Diagnóstico precoz de leucemias mediante análisis ... . · linfoide, que se expresa en linfocitos

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    Trabajo cientfico

    Resumen

    Las leucemias se caracterizan por la presencia de abundantes clulas precursoras o blastos en sangre perifrica. Existen analizadores hematolgicos capaces de determinar este tipo de clulas, por lo que son una herramienta diagnstica muy eficaz para detectar este tipo de patologas de manera rpida. En este trabajo se recopilaron 22 muestras sanguneas con una clara sospecha de leucemia en base a los parmetros grficos (citogramas) caractersticos que proporcion el analiza-dor hematolgico. De todas las muestras se realizaron frotis sanguneos para su diagnstico citolgico, el cual fue de leucemia en todas ellas. Se puede concluir por tanto, que la identificacin e interpretacin correcta de este tipo de grficas, proporciona en pocos minutos una sospecha fundada de leucemia.

    Palabras clave

    Leucemia, citogramas, blastos, analizador hematolgi-co, frotis sanguneos.

    Introduccin

    Actualmente muchas clnicas veterinarias y todos los laboratorios de referencia disponen de diversos analiza-dores hematolgicos. Entre todos ellos, los que se basan en la citometra de flujo (con tecnologa lser) son los de mayor utilidad diagnstica, ya que son capaces de diferenciar e identificar distintos tipos de clulas san-guneas incluidas las formas inmaduras o precursoras de las mismas. Esta ventaja es claramente til en los

    anlisis hematolgicos de rutina, ya que se puede de-tectar un proceso leucmico en sangre perifrica y de forma inmediata, en base a la identificacin de clulas precursoras por el instrumento.

    Las leucemias son neoplasias malignas que proceden de los precursores hematopoyticos de la mdula sea. Estas clulas neoplsicas se mantienen como un clon de clulas inmaduras no funcionales, al ser incapaces de sufrir procesos de diferenciacin, maduracin o apoptosis (1,2,5,15,19,22,23). Desde el punto de vista de la lnea celular de la que proceden, las leucemias se pueden clasificar en dos grandes grupos: linfoide y mieloide. La leucemia linfoide (figura 1) se origina a partir de la estirpe medular linfoide, que se expresa en linfocitos y por otra parte la mieloblstica, que procede de la lnea mieloide (figura 2), la cual en condiciones normales da lugar al resto de los leucocitos (figura 3).

    Diagnstico precoz de leucemias mediante anlisis hematolgico

    automatizado Snchez Visconti, G.*, Hervs Rodrguez, J. ** y Chacn-M Lara, F. *** Doctor en Farmacia. Laboratorio de Anlisis Veterinarios (LAV). Madrid.** Doctores en Veterinaria. Histolab Veterinaria. Fuengirola (Mlaga).

    Figura 1. Leucemia linfoide. Frotis sanguneo en el que se aprecia una poblacin numerosa de clulas blsticas de estirpe linfoide. Tincin de Diff-Quick x400.

  • Diagnstico precoz de leucemias - Snchez Visconti, G., Hervs Rodrguez, J. y Chacn-M Lara, F.

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    Adems, en funcin del curso clnico y de las caracters-ticas citolgicas de la poblacin de clulas leucmicas, pueden clasificarse como agudas y crnicas (1,7,8,17,22 ,23). As se describen dos categoras:

    Adems, en funcin del curso clnico y de las caracters-ticas citolgicas de la poblacin de clulas leucmicas, pueden clasificarse como agudas y crnicas (1,7,8,17,22 ,23). As se describen dos categoras: Leucemia linfoide: Leucemia linfoblstica aguda (LLA)

    y leucemia linfoctica crnica (LLC) como reflejo de alte-raciones linfoproliferativas (linfoide) a nivel medular.

    Leucemia mieloide: Leucemia mieloide aguda (LMA) y leucemia mieloide crnica (LMC), originadas por altera-ciones mieloproliferativas (mieloide) de la mdula sea. Las leucemias mieloides agudas se subclasifican a su vez en mieloblsticas (sin maduracin o con maduracin parcial), promieloctica hpergranular aguda, mielomo-noctica, monoctica y megacarioblstica (1,8). Asimismo algunas leucemias se denominan como aleucmicas o subleucmicas (7,10,22), lo que significa que las clulas neoplsicas aparecen en mdula sea, pero raramente se observan en sangre o su nmero es escaso.

    Las leucemias agudas se caracterizan de forma genrica por la presencia de clulas blsticas en mdula sea, bien sean linfo-blastos en el caso de la LLA o bien mieloblastos en caso de la LMA, y presentan en general un comportamiento biolgico agresivo. Por otra parte, el curso de las leucemias crnicas es prolongado y en la mayora de las ocasiones tarda en mani-

    festarse. En estos casos es caracterstica la presencia de algn precursor tardo bien diferenciado en la mdula sea o en san-gre, ya sean linfocitos en la LLC o neutrfilos en la LMC (1,8,23).

    En los dos tipos de leucemias agudas (LLA y LMA) se pueden observar clulas leucmicas inmaduras o blsticas en extensiones sanguneas, mediante tcnicas rutinarias de tincin de colorantes como Giemsa, Diff-Quick o tincin de Wright, siendo este hecho ms frecuente en las LLA. En estos casos el diagnstico de leucemia se confir-ma por la observacin de abundantes blastos en sangre perifrica o en mdula sea (12,18).

    Sin embargo, a travs del estudio de sangre perifrica es difcil clasificar las leucemias como linfoides o mieloides, ya que en ambos casos las clulas blsticas que proliferan muestran caractersticas citolgicas muy parecidas al estar normalmente poco diferenciadas (2,12,18,19). A pesar de ello la observacin de un nmero considerable y caracterstico de blastos en frotis sanguneos supone un diagnstico preli-minar de leucemia (12,18), aunque su clasificacin definitiva debe hacerse por tinciones citoqumicas (2) o mediante tcnicas de identificacin del inmunofenotipo.

    Por tanto, si el anlisis automatizado de muestras san-guneas es capaz de detectar de forma precisa un nmero anormal de blastos en sangre perifrica, se dispondr de una herramienta de gran utilidad para detectar un proceso leucmico con slo el anlisis visual de grficas especficas y de algunos otros parmetros hematolgicos. Esto ade-ms, se podr conseguir en un corto periodo de tiempo.

    Figura 2. Leucemia mielomonoctica. Frotis sanguneo en el que se aprecia una abundante poblacin de clulas blsticas mieloides con ncleos escotados, nucleolos prominentes y seudpodos citoplasmticos. Tincin de Diff-Quick x400.

    Figura 3. Esquema de la formacin de los distintos tipos de leucocitos a partir de sus precursores. La lnea linfoide dara lugar a las leucemias linfoblsticas, a partir del linfoblasto y la lnea mieloide a las leucemias mieloblsticas, originada por el mieloblasto.

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    Trabajo cientfico

    Material y mtodos

    El instrumento utilizado para el estudio fue un analizador hematolgico dotado de un programa in-

    formtico para multiespecies de mamferos (ADVIA 120, SIEMENS). Este analizador es un citmetro de flujo que consigue la identificacin del diferencial leucocitario combinando un lser y la citoqumica. Con ello se obtienen dos tipos de grficas (o citogra-mas), la de peroxidasa y la de basolobularidad.

    Figura 4. Informe del ADVIA 120 en cuanto a parmetros leucocitarios. Todas las reas estn identificadas en base a la agrupacin de las distintas poblaciones leucocitarias, en las 2 grficas o citogramas. En la grfica A se representa la actividad de las poblaciones leucocitarias, respecto a su tamao (eje Y) y actividad peroxidsica (eje X). El rea que nos interesa es la denominada LUC (clulas grandes no teidas). En ella se agrupan las clulas mayores y que menos se tien con la peroxidada y es donde se localizan los blastos. En la figura B se representa el tamao del ncleo celular (eje Y) frente a la densidad de la cromatina (eje X), de todas las poblaciones de leucocitos. En esta ltima grfica los leucocitos se agrupan en mononucleados (linfocitos y monocitos), polimorfonucleados (neutrfilos y eosinfilos) y basfilos (en un canal aparte). Los blastos se pueden encontrar en el rea de basfilos.

    Figura 5. Resultados (grficos y numricos) caractersticos de una muestra de un perro normal. Las distintas poblaciones de leucocitos se agrupan -en la grfica de peroxidada- en sus reas correspondientes: 1 neutrfilos, 2 linfocitos, 3 monocitos, 4 eosinfilos y 5 LUC (clulas grandes no teidas). Los porcentajes de las distintas poblaciones leucocitarias son normales. No se observa densidad de poblacin en las reas 5 LUC del citograma de peroxidada, ni en las dems reas del citograma de basolobularidad (6 mononucleados, 7 polimorfonucleados y 8 basfilos).

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    AF Prensa A3 STRONGHOLD.ai 1 04/03/13 18:08

  • Trabajo cientfico

    Tabla

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