DISTRIBUCIN DE LA INFECCIN POR Streptococcus iniae EN DIFERENTES RGANOS DE TILAPIA ROJA (Oreochromis sp) Y TILAPIA NILOTICA (Oreochromis niloticus) DIAGNOSTICADO POR PCR EN TIEMPO REAL

Identificacin de la infeccin por streptococcus iniae en diferentes rganos de tilapia roja (Oreochromis sp) y tilapia nilotica (Oreochromis niloticus) por PCR en tiempo realFrank Barreiro , Tec. Acui, Est MVZ; James Betancur, Zoot; Henry Ostos, M.D. MSc. Gentica

Grupo de Investigacin Laboratorio de Medicina Genmica, Universidad Surcolombiana, Neiva, Colombia. Grupo de Investigacin IMEVET, Universidad Corhuila, Neiva, Colombia.

barreirosanchez@Gmail.com

Introduccin Las infecciones estreptocticas se han diagnosticado en especies de cultivo y pecessalvajes.El Streptococcus iniae ha sidoidentificado por la Asociacin Americana de tilapia como el ms importante grupo de patgenos que afecta a la industria de cultivo de tilapia.Importancia por el reporte de infecciones zoonticas porStreptococcus iniae.

2Streptococcus iniae

PCR en tiempo real Es una tcnica para la sntesis in vitro de secuencias especficas de ADN. Las siglas PCR significan Polimerase Chain Reaction: reaccin en cadena de la polimerasa. Desarrollada originalmente por Kary Mullis en la dcada de los 80, por lo cual se le adjudic el Premio Nobel de Qumica en 1993

La PCR En tiempo real es una tcnica con alta sensibilidad, especificidad y semiautomatizada, que evita el manejo post PCR. Emplea sondas (taqman) de secuencias marcadas con fluorocromos.

Objetivos Objetivo general: Identificar la distribucin de la infeccin por Streptococcus iniae en diferentes rganos de tilapia roja (Oreochromis sp) y tilapia nilotica (Oreochromis niloticus) diagnosticada por PCR en tiempo real.

Objetivos especifico Determinar e identificar la distribucin de la infeccin en Cerebro, Hgado y Corazn.

Describir hallazgos histopatolgicos en cerebro, hgado y corazn de individuos infectados con Streptococcus iniae.

Metodologa

Protocolo de PCR en tiempo realControl Positivo Se realiz la extraccin de DNA de los cultivos puros de la cepa de Streptococcus iniae, (fue adquirida de ATTC No. 29178)

Diseo de primersEl grupo Laboratorio de Medicina Genmica, diseo los primers, a partir de las secuencias de la accesin No. Y07622.1 protena Lactato oxigenasa (lctO) (S. iniae). En esta regin se disearon los primers especficos de la especie, utilizando el Software Primer Express 3.0 Applied Byosistems, el equipo utilizado fue Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System+Primers utilizados para el diagnstico de Streptococcus iniae por PCR en tiempo real

ForwardGTT TTC TTG AAG CTA TTG CAG GTT TReversedCGC GCA AGG GTT TCA TGSondaVIC-CTGCGGTTGCCATACCAGCAAGTATTCTA- TAMRA ReactivoCantidadTaqman Universal PCR master mix (2X)12.5 ulTaq man (sonda)0.5 ulPrimer F (10 uM)1.25 ulPrimer R (10 um)1.25 ulDNA1 ulAgua8.5 ulTOTAL 25 ul

Anlisis estadsticoLos resultados se analizaron con estadstica descriptiva y anlisis de frecuencias con el paquete estadstico INFOSTATResultadosExtraccin de DNA a partir de muestras congeladas a -20C.La cantidad de DNA obtenido con el kit comercial de Quigen segn el protocolo para bacterias de la misma marca comercial se encuentra en la tabla siguiente, la medicin se realiz con el equipo NanoDrop 2000

rganos positivos para la infeccin Streptococcus iniae.Individuo rganos infectado 130Corazn - Hgado 332Cerebro 333Corazn 414Corazn 416Corazn 59Hgado 627Corazn - Cerebro 628Hgado Cerebro 629Hgado 77Hgado Cerebro

Curvas de individuos positivos

Sensibilidad de la PCR TIEMPO REAL

ESPECIFICIDAD DE LA PRUEBA PCR TIEMPO REAL

Conclusiones Primer reporte para Colombia para esta enfermedad.Por la magnitud del problema de Streptococcus iniae a nivel mundial, se decidi mirar la distribucin de la infeccin por rgano. La importancia de seguir con monitoreos continuos, por la implicaciones que tiene S. iniae en la salud de los peces y como agente zoontico.S. iniae es una infeccin muy grave y puede tener grandes problemas sobre la actividad acucola del Huila y sobre los recursos icticos nativos.El diagnostico por PCR en tiempo real es una herramienta de alta sensibilidad, especificidad y rapidos resultados para este patgeno.

Gracias