UNIVERSIDADDEL CAUCA

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA EDUCACIÓN

DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍAÁREA DE MICROBIOLOGIA

Prácticas de Laboratorio de Microbiología

DETERMINACIÓN DE LA CURVA DE CRECIMIENTO Y EL EFECTO DE FACTORES AMBIENTALES EN UN CULTIVO

BACTERIANO.

Guía No. 6

1. INTRODUCCIÓN

Las bacterias, al igual que los demás seres vivos requieren de una serie de condiciones o factores ambientales para el desarrollo celular y conformación de poblaciones y comunidades. Los factores pueden diferenciarse en abióticos, referidos a aquellos relacionados con aspectos propios del medio donde se desarrollan, como la temperatura, el pH, los gases respiratorios (O2 y CO2), las radiaciones (lumínicas, sonoras, electromagnéticas), la presión (atmosférica, hidrostática, osmótica) y la presencia de nutrientes y en bióticos, referidos a aquellos relacionados con las interrelaciones que se dan entre las diversas poblaciones y comunidades.

Cuando la bacteria encuentra condiciones propicias para su desarrollo o se adapta a las nuevas condiciones del medio, ocurre inicialmente un crecimiento en masa celular y posteriormente, en el número de células a medida que avanza el tiempo. Estos cambios pueden representarse mediante una curva, la cual ha sido denominada curva de crecimiento, tal como se presenta a continuación:

Las etapas de la curva de crecimiento son:

Fase Lag: Las células bacterianas se aclimatan al nuevo ambiente y las características de estas. En esta fase se da inicialmente un crecimiento en masa

Elaborado por:

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Revisado Por:

Jefe Unidad de Área

Presidente Comité de Plan

Coordinador Comité Desactivación Residuos

Químicos

Aprobada por:

Presidente Comité Técnico Ambiental

Rector

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celular y luego comienzan a formarse nuevas células si se encuentran las condiciones apropiadas para ello.

Fase de crecimiento exponencial: La población bacteriana se incrementa exponencialmente (el mismo número de células por la misma unida de tiempo). Las células se han adaptado al ambiente.

Fase estacionaria: La tasa de crecimiento disminuye por la acumulación de desechos metabólicos y el agotamiento de los nutrientes. La tasa de crecimiento iguala la tasa de mortalidad.

Fase de muerte: La población bacteriana disminuye por el agotamiento total de nutrientes, los efectos tóxicos de los desechos metabólicos y las modificaciones sustanciales en el ambiente.

2. OBJETIVOS

Establecer la curva de crecimiento de un cultivo bacteriano. Capacitar al estudiante en le Manejo del espectrofotómetro y sus aplicaciones en

el trabajo de laboratorio. Proporcionar a los estudiantes los conceptos físicos y químicos que permiten a la

espectrofotometría ser una herramienta de análisis en el laboratorio.

3. CONSULTAS PRELIMINARES

¿Cuáles son los factores ambientales determinantes del crecimiento y desarrollo bacteriano?

¿Cuál es el principio de operación de un espectrofotómetro?

¿Qué es la densidad óptica de un cultivo bacteriano?

4. MATERIALES

MATERIAL CANTIDADCajas de Petri 10Tubo de ensayo con tapa 2Asa bacteriológica 1Mechero 1Cultivo bacteriano 1

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5. REACTIVOS

SUSTANCIAS* CANTIDADAgar nutritivo 150 mlCaldo nutritivo 10 ml

No hay restricción de seguridad por el uso de los medios de cultivo. 6. EQUIPOS

EQUIPOS* CANTIDADIncubadora 1Espectrofotómetro SQ118 1Baño de María 1Cámara flujo laminar con luz UV 1

La incubadora y el baño de maría deberán estar previamente calibrados a la temperatura requerida. No manipular el equipo y mantenerlo cerrado. Abrir solamente para incluir el cultivo a incubar.

7. PROCEDIMIENTO

7.1 DETERMINACIÓN DE LA CURVA DE CRECIMIENTO DE UN CULTIVO BACTERIANO.

Transfiera con el asa bacteriológica una porción de cultivo bacteriano a un tubo de ensayo conteniendo cinco (5) mL de caldo nutritivo. Prepare dos cultivos (2 tubos de ensayo) para obtener una réplica.

Determine el porcentaje de transmitancia (%T) de los cultivos inicialmente preparados en la parte anterior, utilizando el espectrofotómetro previamente calibrado a 660 nm.

Coloque los cultivos a incubar en “baño de maría” a 35 - 37 ºC, realizando agitaciones suaves cada cinco minutos para asegurarse de distribuir las células y los nutrientes.

Realice lectura del porcentaje de transmitancia de sus cultivos en el espectrofotómetro cada 10 minutos hasta obtener la curva de crecimiento de su cultivo.

Convierta el porcentaje de transmitancia obtenido en cada lectura a el valor de densidad óptica (D.O.) del cultivo, aplicando la fórmula: D. O. = 2 – log %T

Con los valores convertidos realice la curva de crecimiento de su cultivo bacteriano, cruzando las variables tiempos versus densidad óptica.

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7. BIBLIOGRAFÍA

BENSON, HAROLD. 1981. Microbiological applications. A laboratory manual in general microbiology. Wm. C. Brown Company Publishers. Iowa.

MADIGAN M. T., MARTINKO J.M. y PARKER J. BROCK. Biología de los microorganismos. Octava edición. Pearson Prentice Hall, Madrid,2004.

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