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DNA MitocondrialMedicina Forense
Jonathan H. Nakata Orientadora: Dr. Cintia Fridman
Mitocndria
Uma das mais importantes organelas celulares Presente na maioria dos eucariontes Processamento e converso de glicose e oxignio em energia na forma de ATP -oxidao de cidos graxos, o Ciclo de Krebs, e a Cadeia Respiratria Na matriz mitocondrial existem protenas, ribossomos e DNA
DNA Mitocondrial
DNA extra-cromossmico, circular Fita dupla, no contm histonas Cada mitocndria possui de duas dez cpias de mtDNA Herana matrilinear Alta taxa de mutao, em funo da baixa fidelidade da mtDNA Polimerase e pela ausncia de mecanismo de reparo
DNA Mitocondrial
16569pb, seqenciado inicialmente por Anderson et al., 1981 A seqncia de Anderson et al. revisada denominada Cambridge (referncia)
Possui apenas xons, sendo 37 genes codificando em 13 protenas, 22 tRNAs e 2 rRNAsHVI e HVII, regies no
codificadoras, na ala D-loop
DNA Mitocondrial na Medicina Forense
De 2 10 cpias por mitocndria, tendo at 1000 mitocndrias por clula Anlise de materiais que sejam muito antigos ou apresentem um avanado grau de decomposio
Esta tcnica de anlise forense tem sido utilizada com sucesso por laboratrios, sendo de grande interesse para a comunidade cientfica, para a Justia, para a Polcia e para o Exrcito
Com exceo das mutaes, a seqncia idntica para todos os familiares maternosAlto grau de polimorfismos na regio controle, ala D-loop (1100pb, regio no codificadora), hipervariveis I e II (HVI e HVII), amplificados por PCR gerando um molde para ser seqenciado
Procedimento
Extrao do mtDNA PCR inicial para amplificao de HVI e/ou HVII PCR secundria para enexao das bases fluorescentes Reao de precipitao Sequenciamento Anlise dos resultados BioEdit
Extrao do mtDNA
Vdeo
PCR
Sequenciamento
Anlise dos Resultados - BioEdit
mtDNA x DNA NuclearVantagens
Desvantagens
Genoma pequeno e volumoso, facilitando a anlise de uma amostra escassa e/ou em alto grau de decomposio/antigos Casos de desaparecimento com herana matrilinear conhecida
No pode ser utilizado para testes de paternidade No identificao do indivduo e apenas como membro de uma famlia Tcnica trabalhosa e de custo elevado
ProjetoDados
100 mes e 100 filhos Possuem parentesco comprovado por teste de paternidade Anlise mtDNA Regies HVI e HVII Parmetro de comparao: Cambridge
ProjetoProcedimento
Comparar sequenciamento obtido com Cambridge Procura por SNPs e polimorfismos de comprimento Anotar a posio das bases trocadas e a respectiva troca Pela herana matrilinear, o filho possui os mesmos polimorfismos
ProjetoObjetivos
Cruzar resultados obtidos em um banco de dados Parear em teste cego os filhos com suas respectivas mes Quantificar a herdabilidade de heteroplasmias passadas de uma gerao outra