruebas compuesta por semillas
procariontes y/o eucariontes. Es aplicable a los siguientes tipos de muestras:
- Aguas naturales (lagos, ríos y pozos).
- Agua potable (agua de grifo diferentes tuberías).
- Aguas residuales domésticas e industriales, incluyendo lodos y lixiviados.
- Sustancias químicas solubles en agua y con sustancias químicas insolubles
en agua y solventes.
El ensayo con bulbos de cebolla (Allium cepa L.) es un bioensayo de toxicidad
aguda (72 horas) semi-estático (con renovación diaria de la solución de ensayo).
Como punto final de evaluación de efectos fitotóxicos se cuantifica la inhibición
promedio en la prolongación de las raíces del bulbo.
El grado de toxicidad de las sustancias químicas de prueba es estimado por la
medición de la longitud de cada uno de los bulbos de las raíces (10 cebollas son
empleadas para cada concentración o menos en dependencia de si sólo están
disponibles pequeñas cantidades de muestra). Para el reporte de la prueba, se
toma un valor medio del crecimiento para cada una de las series. También se
calcula la CE50.
1.6.1 Fitotoxicidad en plantas
Se refiere a tóxicos que afectan a los vegetales. Efectos de toxicidad en especies
vegetales sensibles, donde diversos factores edáficos pueden determinar la
biodisponibilidad de un compuesto químico, y por lo tanto, la intensidad del efecto
fitotóxico, tales como el contenido de materia orgánica y el pH del suelo, además
del grado de solubilidad de la forma química.
1.6.2 Bioconcentración
Hace referencia a que algunas sustancias tienen más afinidad por los tejidos de
ciertas semillas que por el agua, por lo que pueden alcanzar concentraciones más
55
elevadas en esas semillas que en el agua. Esta capacidad depende,
fundamentalmente, del tipo de sustancia y de sus propiedades fisicoquímicas
como la solubilidad relativa en agua y en lípidos.
1.6.3 Bioacumulación
Se da cuando la concentración de una sustancia aumenta en la semilla expuesta
en función del tiempo; por ejemplo, que las concentraciones de una sustancia
específica son más altas en los peces adultos que en los jóvenes del mismo sitio.
Esta capacidad también depende, sobre todo, de las características fisicoquímicas
y bioquímicas del compuesto, como son solubilidad y velocidad de eliminación.
1.6.4 Biomagnificación
La magnificación biológica o Biomagnificación es la tendencia de las sustancias
contaminantes a concentrarse en niveles tróficos sucesivos. Este proceso sucede
cuando un producto contaminante que se asemeja químicamente a nutrientes
inorgánicos esenciales es incorporado y almacenado en la semilla del ser vivo que
se encuentra en la base de la cadena alimenticia. Posteriormente, la sustancia
contaminante pasa en grandes cantidades a la semilla del siguiente ser de la
cadena, de esta manera la sustancia contaminante va magnificándose de un nivel
a otro.
1.6.5 Bioestimulación
Las pruebas que arrojan esta características de Bioestimulación, evalúan la
situación relativa de los nutrientes en un determinado entorno acuático, se
distingue entre la cantidad total de nutrientes y la aprovechable desde el punto de
vista biológico y, finalmente, para determinar los posibles efectos de un cambio en
la calidad del agua sobre el crecimiento de las plantas. En un proceso de
Bioestimulación se observa que los nutrientes estimulan el metabolismo y la
velocidad de crecimiento de las semillas.
56
1.6.6 Necrosis
Es la muerte patológica de un conjunto de células o de cualquier tejido de la
semilla, provocada por un agente nocivo que ha provocado una lesión.
1.6.7 Ensayo de toxicidad con semillas de lechuga Batavia (Lactuca Sativa
L.)
El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (Lactuca sativa L.) es una
prueba estática de toxicidad aguda (120 h de exposición) en el que se pueden
evaluar los efectos fitotóxicos de compuestos puros o de mezclas complejas sobre
el proceso de germinación de las semillas y el desarrollo de las plántulas durante
los primeros días de crecimiento. Como puntos finales para la evaluación de los
efectos fitotóxicos, se determina la inhibición de la germinación y la elongación de
la radícula y del hipocótilo.
Es importante destacar que durante el periodo de germinación y los primeros días
de desarrollo de la plántula ocurren numerosos procesos fisiológicos en los que la
presencia de una sustancia tóxica puede interferir alterando la supervivencia y el
desarrollo normal de la planta, siendo por lo tanto una etapa de gran sensibilidad
frente a factores externos adversos. Por otra parte, muchas de las reacciones y
procesos involucrados son generales para la gran mayoría de las semillas, por lo
que la respuesta de esta especie y los datos obtenidos a partir de la aplicación de
esta prueba son en gran medida representativos de los efectos en semillas o
plántulas en general. El éxito o aptitud de una plántula para establecerse en un
ambiente determinado es relevante para garantizar la supervivencia de la especie.
La evaluación del desarrollo de la radícula y del hipocótilo constituye indicadores
representativos para determinar la capacidad de establecimiento y desarrollo de la
planta.
A diferencia de la prueba tradicional de germinación de semillas, la evaluación del
efecto en la elongación de la radícula y del hipocótilo de las plántulas permite
ponderar el efecto tóxico de compuestos solubles presentes en niveles de
concentración tan bajos que no son suficientes para inhibir la germinación, pero
que sin embargo pueden retardar o inhibir completamente los procesos de
57
elongación de la radícula o del hipocótilo, dependiendo ello del modo y sitio de
acción del compuesto. De esta manera, la inhibición en la elongación de la
radícula e hipocótilo constituyen indicadores sub-letales muy sensibles para la
evaluación de efectos biológicos en vegetales, aportando información
complementaria a la proporcionada al estudiar el efecto en la germinación. Este
ensayo puede ser aplicado para la evaluación de la toxicidad de compuestos
puros solubles, de aguas superficiales (lagos, ríos), aguas subterráneas, aguas
para consumo humano, aguas residuales domésticas e industriales, además de
lixiviados de suelos, sedimentos, lodos u otras matrices sólidas (Bowers et al.,
1997; Cheung et al., 1989; Dutka, 1989). A diferencia de otras pruebas en las que
se consideran algas o plantas acuáticas sumergidas como semilla diagnóstico, el
bioensayo con semillas permite evaluar la Fitotoxicidad de muestras coloreadas o
con elevada turbiedad de manera directa y sin necesidad de filtración previa.
Si bien Lactuca sativa L. no es una especie representativa de ecosistemas
acuáticos, la información generada a partir de esta prueba de toxicidad
proporciona datos acerca del posible efecto de los contaminantes en las
comunidades vegetales cercanas a las márgenes de cuerpos de agua
contaminados, siendo también una especie interesante de considerar por su
importancia desde el punto de vista hortícola. Por otra parte, es de fácil y rápida
germinación, por lo que es posible desarrollar la prueba en pocos días.
Este bioensayo de toxicidad ha sido recomendado y aplicado por diferentes
semillas de protección ambiental para la evaluación ecotóxicológicos de muestras
ambientales y compuestos puros, además de la evaluación del efecto fitotóxico de
pesticidas sobre especies y el blanco necesarios para el registro de pesticidas
(OECD, 1984; Wang, W. 1987; US EPA, 1989; Boutin et al., 1993).
1.7 CONTAMINACIÓN DEL MEDIO ACUÁTICO
La fragilidad del medio acuático deriva, entre otras razones, de su elevado poder
disolvente para una amplia gama de productos de desecho, a la vez que es un
vehículo excelente para la evacuación de materiales de muy diversa índole, tanto
en estado sólido como en líquido o gaseoso, bien sea en suspensión, disolución o
flotación. El problema con el medio acuático surge cuando se altera el equilibrio
58
en que se mantiene, sobrepasando los límites de tolerancia del sistema respecto a
los procesos que lo gobiernan.
Las consecuencias de la degradación del medio acuático se manifiestan
fundamentalmente de dos formas: pérdida de la calidad intrínseca o natural y la
disminución o agotamiento de los recursos. Los resultados son semejantes,
puesto que en ambos casos pueden provocar un déficit de los caudales
disponibles.
1.7.1 Tipos de contaminantes acuáticos
Según su naturaleza, los contaminantes pueden clasificarse en físicos, químicos o
biológicos.
1.7.1.1 Contaminantes físicos
- Temperatura: Interviene en la cantidad de oxígeno susceptible de
permanecer disuelto en la masa acuática, lo que a su vez repercute en las
condiciones de vida o las posibilidades de existencia de los seres que lo
precisan para la respiración; además interviene en los procesos biológicos
de las células y en consecuencia, en la velocidad de determinadas
reacciones bioquímicas y por último condiciona la posibilidad de
supervivencia de algunas especies faunísticas que se hallan supeditadas a
la existencia de determinados umbrales térmicos para poder desarrollarse.
- Partículas en suspensión: Pueden tener origen diverso y, en consecuencia,
composición y tamaños variados. Además pueden incorporarse otras
materias no solubles de diverso origen y naturaleza cuyos indicadores son:
la turbidez, el color, el sabor, el olor, etc.
1.7.1.2 Contaminantes químicos
- pH: En las aguas los valores ideales son de 7.
- Cloruros: La presencia en el agua del ion Cl- puede ser debida a causas
naturales, como sucede en áreas con predominio de materiales salinos;
pero si no existen estas causas, el contenido anormalmente elevado de
cloruros tiene su origen en los vertidos industriales o domésticos.
59
- Sulfatos: El contenido depende de las características del sustrato; en
lugares con abundancia de materiales ricos en sulfuros y con precipitación
escasa pueden encontrarse valores altos.
- Fosfatos: Es relativamente frecuente hallar niveles de fósforo en las aguas
superficiales y en algunas aguas subterráneas, como consecuencia del
gran uso de detergentes domésticos e industriales y abonos incorporados
en su composición. Una excesiva carga de fosfatos potencia la
eutrofización de las aguas.
- Oxigeno disuelto: El oxigeno disuelto en el agua procede del aire y entra a
formar parte de la masa acuática a partir del intercambio atmósfera-agua,
en una relación directamente proporcional a la superficie del agua e
inversamente al volumen.
- Metales: La presencia en el agua de trazas de metales pesados se debe a
los residuos de la actividad industrial, además de las debidas causas
naturales. Elementos como el arsénico, el cadmio, el cobre, el hierro, el
níquel, el plomo, el mercurio, el cromo o el zinc entre otros, son
potencialmente peligrosos para la salud, por lo que se hallan sometidos a
control.
1.7.1.3 Índice de calidad
La calidad del agua se asocia a los usos a que se destina, pero no solo referidos a
los usos domésticos, industriales o agrícolas, sino también a cualquier otra utilidad
que le requiera el medio acuático para desenvolverse, como las recreativas,
mantenimiento de los ecosistemas, etc.
El índice de calidad general de las aguas incorpora varios parámetros, de los
cuales los más importantes son los siguientes:
- Demanda bioquímica de oxígeno (DBO): Indica los miligramos de oxígeno
disuelto por litro, con lo que se tiene un indicador del grado del poder auto
depurador del río, así como la eficiencia de los distintos procesos de
tratamiento existente. La concentración se encuentra muy relacionada con
la cantidad de oxígeno que se consume en una oxidación, con el contenido
en materia orgánica biodegradable y, en menor grado, con los nutrientes
60
que controlan la depuración a través de los procesos biológicos de las
semillas que vienen en el agua y que se desarrollan a partir del consumo de
oxígeno y sustancias nutrientes.
- Demanda química de oxígeno (DQO): Corresponde a los procesos
químicos a diferencia del anterior, que se refiere a los biológicos, mide la
oxidabilidad, es decir, el consumo de oxígeno por parte de todas las
materias orgánicas, tanto del origen natural como artificial, biodegradables
o no, durante el proceso químico de la oxidación.
- Oxígeno disuelto: Hace posible la vida en el interior de la masa acuática y
procede de la atmósfera y de la fotosíntesis de las plantas verdes
acuáticas.
- Conductividad: Señala la concentración de sales inorgánicas,
especialmente cloruros y sulfatos, o el grado de acidez.18
1.7.2 Toxicidad de efluentes
1.7.2.1 Bario
Elemento químico, Ba, con número atómico 56 y peso atómico de 137.34. El bario
ocupa el decimoctavo lugar en abundancia en la corteza terrestre, en donde se
encuentra en un 0.04%, valor intermedio entre el calcio y el estroncio, los otros
metales alcalinotérreos. Los compuestos de bario se obtienen de la minería y por
conversión de dos minerales de bario. La barita, o sulfato de bario, es el principal
mineral y contiene 65.79% de óxido de bario. La witherita, algunas veces llamada
espato pesado, es carbonato de bario y contiene 72% de óxido de bario.
El metal lo aisló por primera vez Sir Humphry Davy en 1808 por electrólisis. En la
industria sólo se preparan pequeñas cantidades por reducción de óxido de bario
con aluminio en grandes retortas. El metal se utiliza en aleaciones bario-níquel
para alambres de bujía (el bario incrementa la capacidad de emisión de la
aleación) y en el metal de Frary, que es una aleación de plomo, bario y calcio, que
se usa en lugar del metal Babbitt porque puede moldearse.
18
Díaz Báez, María C, Bustos L, Martha, Espinosa R, Adriana J, Pruebas De Toxicidad Acuática:
Fundamentos y Métodos, Pág. 72-78, Universidad Nacional.
61
El metal reacciona con el agua más fácilmente que el estroncio y el calcio, pero
menos que el sodio; se oxida con rapidez al aire y forma una película protectora
que evita que siga la reacción, pero en aire húmedo puede inflamarse. El metal es
lo bastante activo químicamente para reaccionar con la mayor parte de los no
metales. El metal es dúctil y maleable; los trozos recién cortados tienen una
apariencia gris-blanca lustrosa.
La barita blanda (fácil de moler) se prefiere en la manufactura de los compuestos
de bario, pero pueden usarse variedades cristalinas. La barita cruda se muele y
mezcla con polvo de carbón. La mezcla se calcina en un horno rotatorio de
reducción; el sulfato de bario se reduce a sulfuro de bario o ceniza negra. La
ceniza negra consta de cerca de 70% de sulfuro de bario y se trata con agua
caliente para hacer una solución que sirve de material de partida en la
manufactura de muchos otros compuestos.
El lipoton, un polvo blanco que consta de 20% de sulfato de bario, 30% de sulfuro
de zinc y menos del 3% de óxido de zinc, se emplea en forma amplia como
pigmento en pinturas blancas. El blanco fijo se emplea en la manufactura de
colorantes brillantes. Es el mejor grado de sulfato de bario para pigmento en
pinturas. A causa de la gran absorción de rayos X por el bario, el sulfato sirve para
cubrir el tubo digestivo en radiografía, para aumentar el contraste. El carbonato de
bario es útil en la industria de la cerámica para prevenir la eflorescencia en arcillas
para loza. Se usa también como vidriado en alfarería, en vidrio óptico y como
veneno para ratas. El cloruro de bario se emplea en la purificación de sal, en la
manufactura de cloruro e hidróxido de sodio, como fundente en aleaciones de
magnesio, como ablandador de agua de calderas y en preparaciones medicinales.
El nitrato de bario, llamado también salitre de barita, se utiliza en pirotecnia y
señales luminosas (produce color verde) y un poco menos en preparaciones
medicinales. El óxido de bario, conocido como barita, o barita calcinada, se utiliza
como agente de secado en la industria y en el endurecimiento de aceros. El
peróxido de bario se emplea en ocasiones como agente blanqueador. El cromato
de bario, cromo limón o amarillo cromo, se emplea en pigmentos amarillos y
fósforos de seguridad. El clorato de bario se utiliza en pirotecnia. El acetato y
62
cianuro de bario su usan en la industria como reactivo químico y en metalurgia,
respectivamente.
1.7.2.1.1 Efectos del Bario sobre la salud
De forma natural los niveles de Bario en el medio ambiente son muy bajos. Altas
cantidades de Bario pueden sólo ser encontradas en suelos y en comida, como
son los frutos secos, algas, pescados y ciertas plantas. La cantidad de Bario que
es detectada en la comida y en agua generalmente no es suficientemente alta
como para llegar a ser concerniente a la salud. La gente con un gran riesgo a la
exposición del bario con efectos adicionales sobre la salud son los que trabajan en
la industria del Bario. Los mayores riesgos para la salud que ellos pueden sufrir
son causados por respirar aire que contiene sulfato de Bario o Carbonato de Bario.
Muchos vertederos de residuos peligrosos contienen ciertas cantidades de Bario.
La gente que vive cerca de ellos posiblemente está expuesta a niveles dañinos. La
exposición podrá entonces ser causada por respirar polvo, comer tierra o plantas,
o beber agua que está contaminada con Bario. Por contacto en la piel puede
también ocurrir.
Los efectos sobre la salud del Bario dependen de la solubilidad de los
compuestos. Compuestos del Bario que se disuelven en agua pueden ser dañinos
para la salud humana. La toma de gran cantidad de Bario que es soluble puede
causar parálisis y en algunos casos incluso la muerte.
Pequeñas cantidades de Bario soluble en agua puede causar en las personas
dificultad al respirar, incremento de la presión sanguínea, arritmia, dolor de
estómago, debilidad en los músculos, cambios en los reflejos nerviosos,
inflamación del cerebro y el hígado. Daño en los riñones y el corazón.
No se ha demostrado que el Bario cause cáncer en los humanos. No hay prueba
de que el Bario pueda causar infertilidad o defectos de nacimiento.
1.7.2.1.2 Efectos ambientales del Bario
El Bario es un metal plateado-blancuzco que puede ser encontrado en el
medioambiente, donde existe de forma natural. Aparece combinado con otros
elementos químicos, como el azufre, carbón u oxígeno.
63
Los compuestos del Bario son usados por las industrias del aceite y gas para
hacer lubricantes para taladros. Los compuestos del Bario son también usados
para hacer pinturas, bricks, azulejos, vidrio y gomas.
Debido al uso extensivo del Bario en las industrias, el Bario ha sido liberado al
ambiente en grandes cantidades. Como resultado las concentraciones de Bario en
el aire, agua y suelo pueden ser mayores que las concentraciones que ocurren de
forma natural en muchos lugares. El Bario es liberado al aire por las minas,
proceso de refinado, y durante la producción de compuestos de Bario. Puede
entrar también al aire durante la combustión del carbón y aceites.
Algunos compuestos del Bario que son liberados durante procesos industriales se
disuelven fácilmente en agua y son encontrados en lagos, ríos y arroyos.
Debido a sus solubilidades estos compuestos del Bario pueden alcanzar largas
distancias desde sus puntos de emisión. Cuando peces y otros organismos
acuáticos absorben los compuestos del Bario, el Bario se acumulará en sus
cuerpos. Los compuestos del Bario que son persistentes usualmente permanecen
en la superficie del suelo, o en el sedimento de las aguas. El Bario es encontrado
en la mayoría de los suelos en bajos niveles. Estos niveles pueden ser más altos
en vertederos de residuos peligrosos. 19
1.7.2.2 Hierro
Elemento químico, símbolo Fe, número atómico 26 y peso atómico 55.847. El
Hierro es el cuarto elemento más abundante en la corteza terrestre (5%). Es un
metal maleable, tenaz, de color gris plateado y magnético. Los cuatro isótopos
estables, que se encuentran en la naturaleza, tienen las masas 54, 56, 57 y 58.
Los dos minerales principales son la hematita, Fe2O3, y la limonita, Fe2O3.3H2O.
Las piritas, FeS2, y la cromita, Fe (CrO2)2, se explotan como minerales de azufre y
de cromo, respectivamente. El hierro se encuentra en muchos otros minerales y
está presente en las aguas freáticas y en la hemoglobina roja de la sangre.
La presencia del Hierro en el agua provoca precipitación y coloración no deseada.
Existen técnicas de separación del Hierro del agua.
19
http://www.lenntech.es/periodica/elementos/ba.htm#ixzz0YKXfqcNx.
64
El uso más extenso del Hierro (fierro) es para la obtención de aceros estructurales;
también se producen grandes cantidades de Hierro fundido y de Hierro forjado.
Entre otros usos del Hierro y de sus compuestos se tienen la fabricación de
imanes, tintes (tintas, papel para heliográficas, pigmentos pulidores) y abrasivos
(colcótar).
Existen varias formas alotrópicas del Hierro. La ferrita es estable hasta 760ºC
(1400ºF). El cambio del Hierro B comprende principalmente una pérdida de
permeabilidad magnética porque la estructura de la red (cúbica centrada en el
cuerpo) permanece inalterada. La forma alotrópica tiene sus átomos en arreglos
cúbicos con empaquetamiento cerrado y es estable desde 910 hasta 1400ºC
(1670 hasta 2600ºF).
Este metal es un buen agente reductor y, dependiendo de las condiciones, puede
oxidarse hasta el estado 2+m 3+ o 6+. En la mayor parte de los compuestos de
Hierro está presente el ion ferroso, Hierro (II), o el ion férrico, Hierro (III), como una
unidad distinta. Por lo común, los compuestos ferrosos son de color amarillo claro
hasta café verdoso oscuro; el ion hidratado Fe (H2O)62+, que se encuentra en
muchos compuestos y en solución, es verde claro. Este ion presenta poca
tendencia a formar complejos de coordinación, excepto con reactivos fuertes,
como el ion cianuro, las poliaminas y las porfirinas. El ion férrico, por razón de su
alta carga (3+) y su tamaño pequeño, tiene una fuerte tendencia a capturar
aniones. El ion hidratado Fe(H2O)63+, que se encuentra en solución, se combina
con OH-, F-, Cl-, CN-, SCN-, N3-, C2O4
2- y otros aniones para forma complejos de
coordinación.
Un aspecto interesante de la química del hierro es el arreglo de los compuestos
con enlaces al carbono. La cementita, Fe3C, es un componente del acero. Los
complejos con cianuro, tanto del ion ferroso como del férrico, son muy estables y
no son intensamente magnéticos, en contraposición a la mayor parte de los
complejos de coordinación del hierro. Los complejos con cianuro forman sales
coloradas.
65
1.7.2.2.1 Efectos del Hierro sobre la salud
El Hierro puede ser encontrado en carne, productos integrales, patatas y
vegetales. El cuerpo humano absorbe Hierro de animales más rápido que el Hierro
de las plantas. El Hierro es una parte esencial de la hemoglobina: el agente
colorante rojo de la sangre que transporta el oxígeno a través de nuestros
cuerpos.
Puede provocar conjuntivitis, coriorretinitis, y retinitis si contacta con los tejidos y
permanece en ellos. La inhalación crónica de concentraciones excesivas de
vapores o polvos de óxido de Hierro puede resultar en el desarrollo de una
neumoconiosis benigna, llamada sideriosis, que es observable como un cambio en
los rayos X. Ningún daño físico de la función pulmonar se ha asociado con la
siderosis. La inhalación de concentraciones excesivas de óxido de Hierro puede
incrementar el riesgo de desarrollar cáncer de pulmón en trabajadores expuestos
a carcinógenos pulmonares. LD50 (oral, rata) =30 gm/kg. (LD50: Dosis Letal 50.
Dosis individual de una sustancia que provoca la muerte del 50% de la población
animal debido a la exposición a la sustancia por cualquier vía distinta a la
inhalación. Normalmente expresada como miligramos o gramos de material por
kilogramo de peso del animal.)
1.7.2.2.2 Efectos ambientales del Hierro
El Hierro (III)-O-arsenito, pentahidratado puede ser peligroso para el medio
ambiente; se debe prestar especial atención a las plantas, el aire y el agua. Se
recomienda encarecidamente que no se permita que el producto entre en el medio
ambiente porque persiste en éste. 20
1.7.2.3 Manganeso
Elemento químico, símbolo Mn, de número atómico 25 y peso atómico 54.938. Es
uno de los metales de transición del primer periodo largo de la tabla periódica; se
encuentra entre el cromo y el Hierro. Tiene propiedades en común con ambos
20
http://www.lenntech.es/periodica/elementos/fe.htm.
66
metales. Aunque poco conocido o usado en su forma pura, reviste gran
importancia práctica en la fabricación de acero.
El Manganeso se oxida con facilidad en el aire para formar una capa castaña de
óxido. También lo hace a temperaturas elevadas. A este respecto su
comportamiento es más parecido a su vecino de mayor número atómico en la
tabla periódica (el Hierro), que al de menor número atómico, el cromo.
El Manganeso es un metal bastante reactivo. Aunque el metal sólido reacciona
lentamente, el polvo metálico reacciona con facilidad y en algunos casos, muy
vigorosamente. Cuando se calienta en presencia de aire u oxígeno, el Manganeso
en polvo forma un óxido rojo, Mn3O4. Con agua a temperatura ambiente se forman
hidrógeno e hidróxido de Manganeso (II), Mn(OH)2. En el caso de ácidos, y a
causa de que el Manganeso es un metal reactivo, se libera hidrógeno y se forma
una sal de Manganeso (II). El manganeso reacciona a temperaturas elevadas con
los halógenos, azufre, nitrógeno, carbono, silicio, fósforo y boro.
En sus muchos compuestos, presenta estados de oxidación de 1+ hasta de 7+.
Los estados de oxidación más comunes son 2+, 4+ y 7+. Todos los compuestos,
excepto los que contienen MnII, son intensamente coloridos. Por ejemplo, el
permanganato de potasio, KmnO4, produce soluciones acuosas que son de color
rojo púrpura; el manganato de potasio, K2MnO4, produce soluciones de color verde
intenso.
Los compuestos de Manganeso tienen muchas aplicaciones en la industria. El
dióxido de Manganeso se usa como un agente desecante o catalizador en pinturas
y barnices y como decolorante en la fabricación de vidrio y en pilas secas. El
permanganato de potasio se emplea como blanqueador para decoloración de
aceites y como un agente oxidante en química analítica y preparativa.
1.7.2.3.1 Efectos del Manganeso sobre la salud
El Manganeso es un compuesto muy común que puede ser encontrado en todas
partes en la tierra. El Manganeso es uno de los tres elementos trazas tóxicos
esenciales, lo cual significa que no es sólo necesario para la supervivencia de los
humanos, pero que es también tóxico cuando está presente en elevadas
concentraciones en los humanos. Cuando la gente no cumple con la ración diaria
67
recomendada su salud disminuirá. Pero cuando la toma es demasiado alta
problemas de salud aparecerán.
La toma de Manganeso por los humanos mayoritariamente tiene lugar a través de
la comida, como son las espinacas, el té y las hierbas. Las comidas que contienen
las más altas concentraciones son los granos y arroz, las semillas de soja, huevos,
frutos secos, aceite de oliva, judías verdes y ostras. Después de ser absorbido en
el cuerpo humano el manganeso será transportado a través de la sangre al
hígado, los riñones, el páncreas y las glándulas endocrinas.
Los efectos del Manganeso mayormente ocurren en el tracto respiratorio y el
cerebro. Los síntomas por envenenamiento con Manganeso son alucinaciones,
olvidos y daños en los nervios. El Manganeso puede causar Parkinson, embolia de
los pulmones y bronquitis.
Cuando los hombres se exponen al Manganeso por un largo periodo de tiempo el
daño puede llegar a ser importante.
Un síndrome que es causado por el Manganeso tiene los siguientes síntomas:
esquizofrenia, depresión, debilidad de músculos, dolor de cabeza e insomnio.
Porque el Manganeso es un elemento esencial para la salud de los humanos la
falta de este puede también causar efectos sobre la salud. Estos son los
siguientes efectos:
Engordar
Intolerancia a la glucosa
Coágulos de sangre
Problemas de la piel
Bajos niveles de colesterol
Desorden del esqueleto
Defectos de nacimiento
Cambios en el color del pelo
Síntomas neurológicos
1.7.2.3.2 Efectos ambientales del Manganeso
Los compuestos del Manganeso existen de forma natural en el ambiente como
sólidos en suelos y pequeñas partículas en el agua. Las partículas de Manganeso
68
en el aire están presentes en las partículas de polvo. Estas usualmente se
depositan en la tierra en unos pocos días.
Los humanos aumentan las concentraciones de Manganeso en el aire por las
actividades industriales y a través de la quema de productos fósiles. El
Manganeso que deriva de las fuentes humanas puede también entrar en la
superficie del agua, aguas subterráneas y aguas residuales. A través de la
aplicación del Manganeso como pesticida el Manganeso entrará en el suelo.
Para los animales el Manganeso es un componente esencial sobre unas 36
enzimas que son usadas para el metabolismo de carbohidratos, proteínas y
grasas.
Con animales que comen muy poco manganeso interfiere en el crecimiento
normal, la formación de huesos y en la reproducción.
Para algunos animales la dosis letal es bastante baja, lo cual significa que tienen
pocas posibilidades de supervivencia incluso a pequeñas dosis de manganeso
cuando este excede la dosis esencial. El Manganeso puede causar disturbancias
en los pulmones, hígado y vasculares, decremento de la presión sanguínea, fallos
en el desarrollo de fetos de animales y daños cerebrales.
Cuando el Manganeso es tomado a través de la piel este puede causar temblores
y fallos en la coordinación. Finalmente, las pruebas de laboratorio con animales
han mostrado que diversos envenenamientos con Manganeso deberían incluso
ser capaces de causar el desarrollo de tumores en animales.
En plantas los iones del Manganeso son transportados hacia las hojas después de
ser tomados en el suelo. Cuando muy poco manganeso puede ser absorbido
desde el suelo esto causa disturbaciones en los mecanismos de las plantas. Por
ejemplo disturbaciones en la división del agua en hidrógeno y oxígeno, en lo cual
el Manganeso juega un papel importante.
El Manganeso puede causar síntomas de toxicidad y deficiencia en plantas.
Cuando el pH del suelo es bajo las deficiencias de Manganeso son más comunes.
69
Concentraciones altamente tóxicas de Manganeso en suelo pueden causar
inflamación de la pared celular, abrasamiento de las hojas y puntos marrones en
las hojas. La deficiencia puede también causar estos efectos entre
concentraciones tóxicas y concentraciones que causan deficiencias una pequeña
área de concentraciones donde el crecimiento de la planta es óptimo puede ser
detectado.21
1.8 ANÁLISIS ESTADÍSTICO
A continuación se presentan los diferentes métodos estadísticos que se utilizan
para determinar los efectos generados por los agentes tóxicos durante la
exposición a las semillas.
1.8.1 Análisis por método PROBIT
Si en lugar de representar el histograma de frecuencias de la forma convencional
se representa la frecuencia acumulada frente a la dosis, obtendremos la figura
representada en la curva, de forma sigmoidea, posee una zona relativamente
lineal en su parte central, correspondiente al rango 16% a 84% de respuesta
porcentual de la población, aproximadamente, representada, de la media de la
tendencia central utilizada, es decir, la media o mediana de los datos distribuidos
normalmente. En este tipo de distribución, la media ± 1 SD representa el 68.3%
del la población; la media ±2 SD, el 99.5% y la media ± 3 SD, el 99.7%.
Podemos convertir la respuesta porcentual en unidades de desviación respecto a
la media, denominadas desviación normal equivalente, o NED. Por consiguiente la
NED de una respuesta porcentual del 50% es de 0, mientras que el valor de la
NED de una respuesta porcentual del 97.8% y 2,25% de la población es de +2 y -2
respectivamente.
Para evitar los valores negativos, la escala de NEDs se puede someter a una
translación añadiendo 5 unidades, con lo cual el valor central seria de 5, mientras
que los valores indicados para la respuesta porcentual del 97.8% y 2.25%
pasarían a ser de +7 y +3, respectivamente. Las nuevas unidades así obtenidas
21
http://www.lenntech.es/periodica/elementos/mn.htm.
70
reciben el nombre de PRO BIT (por cobiontracción de probability unit) y se
utilizan a menudo en toxicología.22
1.8.2 Análisis de varianza (ANOVA)
Se conoce como la iniciación presentada de una explicación lógica de un
procedimiento y como su nombre lo indica, el análisis de varianza trata de analizar
la variación de una respuesta y de asignar porciones (componentes) de esta
variación a cada una de las variables de un conjunto de variables independientes.
El razonamiento se basa en que las variables de una respuesta se modifican por
la variación de algún conjunto de variables independientes desconocidas. El
objetivo del análisis de varianza es identificar variables independientes
importantes en un estudio y determinar cómo interactúan y afectan la respuesta.
- Ho: es considerada la hipótesis nula dentro una investigación,
determinándose cuando la F calculada de la prueba no supera el F teórico,
indicado para la semilla Lactuca sativa L. con un valor de 3.11.
- H1: considerada como la hipótesis alterna, seleccionada cuando la prueba
india un valor superior a F teórico.
- F teórica: valor teórico establecido a nivel internacional para pruebas
fitotóxicas con semillas.
- F calculado: valor obtenido por el análisis de varianza ANOVA el cual debe
ser superior al F teórico y así obtener la aceptación o rechazo de la prueba.
Para el análisis de los resultados se usa la siguiente tabla representada en la
figura 2.
Figura 2. Tabla usada para determinar la varianza.
22
Moreno Grau, María Dolores, Toxicología Ambiental Evaluación de Riesgo para La Salud Humana,
McGraw-Hill 2003, Pág. 10 y 11.
71
R1 R2 R3
Blanco
Total
Concentración Número de organismos que no germinaron
Total Promedio
R= replicas realizadas Fuente: Autoras (2009).
1.9 INDUSTRIA GALVANICA
La industria con procesos galvánicos consisten en la trasformación de metales por
medio de un recubrimiento superficial con diferentes sustancias químicas, es
utilizado para la reducción de costos y cuando la finalidad sea modificar las
propiedades de la superficie de los metales.
Por medio de este proceso se genera una mayor:
Resistencia corrosiva
Resistencia al contacto con químicos
Mejoramiento de las propiedades físicas y mecánicas
Tolerancia a niveles más altos a las fricciones
1.9.1 Descripción del sector galvánico
El sector de la industria galvanotecnia está agrupado bajo el conjunto de industrias
dedicadas a la fabricación de productos metálicos, con excepción de maquinaria y
equipo. Existe en Bogotá numerosos establecimientos enmarcados en esta
agrupación, dispersos tanto en las residencias como en industrias. La industria
galvanotecnia incluye un gran número de empresas dedicadas a prestar un
servicio parcial de las piezas, con excepción de unas pocas que manufacturan
totalmente las piezas. Los diferentes procesos de galvanotecnia dependen del tipo
de elemento que va a ser tratado.
El tamaño de operación de las plantas de galvanotecnia varía desde pequeños
talleres hasta organizaciones más consolidadas. Como ya se mencionó, la planta
galvánica pueden ser integrada en serie a los proceso productivos
72
metalmecánicos, o pueden ser plantas exclusivamente de servicios. En las plantas
de servicio también se puede desarrollar operaciones de superficies de
desbastado, pulido y brillado.
1.9.2 El proceso galvánico
La galvanotecnia es una técnica que consiste en la electrodeposición de un
recubrimiento metálico sobre una superficie que puede ser metálicas o no.
Recomendada para la reducción costos o por razones estructurales, es necesario
modificar las características del metal seleccionado.
El objetivo del recubrimiento es mejorar la apariencia del metal base, protegerlo de
la corrosión y de algunos casos, modificar alguna propiedad superficial, como por
ejemplo, mejorar sus propiedades eléctricas o mecánicas, dar mayor dureza
ejercer lubricación, etc. En galvanotecnia se consideran dos tipos de procesos: la
galvanotecnia y la galvanostegia. El primero, se refiere al proceso en el que los
recubren sobre superficies de metales no conductores; mientras que el segundo,
la galvanostegia, los recubrimientos siempre se realizan sobre elementos
metálicos. 23
1.10 MARCO NORMATIVO
Para determinar las concentraciones máximas permisibles de vertimientos
industriales dentro de nuestro país, debemos remitirnos a la legislación ambiental
normas nacionales y específicas donde se citan estos parámetros para verter en
cuerpos de agua o alcantarillado garantizando un impacto de menor alcance.
Las principales normas ambientales que regulan la legislación en la parte de
protección de los recursos naturales (manejo de aguas) y la adecuada
implementación. Las cuales pueden ser remitidas a normas más específicas como
en el manejo de los vertimientos industriales.
Tabla 1. Legislación Ambiental.
23
Galvanotecnia Planes de Acción para Mejoramiento Ambiental, Manual para Empresarios de La PYME,
Editorial Acercar Bogotá D.C 1997.
73
NORMAS DESCRIPCIÓN
Código de recursos
naturales (Decreto-Ley
2811 de 1974)
El Código Nacional de Recursos Naturales
Renovables y de Protección al Medio Ambiente,
en su capítulo II, desarrolla la regulación para la
prevención y la conservación de los recursos
hídricos frente a la creciente contaminación de los
recursos naturales renovable.
Decreto 1594 DE 1984
Se establece dentro de esta norma de forma
amplia y concisa lo referente al manejo adecuado
y descarga de los vertimientos de aguas
residuales, determinando los niveles máximos
permisibles con los que pueden ser descargados
los vertimientos en un cuerpo de agua, se
implementó la utilización de los estudios de
impacto ambiental y se establecieron procesos
sancionatorios.
Ley 99 de 1993 (Art 66)
Índica las competencias para cada una de las
autoridades correspondientes en su jurisdicción,
con la cual debe garantizar y verificar el manejo
adecuado de los vertimientos generados por
diferentes actividades industriales y que puedan
generar daño inminente al medio.
Resolución 1074 de
1997
Establecen estándares ambientales en materia de
vertimientos. La norma indica los límites
máximos en los que se puede generar descargas
a un cuerpo de agua o alcantarillado público,
estos niveles se mencionaran a continuación.
74
Fuente: Resolución 1074 de 1997, Articulo 3 niveles máximos permisibles para generar descarga
en acuíferos o alcantarillado público.
75
2. ANTECEDENTES
Históricamente, el uso de métodos biológicos para la detección de sustancias
nocivas o peligrosas se registra a comienzos del siglo XX, el uso de bioensayos
con peces inicia hacia 1940 y las pruebas con invertebrados y algas se reportan a
lo largo de la década del cincuenta. Actualmente, las evaluaciones toxicológicas
integran diferentes niveles poblacionales, comunidades o ecosistemas que
permiten identificar los elementos biológicos en riesgo (Díaz-Báez, Bustos y
Espinosa 2004).
Teniendo en cuenta este marco de referencia y consciente de la necesidad de la
evaluación de la presencia de sustancias tóxicas en agua con organismos tales
como Daphnia Pulex, Daphnia Magna, Alevinos de Trucha arco iris, en el país la
Facultad de Ingeniería Ambiental y Sanitaria de la Universidad de la Salle a partir
del 2007 propone temas de tesis orientadas a lograr un conocimiento no sólo de
los problemas y necesidades nacionales en el área de toxicología acuática, sino
también del desarrollo de una capacidad técnica y de infraestructura para
afrontarlas, ya que cuenta con un área de laboratorio independiente para este tipo
de estudios.
En el año 2007 se realizó el ensayo de toxicidad aguda al efluente de la PTAR de
la Calera mediante la utilización de semillas de Lactuca sativa L. y propuesta para
su utilización como agua de riego para cultivos, como primer trabajo realizado con
semillas.
A nivel internacional En octubre de 2001 en el III encuentro de las aguas: agua
vida y desarrollo, que se llevo a cabo en Santiago – Chile se realizó un montaje y
puesta en marcha de un laboratorio de bioensayos para evaluar la toxicidad de las
aguas a nivel local, donde se trabajo con Lactuca sativa L.; obteniendo como
resultados a partir de pruebas ambientales con 120 h: De los 11 bioensayos
realizados con Lactuca sativa L. sólo 6 arrojaron algún porcentaje de inhibición
(entre 5,7 a 34,8%). Los mayores porcentajes de inhibición se detectaron en el
punto de muestreo localizado 100 metros aguas abajo de la zona de descarga de
76
residuos industriales líquidos, tanto para aquellas concentraciones de 50 como
100%.
En el XXVIII Congreso Interamericano de Ingeniería Sanitaria y Ambiental
realizado en Cancún, México (2002), cuyo tema a tratar fue “Influencia de las
Precipitaciones Acidas Sobre el Crecimiento Radicular de Lactuca sativa L. y
Amaranthus hypochondriacus”. El desarrollo de este congreso se basó en la
problemática asociada a la contaminación atmosférica generando lluvia ácida, la
cual al precipitarse afecta a los ecosistemas terrestres y acuáticos, a las áreas de
cultivo, a las construcciones y monumentos históricos. Cabe mencionar que en
México a partir de los años ochentas se comenzaron a realizar estudios sobre
lluvia ácida (Hernández T. T. Y Bauer M. L. 1986; Báez A. P. Y Belmont R., 1987),
los cuales han puesto de manifiesto la degradación del aire y sus efectos sobre las
plantas. En primera instancia, estos efectos tienen importancia económica, ya que
pueden afectar zonas de cultivo; y en segunda instancia ponen en peligro la
sustentabilidad de los bosques al ver afectado todo el ecosistema. Dado que las
plantas son esenciales en los ecosistemas terrestres ya que proveen alimento,
refugio y sitio de anidamiento para numerosos organismos, participan en forma
primordial en el reciclaje de nutrientes y en la estabilización de suelos; el daño a
las plantas producido por la lluvia ácida y los contaminantes disueltos en ella
pueden afectar directamente las funciones de los seres humanos. Por tales
motivos se recomiendo la inclusión de plantas en los estudios de monitoreo
ambiental y una alternativa para evaluar el efecto del agua lluvia sobre las plantas
es mediante bioensayos con semillas; este tipo de pruebas permite evaluar el
efecto tóxico de compuestos solubles en el agua, puesto que la presencia de
compuestos tóxicos en bajas concentraciones que no son suficientes para inhibir
la germinación pueden retardar o inhibir completamente la división celular
impidiendo la elongación radicular (Dutka, B.,1989).
La Universidad Nacional Agraria La Molina, en Perú, en el año 2004 realizó un
estudio sobre Efectos de los Plaguicidas Metamidofos y Carbofuran sobre
Alevinos de Trucha Arco Iris (Oncorhynchus Mykiss), este trabajo se desarrolló en
el Centro Piscícola El Ingenio, Provincia de Concepción en Perú.
77
En el año 2006 se realizó otra investigación, para esta ocasión se estudió el efecto
ecotoxicológico, en tres niveles de dureza total de agua, del dodecil benceno
sulfonato de sodio (DBSS) y del alquil aril sulfonato de sodio (AASS), ingredientes
activos principales de dos detergentes comerciales biodegradables, en el Centro
de Producción “El Ingenio”, Huancayo - Perú, empleando la “trucha arco iris”
Oncorhynchus mykiss como herramienta para la evaluación de riesgo ambiental.
Tabla 2. Cuadro comparativo de trabajos hechos con control positivo de ZnSO4 con CE mg/L.
Dutka (1996) 10
Bioensayos de fitotoxicidad
de residuos orgánicos en
lechuga y ballica anual
realizados en un suelo alfisol
degradado, Universidad de
Concepción-Chillán-Chile
2007
13.6
TRABAJO RESULTADO
Montaje y puesta en marcha
de un laboratorio de
bioensayos para evaluar la
toxicidad de las aguas a nivel
local. Municipalidad de
Pudahuel-Santiago-Chile 2001
EVALUACIÓN DE Lactuca
sativa Y Selenastrum
capricornutum COMO
INDICADORES DE TOXICIDAD
EN AGUAS, Pontificia
Universidad Javeriana-Bogotá-
Col. JUL-DIC 2007
14.48
14.01
Fuente: Autoras (2009).
78
3. METODOLOGÍA
La metodología se realizó en cuatro etapas de investigación; en la primera se
llevaron a cabo los ensayos preliminares y ensayos definitivos con el fin de
determinar la sensibilidad de la especie en estudio con el tóxico de referencia
seleccionado: Sulfato de Zinc (ZnSO4). La segunda etapa, se van a acondicionan
las muestras y se miden los Parámetros fisicoquímicos relevantes en pruebas de
toxicidad, la tercera etapa es la generación de pruebas fitotóxicas para determinar
la CE50 para el Bario, el Hierro y el Manganeso establecidos a partir de Cloruro
Ferroso, Cloruro de Bario y Óxido de Manganeso, el montaje de la pruebas
fitotóxicas para los vertimiento de Hierro y Manganeso provenientes de la industria
galvánica, estableciendo la CE50 de estos dos contaminantes, obteniendo la
concentración inicial de estos metales por espectrofotómetro de absorción
atómica, realizado por un laboratorio certificado; por ultimo en la cuarta etapa se
obtiene el índice de toxicidad para cada uno de los contaminantes.
3.1 PRIMERA ETAPA
3.1.1 Diseño general de las pruebas eco-toxicológicas
Cada batería de ensayos se efectuó realizando el montaje mostrado en la Figura
3.
Figura 3. Estructura de la prueba de toxicidad utilizando semilla de lechuga.
Fuente: Modificada de la fuente: Evaluación Preliminar de la Prueba de Toxicidad Utilizando
Semillas de Arroz y Lechuga.
79
De igual forma durante la realización de las diferentes pruebas se midieron y
controlaron las siguientes variables:
3.1.1.1 Variable independiente
Esta variable se refiere a las concentraciones elegidas para aplicar en las pruebas
de sensibilidad con la especie y el tóxico de referencia escogidos y diluciones a las
cuales fue expuesta la especie de ensayo con agua de la industria galvánica.
3.1.1.2 Variables dependientes
Las más significativas durante la realización del proyecto son: la concentración
efectiva (CE50), la inhibición en el crecimiento de las raíces de las plántulas y los
porcentajes de germinación que se obtendrán pasadas 120 horas (tiempo
requerido para completar el proceso de crecimiento de las semillas).
3.1.1.3 Constantes
La variables que permanecen constantes son las siguientes: número de semillas
expuestos (30 por cada concentración), tiempo de exposición (120 horas), número
de concentraciones (5, mas el blanco en cada prueba), fotoperiodo (oscuridad),
volumen que se adicionan a los semillas expuestos (3ml).
Para la realización de las pruebas biológicas y el diseño del modelo experimental,
se tomó como base la tesis realizada por Jairo Hernán López Celis Y Andrea
Liliana Bayona Pineda
3.1.2 Esquema general del procedimiento de prueba de toxicidad con
semillas
80
PRUEBA DE TOXICIDAD AGUDA CON SEMILLAS DE LACTUCA SATIVA L.
Figura 4. Retomada de: BULUS ROSSINI, Gustavo Daniel; DÍAZ BAEZ, María Consuelo; PICA
GRANADOS, Yolanda, Capítulo 4. Protocolos de Ensayo. Diciembre de 2004.
3.1.3 Reactivos y materiales
3.1.3.1 Selección de material biológico
El material biológico con el que se desarrolló el proyecto fue la semilla Lactuca
sativa L., por su rápida germinación, facilidad de medición y viabilidad económica,
además de las ventajas mencionadas a continuación:
Blanco
Diluciones de la muestra Cada una con 3 repeticiones
120horas de exposición
Registro de signos de fitotoxicidad
Registro de semillas germinadas
Medición de la elongación de la radícula y del hipocótilo
Calculo del porcentaje de inhibición
Cálculo de la CE50
Oscuridad 2mL de muestra
120 horas Control positivo
22+/-2ºC
81
Alta y constante sensibilidad a tóxicos.
Estabilidad genética y uniformidad en las poblaciones.
Representatividad de su nivel trófico.
Facilidad de cultivo y adaptabilidad a las condiciones de laboratorio.
No requiere equipamiento sofisticado.
Utilidad para el control de efluentes.
Estas plantas vasculares han sido recomendadas por la Agencia de Protección
Ambiental (EPA) y por la administración de medicamentos y alimentos (FDA),
ambas de EE.UU., ya que presentan una eficiente sensibilidad, en comparación
con otras especies de plantas terrestres (Wang, 1991).
La semilla utilizada durante la investigación tienes las siguientes características
mencionadas en la tabla 3.
Tabla 3. Características de la semilla Lactuca Sativa L.
GERMINACION % PUREZA%
85 99
Fuente: Autoras (2009).
3.1.3.2 Tóxico de referencia
Para las pruebas de sensibilidad se manejo Sulfato de Zinc (ZnSO4); para las
pruebas con sustancias puras se utilizaron: Cloruro Ferroso (FeCl2), Cloruro de
Bario (BaCl2) y Óxido de Manganeso (MnO2), todos reactivos analíticos
provenientes de laboratorios Merck.
El Sulfato de Zinc El sulfato de zinc es un compuesto químico cristalino,
incoloro y soluble en agua, de fórmula ZnSO4, aunque siempre va
acompañado de un determinado número de moléculas de agua de
hidratación, su composición química está dividida de la siguiente manera:
Zn: 22,73%, S: 11,15%, O: 22,25% y H2O: 43,85 con un peso molecular
de 287,54 g/mol.
El Cloruro Ferroso es usado en los procesos metalúrgicos como agente
reductor, en procesos de tratamientos bilógicos para eliminar olores, en
los procesos de afluentes industriales y mineros para la eliminación de
82
sulfuros y en los procesos de absorción de gases para la absorción de
gases clorados, su composición química está dividida de la siguiente
manera: Fe: 44,05%, y Cl: 55,94% con un peso molecular de 126,75
g/mol.
El Cloruro de Bario Compuesto que se presenta en cristales tubulares o
escamas del sistema rómbico, incoloras y brillantes, que contienen dos
moléculas de agua; son estables al aire y su sabor es salado, amargo,
desagradable, con propiedades venosas. Su fórmula química es
BaCl2·2H2O. Su densidad es de 3,05 a 15º y, por el calor, pierde el agua
de cristalización, fundiendo luego a unos 960º. La sal anhidra recupera
poco a poco el agua de cristalización cuando se expone en contacto del
aire. Por la acción de los rayos X se pone fosforescente; no se disuelve
en el alcohol etílico y muy poco en el metílico. Se emplea el cloruro de
bario como reactivo y para evitar la formación de incrustaciones en las
calderas, para preparar el blanco, su composición química está dividida
de la siguiente manera: Ba: 56,22%, Cl: 29,02% y H2O: 14,74 con un peso
molecular de 244,28 g/mol.
Óxido de Manganeso conocido como pirolusita, es el óxido más importante
del manganeso, pero no el más estable. Se utiliza en pinturas y barnices
para pintar cristales y cerámica. Y en la obtención de cloro, yodo y como
despolarizador en pilas secas su composición química está dividida de la
siguiente manera: Mn: 63,19% y O: 36,80% con un peso molecular de
86,94 g/mol.
3.1.3.3 Material de laboratorio seleccionado
83
Tabla 4. Material empleado para los bioensayos realizados con Lactuca sativa L.
MATERIAL IMAGEN
Cajas de Petri de 100 mm de
diámetro
Papel de filtro Whatman Nº3
(o equivalente), 90 mm de
diámetro
Balones aforados de 1000ml
y 100ml
Pipetas aforadas de 0,1, 1, 2
y 5
Pipeteadores
Cuadricula milimetrada como
elemento de medición, Pinzas
84
Bandejas
Bolsas negras
Botellas ámbar 1L y 500ml
Beaker, erlenmeyer
y embudos de vidrio
Fuente: Autoras (2009).
3.1.4 Montaje de las pruebas de sensibilidad
Estas pruebas de sensibilidad se llevaron a cabo con el sulfato de Zinc (ZnSO4)
con el fin de garantizar la efectividad de las semillas hacia las pruebas posteriores.
Para esta determinación se realizaron 20 pruebas de sensibilidad, con su
respectivo blanco.
Foto 3. Montaje Pruebas de sensibilidad.
Fuente: Autoras (2009).
85
3.1.4.1 Preparación de las diluciones
Se realizaron diluciones de 0.01ppm, 0.1ppm, 1ppm, 10ppm y 100ppm a partir de
la muestra de Sulfato de Zinc obtenida, para lo cual se empleó el siguiente
esquema:
Diagrama 1. Preparación de las diluciones.
Fuente: Autoras (2009).
Mediante la siguiente ecuación se llevo a cabo la preparación de la solución
patrón:
Por medio de la ecuación:
Fuente: Whitten, Química general
1 hora
1 hora
Agregar a un crisol 2-3 gr de ZnSO4 y
ponerlo en la estufa a 1000C.
Llevar el crisol a un desecador.
Medir en balones aforados las
respectivas concentraciones elegidas:
100, 10, 1, 0.1 y 0.01 ppm.
Llevar los 250ml de ZnSO4 y a un
balón aforado de 1000ml para obtener
una concentración de 1000 ppm.
Medir 1gr de ZnSO4 y agregarlo en
250ml de agua destilada y agitar.
86
Se prosigue a determinar las diluciones tanto para las pruebas de sensibilidad
como para las pruebas con las sustancias puras a partir de la solución patrón.
3.1.4.2 Siembra de semillas
En cada caja de petri se ubica el papel filtro el cual es la cama de las 10 semillas,
colocándolas en una secuencia de 1, 4, 4, 1; como se evidencia en la foto número
cuatro. Cabe mencionar que a cada una de las cajas se le agrega 3ml de la
dilución del Sulfato de Zinc (ZnSO4), respectivamente cada una de las
concentraciones tiene tres repeticiones. Obtenido el montaje las cajas son
llevadas a las bandejas, para ser cubiertas por los forros de color negro y se
almacenan durante 5 días lo que equivale a 120 horas en un lugar con
condiciones estándares de temperatura y humedad.
Foto 4. Elaboración y montaje de la siembra.
Fuente: Autoras (2009).
3.1.4.3 Mediciones de efecto
Al culminar el tiempo establecido previamente de 120 horas se procede a
establecer los diferente mediciones a las estructuras de las semillas, las cuales
pueden estar afectadas por la exposición de las sustancias toxicas. Se determinó
el crecimiento de la radícula y el hipocótilo de cada una de las semillas,
adicionalmente se estableció el número de semillas germinadas y no germinadas.
Foto 5. Medición de los efectos en los organismos.
87
Fuente: Autoras (2009).
3.2 SEGUNDA ETAPA
Antes de realizar cualquiera de las pruebas se tuvieron en cuenta los parámetros
fisicoquímicos: Dureza, pH, y Oxigeno disuelto para garantizar la confiabilidad de
la preparación de las diluciones y así mismo de los resultados.
3.3 TERCERA ETAPA
3.3.1 Montaje de las pruebas de sustancias puras
Estas pruebas para sustancias puras se llevaron a cabo con Cloruro Ferroso
(FeCl2), Cloruro de Bario (BaCl2) y Óxido de Manganeso (MnO2), mediante con el
fin de establecer la CE50, de las semillas. Con respecto a las sustancias para esta
determinación se realizaron 10 pruebas para cada compuesto y su respectivo
blanco. Se establecen la CE50 del Zinc a partir de los resultados obtenidos con el
Sulfato de Zinc (ZnSO4).
Foto 6. Montaje de sustancias puras.
Fuente: Autoras (2009).
88
3.3.2 Preparación de las diluciones
Se realizaron diluciones de 1ppm, 5ppm, 10ppm, 15ppm y 20ppm a partir de la
muestra de Cloruro Ferroso (FeCl2), Óxido de Manganeso (MnO2) y Cloruro de
Bario (BaCl2), para lo cual se empleó el siguiente esquema:
Diagrama 2. Diluciones de las sustancias puras.
Fuente: Autoras (2009).
Este procedimiento se realizo para cada metal por separado; en el caso del
Cloruro de Bario por ser dihidratado, se agregan a un crisol de 2-3 gr y se colocan
en la estufa a 100oC durante una hora, luego se lleva a un desecador durante otra
hora y se sigue con el procedimiento anteriormente mencionado.
3.3.3 Siembra de semillas
En cada caja de petri se ubica el papel filtro el cual es la cama de las 10 semillas,
colocándolas en una secuencia de 1, 4, 4, 1. Cabe mencionar que a cada una de
las cajas se le agregó 3ml de cada una de las diluciones de las sustancias.
Obtenido el montaje las cajas son llevadas a las bandejas, para ser cubiertas por
los forros y se almacenan durante 5 días equivalente a 120 horas.
Medir 1gr de FeCl2, MnO2 y BaCl2,
agregar cada uno en 250ml de agua
destilada y agitar.
Llevar los 250ml de cada metal a un
balón aforado de 1000ml para obtener
una concentración de 1000 ppm.
Medir en balones aforados las
respectivas concentraciones elegidas:
20, 15, 10, 5 y 1 ppm.
89
3.3.4 Mediciones de efecto
Se determinó el crecimiento de la radícula y el hipocótilo de cada una de las
semillas, adicionalmente se estableció el número de semillas germinadas y no
germinadas.
3.3.5 Caracterización del vertimiento
Para determinar las características fisicoquímicas provenientes de la industria
galvánica, se realizaron pruebas in-situ de: Oxigeno disuelto, Temperatura y pH,
para cada una de las piscinas de almacenamiento de los metales pesados (Fe y
Mn).
3.3.6 Montaje de Pruebas del vertimiento
La generación de este tipo de pruebas es proveniente de la industria Galvánica.
Se llevó el vertimiento a un laboratorio certificado Ivonne Bernier (Ver Anexo G)
para determinar la concentración inicial de los metales a estudiar, con el fin de
establecer la CE50, de las semillas con respecto a los vertimientos de Hierro y
Manganeso por lo que se realizaron 5 pruebas por cada uno, cada una de sus
concentraciones incluyendo el blanco como medio de control.
3.3.7 Preparación de las diluciones
Inicialmente se realizaron diluciones de 20ppm, 40ppm, 60ppm, 80ppm y 100ppm
a partir de las muestras; cabe mencionar que estas diluciones se manejaron
volumen/volumen, en este caso de tomo 20ml de vertimiento y 80ml de agua
destilada en un balón aforado de 100ml para la concentración de 20ppm; para la
concentración de 40ppm se tomaron 40ml de vertimiento y 60ml de agua
destilada; para la concentración de 60ppm se tomaron 60ml de vertimiento y 40ml
de agua destilada; para la concentración de 80ppm se tomaron 80ml de
vertimiento y 20ml de agua destilada y para la concentración de 100ppm, se
agrego vertimiento a un balón aforado de 100ppm.
90
3.3.8 Siembra de semillas
En cada caja de petri se ubica el papel filtro el cual es la cama de las 10 semillas,
colocándolas en una secuencia de 1, 4, 4, 1. Cabe mencionar que a cada una de
las cajas se le agregan 3ml de cada una de las diluciones del vertimiento.
Obtenido el montaje, las cajas son llevadas a las bandejas, para ser cubiertas por
los forros y se almacenan durante 5 días lo que equivale a 120 horas.
3.3.9 Mediciones del efecto tóxico
Se determinó el crecimiento de la radícula y el hipocótilo de cada una de las
semillas, adicionalmente se estableció el número de semillas germinadas y no
germinadas.
Metodología: Fase I
91
Fase II
92
Fase III
93
Fase IV
Diagrama 3. Diagrama de flujo de la metodología.
Figura 5. Esquema de plántula de Lactuca sativa L. al finalizar el periodo de
exposición3.4 CUARTA ETAPA
3.4.1 RESULTADOS
Y ANÁLISIS DE
RESULTADOS
A partir del desarrollo de la metodología y etapas establecidas en la realización de
esta investigación, al igual que los criterios generados para esta, se desarrollaron
y emplearon las siguientes pruebas:
Pruebas de sensibilidad con Sulfato de Zinc.
Pruebas con sustancias puras.
94
Pruebas con el vertimiento de Hierro y Manganeso.
En los resultados obtenidos en relación con las pruebas mencionadas
anteriormente, se desarrolló el análisis por cada una de estas como se evidencia a
continuación:
3.4.1.1 Pruebas De Sensibilidad Con Sulfato De Zinc (ZnSO4)
Según la etapa de germinación de las plántulas, probablemente se presenta
mayor sensibilidad al contacto con sustancias tóxicas o agentes externos, los
cuales pueden posibles efectos en el desarrollo de la plántula, la cual se debe
determinar por el tiempo que toma la semilla en germinar. Esta etapa es de gran
importancia para la definición de la duración de las pruebas a realizar; el tiempo
de germinación fue de 120 horas. Al finalizar este periodo se puede realizar
mediciones a esta plántula germinada además de determinar los niveles de
afectación o generación de efectos negativos por el contacto con la sustancia ya
mencionada.
En relación con el proceso de las pruebas de sensibilidad con Sulfato De Zinc
(ZnSO4) se buscó ejecutar la carta de control de la especie en estudio, semilla de
lechuga (Lactuca sativa L.). Según el análisis de estas pruebas se encontró:
- La concentración efectiva media (CE50), que afectaban la especie en un
50% de la población con un valor del 13,7180 ppm.
- La desviación estándar registrada, tomada con la medición de la elongación
de la radícula y el hipocótilo, los cuales fueron tomados cuando la semilla
germinaba después de las 120 horas, estos datos fueron registrados en
milímetros (mm).
- Se determinaron los límites máximos y mínimos de la concentración
efectiva media (CE50) en el desarrollo de las pruebas.
3.4.1.2 Sensibilidad Valor de la concentración efectiva media (CE50)
Por medio de cada una de las pruebas realizadas con Sulfato De Zinc (ZnSO4),
por medio del programa estadístico (PROBIT), se obtuvieron de cada una de las
pruebas fitotóxicas los siguientes resultados (tabla numero 5):
95
Tabla 5. Resultados del CE50 de las pruebas de sensibilidad con ZnSO4.
PRUEBAS CE50 (mg/L) Limite Inferior Limite Superior
1 10,9789 4,2029 16,8949
2 14,0579 8,9769 18,7539
3 23,3969 15,0189 29,2329
4 9,3069 1,3139 16,0639
5 22,9419 18,3539 27,4209
6 13,9009 2,2169 23,1639
7 10,6779 0,2231 19,5169
8 10,3499 2,5791 27,1169
9 16,5459 11,2159 21,5429
10 14,6379 5,9829 22,1889
11 20,5929 12,3159 28,0579
12 11,5809 1,8749 19,6619
13 15,7179 7,4889 22,4639
14 20,0659 12,9529 22,5329
15 11,7989 4,9769 17,7929
16 9,8999 2,8359 15,9569
17 11,4419 4,3759 17,5979
18 7,1559 0,3591 13,4789
19 6,9399 1,6959 11,5389
20 12,3709 6,9459 17,2889
Promedio 13,7180 6,2953 20,4133
Fuente: Autoras (2009).
En la tabla 5 se establecen la CE50 de las pruebas fitotóxicas con Sulfato de Zinc
desarrolladas en este ciclo con sus respectivos limites inferiores y superiores los
cuales se obtuvieron por medio del programa estadístico Probit, se encontró una
CE50 de 13,7180, un límite inferior de 6,2953 y uno superior de 20,4133. Esto
significa que 13,7180 mg/L de Sulfato de Zinc producen el 50% de inhibición de la
elongación de la radícula y del hipocótilo de la semilla expuesto.
3.4.1.3 Carta control para el Sulfato de Zinc
En la gráfica número 1 se representa el comportamiento de la semilla expuesta a
la sustancia de referencia tóxica (Sulfato de Zinc (ZnSO4)) durante las diferentes
pruebas fitotóxicas:
Como se puede observar en la carta control, los datos presentaron una baja
desviación con un valor de 3.83 y un valor promedio de la CE50-120 de 13.7180mg
96
de ZnSO4/L, con un intervalo entre 6.2953 y 20.4133mg de ZnSO4/L. De igual
manera se determino que la batería que presentaba mayor índice en cuanto a la
CE50-120 fue la batería número 3 con un valor de 23.3969mg de ZnSO4/L, mientras
que la que presento un menor índice de CE50-120 fue la batería número 19 con un
valor de 6.9399mg de ZnSO4/L. A partir de estos datos se determinó que la
especie de estudio Lactuca sativa L. a 13. 7180mg de ZnSO4/L presenta un grado
de sensibilidad para que se origine una mortalidad del 50% de los organismos.
Estos valores indican que las pruebas fueron realizadas siguiendo debidamente
los protocolos de ensayo. Además se demostró una eficiente respuesta de los
organismos ante el tóxico de referencia, así como su viabilidad para ser utilizados
con la muestra ambiental de estudio.
97
Gráfica 1. Carta control para el Sulfato de Zinc.
Fuente: Autoras (2009).
98
En la gráfica número 1 se observa que las pruebas toxicológicas con el Sulfato de
Zinc se encuentran dentro de los límites inferior y superior establecidos por lo que
se puede mencionar una estabilidad dentro de la mayoría de las pruebas.
3.4.1.4 Análisis ANOVA para las pruebas fitotóxicas con Sulfato de Zinc
Siguiendo la metodología del protocolo LB07 de “Análisis de Varianza” (Ver Anexo
A), se realizó el análisis correspondiente de varianza para los ensayos sobre
Lactuca sativa L., teniendo en cuenta los resultados en las lecturas de cada una
de las pruebas.
A continuación se puede observar, el desarrollo estadístico en la generación de
Anova, para el Sulfato de Zinc; indicando el número de tratamientos como se
muestra en la tabla 7, de igual forma los resultados estadísticos en esta serie de
pruebas como se muestra en la tabla 8.
Tabla 6. Pruebas de Sensibilidad.
R1 R2 R3
100 8 10 10 28 9,33
10 8 9 8 25 8,33
1 10 8 6 24 8
0,1 7 9 6 22 7,33
0,01 3 3 4 10 3,33
Blanco 0 0 0 0 0
Total 109 36,32
Número de organismos que no germinaronTotal PromedioConcentración
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 7. Tratamientos ANOVA para las pruebas de sensibilidad.
Tratamiento 6
Observaciones 3
Total 18
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 8. Resultados ANOVA para las pruebas de sensibilidad.
F Calculado F teórico
5196.2777778
21.6090473 3.11
Entre grupos
17218.0772889Total
1.8166259261221.79951111Dentro de grupos
39.25555556
Origen de las variaciones Suma de cuadrados Grados de libertad Promedio de cuadrados
Fuente: Autoras (2009).
99
Como se puede observar en la tabla 9 el F (valor calculado para aceptar los
resultados de las pruebas) calculado es mayor que el F (valor establecido a nivel
internacional para pruebas fitotóxicas con semillas) teórico, por consiguiente se
rechaza la hipótesis nula (Ho), y se acepta la hipótesis alterna (H1), determinando
así que las diferentes concentraciones producen efectos distintos en las semillas
de prueba.
Se realizó el mismo análisis para las 20 pruebas, obteniendo:
Tabla 9. Resultados ANOVA para todas las pruebas de sensibilidad.
Número de prueba Fecha F Calculado F Teórico Resultado
1 10/20/2009 21.6090 3.11 Se acepta H1
2 10/20/2009 21.7565 3.11 Se acepta H1
3 10/20/2009 31.1565 3.11 Se acepta H1
4 10/20/2009 59.1065 3.11 Se acepta H1
5 10/20/2009 9.2965 3.11 Se acepta H1
6 10/20/2009 38.2465 3.11 Se acepta H1
7 10/20/2009 29.9665 3.11 Se acepta H1
8 10/20/2009 80.3465 3.11 Se acepta H1
9 10/20/2009 90.2065 3.11 Se acepta H1
10 10/20/2009 73.5465 3.11 Se acepta H1
11 10/20/2009 23.2565 3.11 Se acepta H1
12 10/20/2009 19.8165 3.11 Se acepta H1
13 10/20/2009 14.0065 3.11 Se acepta H1
14 10/20/2009 34.1365 3.11 Se acepta H1
15 10/20/2009 42.4165 3.11 Se acepta H1
16 10/20/2009 37.8665 3.11 Se acepta H1
17 10/20/2009 32.5665 3.11 Se acepta H1
18 10/20/2009 24.0465 3.11 Se acepta H1
19 10/20/2009 56.4865 3.11 Se acepta H1
20 10/20/2009 61.7065 3.11 Se acepta H1
Fuente: Autoras (2009).
La tabla 9 muestra que el F calculado para cada una de las pruebas realizadas, es
mayor al F teórico 3,11, dando como resultado la aceptación de H1, lo cual índica
que al aumentar la concentración de Sulfato de Zinc, aumenta también la
inhibición de las plántulas expuestas, por tanto los datos demuestran confiabilidad
para la CE50 para el Sulfato de Zinc.
100
3.4.1.5 Relación Dosis-Respuesta con Sulfato de Zinc (ZnSO4)
En esta relación se indican las diferencias de porcentaje en la inhibición de la
plántula, cuando se modifican las concentraciones a las que se someten las
semillas, definiendo los efectos que produce cada una de estas concentraciones
(100, 10, 1, 0.1, 0.01 mg/L); dichas concentraciones fueron determinadas por
investigaciones anteriores, las cuales revelan que estos valores promedio se
emplean en tipos de pruebas de investigación como ésta.
En tabla 10 se mencionan los diferentes rangos de germinación determinados por
las diversas concentraciones. Este rango de germinación se determino con base
en el crecimiento de la radícula, y del hipocótilo si son mayores de 3 mm se
considera que la semilla germino.
Tabla 10. Porcentaje de germinación dosis-respuesta.
Concentraciones (ppm) % Germinación
Blanco
0.01
0.1
1
10
100
100
67,84
46,84
40,34
27,5
11,34
Fuente: Autoras (2009).
En la gráfica 2 se observa la diferencia presente entre la reducción de las
concentraciones y los niveles de germinación, en cada una de estas.
Gráfica 2. Comparación dosis-respuesta con Sulfato de Zinc.
101
Fuente: Autoras (2009).
Según los resultados obtenidos en la gráfica 2, se evidencian los niveles de
afectación directa que pueden generar las sustancias tóxicas al interactuar con
semillas como la semilla de lechuga (Lactuca sativa L..). Se observó que a medida
que descienden las concentraciones (100, 10, 1, 0.1, 0.01 y Blanco (ppm)) sus
niveles de germinación se presentan de manera creciente, indicando que en las
concentraciones altas como la de 100 y 10 ppm, estos niveles de germinación se
encuentran entre el 11.34% y 27,5 % los cuales son muy bajos y su afectación
sobre las semillas genera una inhibición alta. De igual modo, genera por medio de
su fitotoxicidad síntomas de necrosis y retraimiento de la plántula reflejándose en
las partes de medición las cuales corresponden a la radícula e hipocótilo.
En la gráfica 2 se pueden evidenciar los diferentes efectos generados por el
agente tóxico, observando que las concentraciones altas en las semillas, generan
una inhibición elevada casi del 90%; por ende se puede identificar la presencia del
pre-tratamiento en la plántula, determinando en la parte superior (punta) de la
radícula y el hipocótilo una quema por la exposición del agente tóxico al semilla.
Sin embargo, en las concentraciones más bajas el porcentaje de germinación se
determinó entre el 70 al 100 con lo cual se puede identificar que la germinación es
directamente proporcional al nivel de la concentración y que esta afecta de forma
directa a las semillas expuestas en la prueba.
Otro aspecto que se observa es que se necesitan altas concentraciones del
compuesto tóxico, para que se evidencien claros niveles de afectación
(fitotoxicidad). Esto se determinó ya que se observa el cambio de tendencia entre
la concentración de 0.01 y 100mg de ZnSO4/L. mientras que de 0.1 y 1mg de
ZnSO4/L. se presenta una afectación mínima.
3.4.1.6 Medición de la radícula y hipocótilo para pruebas de Sulfato de Zinc (ZnSO4)
En el desarrollo de las pruebas de sensibilidad, se empleó como agente tóxico el
Sulfato de Zinc (ZnSO4), para determinar su efecto se hicieron mediciones de la
radícula y el hipocótilo, con el cual se definieron los niveles de afectación en el
crecimiento de la plántula.
102
En la tabla 11 se presentan los datos con énfasis en crecimiento de la radícula y
del hipocótilo en cada una de las 20 pruebas fitotóxicas realizadas.
Tabla 11. Mediciones del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en las pruebas de sensibilidad
(mm).
Prueba Radícula (mm) Hipocótilo (mm)
1 11,000 10,931
2 10,538 10,008
3 10,206 9,959
4 10,448 10,092
5 9,885 9,060
6 8,872 11,384
7 11,058 8,985
8 9,152 9,959
9 10,206 9,813
10 9,487 10,137
11 10,662 11,674
12 12,129 9,842
13 10,630 5,382
14 9,842 6,461
15 9,970 12,822
16 11,503 10,177
17 10,056 8,492
18 8,929 7,179
19 11,401 6,702
20 10,863 8,549
Promedio 10,341 9,380
Fuente: Autoras (2009).
En la tabla 11 se compararon de las longitudes para cada una de las pruebas
tanto para la radícula con el hipocótilo; el promedio para todas las pruebas
fitotóxicas en este ciclo, donde se menciona que la radícula obtuvo un promedio
de 10.341 mm y el hipocótilo un promedio de 9,380 mm con el que se puede
mencionar que el hipocótilo tiene un mayor nivel de afectación que la radícula, la
cual se desarrolla en un porcentaje mayor que el hipocótilo, como se obsrva en la
tabla las pruebas 6 y 18 presentan mayor afectación en la radícula presentando
valores de 8.872 y 8,929 mm respectivamente, para el caso del hipocótilo las
pruebas 13 y 14 presentan una menor elongación, con valores de 5.382 y 6.461
mm respectivamente. La prueba con mayor elongación de la radícula es la número
103
12 con un valor de 12.129mm superando el valor promedio y para el hipocótilo la
prueba 15 presenta el mayor valor el cual es de 12.822mm.
Gráfica 3. Medición del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en las pruebas de sensibilidad.
Fuente: Autoras (2009).
La gráfica 4 muestra la influencia durante todas las pruebas por parte del agente
tóxico y determina la misma intensidad en cada una de ellas, de igual manera el
montaje de las pruebas fitotóxicas se realizó bajo los mismos parámetros; el
crecimiento de la radícula fue mayor presentando un porcentaje entre el 80% y
85%, lo que no ocurrió con el hipocótilo como se evidencia en la gráfica generando
un porcentaje menor de longitud de la semilla. Como se evidencia en la gráfica, los
valores de elongación de la radícula son más constantes durente las 20 pruebas,
caso contrario sucede con el hipocótilo, pues de las pruebas 12 a la 20 disminuye
su valor considerablemente.
3.4.2 ANÁLISIS DE PRUEBAS TÓXICOLÓGICAS DE BARIO, HIERRO Y
MANGANESO A PARTIR DE CLORURO DE BARIO, CLORURO FERROSO Y
ÓXIDO DE MANGANESO
Se determinaron las sustancias a emplear, para cada uno de los elementos, para
el Bario se empleo el Cloruro de Bario (BaCl2) en el caso del Hierro el Cloruro
Ferroso (FeCl2) y en el caso del Manganeso el Óxido de Manganeso (MnO2); los
cuales se eligieron por sus características de concentración, su fácil acceso,
además, de su disponibilidad para la elaboración de las pruebas.
104
3.4.2.1 Bioensayos realizados con sustancias puras
Se procede con el montaje pertinente de las pruebas fitotóxicas, donde se contó
con 10 bioensayos por cada uno de las sustancias puras evaluadas (Bario, Hierro
y Manganeso), estos bioensayos manejan tres réplicas las cuales minimizan y
garantizan los datos obtenidos dentro de cada una de ellas; realizando las
siguientes diluciones (20, 15, 10, 5, 1 y blanco) esta última como sistema de
control del medio de germinación, asegurando el desarrollo de las pruebas de
manera adecuada. Las pruebas se aceptan en primera instancia si no se
presentan anomalías graves dentro del control, en este caso las réplicas del
blanco las cuales no deben presentar una inhibición alta de sus semillas.
3.4.3 VALOR DE LA CONCENTRACIÓN MEDIA DE INHIBICION (CE50) PARA
EL BARIO A PARTIR DE LA SUSTANCIA PURA (BaCl2)
Las pruebas expuestas a continuación se realizaron con el fin de determinar la
CE50, que generan las concentraciones de inhibición media de las semillas frente
al agente tóxico de referencia (Bario) por medio del programa estadístico
(PROBIT). Con el desarrollo de estas pruebas se generó la necesidad de modificar
las concentraciones del agente tóxico, con las concentraciones iníciales de (20,
15, 10, 5 y 1) mg/L. estas concentraciones se prepararon a partir del Cloruro de
Bario (BaCl2).
En la tabla 12 se registra las CE50 determinadas por medio de las pruebas
realizadas con el agente tóxico Bario.
Tabla 12. La CE50 registrada con las pruebas de Bario.
PRUEBAS CE50 (mg/L) Limite Inferior Limite Superior
1 9,133 5,445 12,078
2 13,447 7,692 16,930
3 11,051 5,810 14,480
4 14,482 9,608 16,217
5 12,402 6,942 13,139
6 15,570 8,461 17,141
7 11,597 6,053 14,366
8 15,894 9,574 19,243
9 12,314 7,189 16,931
10 10,417 8,564 12,773
Promedio 12,630 7,533 15,329
105
Fuente: Autoras (2009).
En la tabla 12 se muestran los resultados de las CE50, determinadas por el
programa (PROBIT), revelando las concentraciones en las que las semillas
expuestos a las sustancias tóxicas generan inhibición de más del 50%. De igual
modo se establece el valor promedio de la CE50, con un valor de 12.630 mg/L, y
estableciendo la zona de aceptación con un límite inferior de 7.533 mg/L y límite
superior de 15.329 mg/L; indicando la zona donde se pueden establecer las
diferentes pruebas fitotóxicas para este tipo de sustancia.
3.4.3.1 Carta de control para Bario a partir de la sustancia pura
Por medio de la carta control realizada Gráfica 5, se identifica el comportamiento
de las semillas dentro de la exposición al agente tóxico (Bario), observando la
ubicación de un punto fuera de la zona establecida por los límites superior y el
inferior, sin manifestar una distancia alta de la zona de aceptación, con una
concentración del 9,133 mg/L. En las demás pruebas realizadas, se establece un
comportamiento normal y equilibrado frente a la zona delimitada, es válido hacer
referencia a la prueba 8, ya que desarrolló un nivel elevado de inhibición frente a
las demás, con una concentración del 15.894 mg/L. Esta prueba generó afectación
externa por una concentración mayor del agente tóxico o por afectaciones del
ambiente en el cambio de humedad y temperatura desarrollando un nivel más alto
de inhibición de las semillas. En esta carta control se ejecutaron 10 pruebas
fitotóxicas, garantizando la veracidad de los resultados obtenidos.
106
Gráfica 4. Carta control para el Bario a partir de la sustancia pura.
Fuente: Autoras (2009).
107
3.4.3.2 ANOVA de Bario a partir de la sustancia pura
A continuación se puede observar, el desarrollo estadístico en la generación de
ANOVA, para el Bario a partir de la sustancia pura; indicando el número de
tratamientos como se muestra en la tabla 14, de igual forma los resultados
estadísticos en esta serie de pruebas como se muestra en la tabla 15.
Tabla 13. Pruebas de Bario a partir de la sustancia pura.
R1 R2 R3
20 8 7 9 24 8
15 7 5 6 18 6
10 2 3 2 7 2,33
5 2 1 2 5 1,66
1 1 1 0 2 0,66
Blanco 0 0 0 0 0
Total 56 18,65
Número de organismos que no germinaronTotal PromedioConcentración
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 14. Tratamientos ANOVA para las pruebas de Bario con sustancia pura.
Tratamiento 6
Observaciones 3
Total 18
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 15. Resultados ANOVA para las pruebas de Bario con sustancia pura.
F Calculado F teóricoOrigen de las variaciones Suma de cuadrados Grados de libertad Promedio de cuadrados
Total 168,6610056 17
21,5756532 3,11Dentro de grupos 16,88322778 12 1,406935648
Entre grupos 151,7777778 5 30,35555556
Fuente: Autoras (2009).
Como se puede observar el F calculado es mayor que el F teórico, por
consiguiente se rechaza la hipótesis nula (Ho), y se acepta la hipótesis alterna
(H1), determinando así que las diferentes concentraciones producen efectos
distintos en las semillas prueba.
Para las demás pruebas los resultados se encuentran en la tabla numero 16.
108
Tabla 16. Resultados ANOVA para todas las pruebas de Bario a partir de la sustancia pura.
Número de prueba Fecha F Calculado F Teórico Resultado
1 03/11/2009 21,575 3.11 Se acepta H1
2 03/11/2009 24,795 3.11 Se acepta H1
3 03/11/2009 22,975 3.11 Se acepta H1
4 03/11/2009 28,875 3.11 Se acepta H1
5 03/11/2009 23,25 3.11 Se acepta H1
6 03/11/2009 22,53 3.11 Se acepta H1
7 03/11/2009 22,23 3.11 Se acepta H1
8 03/11/2009 21,805 3.11 Se acepta H1
9 03/11/2009 20,61 3.11 Se acepta H1
10 03/11/2009 21,075 3.11 Se acepta H1
Fuente: Autoras (2009).
3.4.3.3 Relación dosis-respuesta para el Bario
En el análisis referente a las dosis administradas del agente tóxico y la exposición
generada frente a las semillas, se obtuvieron diferentes niveles de germinación
establecidos en la tabla número 17.
Tabla 17. Paralelo de concentración Vs germinación.
5 59,33
1 77,16
Blanco 100
20 15,16
15 27.50
10 40,33
Concentraciones (ppm) % Germinación
Fuente: Autoras (2009).
Los resultados obtenidos, nos indican el que porcentaje de germinación cambia
notablemente con la modificación de las concentraciones de las pruebas
realizadas con el agente tóxico (Bario), además de establecer que la relación
dosis-respuesta es directamente proporcional como se nota en la gráfica 6.
Gráfica 5. Dosis-respuesta
109
Fuente: Autoras (2009).
En la gráfica 6 se confrontan las concentraciones realizadas a estas pruebas
fitotóxicas, al mismo tiempo se obtuvo el porcentaje de germinación por cada
prueba y, se determinó el efecto generado a la exposición de las semillas de
lechuga Batavia (Lactuca sativa L..).
Se reafirmó lo mencionado anteriormente que la dosis-respuesta es directamente
proporcional y cuando se aumente las concentraciones de Bario se genera una
inhibición más alta en los semillas expuestos durante las pruebas.
Se observa el cambio de tendencia entre las concentraciones 1 y 10mg de
BaCl2/L. mientras que entre las concentraciones de 1 y 5 la afectación es la que
presenta un menor valor.
3.4.3.4 Mediciones de la longitud de la radícula y el hipocótilo para el Bario
Las diferentes mediciones aplicadas a la radícula y al hipocótilo, fue una de las
fases de mayor importancia en la obtención de los resultados, se pudo determinar
los efectos, que puede desencadenar el agente tóxico en los semillas expuestos
en cada una de las concentraciones y por ende en cada una de las pruebas.
En la tabla 18 se muestran las mediciones de la radícula y del hipocótilo
generando un promedio de crecimiento de cada uno de ellos, a partir del cual se
puede observar que el hipocótilo tuvo un promedio de 14,489 mm y la radícula uno
110
de 13.741 mm indicando que se generó una mayor afectación al radícula que al
hipocótilo durante este ciclo de pruebas y en complemento de esta se desarrolla la
gráfica 8, en la cual se puede observar las diferencias entre los datos de las
pruebas realizadas con el Bario a partir de la sustancia pura.
Tabla 18. Mediciones del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en pruebas con Bario a partir
de la sustancia pura (mm).
Prueba Radícula (mm) Hipocótilo (mm)
1 13,500 13,575
2 13,24 15,525
3 13,54 13,45
4 14,955 15,945
5 12,965 13,445
6 14,785 15,265
7 12,285 13,275
8 14,78 14,69
9 12,705 14,99
10 14,655 14.73
Promedio 13,741 14,489
Fuente: Autoras (2009).
Gráfica 6. Medición del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en pruebas de Bario a partir de
la sustancia pura (mm).
Fuente: Autoras (2009).
La gráfica número 8 permite desarrollar la comparación de la elongación de la
radícula y del hipocótilo observando dos zonas, en la primera se observa que la
111
medición de la radícula es menor a la del hipocótilo y en la segunda zona indica
que la radícula tiene casi la misma medición que el hipocótilo y se reafirma que en
este tipo de pruebas se afecta más la radícula que el hipocótilo durante todas las
pruebas.
Para la elongación de la radícula se observa que a pesar de tener un valor
relativamente constante la prueba número 9 presenta una menor elongación con
un valor de 12.705mm y la prueba 4 presenta la mayor elongación con un valor de
14.965mm; para el caso del hipocótilo la prueba número 7 presenta una menor
elongación con un valor de 13.275mm y la prueba número 2 presenta una mayor
elongación con un valor de 15.525 como se aprecia en la gráfica.
3.4.4 VALOR DE LA CONCENTRACIÓN MEDIA DE INHIBICION (CE50) PARA
EL HIERRO A PARTIR DE LA SUSTANCIA PURA (FeCl2)
Estas pruebas se realizaron con el fin de determinar la CE50 de los semillas
expuestos frente al agente tóxico, el Hierro, a continuación se delimita las
diferentes CE50 establecidas por cada una de las pruebas con el programa
estadístico (PROBIT).
Tabla 19. Inhibición media de la población afectada con Hierro a partir de la sustancia pura.
PRUEBAS CE50 (mg/L) Limite Inferior Limite Superior
1 4,632 0,136 7,310
2 1,370 0,157 2,605
3 2,778 0,935 4,805
4 0,596 0,208 5,744
5 0,666 0,180 2,950
6 3,722 1,559 6,870
7 1,499 1,184 3,130
8 2,600 2,310 4,184
9 0,601 0,345 1,535
10 1,549 1,274 3,171
Promedio 2,001 0,828 4,230
Fuente: Autoras (2009).
En la tabla número 19 se muestran los resultados obtenidos de la CE50 de las
semillas expuesto durante este ciclo de pruebas fitotóxicas se puede observar en
los resultados, para esta fase, la cual fue de 2.001 mg/L, con un límite mínimo de
112
0.828 mg/L y uno máximo de 4.230 mg/L, lo cual indica que a 2.001 mg/L de
Hierro genera la inhibición de la mitad de las semillas; de igual modo la inhibición
de la mitad de las semillas para este agente tóxico se establecerá en una zona
con límite inferior de 0.828 mg/L y uno superior de 4.230 mg/L. A partir de lo
mencionado se presenta la carta de control para el Hierro.
3.4.4.1 Carta de control del Hierro a partir de la sustancia pura
En la realización de la carta control Gráfica 9 de Hierro a partir de la sustancia
pura se establece la zona de límites la cual se constituyó entre 0.828 y 4.230
mg/L, en esta zona se puede prestar atención al comportamiento adecuado de las
pruebas, identificando la prueba 1 la cual se encuentran fuera de esta zona, posee
un valor de 4,632 mg/L; esta prueba generó mayor resistencia frente al agente
tóxico por lo cual se amplió su concentración de inhibición media de la elongación
de la radícula y del hipocótilo a una mayor que las demás pruebas.
Se aprecia que la batería con menor resistencia al tóxico es la número 4 con un
valor de 0.596mg de FeCl2/L.
Con estas pruebas se determino que 2.001mg de FeCl2/L. originan un 50% de
mortalidad de la especie en estudio.
113
Gráfica 7. Carta Control para Hierro a partir de la sustancia pura.
Fuente: Autoras (2009).
114
3.4.4.2 ANOVA de Hierro a partir de la sustancia pura
A continuación se puede observar, el desarrollo estadístico en la generación de
ANOVA, para el Hierro a partir de la sustancia pura; indicando el número de
tratamientos como se muestra en la tabla 21, de igual forma los resultados
estadísticos en esta serie de pruebas como se muestra en la tabla 22.
Tabla 20. Pruebas de Hierro a partir de la sustancia pura.
R1 R2 R3
20 8 7 9 24 8
15 7 6 6 19 6,33
10 2 3 4 9 3
5 2 2 3 7 2,33
1 1 1 0 2 0,66
Blanco 0 0 0 0 0
Total 61 20,32
Concentración Número de organismos que no germinaron
Total Promedio
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 21. Tratamientos ANOVA para las pruebas de Hierro con sustancia pura.
Tratamiento 6
Observaciones 3
Total 18
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 22. Resultados ANOVA para pruebas de Hierro a partir de la sustancia pura.
F Calculado F teórico
21,5897678 3,11Dentro de grupos 16,70544444 12 1,39212037
Total 166,9832222 17
Entre grupos 150,2777778 5 30,05555556
Origen de las variaciones Suma de cuadrados Grados de libertad Promedio de cuadrados
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 23. Resultados ANOVA para todas las pruebas de Hierro a partir de la sustancia pura.
115
Número de prueba Fecha F Calculado F Teórico Resultado
1 03/11/2009 21,589 3.11 Se acepta H1
2 03/11/2009 23,449 3.11 Se acepta H1
3 03/11/2009 22,579 3.11 Se acepta H1
4 03/11/2009 31,089 3.11 Se acepta H1
5 03/11/2009 24,739 3.11 Se acepta H1
6 03/11/2009 22,489 3.11 Se acepta H1
7 03/11/2009 22,949 3.11 Se acepta H1
8 03/11/2009 21,369 3.11 Se acepta H1
9 03/11/2009 22,019 3.11 Se acepta H1
10 03/11/2009 22,659 3.11 Se acepta H1
Fuente: Autoras (2009).
Como se puede observar en la tabla 23 el F calculado es mayor que el F teórico,
por consiguiente se rechaza la hipótesis nula (Ho), y se acepta la hipótesis alterna
(H1), determinando así que las diferentes concentraciones producen efectos
distintos en las semillas prueba.
3.4.4.3 Relación dosis-respuesta para Hierro
Al identificar los niveles de germinación de las semillas expuestos al agente tóxico
(Hierro) y al realizar la modificación de la concentración, esta incide en el
porcentaje de germinación como se muestra en la tabla 24.
Tabla 24. Porcentajes de Germinación Vs Concentración.
Blanco 100
10 40,33
5 59,33
1 77,16
Concentraciones (ppm) % Germinación
20 15,16
15 27.50
Fuente: Autoras (2009).
En la gráfica numero 10, se desarrolla como complemento de la tabla número 24
donde se puede visualizar con mayor claridad todos los datos obtenidos en esta
prueba.
116
Gráfica 8. Dosis-Respuesta del Hierro a partir de la sustancia pura.
Fuente: Autoras (2009).
En la gráfica 10 se puede identificar que su comportamiento es inversamente
proporcional, al igual que las demás pruebas, donde se aplica la relación de dosis-
respuesta para cada uno de los agentes, demostrando un comportamiento normal,
indicando una germinación baja en las concentraciones altas como las de 20 y 15
mg/L, en el cual la germinación es menor del 28% como se establece en la tabla
24, la germinación de los semillas expuestos aumenta alcanzando niveles de más
del 77% en las concentraciones de 1 mg/L. La gráfica 10 nos muestra un
comportamiento constante en el aumento de la germinación, indicando que la
semilla de lechuga Batavia (Lactuca sativa L.) es un aceptable bioindicador, ya
que reacciona correctamente a las diferentes concentraciones que afecta a las
semillas expuestas.
3.4.4.4 Mediciones de la longitud de la radícula y el hipocótilo para el Hierro a partir de la sustancia pura
Las mediciones se realizan directamente en dos partes de la semilla como lo son:
la radícula y el hipocótilo, los cuales pueden sufrir cambios en su estructura, como
disminución en su tamaño, retraimiento de la plántula e inhibición de la semilla.
Dicha medición de las semillas en esta fase de la investigación indica los efectos
117
fitotóxicos que desarrollan estos al tener contacto con el agente tóxico; el
promedio de longitud de la radícula e hipocótilo se registran en la tabla número 25.
Tabla 25. Mediciones del crecimiento de la radícula y el hipocótilo en las pruebas con Hierro a
partir de la sustancia pura.
Prueba Radícula (mm) Hipocótilo (mm)
1 14,000 17,000
2 11,73 10,29
3 13,89 14,11
4 15,26 17,45
5 12,72 11,350
6 15,75 16,68
7 11,15 14,57
8 15,54 15,75
9 11,92 11,86
10 15,15 14,9
Promedio 13,711 14,396
Fuente: Autoras (2009).
A través del análisis de datos, se indica un promedio de longitud lograda por la
totalidad de las pruebas realizadas con este tipo de semillas, determinando la
vulnerabilidad de los componentes de las semillas y generando un mayor nivel de
toxicidad en el hipocótilo el cual desarrolló un promedio de 14.396 mm frente al
alcanzado por la radícula con un valor de 13.711 mm. Con estos datos se afirma
que este tipo de toxico genera mayor alteración en la radícula que en el hipocótilo
al finalizar este ciclo de pruebas.
Al observar la gráfica 12, se evidencia la comparación de la radícula e hipocótilo
en las diferentes pruebas realizadas, indicando que el Hierro afecta en mayor
porcentaje a la radícula que al hipocótilo, teniendo en cuenta que la germinación
de las semillas obtuvo un porcentaje inferior. La prueba de mayor elongación del
hipocótilo como se muestra en la gráfica, es la número 4 obtuvo un valor de 17.45
(mm). De igual modo la número 1 y 6 tienen valores cercanos a los anteriores, en
esta gráfica se manifiesta que el comportamiento entre la radícula y el hipocótilo
fue constante y el nivel de longitud del hipocótilo fue mayor que la de la radícula,
aunque en las pruebas 2, 5, 9 y 10 la radícula presenta mayor elongación respecto
al hipocótilo.
118
La radícula presenta menor elongación en la prueba número 7 con un valor de
11.15 mm y una mayor elongación en la prueba número 6 con un valor de
15.75mm; el hipocótilo presenta menor elongación en la prueba 2 con un valor de
10.29mm y una mayor elongación en la prueba número 4 con un valor de
17.45mm.
Gráfica 9. Medición de crecimiento para la radícula y el hipocótilo en pruebas de Hierro a partir de
la sustancia pura.
Fuente: Autoras (2009).
3.4.5 VALOR DE LA CONCENTRACIÓN MEDIA DE INHIBICION (CE50) PARA
EL MANGANESO A PARTIR DE LA SUSTANCIA PURA (MnO2)
Estas pruebas se realizaron con el fin de determinar la CE50 de los semillas
expuestos frente al agente tóxico, el Manganeso, a continuación se delimita las
diferentes CE50 establecidas por cada una de las pruebas con el programa
estadístico (PROBIT).
Tabla 26. Inhibición media de la población afectada con Manganeso a partir de la sustancia pura.
119
PRUEBAS CE50 (mg/L) Limite Inferior Limite Superior
1 18,555 15,674 21,766
2 23,921 20,148 26,765
3 20,537 17,761 24,065
4 25,218 23,535 26,601
5 21,127 18,831 23,219
6 24,407 20,244 27,304
7 18,684 15,800 22,003
8 26,177 21,732 29,109
9 21,015 18,327 23,498
10 18,170 15,905 20,510
Promedio 21,781 18,795 24,484
Fuente: Autoras (2009).
En la tabla 26 se muestran los valores obtenidos de la CE50 de las semillas
expuesto durante este ciclo de pruebas fitotóxicas. Como se puede observar en
los resultados expuestos anteriormente, para esta fase, la cual fue de 21.781
mg/L, con un límite mínimo de 18.795 mg/L y uno máximo de 24.484 mg/L, lo cual
indica que a 21.781 mg/L de Manganeso genera inhibición de la mitad de las
semillas; de igual modo la inhibición de la mitad de las semillas para este agente
tóxico se establecerá en una zona con límite inferior de 18.795 mg/L y uno
superior de 24.484 mg/L. A partir de lo mencionado se presenta la carta de control
para el Manganeso.
3.4.5.1 Carta de control del Manganeso a partir de la sustancia pura
En la realización de la carta control Gráfica 13 de Manganeso a partir de la
sustancia pura se establece la zona de limites la cual se constituyó entre 18.795 y
24.484 mg/L, en esta zona se puede prestar atención al comportamiento
adecuado de las pruebas, identificando la prueba 10 la cual se encuentra fuera de
esta zona, esta prueba género menor resistencia frente al agente tóxico por lo cual
se disminuyó su concentración de inhibición media de la elongación de la radícula
y del hipocótilo a una menor que las demás pruebas.
120
La batería que presento mayor afectación fue la número 8 con un valor de
26.177mg de MnO2/L. mientras que la que presento menor afectación fue la
prueba número 10 con un valor de 18.170mg de MnO2/L.
121
Gráfica 10. Carta Control para Manganeso a partir de la sustancia pura.
Fuente: Autoras (2009).
122
3.4.5.2 ANOVA de Manganeso a partir de la sustancia pura
A continuación se puede observar, el desarrollo estadístico en la generación de
ANOVA, para el Manganeso a partir de la sustancia pura; indicando el número de
tratamientos como se muestra en la tabla 28, de igual forma los resultados
estadísticos en esta serie de pruebas como se muestra en la tabla 29.
Tabla 27. Pruebas de Manganeso a partir de la sustancia pura.
R1 R2 R3
20 8 7 9 24 8
15 7 5 6 18 6
10 2 3 0 5 1,66
5 2 0 1 3 1
1 1 1 0 2 0,66
Blanco 0 0 0 0 0
Total 52 17,32
Concentración Número de organismos que no germinaron
Total Promedio
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 28. Tratamientos ANOVA para las pruebas de Manganeso con sustancia pura.
Tratamiento 6
Observaciones 3
Total 18
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 29. Resultados ANOVA para pruebas de Manganeso a partir de la sustancia pura.
F Calculado F teóricoOrigen de las variaciones Suma de cuadrados Grados de libertad Promedio de cuadrados
Entre grupos 162,4444444 5 32,48888889
21,5816718 3,11Dentro de grupos 18,06471111 12 1,505392593
Total 180,5091556 17
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 30. Resultados ANOVA para todas las pruebas de Manganeso a partir de la sustancia pura.
123
Número de prueba Fecha F Calculado F Teórico Resultado
1 03/11/2009 21,581 3.11 Se acepta H1
2 03/11/2009 25,891 3.11 Se acepta H1
3 03/11/2009 23,121 3.11 Se acepta H1
4 03/11/2009 26,441 3.11 Se acepta H1
5 03/11/2009 21,541 3.11 Se acepta H1
6 03/11/2009 22,351 3.11 Se acepta H1
7 03/11/2009 21,561 3.11 Se acepta H1
8 03/11/2009 23,991 3.11 Se acepta H1
9 03/11/2009 20,951 3.11 Se acepta H1
10 03/11/2009 21,241 3.11 Se acepta H1
Fuente: Autoras (2009).
Como se puede observar en la tabla 30 el F calculado es mayor que el F teórico,
por consiguiente se rechaza la hipótesis nula (Ho), y se acepta la hipótesis alterna
(H1), determinando así que las diferentes concentraciones producen efectos
distintos en las semillas prueba.
3.4.5.3 Relación dosis-respuesta para Manganeso
Al identificar los niveles de germinación de las semillas expuestos al agente tóxico
(Manganeso) y al realizar la modificación de la concentración, esta incide en el
porcentaje de germinación como se muestra en la tabla 31.
Tabla 31. Porcentajes de Germinación Vs Concentración.
20 15,16
15 27.50
Blanco 100
10 40,33
5 59,33
1 77,16
Concentraciones (ppm) % Germinación
Fuente: Autoras (2009).
En la gráfica 14, se desarrolla como complemento de la tabla 31 donde se puede
visualizar con mayor claridad todos los datos obtenidos en esta prueba.
Gráfica 11. Dosis-Respuesta del Manganeso a partir de la sustancia pura.
124
Fuente: Autoras (2009).
En la gráfica 14 se puede identificar que su comportamiento es inversamente
proporcional, al igual que las demás pruebas, donde se aplica la relación de dosis-
respuesta para cada uno de los agentes, demostrando un comportamiento normal,
indicando una germinación baja en las concentraciones altas como las de 20 y 15
mg/L, en el cual la germinación es menor del 28% como se establece en la tabla
31, la germinación de las semillas expuestas aumenta alcanzando niveles de más
del 77% en las concentraciones de 1 mg/L. La gráfica 14 nos muestra un
comportamiento constante en el aumento de la germinación, indicando que la
semilla de lechuga Batavia (Lactuca sativa L.) es un aceptable bioindicador, ya
que reacciona correctamente a las diferentes concentraciones que afecta a las
semillas expuestas.
3.4.5.4 Mediciones de la longitud de la radícula y el hipocótilo para el Manganeso a partir de la sustancia pura
Las mediciones se realizan directamente en dos partes de la semilla como lo son:
la radícula y el hipocótilo, los cuales pueden sufrir cambios en su estructura, como
disminución en su tamaño, retraimiento de la plántula e inhibición de la semilla.
Dicha medición de las semillas en esta fase de la investigación indica los efectos
fitotóxicos que desarrollan estos al tener contacto con el agente tóxico; el
promedio de longitud de la radícula e hipocótilo se registran en la tabla 32.
125
Tabla 32. Mediciones del crecimiento de la radícula y el hipocótilo en las pruebas con Manganeso
a partir de la sustancia pura.
Prueba Radícula (mm) Hipocótilo (mm)
1 13,000 10,150
2 15,01 11,28
3 12,55 8,95
4 14,01 11,04
5 13,44 9,740
6 13,99 10,12
7 14,6 10,57
8 14,19 10,86
9 14,82 11,41
10 14,29 10,41
Promedio 13,990 10,453
Fuente: Autoras (2009).
A través del análisis de datos, se indica un promedio de longitud lograda por la
totalidad de las pruebas realizadas con este tipo de semillas, determinando la
vulnerabilidad de los componentes de las semillas y generando un mayor nivel de
toxicidad en el hipocótilo el cual desarrolló un promedio de 10.453 mm frente al
alcanzado por la radícula con un valor de 13.990 mm. Con estos datos se afirma
que este tipo de toxico genera mayor alteración en el hipocótilo que en la radícula
al finalizar este ciclo de pruebas.
Al observar la gráfica 16, se evidencia la comparación de la radícula e hipocótilo
en las diferentes pruebas realizadas, indicando que el Manganeso afecta en
mayor porcentaje al hipocótilo que a la radícula, teniendo en cuenta que la
germinación de las semillas obtuvo un porcentaje inferior. Las pruebas de mayor
determinación como se muestra en la gráfica es la 2 por su longitud a nivel la
radícula obtuvo un valor de 15.01 (mm). De igual modo la 9 tiene un valor cercano
al anterior, la prueba número 3 es la que presenta menor elongación co un valor
de 12.55mm , el hipocótilo presenta menor elongación en la prueba número 3 con
un valor de 8.85mm y una mayor elongación en la prueba número 9 con un valor
de 11.41mm, igualmente esta gráfica manifiesta que el comportamiento entre la
radícula y el hipocótilo fue constante y el nivel de longitud de la radícula fue mayor
126
que la del hipocótilo, se aprecia que tanto para la radícula como para el hipocótilo
la prueba de menor afectación fue la número 9 y la de mayor fue la número 3.
Gráfica 12. Medición de crecimiento para la radícula y el hipocótilo en pruebas de Manganeso a
partir de la sustancia pura.
Fuente: Autoras (2009).
3.4.6 VALOR DE LA CONCENTRACIÓN EFECTIVA MEDIA (CE50) PARA EL
VERTIMIENTO DE HIERRO
El fin de la obtención de la CE50, es identificar el nivel de inhibición reflejada por
las semillas; dentro de esta investigación se busca definir la CE50, para el
vertimiento de Hierro, proveniente de la industria galvánica, para así evaluar el
efecto que produce en las semillas.
En la tabla 33 se indican los valores obtenidos de la CE50, en las pruebas
realizadas con el programa estadístico (PROBIT), por medio de esta se referencia
los límites inferior, superior, y el promedio de la CE50 para el vertimiento de Hierro.
Tabla 33. Inhibición media para el vertimiento de Hierro.
127
PRUEBAS CE50 (mg/L) Limite Inferior Limite Superior
1 60.967 45.986 82.332
2 59.554 42.850 82.035
3 60.452 45.586 81.762
4 59.919 43.208 86.162
5 62.260 47.155 88.512
Promedio 60.630 44.957 84.160
Fuente: Autoras (2009).
De acuerdo con los datos de la tabla 33 se estableció un promedio de 60.630 mg/L
del vertimiento de Hierro lo cual nos índica que con esta concentración se produce
la inhibición del 50% de la población expuesta y también, se determinó la zona de
aceptación para este tipo de toxico; la zona se encuentra delimitada por un límite
inferior de 44.957 mg/L y uno superior de 84.160 mg/L generando la zona dentro
de la cual se deben ubicar las pruebas para ser aceptadas en el manejo de este
tóxico.
Por medio de los datos de la tabla 33 se realizará la carta control indicando las
pruebas más vulnerables durante la realización de las pruebas fitotóxicas.
3.4.6.1 Carta de control para el vertimiento de Hierro de la Industria
Galvánica
El objetivo de la gráfica 17, es delimitar la zona de aceptación para este tipo de
toxicó, la cual se obtiene con el promedio de la CE50 con un valor de 60.630 mg/L
y desarrollando también un promedio para la CE50 inferior y superior,
encontrándose con los siguientes valores para cada una de ellas, límite inferior
44.957 mg/L y limite superior 84.160 mg/L; se observó que el comportamiento de
las pruebas fue adecuado, registrándose la totalidad de las pruebas dentro de la
zona de aceptación para este tóxico.
En la carta control se observa que la batería número 5 presenta un valor de CE50-
120 mayor de 62.260mg/L y que la prueba número 2 presenta un valor menor de
59.554mg/L.
128
Gráfica 13. Carta control para el vertimiento de Hierro.
Fuente: Autoras (2009).
129
3.4.6.2 ANOVA para el vertimiento de Hierro
A continuación se puede observar, el desarrollo estadístico en la generación de
ANOVA, para el vertimiento de Hierro proveniente de la industria Galvánica;
indicando el número de tratamientos como se muestra en la tabla 35, de igual
forma los resultados estadísticos en esta serie de pruebas como se muestra en la
tabla 36.
Tabla 34. Pruebas del vertimiento de Hierro provenientes de la industria.
R1 R2 R3
100 9 10 9 28 9,33
80 8 8 7 23 7,66
60 3 2 3 8 2,66
40 1 2 2 5 1,66
20 2 0 1 3 1
Blanco 0 0 0 0 0
Total 67 22,31
Total PromedioConcentración Número de organismos que no germinaron
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 35. Tratamientos ANOVA para pruebas del vertimiento de Hierro.
Tratamiento 6
Observaciones 3
Total 18
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 36. Resultados ANOVA para pruebas del vertimiento de Hierro.
F Calculado F teóricoOrigen de las variaciones Grados de libertad Promedio de cuadrados
Entre grupos 220,9444444 5 44,18888889
Suma de cuadrados
21,6142234 3,11Dentro de grupos 24,53322778 12 2,044435648
Total 245,4776722 17
Fuente: Autoras (2009).
Como se puede observar en la tabla 36 el F calculado es mayor que el F teórico,
por consiguiente se rechaza la hipótesis nula (Ho), y se acepta la hipótesis alterna
(H1), determinando así que las diferentes concentraciones producen efectos
distintos en las semillas prueba.
130
Para las demás pruebas, los resultados se encuentran en la tabla 37 realizada a
continuación.
Tabla 37. Resultados ANOVA para todas las pruebas del vertimiento de Hierro.
Número de prueba Fecha F Calculado F Teórico Resultado
1 09/11/2009 21,614 3.11 Se acepta H1
2 09/11/2009 23,144 3.11 Se acepta H1
3 09/11/2009 21,404 3.11 Se acepta H1
4 09/11/2009 22,864 3.11 Se acepta H1
5 09/11/2009 23,544 3.11 Se acepta H1
Fuente: Autoras (2009).
3.4.6.3 Relación dosis-respuesta para vertimiento de Hierro
Con la relación dosis-respuesta del agente tóxico, en este caso el vertimiento de
Hierro de la industria, índica que es directamente proporcional al porcentaje de
germinación con respecto al nivel de la concentración suministrada a las semillas
expuestas en el desarrollo de la pruebas fitotóxicas; por medio de las distintas
concentraciones utilizadas para estas pruebas se desarrollaron diferentes
porcentajes de germinación los cuales se colocan en la tabla 38 realizada a
continuación.
Los valores incluidos en la tabla 38 muestran el porcentaje de germinación en las
diversas concentraciones presentes en el desarrollo de estas pruebas, en las que
se observa aumento en la germinación de las semillas a medida que se reduce la
concentración. Para tener mayor claridad se realizó la gráfica 18.
Tabla 38. Porcentaje de germinación Vs concentración.
Concentraciones (ppm) % Germinación
100 14,33
80 34
60 56
40 78,67
20 90,33
Blanco 100
Fuente: Autoras (2009).
Gráfica 14. Dosis respuesta en pruebas con vertimiento de Hierro.
131
Fuente: Autoras (2009).
Podemos observar que la dosis aplicada en las semillas a medida que disminuye
ejerce un aumento en la germinación de forma ascendente como lo plasma la
gráfica 18; reflejando que la concentración de 100 mg/L, se genera una
germinación del 14.33% y en la concentración más bajas se genera el 90.33% de
germinación.
El porcentaje de germinación presenta una diferencia menor entre las
concentraciones de 20 y 40, mientras que para las concentraciones de 40, 60 y 80
presenta una disminución proporcional al aumento de la concentración.
3.4.6.4 Medición de la Longitud de la radícula y el hipocótilo para vertimiento
de Hierro
Con la longitud obtenida de la radícula e hipocótilo se comprueba los efectos
generados por el agente tóxico (vertimiento de Hierro) y se puede determinar en
cuales desencadenó mayor influencia por parte del agente, identificando
afectación en la estructura de la radícula e hipocótilo durante este proceso, el
resultado de ello se muestra en la tabla 39.
Tabla 39. Mediciones del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en pruebas del vertimiento de
Hierro.
132
Prueba Radícula (mm) Hipocótilo (mm)
1 7,400 6,120
2 8,3 7,07
3 7,86 7,15
4 8,22 7,82
5 11,59 11,020
Promedio 8,674 7,836
Fuente: Autoras (2009).
Según los datos obtenidos en la tabla 39, se ve la afectación de manera
semejante en las extremidades de la plántula, directamente en la longitud de la
radícula y del hipocótilo. Por medio del promedio definido en la tabla 39 se puede
detectar que en el hipocótilo su efecto está en un nivel más alto con un valor de
7.836 mm comparado con la longitud de la radícula la cual tiene un valor de 8.674
mm.
Gráfica 15. Paralelo de la elongación en las diferentes pruebas con el vertimiento de Hierro.
Fuente: Autoras (2009).
Como se ha mencionado la semilla reaccionó tanto en la radícula como en el
hipocótilo, indicando una alteración semejante ante los componentes empleados.
La prueba 5 tuvo un crecimiento mayor tanto en la radícula con un valor de 11.59
mg/L y el hipocótilo con 11.020 mg/L; como lo demuestra esta prueba la diferencia
entre los componentes a la exposición toxica es mínima se mantiene relativamente
constante; las demás pruebas presentan normalidad frente a lo evidenciado por la
133
gráfica, presentan una media de 8.674 mg/L en la radícula y una media de 7,836
mg/L en el hipocótilo.
3.4.7 VALOR DE LA CONCENTRACIÓN EFECTIVA MEDIA (CE50) PARA EL
VERTIMIENTO DE MANGANESO
Por medio de la CE50 se puede determinar las concentraciones medias de
inhibición, es decir las que generan la muerte de la mitad de las semillas; por
medio de la investigación se define la concentración del agente tóxico (vertimiento
de Manganeso) proveniente de la industria galvánica. Este agente permite definir
los efectos a los que está expuesta la semilla durante las pruebas, como se
muestra en la tabla 40.
Tabla 40. Inhibición media de la población para pruebas del vertimiento de Manganeso.
PRUEBAS CE50 (mg/L) Limite Inferior Limite Superior
1 64.074 50.511 83.719
2 64.612 52.022 83.430
3 66.872 53.030 86.478
4 67.723 53.186 87.581
5 66.844 52.535 86.751
Promedio 66.025 52.256 85.591
Fuente: Autoras (2009).
En la tabla 40 se define el promedio de la CE50 con un valor de 66.025 mg/L; esta
concentración índica que el 50% de la población genera inhibición durante el
desarrollo de la pruebas. Se determinó la zona de aceptación para este tipo de
toxicó con un límite inferior de 52.256 mg/L y un límite superior de 85.591 mg/L
estableciendo la zona de ubicación de las diferentes pruebas para este tipo de
toxico.
3.4.7.1 Carta de control para el vertimiento de Manganeso de la Industria
Galvánica
Como se aprecia el la gráfica, la prueba número 4 presenta una mayor valor de la
CE50-120 con 67.723mg/L. y la prueba número 1 presenta una menor con valor
64.074mg/L.
134
Indicando que al 66.025mg/L los organismos de la especie expuesta presentan
mayor sensibilidad.
135
Gráfica 16. Carta control para el vertimiento de Manganeso.
Fuente: Autoras (2009).
136
La realización de la carta de control expuesta en la gráfica 21, permitió establecer
que pruebas se ubican en la zona de aceptación por los límites inferior y superior,
determinados por el programa estadístico (PROBIT), luego del análisis de
inhibición de los semillas; de esta manera y como se puede observar, las primeras
pruebas generaron mayor sensibilidad frente al agente tóxico. En las tres últimas
se evidenció menor sensibilidad en relación a dicho agente tóxico con una
diferencia de 2 mg/L en la concentración media de inhibición.
3.4.7.2 ANOVA para el vertimiento de Manganeso
A continuación se puede observar, el desarrollo estadístico en la generación de
ANOVA, para el vertimiento de Manganeso proveniente de la industria galvánica,
indicando el número de tratamientos, como se muestra en la tabla 42; de igual
forma se muestran los resultados estadísticos en esta serie de pruebas en la tabla
43.
Tabla 41. Pruebas del vertimiento de Manganeso proveniente de la industria.
R1 R2 R3
100 10 9 8 27 9
80 6 5 6 17 5,66
60 3 2 3 8 2,66
40 1 2 3 6 2
20 1 1 0 2 0,66
Blanco 0 0 0 0 0
Total 60 19,98
Número de organismos que no germinaronTotal PromedioConcentración
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 42. Tratamientos ANOVA para pruebas del vertimiento de Manganeso.
Tratamiento 6
Observaciones 3
Total 18
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 43. Resultados ANOVA para pruebas del vertimiento de Manganeso.
137
F Calculado F teóricoOrigen de las variaciones Suma de cuadrados Grados de libertad Promedio de cuadrados
Entre grupos 174 5 34,8
21,5950108 3,11Dentro de grupos 19,3378 12 1,611483333
Total 193,3378 17
Fuente: Autoras (2009).
Como se puede observar en la tabla 43, el F calculado es mayor que el F teórico,
por consiguiente se rechaza la hipótesis nula (Ho), y se acepta la hipótesis alterna
(H1), determinando así que las diferentes concentraciones producen efectos
distintos en las semillas.
Para las demás pruebas los resultados se encuentran en la tabla número 44:
Tabla 44. Resultados ANOVA para todas las pruebas del vertimiento de Manganeso.
Número de prueba Fecha F Calculado F Teórico Resultado
1 09/11/2009 21,595 3.11 Se acepta H1
2 09/11/2009 21,795 3.11 Se acepta H1
3 09/11/2009 21,515 3.11 Se acepta H1
4 09/11/2009 21,735 3.11 Se acepta H1
5 09/11/2009 21,565 3.11 Se acepta H1
Fuente: Autoras (2009).
3.4.7.3 Relación dosis-respuesta para vertimiento de Manganeso
En la tabla número 45 se reúne los datos obtenidos para la CE50, estableciendo el
porcentaje de germinación por cada concentración.
Tabla 45. Porcentaje de germinación Vs concentración
Concentraciones (ppm) % Germinación
100 16,66
80 48,66
Blanco 100
60 67,33
40 90
20 97
Fuente: Autoras (2009).
El porcentaje obtenido de germinación en la prueba con vertimiento de
Manganeso, no manifiesta diferencia en relación con las demás fases de las
diversas pruebas, considerando que a niveles altos de concentración este
porcentaje de germinación es mínimo. Sin embargo, cuando hay modificaciones
138
de la concentración aumenta dicho porcentaje, para mayor claridad, las diferencias
mencionadas se presenta la gráfica 22.
Gráfica 17.Dosis-respuesta del vertimiento de Manganeso.
Fuente: Autoras (2009).
Como se puede observar, al aumentar las concentraciones la germinación es
menor como sucede para 100 mg/L donde la concentración tiene un porcentaje
menor al 20% y las concentraciones más bajas mantienen porcentajes mayores de
germinación casi del 100% en las semillas expuestas.
Los organismos expuestos a las concentraciones de 20 y 40 presentan una
tendencia de germinación bastante cercana mientras que la diferencia se
comienza a hacer notoria entre las concentraciones de 40 y 60.
3.4.7.4 Medición de la longitud de la radícula y el hipocótilo para el
vertimiento de Manganeso
El promedio de longitud de la radícula y del hipocótilo que alcanzan estas semillas
o bioindicadores durante la aplicación de las diferentes pruebas, contribuye a la
definición de la presencia de algún tipo de influencia en la semilla, ya sea por parte
o no del agente tóxico, por esta razón las longitudes de la radícula y del hipocótilo
se establecen dentro de la siguiente tabla como un indicador de la presencia
tóxica.
139
Con los resultados obtenidos en la tabla 46 se estableció el promedio de la
elongación para la radícula y para el hipocótilo indicando que la estructura de la
semilla fue la más vulnerada por la exposición del agente toxico; se determinó que
el hipocótilo fue la estructura de la semilla más afectada al generar un promedio
de 4.278 mm con respecto al de la radícula con un valor de 5.462 mm, lo cual
indica una mayor afectación sobre el hipocótilo por parte del agente tóxico.
Tabla 46. Mediciones del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en pruebas con el vertimiento
de Manganeso.
Prueba Radícula (mm) Hipocótilo (mm)
1 5,380 4,150
2 5,96 3,97
3 5,63 4,78
4 4,43 3,97
5 5,91 4,520
Promedio 5,462 4,278
Fuente: Autoras (2009).
Esta gráfica permite observar el comportamiento de las pruebas ha sido
homogéneo, la radícula tuvo menor afectación que la producida en el hipocótilo,
indicando que la plántula obtuvo una influencia semejante en todas las pruebas,
manejadas con una misma intensidad, identificándonos que en la aplicación de las
pruebas se realizó un adecuado proceso en cada una de estas.
Es notorio que tanto para la elongación de la radícula como la del hipocótilo se ve
más afectada en la prueba número 4.
Gráfica 18. Medición del crecimiento para la radícula y el hipocótilo en pruebas de vertimiento de
Manganeso.
140
Fuente: Autoras (2009).
3.4.8 DETERMINACIÓN DEL ÍNDICE DE EFECTO TÓXICO POTENCIAL
Para definir el tipo de tóxico establecido por los vertimientos de la Industria
Galvánica, se determina el índice toxicológico de los vertimientos los cuales se
realizan por medio de cálculos los cuales se realizan a continuación.
3.4.8.1 Índice Toxicológico del Vertimiento de Hierro
Donde:
mesmL
m
mes
L
meses
LQ
t
VQ
/11000
11000
2
2000 33
4231.0
6493.11
1
6493.1)(arg
1630.60
100)(arg
100)(arg
50
IT
LogIT
UTLogIT
UTTóxicaaC
UTTóxicaaC
QCE
UTTóxicaaC
141
Q: Caudal promedio del efluente, (m3/mes) el cual varía según la producción de
la Industria evaluada.
CL 50: Concentración letal media promedio
CT: Carga Toxica, expresada en unidades toxicas
IT: Índice Toxicológico
3.4.8.2 Índice Toxicológico del Vertimiento de Manganeso
Donde:
Q: Caudal promedio del efluente, (m3/mes) el cual varía según la producción de
la Industria evaluada.
CL 50: Concentración letal media promedio
CT: Carga Toxica, expresada en unidades toxicas
IT: Índice Toxicológico
Según los valores de los resultados el índice toxicológico tanto para el vertimiento de Hierro como para el de Manganeso, presenta una carga tóxica despreciable, según los rangos establecidos en la tesis “Implementación de un sistema de alerta de riego toxicológico utilizando Daphnia Pulex para la evaluación de muestras ambientales”, realizada por Escobar Malaver; Pedro Miguel.
mesmL
m
mes
L
meses
LQ
t
VQ
/11000
11000
2
2000 33
4004.0
)5146.11
1
5146.1)(arg
1025.66
100)(arg
100)(arg
50
IT
LogIT
UTLogIT
UTTóxicaaC
UTTóxicaaC
QCE
UTTóxicaaC
142
Tabla 47. Mediciones de los parámetros fisicoquímicos para cada una de las concentraciones
manejadas en las pruebas.
26 Blanco (Agua Destilada) 8.2 11 15.66
ND: No detectable
24 Concentración 80 %V/V de Vertimiento para Fe y Mn 2.5 ND 399.66
25 Concentración 100 %V/V de Vertimiento para Fe y Mn 2.4 ND 474.02
22 Concentración 40 %V/V de Vertimiento para Fe y Mn 2.8 0.3 143.9
23 Concentración 60 %V/V de Vertimiento para Fe y Mn 2.6 0.2 385.2
20 Concentración 20 (mg/L) de MnO2 7.6 5.50 10.42
21 Concentración 20 %V/V de Vertimiento para Fe y Mn 3.1 0.4 117.44
18 Concentración 10 (mg/L) de MnO2 7.6 8.10 11
19 Concentración 15 (mg/L) de MnO2 7.6 7.14 11.5
16 Concentración 1 (mg/L) de MnO2 7.6 9.28 12.08
17 Concentración 5 (mg/L) de MnO2 7.6 8.76 10.96
14 Concentración 15 (mg/L) de BaCl2 7.6 7.23 10.6
15 Concentración 20 (mg/L) de BaCl2 7.7 5.57 13.44
12 Concentración 5 (mg/L) de BaCl2 7.6 8.83 11.06
13 Concentración 10 (mg/L) de BaCl2 7.6 8.12 10.62
10 Concentración 20 (mg/L) de FeCl2 7.6 5.59 10.56
11 Concentración 1 (mg/L) de BaCl2 7.6 9.19 10.36
8 Concentración 10 (mg/L) de FeCl2 7.6 8.18 10.7
9 Concentración 15 (mg/L) de FeCl2 7.6 7.25 10.6
6 Concentración 1 (mg/L) de FeCl2 7.5 9.25 10.92
7 Concentración 5 (mg/L) de FeCl2 7.5 8.79 10.52
4 Concentración 10 (mg/L) de ZnSO4 7.8 8.14 9.93
5 Concentración 100 (mg/L) de ZnSO4 7.8 2.74 12.61
2 Concentración 0.1 (mg/L) de ZnSO4 7.8 10.19 9.49
3 Concentración 1 (mg/L) de ZnSO4 7.9 9.22 9.65
Muestra Núm. Tipo de muestra pH O.D. (mg/L) Dureza (mg CaCO3/L)
1 Concentración 0.01 (mg/L) de ZnSO4 7.8 10.43 9.03
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 48. Resumen resultados de pruebas de sensibilidad con ZnSO4.
143
Valor
13,718
81,000
10,341
9,380
Parámetro
Hipocótilo (mm)
Radícula (mm)
Germinación (%)
CE50 (mg/L)
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 49. Resumen resultados de pruebas de Hierro para la sustancia pura.
Valor
2,001
83,600
13,711
14,396
Parámetro
CE50 (mg/L)
Germinación (%)
Radícula (mm)
Hipocótilo (mm)
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 50. Resumen resultados de pruebas de Bario para la sustancia pura.
Valor
12,630
83,600
13,741
14,489
Parámetro
CE50 (mg/L)
Germinación (%)
Radícula (mm)
Hipocótilo (mm)
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 51. Resumen resultados de pruebas de Manganeso para la sustancia pura.
Valor
21,781
77,400
13,990
10,453
CE50 (mg/L)
Germinación (%)
Radícula (mm)
Hipocótilo (mm)
Parámetro
Fuente: Autoras (2009).
Tabla 52. Resumen resultados de pruebas del vertimiento de Hierro.
Valor
60.630
91.17
8.674
7.836
Parámetro
CE50 (mg/L)
Germinación (%)
Radícula (mm)
Hipocótilo (mm)
Fuente: Autoras (2009).
144
Tabla 53. Resumen resultados de pruebas del vertimiento de Manganeso.
Valor
66.025
90.170
5.462
4.278
Radícula (mm)
Hipocótilo (mm)
Parámetro
CE50 (mg/L)
Germinación (%)
Fuente: Autoras (2009).
145
CONCLUSIONES
- La sensibilidad determinada para la Lactuca sativa L. con la exposición del
agente tóxico Sulfato de Zinc (ZnSO4), se estableció con un valor de 13,781
mg/L, identificando que se encuentra dentro de los rangos obtenidos por
otros investigadores con este tipo de bioindicadores y este tóxico de
referencia como lo muestra la carta control; las diferencias con los valores
obtenidos y los teóricos se deben al manejo de los químicos en las pruebas
realizadas.
- Se estableció por medio de las pruebas de Bario a partir de la sustancia
pura que la concentración de inhibición media (CE50) para este tipo de
agente tóxico es 12,630 mg/L. Dicha concentración no se encuentra en los
límites de las normas con las que se rige el uso y aprovechamiento del
recurso agua como son la resolución 1074 de 1997, el decreto 1594 de
1984, indicando que no cumple con la normatividad para la protección y
supervivencia de la flora y fauna.
- La concentración determinada para el vertimiento de Hierro fue de 82,1
mgFe/L (Ver Anexo G), la determinación de la CE50 obtuvo un valor de
60.630 mg/L, no cumple con lo establecido por la norma.
- También se estableció por medio de las pruebas de Hierro a partir de la
sustancia pura que la concentración de inhibición media (CE50) para este
tipo de agente tóxico es 2,001 mg/L. Dicha concentración no se encuentra
sobre los límites de las normas con las que se rige el uso y
aprovechamiento del recurso agua como son la resolución 1074 de 1997, el
decreto 1594 de 1984, indicando que no cumple con la normatividad para la
protección y supervivencia de la flora y fauna.
146
- La concentración de la CE50 determinada para el vertimiento de Manganeso
de 66.025 mg/L, superando los límites máximos ejercidos por la
normatividad como se contempla en la resolución 1074 de 1997 que indica
un valor de 0,112 mg/L para este tipo de contaminante, a pesar del que el
vertimiento antes de realizar las pruebas contaba con una concentración
inicial de 0,342 mgMn/L (Ver Anexo G).
- Se estableció por medio de las pruebas de Manganeso a partir de la
sustancia pura que la concentración de inhibición media (CE50) para este
tipo de agente tóxico es 21,781 mg/L. Dicha concentración no se encuentra
en los límites de las normas con las que se rige el uso y aprovechamiento
del recurso agua como son la resolución 1074 de 1997, el decreto 1594 de
1984, indicando que no cumple con la normatividad para la protección y
supervivencia de la flora y fauna.
- Con la finalización de la investigación se concluye que la relación
concentración vs porcentaje de inhibición es directamente proporcional,
indicando que en presencia de concentraciones altas los niveles de
inhibición son mayores en las semillas expuestas; a diferencia de la relación
concentración vs elongación de plántula (radícula y hipocótilo), presentando
diferentes variaciones ya que estas son inversamente proporcionales,
dependiendo de las cualidades del contaminante se puede enseñar las
partes de mayor afectación dentro de las semillas, evidenciando el efecto
que tiene las concentraciones altas con la reducción en el crecimiento de
las semillas expuestas.
- Se puede interpretar también que a medida que se garantice la reducción
de la concentración del contaminante en el vertimiento se aumentará el
nivel de la CE50 para las semillas expuestas en los ensayos de toxicidad,
pues la concentración de Manganeso en el vertimiento es mucho menor
que la de Hierro pero aun así las semillas crecieron mejor.
147
- Se concluye que en todos los ensayos de toxicidad desarrollados durante la
investigación se dio una relación directamente proporcional frente a los
niveles de concentración de los contaminantes y el porcentaje de
germinación el cual se afectaba con los cambios de concentraciones a
niveles más altos se bajaban los niveles de germinación de las semillas.
- Durante el análisis de la elongación de la radícula y del hipocótilo se podía
verificar la intensidad del tóxico al generar una inhibición media en la
estructura de los semillas; por medio de ésta afectación a la estructura se
puede establecer que parte de la semilla fue más vulnerable con referencia
al tóxico si se genera mayor inhibición a la radícula o al hipocótilo.
- Durante la realización del análisis de varianza (ANOVA) para cada una de
las pruebas fitotóxicas, se rechaza la hipótesis nula (Ho) y se acepta la
hipótesis alterna (H1), estableciendo que a diferentes concentraciones se
producen efectos distintos en los semillas de prueba, proporcionando de
esta manera un grado de confiabilidad de los resultados obtenidos durante
el desarrollo de las pruebas.
- Según los valores de los resultados el índice toxicológico tanto para el
vertimiento de Hierro como para el de Manganeso, la carga toxica es
despreciable ya que es menor de 1, en el caso de la industria estudiada y
del organismo expuesto, pero a pesar del ello incumplen con la norma, por
lo que se debería pensar en un tratamiento para el agua que se descarga,
pues podría estar estimulando la especie.
- Para la cuantificación de los datos se debe tener en cuenta el número de
organismos que germinan, y no la elongacion de las semillas debido a que
durante la cosecha, se espera que minimo germine el 85% de los
organismos sembrados.
148
RECOMENDACIONES
- Se recomienda la utilización de los ensayos fitotóxicos por ser una
herramientas adecuadas para el diagnostico oportuno de posibles
generaciones de impactos ambientales en el medio ambiente (flora y
fauna), los cuales deben ser implementados en los diferentes sectores
industriales y para nuevos tipos de contaminantes.
- Con el fin de obtener resultados satisfactorios frente a los ensayos de
Fitotoxicidad en vertimientos industriales se debe garantizar la constancia
de la carga contaminante dentro del manejo de los vertimientos ya que
dentro de estas industrias se modifica la concentración la cual depende de
la demanda del producto, lo que indicaría que la totalidad de las pruebas
deben tener las misma concentraciones del contaminante para obtener
resultados específicos en este tipo de vertimiento.
- Para cumplir con la norma se le recomienda a la industria, realizar un
tratamiento al agua proveniente de sus procesos, antes de ser vertida con
contenido de metales a cualquier cuerpo de agua; en el caso de la industria
estudiada específicamente se le recomienda homogenizar la muestra; por
poseer UN pH ácido se DEBE LEVAR A UN PH CERCANO A 10
adicionándole Hidróxido de Sodio para generar la formación de hidróxidos y
hacer que los metales precipiten, posteriormente se le agrega Ácido
Sulfúrico para llevar el pH a 7 y finalmente se filtra la muestra.
149
BIBLIOGRAFIA
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Toxicidad Aguda al Efluente de la PTAR de la Calera Mediante la Utilización de
Semillas de Lactuca Sativa L. Y Propuesta para su Utilización como Agua de
Riegos para Cultivos. Trabajo de grado ingeniero ambiental y sanitario. Bogotá
D.C.: Universidad de La Salle, Facultad de Ingeniería Ambiental y Sanitaria. 2006.
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GRANADOS, Yolanda; Aseguramiento y Control de Calidad de Bioensayos.
Capitulo 6. Pg. 132, Diciembre 2006.
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Tratamiento y Gestión del Medio Ambiente, ecotoxicología y toxicología ambiental.
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CASTILLO MORALES, Gabriela. Eds. Ensayos Toxicológicos y Métodos de
Evaluación de Calidad de Aguas, conceptos generales. México, 2004.
Centro Panamericano De Ecología Humana y Salud División de Salud Ambiental;
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DÍAZ BAEZ, María Consuelo; BUSTOS LÓPEZ, Martha Cristina y ESPINOSA
RAMÍREZ, Adriana Janneth. Pruebas de Toxicidad Acuática: Fundamentos y
Métodos, conceptos generales. Colombia: Unibiblos, 2004.
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ESCOBAR, MALAVER; Pedro Miguel. Implementación de un sistema de alerta de
riesgo toxicológico utilizando Daphnia Pulex para la evaluación de muestras
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Empresarios de La PYME, Editorial Acercar Bogotá D.C 1997.
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Utilización como Agua de riego para cultivos. Unisalle.
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VALLEJO, B; María, C (2007) Toxicología Ambiental; (pág.); ED. Grupo
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http:// www.euroresidentes.com/Alimentos/lechuga.htm.
http://www.infoagro.com/hortalizas/lechuga.htm.
http://www.lenntech.es/periodica/elementos/ba.htm#ixzz0YKXfqcNx.
151
http://www.lenntech.es/periodica/elementos/fe.htm.
http://www.lenntech.es/periodica/elementos/mn.htm.
152
ANEXOS
153
ANEXO A
154
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 10.9789 4.2029 16.8949
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
155
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 14.0579 8.9769 18.7539
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
156
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 23.3969 15.0189 29.2329
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
157
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 9.3069 1.3139 16.0639
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
158
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 22.9419 18.3539 27.4209
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
159
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 13.9009 2.2169 23.1639
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
160
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 10.6779 0.2231 19.5169
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
161
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 10.3499 2.5791 27.1169
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
162
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 16.5459 11.2159 21.5429
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
163
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 14.6379 5.9829 22.1889
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
164
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 20.5929 12.3159 28.0579
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
165
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 11.5809 1.8749 19.6619
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
166
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 15.7179 7.4889 22.4639
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
167
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 20.0659 12.9529 22.5329
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
168
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 11.7989 4.9769 17.7929
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
169
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 9.8999 2.8359 15.9569
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
170
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 11.4419 4.3759 17.5979
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
171
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 7.1559 0.3591 13.4789
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
172
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 6.9399 1.6959 11.5389
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
173
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
0.01 -2.0000 30. 10. 13.04
0.10 -1.0000 30. 22. 18.21
1.00 0.0000 30. 24. 22.82
10.00 1.0000 30. 25. 26.21
100.00 2.0000 30. 28. 28.29
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 5.7139
Pendenza (b) = 0.4385 es = 0.0903
Media delle X = -0.4163
Media delle Y = 5.5313
CHI quadro = 4.0088
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.0000 0.0000 0.0000
LC50 12.3709 6.9459 17.2889
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
174
ANEXO B
175
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.79
5.00 0.6990 30. 5. 7.26
10.00 1.0000 30. 7. 13.03
15.00 1.1761 30. 18. 16.75
20.00 1.3010 30. 24. 19.31
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.9345
Pendenza (b) = 1.8874 es = 0.3530
Media delle X = 0.9955
Media delle Y = 4.8134
CHI quadro = 11.0703
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.7275 0.0147 2.0512
LC50 9.1330 5.4450 12.0780
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
176
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.79
5.00 0.6990 30. 5. 7.26
10.00 1.0000 30. 7. 13.03
15.00 1.1761 30. 18. 16.75
20.00 1.3010 30. 24. 19.31
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.9345
Pendenza (b) = 1.8874 es = 0.3530
Media delle X = 0.9955
Media delle Y = 4.8134
CHI quadro = 11.0703
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.7275 0.0147 2.0512
LC50 13.4470 7.6920 16.9300
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
177
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.79
5.00 0.6990 30. 5. 7.26
10.00 1.0000 30. 7. 13.03
15.00 1.1761 30. 18. 16.75
20.00 1.3010 30. 24. 19.31
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.9345
Pendenza (b) = 1.8874 es = 0.3530
Media delle X = 0.9955
Media delle Y = 4.8134
CHI quadro = 11.0703
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.7275 0.0147 2.0512
LC50 11.0510 5.8100 14.4800
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
178
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.79
5.00 0.6990 30. 5. 7.26
10.00 1.0000 30. 7. 13.03
15.00 1.1761 30. 18. 16.75
20.00 1.3010 30. 24. 19.31
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.9345
Pendenza (b) = 1.8874 es = 0.3530
Media delle X = 0.9955
Media delle Y = 4.8134
CHI quadro = 11.0703
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.7275 0.0147 2.0512
LC50 14.4820 9.6080 16.2170
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
179
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.79
5.00 0.6990 30. 5. 7.26
10.00 1.0000 30. 7. 13.03
15.00 1.1761 30. 18. 16.75
20.00 1.3010 30. 24. 19.31
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.9345
Pendenza (b) = 1.8874 es = 0.3530
Media delle X = 0.9955
Media delle Y = 4.8134
CHI quadro = 11.0703
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.7275 0.0147 2.0512
LC50 12.4020 6.9420 13.1390
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
180
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.79
5.00 0.6990 30. 5. 7.26
10.00 1.0000 30. 7. 13.03
15.00 1.1761 30. 18. 16.75
20.00 1.3010 30. 24. 19.31
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.9345
Pendenza (b) = 1.8874 es = 0.3530
Media delle X = 0.9955
Media delle Y = 4.8134
CHI quadro = 11.0703
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.7275 0.0147 2.0512
LC50 15.5700 8.4610 17.1410
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
181
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.79
5.00 0.6990 30. 5. 7.26
10.00 1.0000 30. 7. 13.03
15.00 1.1761 30. 18. 16.75
20.00 1.3010 30. 24. 19.31
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.9345
Pendenza (b) = 1.8874 es = 0.3530
Media delle X = 0.9955
Media delle Y = 4.8134
CHI quadro = 11.0703
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.7275 0.0147 2.0512
LC50 11.5970 6.0530 14.3660
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
182
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.79
5.00 0.6990 30. 5. 7.26
10.00 1.0000 30. 7. 13.03
15.00 1.1761 30. 18. 16.75
20.00 1.3010 30. 24. 19.31
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.9345
Pendenza (b) = 1.8874 es = 0.3530
Media delle X = 0.9955
Media delle Y = 4.8134
CHI quadro = 11.0703
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.7275 0.0147 2.0512
LC50 15.8940 9.5740 19.2430
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
183
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.79
5.00 0.6990 30. 5. 7.26
10.00 1.0000 30. 7. 13.03
15.00 1.1761 30. 18. 16.75
20.00 1.3010 30. 24. 19.31
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.9345
Pendenza (b) = 1.8874 es = 0.3530
Media delle X = 0.9955
Media delle Y = 4.8134
CHI quadro = 11.0703
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.7275 0.0147 2.0512
LC50 12.3140 7.1890 16.9310
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
184
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.79
5.00 0.6990 30. 5. 7.26
10.00 1.0000 30. 7. 13.03
15.00 1.1761 30. 18. 16.75
20.00 1.3010 30. 24. 19.31
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.9345
Pendenza (b) = 1.8874 es = 0.3530
Media delle X = 0.9955
Media delle Y = 4.8134
CHI quadro = 11.0703
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.7275 0.0147 2.0512
LC50 10.4170 8.5640 12.7730
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
185
ANEXO C
186
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 1.02
5.00 0.6990 30. 7. 8.26
10.00 1.0000 30. 9. 14.20
15.00 1.1761 30. 19. 17.88
20.00 1.3010 30. 24. 20.35
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 3.1146
Pendenza (b) = 1.8151 es = 0.3360
Media delle X = 0.9789
Media delle Y = 4.8914
CHI quadro = 7.0469
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.5716 0.1109 1.2562
LC50 4.6320 0.1360 7.3100
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
187
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 1.02
5.00 0.6990 30. 7. 8.26
10.00 1.0000 30. 9. 14.20
15.00 1.1761 30. 19. 17.88
20.00 1.3010 30. 24. 20.35
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 3.1146
Pendenza (b) = 1.8151 es = 0.3360
Media delle X = 0.9789
Media delle Y = 4.8914
CHI quadro = 7.0469
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.5716 0.1109 1.2562
LC50 1.3700 0.1570 2.6050
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
188
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 1.02
5.00 0.6990 30. 7. 8.26
10.00 1.0000 30. 9. 14.20
15.00 1.1761 30. 19. 17.88
20.00 1.3010 30. 24. 20.35
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 3.1146
Pendenza (b) = 1.8151 es = 0.3360
Media delle X = 0.9789
Media delle Y = 4.8914
CHI quadro = 7.0469
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.5716 0.1109 1.2562
LC50 2.7780 0.9350 4.8050
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
189
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 1.02
5.00 0.6990 30. 7. 8.26
10.00 1.0000 30. 9. 14.20
15.00 1.1761 30. 19. 17.88
20.00 1.3010 30. 24. 20.35
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 3.1146
Pendenza (b) = 1.8151 es = 0.3360
Media delle X = 0.9789
Media delle Y = 4.8914
CHI quadro = 7.0469
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.5716 0.1109 1.2562
LC50 0.5960 0.2080 5.7440
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
190
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 1.02
5.00 0.6990 30. 7. 8.26
10.00 1.0000 30. 9. 14.20
15.00 1.1761 30. 19. 17.88
20.00 1.3010 30. 24. 20.35
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 3.1146
Pendenza (b) = 1.8151 es = 0.3360
Media delle X = 0.9789
Media delle Y = 4.8914
CHI quadro = 7.0469
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.5716 0.1109 1.2562
LC50 0.6660 0.1800 2.9500
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
191
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 1.02
5.00 0.6990 30. 7. 8.26
10.00 1.0000 30. 9. 14.20
15.00 1.1761 30. 19. 17.88
20.00 1.3010 30. 24. 20.35
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 3.1146
Pendenza (b) = 1.8151 es = 0.3360
Media delle X = 0.9789
Media delle Y = 4.8914
CHI quadro = 7.0469
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.5716 0.1109 1.2562
LC50 3.7220 1.5590 6.8700
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
192
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 1.02
5.00 0.6990 30. 7. 8.26
10.00 1.0000 30. 9. 14.20
15.00 1.1761 30. 19. 17.88
20.00 1.3010 30. 24. 20.35
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 3.1146
Pendenza (b) = 1.8151 es = 0.3360
Media delle X = 0.9789
Media delle Y = 4.8914
CHI quadro = 7.0469
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.5716 0.1109 1.2562
LC50 1.4990 1.1840 3.1300
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
193
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 1.02
5.00 0.6990 30. 7. 8.26
10.00 1.0000 30. 9. 14.20
15.00 1.1761 30. 19. 17.88
20.00 1.3010 30. 24. 20.35
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 3.1146
Pendenza (b) = 1.8151 es = 0.3360
Media delle X = 0.9789
Media delle Y = 4.8914
CHI quadro = 7.0469
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.5716 0.1109 1.2562
LC50 2.6000 2.3100 4.1840
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
194
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 1.02
5.00 0.6990 30. 7. 8.26
10.00 1.0000 30. 9. 14.20
15.00 1.1761 30. 19. 17.88
20.00 1.3010 30. 24. 20.35
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 3.1146
Pendenza (b) = 1.8151 es = 0.3360
Media delle X = 0.9789
Media delle Y = 4.8914
CHI quadro = 7.0469
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.5716 0.1109 1.2562
LC50 0.6010 0.3450 1.5350
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
195
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 1.02
5.00 0.6990 30. 7. 8.26
10.00 1.0000 30. 9. 14.20
15.00 1.1761 30. 19. 17.88
20.00 1.3010 30. 24. 20.35
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 3.1146
Pendenza (b) = 1.8151 es = 0.3360
Media delle X = 0.9789
Media delle Y = 4.8914
CHI quadro = 7.0469
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.5716 0.1109 1.2562
LC50 1.5490 1.2740 3.1710
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
196
ANEXO D
197
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.61
5.00 0.6990 30. 3. 6.56
10.00 1.0000 30. 5. 12.28
15.00 1.1761 30. 18. 16.08
20.00 1.3010 30. 24. 18.74
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.6996
Pendenza (b) = 2.0311 es = 0.3712
Media delle X = 1.0090
Media delle Y = 4.7490
CHI quadro = 17.0139
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.9710 0.0347 2.4549
LC50 18.5550 15.6740 21.7660
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
198
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.61
5.00 0.6990 30. 3. 6.56
10.00 1.0000 30. 5. 12.28
15.00 1.1761 30. 18. 16.08
20.00 1.3010 30. 24. 18.74
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.6996
Pendenza (b) = 2.0311 es = 0.3712
Media delle X = 1.0090
Media delle Y = 4.7490
CHI quadro = 17.0139
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.9710 0.0347 2.4549
LC50 23.9210 20.1480 26.7650
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
199
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.61
5.00 0.6990 30. 3. 6.56
10.00 1.0000 30. 5. 12.28
15.00 1.1761 30. 18. 16.08
20.00 1.3010 30. 24. 18.74
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.6996
Pendenza (b) = 2.0311 es = 0.3712
Media delle X = 1.0090
Media delle Y = 4.7490
CHI quadro = 17.0139
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.9710 0.0347 2.4549
LC50 20.5370 17.7610 24.0650
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
200
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.61
5.00 0.6990 30. 3. 6.56
10.00 1.0000 30. 5. 12.28
15.00 1.1761 30. 18. 16.08
20.00 1.3010 30. 24. 18.74
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.6996
Pendenza (b) = 2.0311 es = 0.3712
Media delle X = 1.0090
Media delle Y = 4.7490
CHI quadro = 17.0139
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.9710 0.0347 2.4549
LC50 25.2180 23.5350 26.6010
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
201
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.61
5.00 0.6990 30. 3. 6.56
10.00 1.0000 30. 5. 12.28
15.00 1.1761 30. 18. 16.08
20.00 1.3010 30. 24. 18.74
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.6996
Pendenza (b) = 2.0311 es = 0.3712
Media delle X = 1.0090
Media delle Y = 4.7490
CHI quadro = 17.0139
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.9710 0.0347 2.4549
LC50 21.1270 18.8310 23.2190
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
202
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.61
5.00 0.6990 30. 3. 6.56
10.00 1.0000 30. 5. 12.28
15.00 1.1761 30. 18. 16.08
20.00 1.3010 30. 24. 18.74
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.6996
Pendenza (b) = 2.0311 es = 0.3712
Media delle X = 1.0090
Media delle Y = 4.7490
CHI quadro = 17.0139
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.9710 0.0347 2.4549
LC50 24.4070 20.2440 27.3040
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
203
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.61
5.00 0.6990 30. 3. 6.56
10.00 1.0000 30. 5. 12.28
15.00 1.1761 30. 18. 16.08
20.00 1.3010 30. 24. 18.74
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.6996
Pendenza (b) = 2.0311 es = 0.3712
Media delle X = 1.0090
Media delle Y = 4.7490
CHI quadro = 17.0139
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.9710 0.0347 2.4549
LC50 18.6840 15.8000 22.0030
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
204
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.61
5.00 0.6990 30. 3. 6.56
10.00 1.0000 30. 5. 12.28
15.00 1.1761 30. 18. 16.08
20.00 1.3010 30. 24. 18.74
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.6996
Pendenza (b) = 2.0311 es = 0.3712
Media delle X = 1.0090
Media delle Y = 4.7490
CHI quadro = 17.0139
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.9710 0.0347 2.4549
LC50 26.1770 21.7320 29.1090
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
205
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.61
5.00 0.6990 30. 3. 6.56
10.00 1.0000 30. 5. 12.28
15.00 1.1761 30. 18. 16.08
20.00 1.3010 30. 24. 18.74
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.6996
Pendenza (b) = 2.0311 es = 0.3712
Media delle X = 1.0090
Media delle Y = 4.7490
CHI quadro = 17.0139
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.9710 0.0347 2.4549
LC50 21.0150 18.3270 23.4980
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
206
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
1.00 0.0000 30. 2. 0.61
5.00 0.6990 30. 3. 6.56
10.00 1.0000 30. 5. 12.28
15.00 1.1761 30. 18. 16.08
20.00 1.3010 30. 24. 18.74
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = 2.6996
Pendenza (b) = 2.0311 es = 0.3712
Media delle X = 1.0090
Media delle Y = 4.7490
CHI quadro = 17.0139
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 0.9710 0.0347 2.4549
LC50 18.1700 15.9050 20.5100
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
207
ANEXO E
208
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
20.00 1.3010 30. 3. 1.12
40.00 1.6021 30. 5. 7.68
60.00 1.7782 30. 8. 15.03
80.00 1.9031 30. 23. 20.42
100.00 2.0000 30. 28. 23.92
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = -2.2107
Pendenza (b) = 4.0557 es = 0.6005
Media delle X = 1.7776
Media delle Y = 4.9988
CHI quadro = 15.2786
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 16.0074 4.7681 25.3001
LC50 60.9670 45.9860 82.3320
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
209
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
20.00 1.3010 30. 3. 1.12
40.00 1.6021 30. 5. 7.68
60.00 1.7782 30. 8. 15.03
80.00 1.9031 30. 23. 20.42
100.00 2.0000 30. 28. 23.92
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = -2.2107
Pendenza (b) = 4.0557 es = 0.6005
Media delle X = 1.7776
Media delle Y = 4.9988
CHI quadro = 15.2786
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 16.0074 4.7681 25.3001
LC50 59.5540 42.8500 82.0350
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
210
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
20.00 1.3010 30. 3. 1.12
40.00 1.6021 30. 5. 7.68
60.00 1.7782 30. 8. 15.03
80.00 1.9031 30. 23. 20.42
100.00 2.0000 30. 28. 23.92
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = -2.2107
Pendenza (b) = 4.0557 es = 0.6005
Media delle X = 1.7776
Media delle Y = 4.9988
CHI quadro = 15.2786
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 16.0074 4.7681 25.3001
LC50 60.4520 45.5860 81.7620
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
211
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
20.00 1.3010 30. 3. 1.12
40.00 1.6021 30. 5. 7.68
60.00 1.7782 30. 8. 15.03
80.00 1.9031 30. 23. 20.42
100.00 2.0000 30. 28. 23.92
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = -2.2107
Pendenza (b) = 4.0557 es = 0.6005
Media delle X = 1.7776
Media delle Y = 4.9988
CHI quadro = 15.2786
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 16.0074 4.7681 25.3001
LC50 59.9190 43.2080 86.1620
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
212
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
20.00 1.3010 30. 3. 1.12
40.00 1.6021 30. 5. 7.68
60.00 1.7782 30. 8. 15.03
80.00 1.9031 30. 23. 20.42
100.00 2.0000 30. 28. 23.92
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = -2.2107
Pendenza (b) = 4.0557 es = 0.6005
Media delle X = 1.7776
Media delle Y = 4.9988
CHI quadro = 15.2786
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 16.0074 4.7681 25.3001
LC50 52.2600 47.1550 88.5120
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
213
ANEXO F
214
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
20.00 1.3010 30. 2. 0.93
40.00 1.6021 30. 6. 6.35
60.00 1.7782 30. 8. 12.90
80.00 1.9031 30. 17. 18.14
100.00 2.0000 30. 27. 21.86
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = -1.8577
Pendenza (b) = 3.7616 es = 0.6116
Media delle X = 1.7922
Media delle Y = 4.8840
CHI quadro = 9.0546
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 16.0190 3.6248 26.3364
LC50 64.0740 50.5110 83.7190
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
215
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
20.00 1.3010 30. 2. 0.93
40.00 1.6021 30. 6. 6.35
60.00 1.7782 30. 8. 12.90
80.00 1.9031 30. 17. 18.14
100.00 2.0000 30. 27. 21.86
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = -1.8577
Pendenza (b) = 3.7616 es = 0.6116
Media delle X = 1.7922
Media delle Y = 4.8840
CHI quadro = 9.0546
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 16.0190 3.6248 26.3364
LC50 64.6120 52.0220 83.4300
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
216
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
20.00 1.3010 30. 2. 0.93
40.00 1.6021 30. 6. 6.35
60.00 1.7782 30. 8. 12.90
80.00 1.9031 30. 17. 18.14
100.00 2.0000 30. 27. 21.86
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = -1.8577
Pendenza (b) = 3.7616 es = 0.6116
Media delle X = 1.7922
Media delle Y = 4.8840
CHI quadro = 9.0546
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 16.0190 3.6248 26.3364
LC50 66.8720 53.0300 86.4780
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
217
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
20.00 1.3010 30. 2. 0.93
40.00 1.6021 30. 6. 6.35
60.00 1.7782 30. 8. 12.90
80.00 1.9031 30. 17. 18.14
100.00 2.0000 30. 27. 21.86
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = -1.8577
Pendenza (b) = 3.7616 es = 0.6116
Media delle X = 1.7922
Media delle Y = 4.8840
CHI quadro = 9.0546
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 16.0190 3.6248 26.3364
LC50 67.7230 53.1460 87.5810
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
218
======================================================================
CONCENTRAZIONE LOG(CONC) N.TRATTATI N.MORTI
osservati attesi
20.00 1.3010 30. 2. 0.93
40.00 1.6021 30. 6. 6.35
60.00 1.7782 30. 8. 12.90
80.00 1.9031 30. 17. 18.14
100.00 2.0000 30. 27. 21.86
Controllo 30. 0. 0.00
======================================================================
PARAMETRI STATISTICI DELLA REGRESSIONE Y=a+bX :
(Y= probits ponderati; X= log(conc) ponderati)
Intercetta (a) = -1.8577
Pendenza (b) = 3.7616 es = 0.6116
Media delle X = 1.7922
Media delle Y = 4.8840
CHI quadro = 9.0546
* CHI quadro significativo. Il fattore di eterogeneità
non è utilizzato. Usare molta cautela*
ALTRI PARAMETRI STATISTICI :
Numero di punti = 5
Gradi di libertà = 3
Mortalità naturale = 0.0000 es = 0.0001
Numero di cicli = 1
======================================================================
END POINT CONCENTRAZIONE LIMITI FIDUCIALI (95%)
inferiore superiore
LC1 16.0190 3.6248 26.3364
LC50 66.8940 52.5350 86.7510
======================================================================
NOTA: Se LC è al di fuori del range di conc. analizzate,
il valore deve essere preso con estrema cautela trattandosi
di un valore stimato per estrapolazione.
La stessa avvertenza vale per i limiti di confidenza.
Se è necessaria altra assistenza, rivolgersi ad un esperto
di statistica.
219
ANEXO G
220
![Presentacion Reaxys espanol [Modo de Compatibilidade]web.usbmed.edu.co/usbmed/biblioteca/docs/Tutorial_Reaxys.pdf · • Inhibición / concentración efectiva (e.g. IC/EC50) • Constantes](https://img.pdfslide.tips/doc/110x75/5c6a44d309d3f20c178c654d/presentacion-reaxys-espanol-modo-de-compatibilidadeweb-inhibicion-.jpg)