8/8/2019 DETERMINAREA ACTIVITĂŢII AMILAZEI SERICE

http://slidepdf.com/reader/full/determinarea-activitatii-amilazei-serice 1/2

DETERMINAREA ACTIVITĂŢII AMILAZEI SERICE

Amilaza 1,4-glucanhidrolaza (E.C.3.2.1.1.) catalizează hidroliza polizaharidelor solubile formate din unităţi de glucoză legate prin legături α1-4 glucozidice.

Amilaza acţionează asupra amidonului prin scindarea legăturilor 1-4glucozidice, producând fragmentarea substratului în molecule mai mici:dextrine, maltodextroze, maltoză, glucoză. În funcţie de greutateamoleculară a dextrinelorrezultate, acestea dau cu iodul coloraţii diferite,după cum urmează:

albastru – amilodextrineroşu – eritrodextrinegalben – flavodextrineDextrinele cu mase moleculare mici (acrodextrine) nu dau reacţii de

culoare cu iodul.

Principiul metodei:

Amidonul rămas nehidrolizat în urma acţiunii enzimei din proba biologică este dozat colorimetric cu iod.

Reactivi:1. Substrat tamponat: 13,3 g Na2HPO4 şi 4,3 g acid benzoic. Se

dizolvă în 250 ml. apă distilată la fierbere. Se adaugă 5 mlsuspensie rece conţinând 200 mg amidon. Se lasă să serăcească. Se aduce la 500 ml cu apă distilată. Se păstrează la40C (soluţia trebuie să fie limpede).

2. Soluţie stoc iod: 3,56 g KIO3 şi 45 g KI. Se dizolvă în 800 mlapă distilată. Se adaugă prin picurare 9 ml soluţie HCl 12 Magitând continuu. Se aduce la 1 l cu apă distilată. Se păstreazăla +40C timp de maxim un an.

3. Soluţia de iod pentru determinări: se face o diluţie din soluţiastoc 1:10 cu apă distilată. Se păstrează la +40C maxim 2 luni.

4. Soluţia acid clorhidric 1N.5. Soluţie amilază din comprimat: soluţie enzimatică obţinută prin

triturarea unui comprimat de Mezym forte în mojar şi extracţia produsului finpulverizat obţinut cu 10 ml tamponat fosfat timpde 30 min. la temperatura camerei, urmată de filtrarea soluţiei.Soluţia filtrată se aduce în balon cotat de 100 ml cu ser fiziologic tamponat.

1

8/8/2019 DETERMINAREA ACTIVITĂŢII AMILAZEI SERICE

http://slidepdf.com/reader/full/determinarea-activitatii-amilazei-serice 2/2

Mod de lucru:

Se folosesc baloane cotate de 25 ml.

Reactivi (ml) Probă Martor  Substrat (amidon 370C) 2,5 2,5 

Preincubare 15 minute la 370CSoluţie amilaza din comprimat 0,05 -

Incubare 7,5 minute la 370C. Răcire pe gheaţăAcid clorhiddric 1 N 1 1Apă distilată 15 15Soluţie iod determinări 2,5 2,5Soluţie amilaza din comprimat - 0,05Se aduc ambele baloane la cotă cu apă distilatăSe citeşte absorbanţa la 660 nm faţă de apa distilată

Calcul:

(AM-AP)/AM x 4200 = unităţi amilazice/dl probă

2