METODE U MIKROBIOLOGIJISADRŽAJ

UVOD___________________________2

1.TEMA__________________________3

1.1. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE_____________________3

1.2. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE- PRIPREMANJE_____4-5

1.3. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE- INKUBACIJA________6

1.4. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE- ZONE INHIBICIJE_________________________7-8

1.5. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE- PREDNOSTI ,OGRANIČENJA I TUMAČENJE REZULTATA DISK-DIFUZIONOG METODA _______________9

ZAKLJUČAK_____________________10

Metode u mikrobiologiji 1

METODE U MIKROBIOLOGIJI

A ntibiogram je metoda ispitivanja osjetljivosti

bakterija prema antibakterijskim lijekovima.

Prije primjene nekog antibakterijskog lijeka u terapiji oboljenja potrebno je in vitro ispitati ponašanje mikroorganizma izolovanog u čistoj kulturi, na određena antibakterijska sredstva.

Ovo ispitivanje se vrši na 2 načina : difuzionim i dilucionim metodama.

MIK - minimalna inhibitorna koncentracija najmanja koncentracija antibiotika koja sprecava rast i razmnožavanje bakterija.

MBK - minimalna baktericidna koncentracija najmanja koncentracija antibiotika koja izaziva smrt bakterija.

Metode u mikrobiologiji 2

UVOD

Slika 1. Metode antibiograma

TEMAMETODE U MIKROBIOLOGIJI

Zasniva se na principu difuzije antibiotika kroz čvrstu hranljivu podlogu (agar) (najčešće Mueller-Hinton) prethodno zasijanu ispitivanom bakterijskom kulturom.

Disk metoda ( metoda tablete ) – to je najčešće primenjena metoda.

Upotrebljavaju se diskovi ili tablete obloženi tačno određenom koncentracijom antibakterijskog lijeka, koja je odgovarajuća onoj koja se postiže u organizmu primenom terapijskih doza tog lijeka.

-Sastav Mueller-Hinton podloge:

1. Extrakt mesa 2g2. Kazein-hidrolizat 17.5g3. Škrob 5g4. Agar 17g5. Destilovana voda 1000

-pH 7.3-Sterilizacija: autoklav 121 C – 15 min

Metode u mikrobiologiji 3

ANTIBIOTSKI DISK

1.1. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE

Slika 2. Mueller-Hinton podloga(RAZLIVENANA PETRIJEVU PLOČU)

ZONA INHIBICIJE

Slika 3. Izgled disk difuzione metode primjenjene na različitim bakterijama.

HRANLJIVA PODLOGA SA ZASIJANOM ČISTOM KULTUREOM ISPITIVANOG SOJA

Iz čiste bakterijske kulture uzeti 4-5 kolonija ezom.

Pravljenje suspenzije odrđene gustine od ispitivane bakterijske kulture.

Bris natopiti suspenzijom bakterija i ocediti višak tecnosti lakim pritiskom o zidove epruvete.

Ravnomerno nanošenje bakterijskesuspenzije brisem na celu površinu agara (najčešće Mueller-Hinton) da bi se dobio konfluentan porast.

Metode u mikrobiologiji 4

1.2. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE- PRIPREMANJE

Slika 4. Escherichia Coli zasijana na hranjivu podlogu

Slika 5. Eze za kultivaciju bakterija na hranjive podloge (jednokratne eze)

Slika 6. Pravljenje suspenzije.

Slika 7. Nanošenje suspenzije na podlogu.

Stavljanje diskova sa određenim (standardnim) koncentracijama antibiotika pincetom.

Slika 9. Raspored diskovaantibioticima

Inkubacija u termostatu :

od 16 do 24 h 37°C Poslije inkubacije vrši se

očitavanje prečnika zone inhibicije.

Ako su svi uslovi standardizovani ( pritisak, temperatura, pH, vrijeme inkubacije ) onda je prečnik zone inhibicije proporcionalan koncentraciji datog antibakterijskog sredstva.

Metode u mikrobiologiji 5

1.2. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE- PRIPREMANJE

Slika 8. Oxacillin - disk difuzijona metoda za identifikaciju MRSA

24mm

10 -15mm

Slika 10. Termostat za inkubaciju.

U toku inkubacije dolazi do umnožavanja bakterija na hranjivoj podlozi.

Antibiotik difunduje kroz hranjivu podlogu.

Koncentracija antibiotika postepeno i radijalno opada sa udaljavanjem od diska sve do tacke gde više nijen inhibitorna i gde se pojavljuje porast bakterija.

Nastaje zona inhibicije rasta.

.

Metode u mikrobiologiji 6

1.3. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE-INKUBACIJA

Čvrsta hranljiva podloga zasijana čistom bakterijskom kulturom

Antibiogramdiskovi

Čitanjerezultata

37°C/24h

Slika 11. Disk-difuzioni metod

Zona inhibicije rasta: okrugla zona oko diska sa antibiotikom u kojoj nema vidljivog porasta bakterija.

Tumačenje rezultata disk difuzionog metoda:

Postoje 3 kategorije osetljivosti:

S / osjetljiv - verovatnoća uspjeha terapije je visoka nakon primjene uobičajenih doza antibiotika, datih na uobičajeni način.

I / intermediarno - (umjereno) osjetljiv –mogući uspjeh terapije ako se antibiotik da u maksimalnim koncentracijama i pareneteralnim.

R / rezistentan- nikada se ne primjenjuje u terapiji; bez obzira na dozu, terapija je vrlo vjerovatno neuspješna.

Metode u mikrobiologiji 7

Slika 12. Mjerenje prečnika

zone inhibicije

1.4. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE-ZONE INHIBICIJE

Slika 13. Mjerenje prečnika zone inhibicije

Na širinu zone inhibicije mogu da utiču sljedeći faktori:

Osobine podloge Veličina inokuluma Faza raazmnožavanja u kojoj se

nalazi ispitivana bakterija Stabilnost antibakterijskog

sredstva

Da bi se otklonio uticaj ovih faktora za izvođenje antibiograma se koristi standardna Mueller – Hintonova podloga.

Zona inhibicije rasta (R) rezistentan

Zona inhibicije rasta (S) osjetljiv

Metode u mikrobiologiji 8

1.4. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE-ZONE INHIBICIJE

Slika 14. Bakterija može da savlada ekstrakt antibiotika, i ponovo rasti u zoni inhibicije

Slika 15. Podloga Mueller Hinton / bakterija pseudomonas aeruginosa.

Metode u mikrobiologiji 9

1.5. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE-PREDNOSTI ,OGRANIČENJA I TUMAČENJE REZULTATA DISK-DIFUZIONOG METODA

Uporediti izmjereneprečnike zona inhibicijeispitivane bakterije sa standardnim preporučenim zonama za određenu bakteriju i određeni antibiotik.

Kvalitativna metoda - disk difuzioni metodantibiograma (rezultati S, I, R) postoji opasnost od prevelike ili marginalno efektivne doze.

Posebno kod “teških” pacijenata sa invazivnim bakterijskim infekcijama i sa primarnim osnovnim oboljenjem (insuficijencija jetre, bubrega...) kod kojih je važno precizno dozirati lijek. Poznavanje MIK određenog antibiotika za dati bakterijski soj koji je izolovan od pacijenta omogućava individualno doziranje antibiotika. MIK se smatra referentnim kriterijumom za definisanje osjetljivosti mikroorganizama.

MIKROBIOLOGOdređivanje MIK antibiotika za određeni soj bakterija izolovan od pacijenta.

PREDNOSTI OGRANIČENJAIstovremeno se ispituje osjetljivost na veći broj antibiotika

Ne može se odrediti MIK

Jednostavan i jeftinRelativno brz (24 h)

PRIMER PREPORUČENIH ZONA

DIJAMETAR ZONE INHIBICIJE RASTA

Staphylococcus aureus S I RAmpicilin >29 / <28Impienem >16 14-15 <13Meticilin >14 10-13 <9

Hloramfenikol >18 13-17 <12Gentamicin >15 13-14 <12

Ciprofloksacin >21 16-20 <15Trimetoprim+

Sulfametoksazol>16 11-15 <10

Vankomicin >15 / /Escherichia coli S I R

Ampicilin >17 14-16 <13Impienem >16 14-15 <13Meticilin / / /

Hloramfenikol >18 13-17 <12Gentamicin >15 13-14 <12

Ciprofloksacin >21 16-20 <15Trimetoprim+

Sulfametoksazol>16 11-15 <10

Vankomicin / / /

METODE U MIKROBIOLOGIJI

Metode u mikrobiologiji 10

FARMAKOLOGPoznavanje farmakološkihparametara za taj antibiotik(zadržavanje u organizmu,vrijeme eliminacije, penetracija u tkiva...).

KLINIČARPostavljanje ispravnedijagnoze i sagledavanje svih faktora rizika kod pacijenta.

Izbor najboljegantibotika u

odgovarajućojdozi za datog pacijenta.

METODE U MIKROBIOLOGIJI

BAKTERIOLOGIJA/

MIRSADA HUKIĆ I SARADNICI

MEDICINSKA MIKROBIOLOGIJA/UNIVERZITET U SARAJEVU /MEDICINSKI FAKULTET- /EDINA BEŠLAGIĆ I SARADNICI

http://wwwold.med.bg.ac.rs/dloads/studenti/2011/mikrobi/vezba_5_Antibiogram.pdf

SLIKE http://www.google.ba/imghp?hl=bs&tab=wi

Metode u mikrobiologiji 11

LITERATURA