DNA Parmak İzi 1

DNA Parmak İzi Prosedürü

DNA Parmak İzi 2

Her grup için tüpler

DNA Parmak İzi 3

Şüpheli 1 – 5Her tüp 10 µl DNA örneği içerir

70 µl Enzim Karışımı

0,24 gAgaroz

10 µl Marker

80 µl Boyayıcı

10 µl Suçlu DNA Öreneği

DNA Parmak İzi 4

1. Restriksiyonun Hazırlanmansı

DNA Parmak İzi 5

Dikkat!

• Deneydeki kirliliği ve bozulmayı önleyebilmek için pipet uçlarını yalnızca bir kez kullanın.

• Tüpleri karışmaları için en az 30 saniye boyunca döndürün.

DNA-Fingerprint 6

1. DNA Örneği İçeren Tüpler

DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl

CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5

10µl

DNA Parmak İzi 7

1.1 Her tüpe pipet ile 10 µl enzim karışımı ekleyin

DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl

CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5

10µl

Enzim- 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl Karışımı(ENZ)

DNA Parmak İzi 8

2. Restriksiyon Sindirim

Test tüpleri inkübatöre yerleştirin ve su banyosu içerisinde 37°C’de 20 dakika bekletin.

DNA Parmak İzi 9

3. Elektroforez’in Hazırlanması

DNA Parmak İzi 10

Kızak, metal levha ve tarağı elektroforez odacığının içerisine yerleştirin.

3.1 Elektroforez Odacığının Hazırlanması

Metal LevhaKızak

Tarak

11

3.2 Agaroz Jelin Hazırlanması(0,8%)

• 250 ml erlenmayerin içerisine 0,24 g agaroz + 30 ml TAE-boyayıcısı koyun.

• Kısa bir süre erlenmayeri mikrodalga fırında kaynatın, karıştırın ve tekrar kaynatın.

DNA Parmak İzi

12

3.3 Jelin Dökülmesi

55 °C’de jeli jel kutusunun içerisine dökün.

Dikkat:

•Test Sıcaklığı elinizin üstü ile kontrol edin.

•Jel katılaşana kadar hareket ettirmeyin.

DNA Parmak İzi

13

3.4 Odacığın Hazırlanması

• Jel katılaştıktan sonra elektroforez odacığının metal plakasını sökün.

• Odacığı 27F ml TAE boyayıcısı ile jelin üzerini kaplayacak şekilde doldurun.

• Tarağı çekin.DNA Parmak İzi

14

4. DNA Markerının Hazırlanması

Pipet ile 10 µl tamponu (LB) 10 µl marker’a (M) ekleyin.

DNA Parmak İzi

15

5. 10 µl Tamponun Eklenmesi

10 µl tamponu CS ve S1-S5’e pipet ile ekleyin.10 µl

10 µl10 µl

DNA Parmak İzi

16

Her örnekten 20 µl ve 20 µl marker’ı kuyulara doldurun.

6. Kuyuların Doldurulması

Sırayı Unutmayın!

Kuyular: sağdan sola doğru doldurun

Sol kuyu boş kalmalı.

DNA Parmak İzi

17

6. Kuyuların Doldurulması

Dikkat:Jel kuyuları delik olmamalıdır.

DNA Parmak İzi

18

7. Jel Elektroforezi (120 V ca. 30 dakika)

Mavi bantlar jelin sonuna ulaşmadan 1 cm önce elektroforezi durdurun.

DNA Parmak İzi

19

8. DNA’nın Renklendirilmesi

• Jeli reklendirici çanağa aktarın ve 60 ml renklendirici çözelti 2 dakika ile kaplayın.

• Renklendirici çözeltiyi erlenmayerin içerisine dökün.

DNA Parmak İzi

20

9. JeliAnaliz Edin.

CS S1 S2 S3 S4 S5 M

Süphelilerden hangisi suçlu?

DNA Parmak İzi

21

9. Sonuç

DNA Parmak İzi