Upload
others
View
3
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
i
EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BUNGA
TELANG (Clitoria ternatea L.) TERHADAP JUMLAH SEL NEUTROFIL
DAN EKSPRESI COX-2 PADA KULIT MENCIT TERINDUKSI
KARAGENIN
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Diajukan oleh:
Ni Made Kuswindayanti
NIM: 168114126
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2020
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ii
Persetujuan Pembimbing
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iii
Pengesahan Skripsi Berjudul
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH
UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vi
HALAMAN PERSEMBAHAN
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vii
PRAKATA
Puji dan syukur saya haturkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas
karunia-Nya yang begitu besar sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang
berjudul “Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria
Ternatea L.) Terhadap Jumlah Sel Neutrofil dan Ekspresi COX-2 Pada Kulit
Mencit Terinduksi Karagenin” dengan baik. Skripsi ini disusun untuk
memperoleh gelar Sarjana Strata Satu pada program studi Farmasi Universitas
Sanata Dharma Yogyakarta. Terselesainya skripsi ini tidak lepas dari dukungan
berbagai pihak sehingga penulis bermaksud menyampaikan rasa terimakasih,
kepada :
1. Bapak I Ketut Agus Pancana, S.E., Ibu Ni Wayan Wirawati, S.E., I Wayan
Kuswirocana, S.Kom., dan I Nyoman Birawascita yang selalu memberikan
dukungan, doa, dan motivasi kepada penulis.
2. Ibu drh. Sitarina Widyarini, MP., Ph.D. selaku dosen pembimbing yang
telah membimbing dan memberikan banyak pengalaman kepada penulis
sehingga dapat menyelesaikan skripsi ini dengan baik.
3. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, Apt. dan Bapak Christianus Heru Setiawan,
M.Sc., Apt. selaku dosen penguji yang telah memberikan saran dan
masukan untuk menjadikan skripsi ini lebih baik.
4. Ibu Dr. Christine Patramurti, Apt. selaku dosen pembimbing akademik
yang telah memberikan arahan selama perkuliahan penulis.
5. Sahabat seperjuangan Kadek Evi indrayani, Thessalonika, dan Ni Putu
Intan Ratnadi yang selalu memberikan dukungan dan telah membantu
penulis dalam mengerjakan skripsi ini.
6. Sahabat Radikal Bebas Squad selaku teman perkuliahan yang selalu
memberikan masukan, dukungan, dan mendengarkan keluh kesah penulis
dalam mengerjakan skripsi ini. Penulis sangat bersyukur memiliki teman
seperti kalian.
7. Bapak Heru, Bapak Wagiran, dan Bapak Lilik selaku laboran yang telah
membantu penulis dalam menjalankan penelitian.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
viii
8. Seluruh Dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah
memberikan ilmunya selama perkuliahan.
9. Seluruh teman-teman FSMC 2016 yang tidak bisa penulis sebutkan satu
persatu.
10. Seluruh teman-teman angkatan 2016 yang tidak bisa penulis sebutkan satu
persatu.
Penulis sadar bahwa masih banyak kekurangan dalam penyusunan skripsi
ini sehingga penulis berharap menerima kritik dan saran yang membangun. Akhir
kata, semoga skripsi ini bermanfaat untuk ilmu pengetahuan khususnya di bidang
farmasi.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ................................................................................................ i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN SKRIPSI ................................................................ iii PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................................. v PERNYATAAN PUBLIKASI ................................................................................ v HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................................ vi PRAKATA ............................................................................................................ vii
DAFTAR ISI .......................................................................................................... ix DAFTAR TABEL .................................................................................................. xi DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ xii
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xiii ABSTRAK ........................................................................................................... xiv ABSTRACT .......................................................................................................... xv
PENDAHULUAN .................................................................................................. 1 METODE PENELITIAN ........................................................................................ 2
Desain dan Subjek Penelitian .............................................................................. 2
Alat dan Bahan .................................................................................................... 3 Determinasi Tanaman ......................................................................................... 3
Ekstraksi .............................................................................................................. 4
Uji Flavonoid ...................................................................................................... 4
Uji Antosianin ..................................................................................................... 5 Uji Kadar Air....................................................................................................... 5
Pembuatan Larutan Karagenin dan Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang
(Clitoria ternatea L.) ........................................................................................... 5 Uji Organoleptis dan Homogenitas Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria
ternatea L.) .......................................................................................................... 5
Uji Pendahuluan Karagenin ................................................................................ 6 Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) ..... 6 Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria
ternatea L.) terhadap Jumlah Sel Neutrofil dan Ekspresi COX-2 ...................... 7
Analisis Statistik ................................................................................................. 7 HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................... 8
Uji Kadar Air....................................................................................................... 8
Ekstraksi .............................................................................................................. 9 Uji Flavonoid ...................................................................................................... 9 Uji Antosianin ................................................................................................... 11 Uji Organoleptis dan Homogenitas Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang
(Clitoria ternatea L.) ......................................................................................... 13
Uji Pendahuluan Karagenin .............................................................................. 13 Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria
ternatea L.) terhadap Jumlah Sel Neutrofil....................................................... 14 Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria
ternatea L.) terhadap Ekspresi COX-2 ............................................................. 20 KESIMPULAN ..................................................................................................... 30
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
SARAN ................................................................................................................. 30 DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 31
BIOGRAFI PENULIS .......................................................................................... 60
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Hasil Pengujian Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang dengan Basis
Biocream®. ........................................................................................................... 13 Tabel 2. Hasil Uji Tamhane Jumlah Sel Neutrofil Pada Mencit Setelah Pemberian
Ekstrak Etanol Bunga Telang secara Topikal. ...................................................... 18
Tabel 3. Rerata Persentase (%) Ekspresi COX-2 dan Hasil Uji Tamhane Pada
Kelompok Kontrol Beserta Kelompok Perlakuan Pada Mencit Setelah Pemberian
Ekstrak Etanol Bunga Telang Secara Topikal. ..................................................... 23 Tabel 4. Persentase (%) Penekanan Ekspresi COX-2 Pada Kelompok Kontrol dan
Kelompok Perlakuan Pada Mencit Terinduksi Karagenin. ................................... 26
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Reaksi Flavonoid dengan HCl dan Logam Magnesium .................... 10 Gambar 2. Kesetimbangan Antosianin dalam Larutan ........................................ 12 Gambar 3. Mikrofotografi Pengecatan HE Kulit Normal Mencit. ...................... 16 Gambar 4. Mikrofotografi Pengecatan HE Kontrol Negatif Karagenin 4,5%,
Kontrol Positif Voltaren 1%, serta Perlakuan Ekstrak Etanol Bunga Telang 0,5% ;
1% ; dan 1,5% dengan Perbesaran 400 kali.. ........................................................ 17
Gambar 5. Rerata Jumlah Sel Neutrofil Pada Mencit Setelah Pemberian Ekstrak
Etanol Bunga Telang secara Topikal. ................................................................... 20 Gambar 6. Mikrofotografi Pengecatan Immunohistokimia Kulit Normal Mencit.
............................................................................................................................... 21 Gambar 7. Mikrofotografi Pengecatan Immunohistokimia dengan Antibodi Anti-
COX-2 Pada Kontrol Negatif Karagenin 4,5%, Kontrol Positif Voltaren 1%, serta
Perlakuan Ekstrak Etanol Bunga Telang 0,5% ; 1% ; dan 1,5% dengan Perbesaran
400 Kali.. ............................................................................................................... 22 Gambar 8. Rerata Persentase (%) Ekspresi COX-2 Pada Mencit Setelah
Pemberian Ekstrak Etanol Bunga Telang secara Topikal. .................................... 25 Gambar 9. Persentase (%) Penekanan Ekspresi COX-2 Pada Kelompok Kontrol
Positif dan Kelompok Perlakuan. .......................................................................... 27
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Alat dan Bahan yang Digunakan dalam Penelitian ........................ 36 Lampiran 2. Hewan Uji yang Digunakan dalam Penelitian ................................ 40
Lampiran 3. Pemotongan Kulit Untuk Histopatologi ......................................... 41 Lampiran 4. Hasil Preparat Histopatologi Kulit Punggung Mencit Galur Swiss 42 Lampiran 5. Surat Keterangan Hasil Determinasi Tanaman Telang (Clitoria
ternatea L.) ............................................................................................................ 44 Lampiran 6. Surat Ethical Clearance .................................................................. 45
Lampiran 7. Surat Kalibrasi Jangka Sorong ........................................................ 46 Lampiran 8. Hasil Analisis Statistik Rerata Jumlah Sel Neutrofil pada Masing-
Masing Kelompok ................................................................................................. 48
Lampiran 9. Hasil Analisis Statistik Uji Normalitas dengan Uji Shapiro-Wilk .. 50 Lampiran 10. Hasil Pengujian ANOVA Rerata Jumlah Sel Neutrofil pada
Masing-Masing Kelompok ................................................................................... 51
Lampiran 11. Hasil Pengujian Uji Post Hoc Test dengan Uji Tamhane ............. 51 Lampiran 12. Hasil Analisis Statistik Perhitungan Rerata Persentase (%)
Ekspresi COX-2 Pada Masing-Masing Kelompok ............................................... 53
Lampiran 13. Hasil Uji Normalitas dengan Uji Shapiro-Wilk ............................ 56 Lampiran 14. Hasil Pengujian ANOVA Rerata Persentase (%) Ekspresi COX-2
pada Masing-Masing Kelompok ........................................................................... 57
Lampiran 15. Hasil Pengujian Uji Post Hoc Test dengan Uji Tamhane ............ 57
Lampiran 16. Surat Keterangan Analisis Data Statistik di Pusat Kajian CE & BU
............................................................................................................................... 59
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
ABSTRAK
Bunga telang (Clitoria ternatea L.) mengandung flavonoid dan antosianin
yang sebelumnya terbukti memiliki efek sebagai antiinflamasi yang diekstrak
dalam bentuk infusa. Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan sediaan topikal
krim ekstrak etanol bunga telang memiliki aktivitas antiinflamasi yang dilihat dari
penurunan jumlah sel neutrofil dan penekanan ekspresi COX-2 pada mencit yang
terinduksi karagenin. Metode penelitian yang digunakan adalah eksperimental
murni dengan Rancangan Acak Lengkap pola searah. Hewan uji yang digunakan
adalah mencit betina galur Swiss sebanyak 31 ekor, usia 2-3 bulan, berat 20-30 g
yang dibagi menjadi lima kelompok, yaitu kelompok kontrol negatif, kelompok
kontrol positif, dan kelompok perlakuan yang terdiri dari tiga kelompok dengan
masing-masing konsentrasi 0,5% ; 1% ; dan 1,5%. Penginduksi edema
menggunakan karagenin dengan konsentrasi 4,5%. Uji aktivitas antiinflamasi
akan dilakukan dengan metode pengamatan secara mikroskopik, yaitu metode
pengecatan Hematoksilin Eosin (HE) untuk uji penurunan migrasi jumlah sel
neutrofil dan Immunohistokimia (IHC) dengan antibodi anti-COX-2 untuk uji
penurunan persentase ekspresi COX-2 pada kulit punggung mencit yang
terinduksi karagenin. Data yang dianalisis menggunakan Uji Shapiro-Wilk,
dilanjutkan dengan Levene Test, lalu dilanjutkan dengan Uji One Way ANOVA
dan Uji Tamhane. Hasil penelitian menunjukkan bahwa rerata sel neutrofil pada
konsentrasi 0,5% ; 1% ; dan 1,5% berturut-turut, yaitu 24,67 ; 15,14 ; dan 9,60.
Persentase rerata hasil penekanan ekspresi COX-2 berturut-turut, yaitu 1,13% ;
48,11% ; dan 53,84%. Konsentrasi optimum dari ekstrak etanol bunga telang
adalah 1,5%. Kesimpulan penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol bunga
telang dengan konsentrasi 1% dan 1,5% memiliki efek sebagai antiinflamasi yang
dilihat dari hasil penurunan jumlah sel neutrofil dan ekspresi COX-2.
Kata Kunci : Bunga telang (Clitoria ternatea L.), sediaan topikal krim,
antiinflamasi, sel neutrofil, ekspresi COX-2
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xv
ABSTRACT
Butterfly pea (Clitoria ternatea L.) contains flavonoids and anthocyanins
that are previously proven to have an antiinflammatory effect which was extracted
in the form of infusion. This study aims that to prove the topical cream of ethanol
extract of butterfly pea have antiinflammatory activity which is seen from the
decrease in the number of neutrophil cells and suppression of COX-2 expression
in carrageenan induced mice microscopically. The research method used is
experimental study with one way complete random design. Animals subject used
were 31 female Swiss strain mice, age 2-3 months, weight 20-30 g divided into
five groups, such as the negative control group, the positive control group, and the
treatment group consisting of three groups with each concentration 0,5% ; 1% ;
and 1,5%. Induction of edema using carrageenan with a concentration of 4,5%.
Antiinflammatory activity test will be carried out by microscopic observation
method, which is the method of Hematoxylin Eosin (HE) staining to reduce the
migration of neutrophil cells counts and immunohistochemistry staining with anti-
COX-2 antibodies to test the reduction in the percentage of COX-2 expression in
the skin of mice induced carrageenan. Data were analyzed using Shapiro-Wilk
Test, followed by Levene Test, then continued with One Way ANOVA Test and
Tamhane Test. The results of the study showed that the average of neutrophil cells
at concentration of 0,5% ; 1% ; and 1,5% in a row are 24,67 ; 15,14 ; and 9,60.
The average percentage of the suppression of COX-2 expression in a row are
1,13% ; 48,11% ; and 53,84%. The optimum concentration of the ethanol extract
of butterfly pea is 1,5%. The conclusion of the study shows that the ethanol
extract of butterfly pea with concentrations of 1% and 1,5% have
antiinflammatory activity which is seen from the result of decrease in the
migration of neutrophil cells counts and decrease of COX-2 expression.
Keywords : Butterfly Pea (Clitoria ternatea L.), topical cream,
antiinflammatory, neutrophil cells, COX-2 expression
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara tropis yang memiliki tingkat
keanekaragaman hayati yang tinggi dan memiliki beragam jenis tanaman obat
(Novianti, 2017). Salah satu tanaman yang dapat digunakan sebagai obat
tradisional adalah bunga telang (Clitoria ternatea L.). Bunga telang memiliki sifat
yang menguntungkan untuk kesehatan, seperti antidiabetes, antiinflamasi,
analgesik, antimikroba, dan mengandung senyawa antosianin dengan aktivitas
antioksidan yang tinggi (Kusrini et al., 2017). Menurut (Al-snafi, 2016), skrining
fitokimia menunjukkan bahwa bunga telang mengandung tanin, flobatanin,
karbohidrat, saponin, triterpenoid, fenol, flavonoid, flavanol glikosida, protein,
alkaloid, antrakuinon, antosianin, stigmasit 4-ena-3,6 dion, minyak atsiri, dan
steroid. Sejumlah penelitian membuktikan bahwa flavonoid memiliki aktivitas
sebagai antivirus, antialergi, antiplatelet, antiinflamasi, antitumor, dan antioksidan
(Ponnusamy et al., 2014).
Inflamasi adalah peradangan sebagai akibat dari mekanisme
perlindungan diri terhadap zat asing yang masuk ke dalam tubuh. Saat zat asing
masuk ke dalam tubuh, tubuh bereaksi dengan melepaskan senyawa
prostaglandin, leukotriene, interleukin, nitrit oksida, dan proinflamatori sitokin
(Alfaridz dan Amalia, 2015). Respon inflamasi ditandai dengan tumor
(pembengkakan jaringan), calor (peningkatan suhu jaringan), rubor (kemerahan),
dolor (nyeri), dan function laesa (hilangnya fungsi jaringan) (Stankov, 2012). Di
Indonesia, penyakit yang melibatkan proses inflamasi di dalam tubuh angka
kejadiannya cukup tinggi. Prevalensi nasional penyakit sebanyak hepatitis 0,4%,
penyakit diabetes mellitus 1,5%, penyakit tumor/kanker 1,8%, asma 2,4%,
pneumonia 4,0%, dermatitis 6,8%, penyakit sendi 7,3%, ISPA 9,3%, dan stroke
10,9%. Penyakit tersebut termasuk penyakit yang terdapat reaksi inflamasi
(Riskesdas, 2018).
Pada penelitian ini, ekstrak yang digunakan adalah ekstrak etanol bunga
telang. Metode ekstraksi yang digunakan adalah maserasi dengan menggunakan
pelarut etanol 70% karena berdasarkan penelitian (Andriani dan Murtisiwi, 2018),
etanol 70% memiliki kemampuan penetrasi yang baik pada sisi hidrofil dan lipofil
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
sehingga dapat menembus membran sel, lalu dapat masuk ke dalam sel dan
berinteraksi dengan metabolit yang terdapat dalam sel. Selain itu, etanol 70% juga
dapat menyari senyawa-senyawa yang diperlukan untuk uji aktivitas bunga telang,
seperti fenolik, flavonoid, alkaloid, terpenoid, dan steroid.
Ekstrak etanol bunga telang dibuat dalam bentuk sediaan topikal karena
pengobatan secara topikal untuk inflamasi merupakan tindakan pertama yang
dapat dilakukan dengan cara mengoleskan sediaan pada daerah yang mengalami
inflamasi secara langsung sehingga mudah untuk diaplikasikan. Penggunaan Obat
Anti Inflamasi Nonsteroid (OAINS) peroral dapat menyebabkan iritasi saluran
cerna sehingga menurut (Soeratri et al., 2014), penggunaan obat secara topikal
merupakan salah satu upaya untuk menghindari terjadinya efek samping tersebut.
Pada penelitian ini, digunakan bagian kulit punggung pada mencit karena aplikasi
sediaan topikal pada bagian tersebut memiliki area permukaan kulit yang luas dan
mudah diamati secara mikroskopik. Penurunan respon inflamasi dapat ditandai
dengan berkurangnya sintesa protein COX-2, berkurangnya biosintesis
prostaglandin, dan penghambatan adhesi neutrofil pada dinding pembuluh darah.
Penghambatan adhesi neutrofil pada dinding pembuluh darah menyebabkan
infiltrasi neutrofil ke dalam jaringan menurun sehingga inflamasi akan berkurang.
Maka dari itu, untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi dapat diketahui melalui
pengurangan migrasi jumlah sel neutrofil dan penurunan ekspresi COX-2 pada
area yang mengalami inflamasi (Kusumastuti et al., 2014).
Berdasarkan uraian di atas, penulis tertarik untuk meneliti aktivitas
sediaan topikal ekstrak etanol bunga telang sebagai antiinflamasi terhadap kulit
punggung mencit yang terinduksi karagenin melalui pengamatan secara kualitatif
gambaran histopatologi kulit punggung mencit terhadap penurunan migrasi
jumlah sel neutrofil dan penurunan ekspresi protein COX-2.
METODE PENELITIAN
Desain dan Subjek Penelitian
Penelitian mengenai ekstrak etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.)
yang diberikan secara topikal sebagai antiinflamasi merupakan jenis penelitian
eksperimental murni dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) pola
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
searah. Subjek uji pada penelitian ini adalah mencit betina galur Swiss dan berusia
2-3 bulan dengan berat badan 20-30 gram yang diperoleh dari Laboratorium
Imono Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Dua puluh lima ekor ubjek uji
dibagi secara acak menjadi lima kelompok, yang mana masing-masing kelompok
terdiri dari lima ekor mencit. Penelitian dilakukan dengan menghitung penurunan
jumlah sel neutrofil dan penekanan ekspresi COX-2 pada kulit punggung mencit
betina yang terinduksi karagenin. Prosedur yang digunakan dalam penelitian ini
telah disetujui oleh Komisi Etik Penelitian Kedokteran dan Kesehatan Fakultas
Kedokteran Universitas Gadjah Mada Yogyakarta dengan nomor
KE/FK/1362/EC/2019. Keaslian penelitian juga telah disetujui oleh Fakultas
Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah alat ekstraksi yang
terdiri dari rotary evaporator vacuum, alat maserasi, corong buchner, kertas
saring, aluminium foil, mortir, stamfer, dan alat – alat gelas (labu ukur, gelas
Beker, erlenmeyer, gelas ukur, cawan porselin, pipet tetes, batang pengaduk dan
gelas arloji). Alat induksi dan pengukuran edema kulit punggung mencit betina
galur Swiss, terdiri dari gunting, alat pencukur rambut mencit, spuit injeksi 1 mL,
neraca analitik, stopwatch, jangka sorong digital, dan mikroskop binokuler. Alat
yang digunakan untuk pemotongan organ kulit punggung mencit betina galur
Swiss terdiri dari kertas karton, container, gunting bedah, dan formalin 10%.
Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah mencit betina
galur Swiss yang berumur sekitar 2-3 bulan dengan bobot sekitar 20-30 gram,
serbuk bunga telang (Clitoria ternatea L.), karagenin, etanol 70%, NaCl 0,9%,
aquadest, Biocream®, Veet®, dan Voltaren®.
Determinasi Tanaman
Serbuk bunga telang (Clitoria ternatea L.) diperoleh dari tempat
budidaya tanaman telang Kranesia, Maguwoharjo, Depok, Sleman, Yogyakarta.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini dilakukan determinasi terlebih dahulu
di Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Determinasi tanaman
bertujuan untuk membuktikan bahwa jenis tanaman yang digunakan dalam
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
penelitian ini sudah sesuai, yaitu jenis tanaman telang (Clitoria ternatea L.).
Berdasarkan hasil determinasi yang telah dilakukan pada lampiran, maka terbukti
bahwa bunga telang yang digunakan dalam penelitian ini adalah berasal dari
tanaman telang (Clitoria ternatea L.).
Ekstraksi
Bahan yang digunakan untuk ekstraksi pada penelitian ini adalah serbuk
bunga telang (Clitoria ternatea L.) yang diperoleh dari tempat budidaya tanaman
telang Kranesia, Maguwoharjo, Depok, Sleman, Yogyakarta. Ekstraksi etanol
bunga telang (Clitoria ternatea L.) dilakukan dengan mengambil 50 g serbuk
kering bunga telang. Kemudian, ditambah dengan 250 mL etanol 70% pada
erlenmeyer, ditutup dengan aluminium foil, dan proses ekstraksi dilakukan
dengan metode maserasi selama 3 hari pada suhu ruang dengan sesekali diaduk,
lalu disaring menggunakan corong buchner untuk mendapatkan filtrat. Setelah itu,
dilakukan remaserasi ampas dari serbuk bunga telang dengan melarutkan kembali
dalam larutan penyari dengan jumlah 125 mL selama tiga hari, lalu disaring untuk
mendapatkan filtrat. Hasil filtrat maserasi dan remaserasi disatukan, lalu dibiarkan
selama satu hari. Selanjutnya, pelarut ekstrak diuapkan menggunakan rotary
evaporator vacuum hingga diperoleh ekstrak kental dengan cara pemekatan
ekstrak (Andriani and Murtisiwi, 2018). Hasil rendemen ekstrak kental diperoleh
menggunakan rumus sebagai berikut :
(Vifta et al., 2017).
Uji Flavonoid
Uji flavonoid dilakukan bertujuan untuk membuktikan bahwa ekstrak
etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) mengandung senyawa flavonoid.
Pengujian dilakukan dengan cara ekstrak sampel ditambahkan dengan beberapa
tetes asam klorida (HCl) pekat dan ditambahkan dengan serbuk Magnesium (Mg).
Apabila menunjukkan warna kemerahan hingga merah muda, maka ekstrak etanol
bunga telang yang diuji tersebut positif mengandung flavonoid (Samatha et al.,
2012).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
Uji Antosianin
Uji antosianin bertujuan untuk membuktikan bahwa di dalam ekstrak
etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) mengandung senyawa antosianin.
Pengujian dilakukan dengan cara 2 mL sampel ditambahkan dengan 2 mL HCl 2N
dan ditambahkan amonia (NH3). Apabila warna merah muda atau merah berubah
menjadi biru keunguan, maka menunjukkan adanya antosianin pada ekstrak etanol
bunga telang (Obouayeba et al., 2015).
Uji Kadar Air
Uji kadar air bertujuan untuk mengetahui kadar air dalam serbuk bunga
telang (Clitoria ternatea L.) sehingga kualitas serbuk tetap dalam keadaan baik.
Uji kadar air dilakukan dengan menggunakan metode destilasi. Pereaksi yang
digunakan adalah 200 mL toluen jenuh air yang dikocok dengan 20 mL air,
kemudian dibiarkan memisah dan lapisan air dibuang. Timbang saksama 10 g
serbuk sampel, lalu dimasukkan ke dalam labu kering. Masukkan lebih kurang
200 mL toluen jenuh air ke dalam labu, lalu pasang rangkaian alat. Kemudian,
labu dipanaskan sampai semua air tersuling. Baca volume air setelah air dan
toluen memisah sempurna. Kadar air dihitung dalam % v/b (FHI, 2008).
Pembuatan Larutan Karagenin dan Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang
(Clitoria ternatea L.)
Karagenin 4,5% dibuat dengan melarutkan 1,125 g karagenin dalam 25
mL larutan NaCl 0,9% sehingga diperoleh larutan karagenin 4,5% b/v.
Konsentrasi sediaan krim ekstrak etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) dibuat
dalam tiga konsentrasi, yaitu 0,5% ; 1% ; dan 1,5%. Pembuatan krim ekstrak
etanol bunga telang dilakukan dengan cara menimbang ekstrak etanol bunga
telang sebanyak 0,025 g ; 0,05 g ; dan 0,075 g yang ditambahkan dalam 5 g basis
Biocream®, lalu diaduk hingga terbentuk sediaan krim.
Uji Organoleptis dan Homogenitas Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang
(Clitoria ternatea L.)
Sediaan krim ekstrak etanol bunga telang dievaluasi dengan pengujian
organoleptis dan pengujian homogenitas. Pada uji organoleptis, pengataman
dilakukan secara visual dengan mengamati bau, warna, bentuk, dan tekstur dari
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
sediaan krim. Kemudian, pada uji homogenitas dilakukan dengan cara sediaan
krim ekstrak etanol bunga telang diambil sebanyak 1 g dan dioleskan pada kaca
objek. Lalu, diamati apakah terjadi pemisahan fase atau tidak pada sediaan krim
(Depkes RI, 1979).
Uji Pendahuluan Karagenin
Uji pendahuluan bertujuan untuk menetapkan konsentrasi karagenin
optimal yang akan digunakan sebagai penginduksi inflamasi pada daerah kulit
punggung mencit secara subkutan. Uji pendahuluan menggunakan enam ekor
mencit yang masing-masing dibagi secara acak menjadi tiga kelompok
konsentrasi. Konsentrasi yang digunakan dalam uji pendahuluan ini adalah 1,5% ;
3% ; dan 4,5% yang dilakukan dengan menginjeksikan karagenin sebanyak 0,1
mL pada kulit punggung mencit secara subkutan yang telah dicukur bulunya.
Kelompok karagenin yang dipilih berdasarkan edema yang muncul menunjukkan
penebalan kulit 2-3 kali lipat dari tebal kulit awal.
Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria ternatea L.)
Hewan uji yang dibutuhkan sebanyak 25 ekor mencit betina galur Swiss
dan dibagi secara acak menjadi lima kelompok perlakuan. Sebelum pengujian,
hewan uji dicukur rambutnya pada punggungnya terlebih dahulu menggunakan
gunting, kemudian dioleskan Veet® untuk merontokkan rambut yang belum
tercukur sempurna. Kulit punggung yang telah dicukur rambutnya dibiarkan
selama dua hari untuk menghindari adanya inflamasi yang disebabkan oleh
pencukuran dan pemberian Veet®. Kelompok 1 terdiri dari lima ekor mencit
sebagai kontrol negatif dengan diinduksi karagenin secara subkutan pada daerah
kulit punggung mencit. Kelompok 2 terdiri dari lima ekor mencit sebagai kontrol
positif dengan diinduksi karagenin secara subkutan dan diolesi Voltaren® pada
daerah kulit punggung mencit. Kelompok 3, 4, dan 5 yang masing-masing
kelompok terdiri dari lima ekor mencit sebagai kontrol perlakuan dengan
perbedaan konsentrasi pada ketiga kelompok, yaitu 0,5% ; 1% ; dan 1,5% b/b.
Ekstrak sebanyak 0,025 g ; 0,05 g ; dan 0,075 g, masing-masing dicampur dengan
basis krim Biocream® sebanyak 5 g sehingga diperoleh konsentrasi 0,5% ; 1% ;
dan 1,5% b/b. Biocream® dan masing-masing konsentrasi ekstrak dalam basis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
krim diambil sebanyak 0,1 g, kemudian dioleskan pada daerah kulit punggung
mencit disekitar suntikan seluas 1 x 1 cm (PDR, 2020).
Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria
ternatea L.) terhadap Jumlah Sel Neutrofil dan Ekspresi COX-2
Pengujian dilakukan setelah enam jam diinduksi karagenin, mencit
dikorbankan dengan cara dislokasi tulang leher mencit dan dilakukan
pengambilan kulit punggung mencit dengan cara dibedah. Area pengambilan kulit
di sekitar daerah injeksi subkutan dengan ukuran 1 x 1 cm. Hasil pemotongan
organ diletakkan pada karton tebal dan dimasukkan ke dalam container yang telah
diberi formalin 10% hingga organ kulit terendam sempurna. Kemudian, dilakukan
pengecatan Hematoksilin Eosin (HE) sesuai prosedur dari Laboratorium Patologi
Anatomi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada Yogyakarta dan
pengecatan immunohistokimia (IHC) dengan Rabbit Polyclonal antibodi anti-
COX-2 sesuai prosedur dari RSUP Dr. Sardjito Yogyakarta. Selanjutnya, analisis
data dilakukan dengan menghitung jumlah sel neutrofil menggunakan perhitungan
langsung (direct counting) dan sel yang mengekspresikan COX-2 pada daerah
subkutan jaringan kulit punggung mencit betina galur Swiss pada tiga sudut
pandang yang berbeda di bawah mikroskop binokuler (Olympus CX21) dengan
perbesaran 400 kali. Jumlah sel neutrofil tersebut dihitung pada tiga sudut
pandang, kemudian dilakukan perhitungan rata-rata untuk menentukan total
jumlah sel neutrofil pada tiga sudut pandang tersebut. Pada hasil positif ekspresi
COX-2 ditandai dengan warna coklat atau gelap dalam sitoplasma. Sedangkan,
yang tidak menunjukkan adanya ekspresi COX-2 akan memberikan warna ungu
atau biru. Analisis secara kuantitatif persentase ekspresi COX-2 menggunakan
persamaan sebagai berikut :
(Ikawati et al., 2014).
Analisis Statistik
Seluruh analisis data statistik dilakukan di Pusat Kajian CE & BU dengan
menggunakan program IBM SPSS 22 Lisensi Universitas Gadjah Mada
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
Yogyakarta dengan taraf kepercayaan 95%. Data yang diperoleh terlebih dahulu
dianalisis secara statistik dengan Uji Shapiro Wilk untuk melihat kenormalan
distribusi data dan dilanjutkan Levene Test untuk melihat homogenitas variasi
data. Data yang terdistribusi normal (p>0,05), dilanjutkan dengan uji One Way
ANOVA dengan taraf kepercayaan 95% karena data tidak berpasangan dan lebih
dari dua kelompok. Apabila variasi data homogen, maka analisis dilanjutkan
dengan Post Hoc Test dengan Scheffe Test untuk melihat perbedaan bermakna
atau tidak antar tiap kelompok perlakuan. Apabila variasi data tidak homogen,
maka analisis dilanjutkan dengan Uji Tamhane. Apabila syarat Uji One Way
ANOVA tidak dapat terpenuhi, maka digunakan uji alternatif non-parametrik
Kruskal Wallis dengan taraf kepercayaan 95%. Apabila Uji Kruskal Wallis
menunjukkan perbedaan signifikan (p<0,05), maka dilanjutkan dengan Post Hoc
Test menggunakan Uji Mann Whitney untuk mengetahui perbedaan tiap kelompok
perlakuan (Djunarko et al., 2016).
HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji Kadar Air
Pengujian kadar air dilakukan dengan metode destilasi sesuai dengan
metode uji kadar air pada Farmakope Herbal Indonesia. Hasil uji kadar air pada
serbuk simplisia bunga telang adalah sebesar 6%. Berdasarkan hasil kadar air
tersebut, menunjukkan bahwa serbuk simplisia bunga telang termasuk dalam
standar serbuk yang baik karena standar kadar air pada serbuk yang baik adalah
≤10% (Kemenkes RI, 2014). Penentuan kadar air yang sesuai dengan standar yang
ditetapkan (≤10%), hal tersebut berkaitan dengan kemurnian dan adanya
kontaminan dalam serbuk simplisia tersebut. Jumlah kadar air berlebih dalam
serbuk simplisia mempengaruhi masa penyimpanan dari serbuk dan
mempengaruhi percepatan pertumbuhan mikroba sehingga mempengaruhi mutu
dari serbuk simplisia. Dalam penelitian ini, metode destilasi efektif untuk
melakukan penetapan kadar air karena terjadinya penyulingan berulang kali di
dalam labu dan menggunakan pendingin balik (condensor) yang berfungsi untuk
mencegah adanya penguapan berlebih (Handayani et al., 2017).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
Ekstraksi
Ekstrak etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) diperoleh dari proses
penyarian dengan metode maserasi menggunakan serbuk simplisia bunga telang
(Clitoria ternatea L.). Hasil ekstrak etanol kental yang diperoleh pada metode
maserasi kali ini adalah sebesar 21,0544 g dengan rendemen ekstrak sebesar
42,1088% dan berwarna ungu pekat. Besarnya nilai rendemen merupakan
parameter yang menentukan keefektifan dari suatu proses ekstraksi yang mana
dapat menggambarkan jumlah penarikan senyawa aktif pada proses ekstraksi.
Pada penelitian kali ini, rendemen ekstrak yang dihasilkan dapat
dipengaruhi oleh pelarut yang digunakan, yaitu etanol 70%. Etanol 70% memiliki
sifat kepolaran yang sama dengan senyawa yang terdapat dalam bunga telang dan
juga dapat melarutkan senyawa fitokimia lebih maksimal karena etanol 70%
mengandung air yang cukup banyak (30%) yang dapat membantu proses ekstraksi
sehingga senyawa yang terdapat dalam bunga telang dapat tertarik keluar dalam
etanol. Asam amino, gula, dan beberapa senyawa fitokimia lainnya seperti
flavonoid dan alkaloid dapat terlarut dalam pelarut polar sehingga senyawa yang
terekstrak dalam etanol 70% cukup banyak dan menghasilkan rendemen yang
cukup tinggi (Sani et al., 2014).
Uji Flavonoid
Uji flavonoid dilakukan untuk membuktikan adanya kandungan senyawa
flavonoid dalam ekstrak etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) yang dilakukan
dengan cara menambahkan beberapa tetes HCl pekat dan ditambahkan dengan
serbuk Mg. Hasil uji menunjukkan bahwa ekstrak etanol bunga telang positif
mengandung flavonoid yang dapat ditunjukkan dari warna merah yang dihasilkan
setelah ditetesi dengan reagen HCl dan serbuk Mg.
Senyawa flavonoid yang terdapat pada tanaman telang berikatan dengan
suatu gugus gula yang membentuk senyawa glikosida flavonoid. Adapun
pengertian glikosida merupakan senyawa yang terdiri dari senyawa gula (glikon),
sedangkan senyawa bukan gula disebut aglikon. Agar flavonoid bisa diidentifikasi
pada ekstrak sampel, maka ikatan glikosida dengan flavonoid harus diputus
dengan cara mereduksi ikatan tersebut (Riyani and Adawiah, 2015). Berikut
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
merupakan reaksi yang terjadi ketika penambahan HCl dan Mg pada ekstrak
sampel.
Gambar 1. Reaksi Flavonoid dengan HCl dan Logam Magnesium
(Nugrahani et al., 2016).
Pada uji flavonoid ini, dilakukan penambahan logam Mg dan HCl pada
ekstrak etanol bunga telang yang bertujuan untuk mereduksi inti benzopiron yang
terdapat dalam struktur flavonoid sehingga terbentuk garam flavilium berwarna
merah atau jingga (Ergina et al., 2014). Senyawa flavonoid merupakan reaksi
oksidasi, yang mana senyawa flavonoid akan dioksidasi oleh Mg2+
dengan
membentuk kompleks dengan ion magnesium. Polihidroksi dari flavonon akan
direduksi oleh logam magnesium dalam asam klorida dalam larutan etanol
sehingga membentuk garam benzopirilium yang berwarna merah, kuning, atau
disebut dengan garam flavilium (Setiabudi and Tukiran, 2017). Penambahan
reagen HCl pada ekstrak etanol bunga telang yang bertujuan untuk menghidrolisis
flavonoid menjadi aglikonnya, yaitu menjadi O-glikosil. Gugus glikosil akan
tergantikan oleh H+ dari asam kloridanya karena bersifat elektrofilik. Reduksi HCl
ini menghasilkan senyawa kompleks yang berwarna merah pada flavonol,
flavanon, flavanolol, dan xanton (Riyani and Adawiah, 2015). Perubahan warna
menjadi merah tersebut dapat diberikan oleh senyawa flavon yang terkandung
pada ekstrak etanol bunga telang (Mariana et al., 2014).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
Uji Antosianin
Uji antosianin dilakukan untuk membuktikan adanya kandungan senyawa
antosianin dalam ekstrak etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.). Pengujian
dilakukan dengan menambahkan 2 mL HCL 2N dan menambahkan NH3 pada 2
mL ekstrak kental bunga telang. Hasil uji menunjukkan bahwa ekstrak etanol
bunga telang positif mengandung antosianin karena terjadi perubahan warna
ekstrak kental dari warna merah setelah ditambahkan HCl yang berubah menjadi
biru keunguan setelah ditambahkan dengan NH3. Hasil tersebut menunjukkan
bahwa ekstrak etanol bunga telang positif mengandung antosianin.
Hasil positif yang ditunjukan setelah dilakukan pengujian tabung pada
ekstrak etanol bunga telang dapat disebabkan oleh adanya pengaruh pH. Pada pH
asam, antosianin akan berada pada bentuk ion flavilium yang berwarna merah dan
berubah menjadi warna biru kehijauan pada keadaan basa. Warna biru kehijauan
dapat disebabkan karena antosianin banyak berada dalam bentuk ion anhidro basa
(Maulida and Guntarti, 2015). Perubahan warna yang terjadi disebabkan karena
antosianin berada dalam empat bentuk kesetimbangan tergantung pada kondisi
pH. Keempat bentuk tersebut adalah kation flavilium, basa karbinol, kalkon, dan
basa quinoidal. Saat pH dinaikkan (>5), akan mempercepat kehilangan proton
sehingga membentuk basa quinoidal yang cenderung menjadi biru atau ungu.
Selain itu, kenaikan pH menyebabkan hidrasi kation flavilium untuk membentuk
karbinol atau kalkon yang tidak berwarna (Neliyanti and Idiawati, 2014). Pada pH
sangat asam (pH 1-2), bentuk dominan dari antosianin adalah kation flavilium.
Flavilium dalam kondisi asam berwarna merah. Pada kondisi ini, antosianin
berada dalam kondisi paling stabil dan paling berwarna. Ketika pH meningkat
diatas 4, terbentuk senyawa antosianin berwarna kuning yaitu dalam bentuk
kalkon. Apabila senyawa berwarna biru, maka termasuk dalam bentuk quinoid.
Kemudian, senyawa yang tidak berwarna termasuk dalam basa karbinol
(Virliantari et al., 2018).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
Gambar 2. Kesetimbangan Antosianin dalam Larutan (Neliyanti and Idiawati, 2014).
Secara kimia, semua antosianin merupakan turunan suatu struktur
aromatik tunggal, yaitu sianidin. Antosianidin adalah aglikon antosianin yang
terbentuk apabila antosianidin dihidrolisis dengan asam. Perbedaan warna alami
pigmen ini dipengaruhi oleh hidroksilasi dan metilasi. Hidroksilasi meningkatkan
warna biru, sedangkan metilasi meningkatkan warna merah (Solihin et al., 2013).
Selain faktor pH, adanya campuran dengan senyawa lain, jumlah gugus
hidroksi dan metoksi juga dapat mempengaruhi warna dari antosianin. Jumlah
gugus hidroksi yang dominan dapat menyebabkan warna cenderung biru,
sedangkan jumlah gugus metoksi yang dominan dibandingkan gugus hidroksi
pada struktur antosianin dapat menyebabkan warna cenderung merah (Supiyanti
et al., 2010).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
Uji Organoleptis dan Homogenitas Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang
(Clitoria ternatea L.)
Berikut merupakan hasil pengujian organoleptis dan homogenitas pada
sediaan krim ekstrak etanol bunga telang.
Tabel 1. Hasil Pengujian Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang dengan Basis Biocream®.
No. Uji Evaluasi Hasil Pengujian Krim
EEBT 0,5% EEBT 1% EEBT 1,5%
1 Uji
Organoleptis
Warna ungu
terang, bau khas
bunga telang,
konsistensi/tekstur
krim lembut.
Warna ungu agak
pekat, bau khas
bunga telang,
konsistensi/tekstur
krim lembut.
Warna ungu
pekat, bau khas
bunga telang,
konsistensi/tekstur
krim lembut.
2 Uji
Homogenitas
Terdispersi
merata dan tidak
terdapat butiran-
butiran partikel.
Terdispersi
merata dan tidak
terdapat butiran-
butiran partikel.
Terdispersi
merata dan tidak
terdapat butiran-
butiran partikel.
Uji Pendahuluan Karagenin
Pada uji pendahuluan karagenin, hasil pengukuran tebal lipat kulit mencit
yang sudah diinduksi karagenin menunjukkan adanya edema pada setiap jamnya
selama enam jam. Setelah dilakukan pengamatan selama enam jam, konsentrasi
optimal karagenin yang digunakan sebagai penginduksi inflamasi adalah
karagenin dengan konsentrasi 4,5%. Pada penelitian ini, digunakan karagenin
sebagai penginduksi inflamasi karena memiliki beberapa keuntungan, yaitu tidak
meninggalkan bekas, tidak menimbulkan kerusakan jaringan, dan memberikan
respon yang lebih peka terhadap obat antiinflamasi dibandingkan dengan senyawa
iritan lainnya (Nur et al., 2018). Perkembangan edema setelah diinjeksi karagenin,
berbagai mediator inflamasi beroperasi secara berurutan untuk menghasilkan
respon inflamasi. Ada beberapa mediator yang terlibat dalam peradangan, yaitu
histamin, serotonin, dan bradikinin yang merupakan mediator pertama yang
terdeteksi pada fase awal karagenin diinduksi (90 menit pertama) (Necas dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
Bartosikova, 2013). Fase kedua terjadi pelepasan bradikinin pada 1,5 - 2,5 jam
setelah induksi. Pada fase ketiga, terjadi pelepasan prostaglandin pada 3 jam
setelah induksi (Sukmawati et al., 2015). Eksudasi cairan (keluarnya cairan
beserta sel radang neutrofil melalui membran luka) termasuk semua protein
plasma (albumin, globulin, dan fibrinogen) akan keluar ke pembuluh darah.
Banyaknya produk radang di sekitar jaringan ditandai dengan jumlah sel neutrofil
yang meningkat sehingga menimbulkan gejala pembengkakan atau edema
(Agustin et al., 2016).
Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria
ternatea L.) terhadap Jumlah Sel Neutrofil
Pada penelitian kali ini, pengujian efek antiinflamasi ekstrak etanol
bunga telang (Clitoria ternatea L.) bertujuan untuk mengetahui efek antiinflamasi
topikal ekstrak etanol bunga telang dan untuk menentukan konsentrasi optimum
ekstrak etanol bunga telang sebagai antiinflamasi yang dapat dilihat dari hasil
pengukuran penurunan jumlah sel neutrofil dan penekanan ekspresi COX-2.
Neutrofil merupakan leukosit yang paling banyak dalam sirkulasi dan dianggap
sebagai garis pertahanan pertama dalam sistem kekebalan tubuh, serta dapat
digunakan sebagai parameter terjadinya inflamasi karena neutrofil berperan
sebagai mediator peradangan (Rosales, 2018). Penghambatan adhesi neutrofil
pada dinding pembuluh darah menyebabkan infiltrasi neutrofil ke dalam jaringan
menurun sehingga inflamasi akan berkurang (Kusumastuti et al., 2014).
Peningkatan pelepasan neutrofil dari sumsum tulang menuju daerah atau lokasi
yang mengalami inflamasi selama 5 jam pertama sehingga akan dijumpai
peningkatan neutrofil dalam darah tepi (Prihandari and Muniroh, 2016).
Metode pengujian yang dilakukan untuk melihat jumlah sel neutrofil
adalah menggunakan pewarnaan HE. Pewarnaan HE tersebut bertujuan untuk
mewarnai jaringan kulit punggung mencit yang telah diambil untuk membedakan
komponen-komponen yang ada di dalam jaringan, memperlihatkan struktur, dan
morfologi jaringan pada uji histopatologi. Pewarnaan HE ini didasarkan pada
prinsip sederhana, yaitu sifat asam basa dari larutan yang akan berikatan dengan
komponen jaringan yang mempunyai kecenderungan terhadap sifat asam ataupun
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
basa pada sel sehingga terjadi ikatan antara molekul zat warna dengan komponen
jaringan. Senyawa hematoksilin yang digunakan disebut sebagai hematin (bentuk
oksidasinya) dan mengalami proses oksidasi yang disebut sebagai ripening.
Hematin akan mengikat molekul yang bermuatan negatif, yaitu material kromatis
dalam inti sel yang bermuatan negatif. Kromatin pada inti sel mempunyai sifat
asam dan akan menarik zat warna hematoksilin yang bersifat basa. Sedangkan,
pewarnaan eosin yang bersifat asam akan mengikat molekul protein yang
bermuatan positif di sitoplasma dan jaringan ikat. Eosin dapat mewarnai
sitoplasma dan jaringan ikat menjadi warna merah dan oranye, serta dapat
mewarnai inti sel yang telah terwarnai hematoksilin dari biru menjadi berwarna
ungu (Khristian and Inderiati, 2017). Perhitungan sel neutrofil menggunakan
perhitungan langsung (direct counting) dengan mikroskop binokuler untuk setiap
tiga bidang pandang berbeda dengan perbesaran 400 kali.
Pengujian sediaan topikal krim ekstrak etanol bunga telang menggunakan
tiga seri konsentrasi, yaitu konsentrasi 0,5% ; 1% ; dan 1,5% dengan tujuan untuk
mengetahui konsentrasi optimum dari sediaan topikal ekstrak etanol bunga telang
sebagai antiinflamasi dan juga untuk mengetahui apakah dari ketiga konsentrasi
tersebut memiliki efek antiinflamasi yang berbeda secara signifikan atau tidak.
Hasil dari kontrol perlakuan dengan perbedaan tiga konsentrasi tersebut akan
dibandingkan khasiat antiinflamasinya dengan hasil dari kelompok lainnya
sebagai antiinflamasi topikal.
Setelah pengamatan selama enam jam, dilakukan eutanasia pada mencit
dengan cara dislokasi tulang leher yang kemudian diambil kulit punggung mencit
dan diletakkan dalam container yang telah berisi formalin 10%. Pada pengujian
histopatologi, pembedahan kulit punggung mencit dilakukan setelah enam jam
pengamatan karena pembentukan radang oleh karagenin dapat bertahan selama
360 menit dan berangsur-angsur berkurang selama satu hari. Pembentukan radang
oleh karagenin menghasilkan peradangan akut dan tidak menyebabkan kerusakan
pada jaringan (Sukmawati et al., 2015). Profil pengecatan Hematoksilin dan Eosin
(HE) pada kulit normal mencit dapat dilihat pada gambar 3 berikut.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
Gambar 3. Mikrofotografi Pengecatan HE Kulit Normal Mencit (Groves et al., 1995).
Kulit terdiri atas dua lapisan utama, yaitu epidermis dan dermis. Epidermis
merupakan jaringan epitel yang berasal dari ektoderm, sedangkan dermis berupa
jaringan ikat agak padat yang berasal dari mesoderm. Di bawah dermis terdapat
selapis jaringan ikat longgar yaitu hipodermis, yang pada beberapa tempat
terutama terdiri dari jaringan lemak. Epidermis merupakan lapisan paling luar
kulit yang terdiri dari jaringan epitel dan tidak mempunyai pembuluh darah
maupun limfa. Lapisan selanjutnya adalah dermis terdiri atas stratum papilaris dan
stratum retikularis, batas antara kedua lapisan tidak tegas, serat antaranya saling
menjalin. Sel-sel dermis merupakan sel-sel jaringan ikat seperti fibroblas, sel
lemak, sedikit makrofag, dan sel mast. Kemudian, hipodermis merupakan sebuah
lapisan subkutan dibawah retikularis dermis. Hipodermis berupa jaringan ikat
lebih longgar dengan serat kolagen halus terorientasi terutama sejajar terhadap
permukaan kulit, dengan beberapa di antaranya menyatu dengan yang dari dermis
(Kalangi, 2013). Profil pengecatan Hematoksilin dan Eosin (HE) pada kelompok
kontrol dan kelompok perlakuan dapat dilihat pada gambar 4 berikut.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
Kontrol Negatif Karagenin 4,5% Kontrol Positif Voltaren 1%
Ekstrak Etanol
Bunga Telang 0,5%
Ekstrak Etanol
Bunga Telang 1%
Ekstrak Etanol Bunga Telang 1,5%
Gambar 4. Mikrofotografi Pengecatan HE Kontrol Negatif Karagenin 4,5%, Kontrol Positif
Voltaren 1%, serta Perlakuan Ekstrak Etanol Bunga Telang 0,5% ; 1% ; dan 1,5% dengan
Perbesaran 400 kali. Migrasi Sel Neutrofil Terlihat Pada Daerah Subkutan Jaringan Kulit
Punggung Mencit dan Ditandai dengan Lingkaran Kuning.
*Keterangan :
1. Kulit Kontrol Negatif Karagenin (KNK) 4,5% dengan perbesaran 400 kali.
2. Kulit Kontrol Positif Voltaren (KPV) 1% dengan perbesaran 400 kali.
3. Kulit Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 0,5% dengan perbesaran 400 kali.
4. Kulit Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1% dengan perbesaran 400 kali.
5. Kulit Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1,5% dengan perbesaram 400 kali.
1 2
3
5
4
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
Tabel 2. Hasil Uji Tamhane Jumlah Sel Neutrofil Pada Mencit Setelah Pemberian Ekstrak
Etanol Bunga Telang secara Topikal.
Rerata Sel Neutrofil
± SE I II III IV V
I 28.0000 ± 2.36112 BB BTB BB BB
II 9.4680 ± 0.74164 BB BB BTB BTB
III 24.6680 ± 1.74563 BTB BB BB BB
IV 15.1360 ± 1.28497 BB BTB BB BTB
V 9.6000 ± 1.00294 BB BTB BB BTB
*Keterangan :
I = Kontrol Negatif Karagenin (KNK) 4,5%.
II = Kontrol Positif Voltaren® (KPV) 1%.
III = Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 0,5%.
IV = Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1%.
V = Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1,5%.
BB = Berbeda Bermakna (p<0,05).
BTB = Berbeda Tidak Bermakna (p>0,05).
SE = Standart Error.
Berdasarkan hasil analisis statistik dari Uji Shapiro-Wilk, menunjukkan
bahwa data yang digunakan terdistribusi normal (p>0,05) sehingga dilanjutkan
dengan Levene Test. Variasi data yang dihasilkan tidak homogen dengan nilai p =
0,041 (p<0,05) sehingga analisis statistik dilanjutkan dengan Uji One Way
ANOVA dengan Post Hoc Test, yaitu Uji Tamhane.
Pada kontrol negatif karagenin (KNK) 4,5% menunjukkan hasil rerata
yang paling besar diantara kelompok lainnya, yaitu 28.0000 ± 2.36112.
Kemudian, kelompok perlakuan EEBT 0,5% menunjukkan rerata jumlah sel
neutrofil yang cukup besar juga diantara kelompok lainnya, yaitu 24.6680 ±
1.74563. Analisis statistik menunjukkan bahwa KNK 4,5% berbeda bermakna
(p<0,05) dengan kontrol positif voltaren (KPV) 1%, EEBT 1%, dan EEBT 1,5%.
Serta, berbeda tidak bermakna (p>0,05) dengan EEBT 0,5%. Hasil tersebut
menunjukkan bahwa KNK 4,5% dapat menginduksi inflamasi yang ditandai
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
dengan adanya peningkatan jumlah neutrofil pada kulit punggung mencit yang
diberikan secara subkutan. Serta, menunjukkan hasil bahwa EEBT 0,5% tidak
dapat memberikan efek sebagai antiinflamasi karena hasilnya berbeda bermakna
(p<0,05) dibandingkan dengan KPV 1%, EEBT 1%, dan EEBT 1,5%
Pada kelompok KPV 1% berbeda bermakna (p<0,05) dengan KNK 4,5%
dan EEBT 0,5%, sedangkan berbeda tidak bermakna (p>0,05) dengan EEBT 1%
dan EEBT 1,5%. Rerata yang dihasilkan pada KPV 1% sebesar 9.4680 ± 0.74164,
yang berarti bahwa adanya pengurangan jumlah sel neutrofil yang cukup besar
dan hasil tersebut menunjukkan bahwa KPV 1% dapat memberikan efek sebagai
antiinflamasi.
Berdasarkan rerata dari EEBT 1%, yaitu 15.1360 ± 1.28497 berbeda tidak
bermakna (p>0,05) dengan KPV 1% dan EEBT 1,5%, serta berbeda bermakna
(p<0,05) dengan KNK 4,5% dan EEBT 0,5%. Kemudian, EEBT 1,5% memiliki
rerata 9.6000 ± 1.00294 yang berbeda tidak bermakna (p>0,05) dengan KPV 1%
dan EEBT 1%, sedangkan berbeda bermakna (p<0,05) dengan KNK 4,5% dan
EEBT 0,5%. Hasil tersebut menunjukkan bahwa EEBT 1% dan EEBT 1,5%
memiliki efek sebagai antiinflamasi yang hampir sama dengan KPV 1%, yaitu
dapat menunjukkan adanya penurunan jumlah sel neutrofil yang bermigrasi pada
daerah subkutan, walaupun aktivitas antiinflamasinya tidak tinggi jika
dibandingkan dengan kontrol positif voltaren.
Berdasarkan hasil analisis statistik tersebut, dipilih EEBT konsentrasi
1,5% sebagai konsentrasi optimum karena memiliki hasil yang paling baik
dibandingkan dengan konsentrasi EEBT yang lainnya. Efek antiinflamasinya
dilihat dari efektivitasnya sebagai antiinflamasi yang dilihat dari penurunan rerata
jumlah sel neutrofil pada kulit punggung mencit yang memiliki hasil berbeda
bermakna setelah dibandingkan dengan kelompok KNK 4,5%. Profil rerata
jumlah sel neutrofil pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan dapat dilihat
pada gambar 5.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
Gambar 5. Rerata Jumlah Sel Neutrofil Pada Mencit Setelah Pemberian Ekstrak Etanol
Bunga Telang secara Topikal.
*Keterangan :
= Kontrol Negatif Karagenin (KNK) 4,5%.
= Kontrol Positif Voltaren (KPV) 1%.
= Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 0,5%.
= Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1%.
= Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1,5%.
Berdasarkan diagram tersebut, dapat dinyatakan bahwa KNK 4,5%
memiliki rerata jumlah sel neutrofil yang paling besar pada daerah kulit punggung
mencit dibandingkan dengan kelompok lainnya. Hal tersebut menunjukkan bahwa
karagenin dapat digunakan sebagai penginduksi inflamasi yang dapat dilihat dari
peningkatan jumlah sel neutrofil pada daerah punggung mencit. Kemudian, EEBT
0,5% juga memiliki rerata jumlah sel neutrofil yang cukup besar setalah KNK
4,5%, yang menunjukkan bahwa EEBT 0,5% tidak dapat memberikan efek
sebagai antiinflamasi seperti kelompok KPV 1%, EEBT 1%, dan EEBT 1,5%.
Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria
ternatea L.) terhadap Ekspresi COX-2
Enzim COX-2 merupakan enzim yang terinduksi pada sel yang
mengalami inflamasi. Pengujian imunohistokimia dengan antibodi anti-COX-2
bertujuan untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi ekstrak etanol bunga telang
(Clitoria ternatea L.) dengan melihat ekspreksi COX-2 menggunakan mikroskop
binokuler pada setiap tiga sudut pandang dengan perbesaran 400 kali. Pengecatan
0
5
10
15
20
25
30
35
Kelompok
Rer
ata
Jum
lah
Sel
Neu
tro
fil
KNK 4,5%
KPV 1%
EEBT 0,5%
EEBT 1%
EEBT 1,5%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
imunohistokimia dilakukan menggunakan antibodi anti-COX-2 terhadap sel kulit
punggung mencit yang dianalisis secara kuantitatif. Imunohistokimia adalah suatu
metode untuk mendeteksi keberadaan molekul atau berbagai macam komponen
yang terdapat di dalam sel atau jaringan dengan menggunakan prinsip reaksi
antara antigen dengan antibodi (Unitly and Sahertian, 2010). Ekspresi COX-2
diamati menggunakan mikroskop binokuler yang mana akan dihasilkan warna
coklat/gelap pada sel yang mengekspresikan protein COX-2, sedangkan yang
tidak akan memberikan warna ungu/biru (Ikawati et al., 2014).
Pengujian penekanan ekspresi COX-2 dengan metode inumohistokimia
dilakukan dengan analisis kuantitatif untuk mengetahui persentase penekanan
ekspresi COX-2 oleh ekstrak etanol bunga telang. Persentase penekanan ekspresi
COX-2 dilakukan dengan menghitung persentase ekspresi COX-2 terlebih dahulu.
Profil pengecatan immunohistokimia pada kulit normal mencit, kelompok kontrol,
kelompok perlakuan, beserta rerata persentase ekspresi COX-2 pada kulit
punggung mencit yang terinduksi karagenin dapat dilihat pada gambar dan tabel
berikut.
Gambar 6. Mikrofotografi Pengecatan Immunohistokimia Kulit Normal Mencit (Futagami
et al., 2002).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
Kontrol Negatif Karagenin 4,5% Kontrol Positif Voltaren 1%
Ekstrak Etanol
Bunga Telang 0,5%
Ekstrak Etanol
Bunga Telang 1%
Ekstrak Etanol Bunga Telang 1,5%
Gambar 7. Mikrofotografi Pengecatan Immunohistokimia dengan Antibodi Anti-COX-2
Pada Kontrol Negatif Karagenin 4,5%, Kontrol Positif Voltaren 1%, serta Perlakuan
Ekstrak Etanol Bunga Telang 0,5% ; 1% ; dan 1,5% dengan Perbesaran 400 Kali. Tanda
Lingkaran Hijau Menunjukkan Hasil Positif Ekspresi COX-2 dan Tanda Lingkaran Merah
Menunjukkan Hasil Negatif Ekspresi COX-2.
*Keterangan :
1. Kulit Kontrol Negatif Karagenin (KNK) 4,5% dengan perbesaran 400 kali.
2. Kulit Kontrol Positif Voltaren (KPV) 1% dengan perbesaran 400 kali.
3. Kulit Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 0,5% dengan perbesaran 400 kali.
4. Kulit Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1% dengan perbesaran 400 kali.
5. Kulit Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1,5% dengan perbesaram 400 kali.
3
5
4
1 2
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
Tabel 3. Rerata Persentase (%) Ekspresi COX-2 dan Hasil Uji Tamhane Pada Kelompok
Kontrol Beserta Kelompok Perlakuan Pada Mencit Setelah Pemberian Ekstrak Etanol
Bunga Telang Secara Topikal.
Rerata % Ekspresi
COX-2 ± SE I II III IV V
I 91.9400 ± 1.95870 BB BTB BB BB
II 41.3540 ± 1.82401 BB BB BTB BTB
III 90.9040 ± 0.45578 BTB BB BB BB
IV 47.7100 ± 2.65788 BB BTB BB BTB
V 42.4400 ± 3.73750 BB BTB BB BTB
*Keterangan :
I = Kontrol Negatif Karagenin (KNK) 4,5%.
II = Kontrol Positif Voltaren® (KPV) 1%.
III = Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 0,5%.
IV = Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1%.
V = Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1,5%.
BB = Berbeda Bermakna (p<0,05).
BTB = Berbeda Tidak Bermakna (p>0,05).
SE = Standart Error.
Berdasarkan hasil analisis statistik, setelah dilakukan Uji Shapiro Wilk
diperoleh hasil bahwa data terdistribusi normal (p>0,05) sehingga dilanjutkan
dengan Levene Test. Hasil analisis yang diperoleh adalah variasi data tidak
homogen dengan nilai p = 0,001 (p<0,05). Oleh karena itu, analisis statistik
dilanjutkan dengan Uji One Way ANOVA dengan Uji Post Hoc Test, yaitu Uji
Tamhane.
Pada kelompok KNK 4,5% memiliki nilai rerata persentase (%) ekspresi
COX-2 sebesar 91.9400 ± 1.95870. Hasil rerata tersebut menunjukkan bahwa
persentase ekspresi COX-2 yang cukup besar setelah dilakukan perhitungan
menggunakan rumus. Rerata ekspresi COX-2 pada KNK 4,5% memiliki hasil
yang hampir sama dengan kelompok EEBT 0,5%, yaitu 90.9040 ± 0.45578.
Berdasarkan hasil Uji Tamhane, KNK 4,5% berbeda tidak bermakna (p>0,05)
dengan EEBT 0,5%, serta berbeda bermakna (p<0,05) dengan KPV 1%, EEBT
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
1%, dan EEBT 1,5%. Hasil tersebut menunjukkan bahwa KNK 4,5% dapat
menginduksi inflamasi yang ditandai dengan adanya peningkatan ekspresi COX-2
pada kulit punggung mencit yang terinduksi karagenin. Kemudian, hal tersebut
juga menunjukkan bahwa EEBT 0,5% tidak dapat memberikan efek sebagai
antiinflamasi dibandingkan dengan kelompok perlakuan lainnya karena hasilnya
berbeda bermakna (p<0,05) dibandingkan dengan kelompok KPV 1%, EEBT 1%,
dan EEBT 1,5%.
Rerata persentase ekspresi COX-2 pada kelompok KPV 1% sebesar
41.3540 ± 1.82401 yang menunjukkan bahwa terjadi penurunan ekspresi COX-2
pada kulit punggung mencit. KPV 1% berbeda bermakna (p<0,05) dengan KNK
4,5% dan EEBT 0,5%, serta berbeda tidak bermakna (p>0,05) dengan EEBT 1%
dan EEBT 1,5%. Hasil tersebut menunjukkan bahwa KPV 1% dapat memberikan
efek sebagai antiinflamasi yang hampir sama dengan EEBT 1% dan EEBT 1,5%.
Pada kelompok EEBT 1% memiliki nilai rerata persentase ekspresi COX-
2 sebesar 47.7100 ± 2.65788, berbeda tidak bermakna (p>0,05) dengan KPV 1%
dan EEBT 1,5%. Hasil tersebut menunjukkan bahwa EEBT 1% dapat
memberikan efek sebagai antiinflamasi pada kulit punggung mencit yang ditandai
dengan adanya penurunan persentase ekspresi COX-2. EEBT 1% memiliki hasil
yang berbeda tidak bermakna atau hampir sama dengan EEBT 1,5% yang mana
EEBT 1,5% memiliki rerata sebesar 42.4400 ± 3.73750.
Berdasarkan hasil analisis statistik tersebut, konsentrasi kelompok EEBT
yang dipilih sebagai konsentrasi optimum adalah EEBT 1,5% karena EEBT 1,5%
dapat memberikan efek antiinflamasi yang paling baik pada mencit dibandingkan
dengan konsentrasi EEBT lainnya. Efek antiinflamasinya dilihat dari penurunan
persentase ekspresi COX-2 yang hasilnya berbeda bermakna dengan kelompok
KNK 4,5%, walaupun penurunan ekspresi COX-2 nya tidak tinggi seperti pada
kelompok KPV 1%.
Profil rerata persentase (%) ekspresi COX-2 pada kelompok kontrol dan
kelompok perlakuan dapat dilihat pada gambar 8 berikut.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
Gambar 8. Rerata Persentase (%) Ekspresi COX-2 Pada Mencit Setelah Pemberian Ekstrak
Etanol Bunga Telang secara Topikal.
*Keterangan :
= Kontrol Negatif Karagenin (KNK) 4,5%.
= Kontrol Positif Voltaren (KPV) 1%.
= Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 0,5%.
= Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1%.
= Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1,5%.
Berdasarkan diagram batang tersebut, menunjukkan bahwa rerata ekspresi
COX-2 paling tinggi terdapat pada KNK 4,5%. Kemudian, kelompok EEBT 0,5%
juga menunjukkan rerata ekspresi COX-2 yang cukup besar setelah KNK 4,5%,
yang menunjukkan bahwa KNK 4,5% dapat menginduksi terjadinya inflamasi
pada kulit punggung mencit yang terinduksi karagenin dilihat dari peningkatan
ekspresi COX-2 yang dihasilkan. Hal tersebut juga menunjukkan bahwa EEBT
0,5% tidak dapat memberikan efek sebagai antiinflamasi dibandingkan dengan
kelompok lainnya, yaitu KPV 1%, EEBT 1%, dan EEBT 1,5%.
Persentase penekanan ekspresi COX-2 diperoleh dengan cara menghitung
secara langsung (direct counting) sel neutrofil yang mengekspresikan COX-2
menggunakan mikroskop binokuler dengan perbesaran 400 kali. Pembacaan
dilakukan setelah pengecatan HE dan immunohistokimia pada histopatologi kulit
punggung mencit yang terinduksi karagenin dan diberikan sediaan topikal ekstrak
etanol bunga telang. Sel neutrofil yang mengekspresikan COX-2 akan
0.00%
20.00%
40.00%
60.00%
80.00%
100.00%
120.00%
Kelompok
Rer
ata
Per
sen
tase
(%
) Ek
spre
si C
OX
-2
KNK 4,5%
KPV 1%
EEBT 0,5%
EEBT 1%
EEBT 1,5%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
mengasilkan warna coklat/gelap, sedangkan sel neutrofil yang tidak
mengekspresikan COX-2 akan berwarna ungu. Hasil direct counting akan
dihitung untuk memperoleh hasil persentase ekspresi COX-2 pada masing-masing
kelompok kontrol dan perlakuan. Kemudian, hasil persentase ekspresi COX-2
pada masing-masing kelompok akan dihitung menggunakan rumus sebagai
berikut :
*Keterangan :
A = Persentase (%) Rerata Ekspresi COX-2 Kontrol Negatif Karagenin 4,5%
B = Persentase (%) Rerata Ekspresi COX-2 Kontrol Positif atau Kelompok Perlakuan
Berikut merupakan tabel profil persentase (%) penekanan ekspresi COX-2
pada kulit punggung mencit yang terinduksi karagenin.
Tabel 4. Persentase (%) Penekanan Ekspresi COX-2 Pada Kelompok Kontrol dan
Kelompok Perlakuan Pada Mencit Terinduksi Karagenin.
Kode Kelompok
Rerata
%Ekspresi
COX-2
%Penekanan
Ekspresi
COX-2
KNK 4,5% Kontrol Negatif Karagenin 4,5% 91,94% -
KPV 1% Kontrol Positif Voltaren 1% 41,36% 55,01%
EEBT 0,5% Ekstrak Etanol Bunga Telang 0,5% 90,90% 1,13%
EEBT 1% Ekstrak Etanol Bunga Telang 1% 47,71% 48,11%
EEBT 1,5% Ekstrak Etanol Bunga Telang 1,5% 42,44% 53,84%
Berdasarkan tabel di atas, dinyatakan bahwa persentase (%) penekanan
ekspresi COX-2 paling besar pada kelompok KPV 1%, yaitu 55,01%. Kemudian,
dilanjutkan dengan kelompok EEBT 1,5% dengan persentase sebesar 53,84%.
Selanjutnya adalah EEBT 1% dengan persentase sebesar 48,11%, lalu yang
terakhir adalah EEBT 0,5% dengan persentase sebesar 1,13%. Hasil tersebut
menunjukkan bahwa EEBT 1% dan 1,5% dapat memberikan efek sebagai
antiinflamasi yang dapat dilihat dari persentase penekanan terhadap ekspresi
COX-2 yang cukup besar, walaupun tidak sebesar pada kontrol positif.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
Sedangkan, pada kelompok EEBT 0,5% menunjukkan penekanan terhadap
ekspresi COX-2 yang paling rendah sehingga EEBT 0,5% dinyatakan tidak
memberikan efek sebagai antiinflamasi dibandingkan dengan kelompok perlakuan
lainnya. Kemudian, KNK 4,5% digunakan sebagai pembanding terhadap
kelompok lainnya karena KNK 4,5% merupakan kontrol negatif yang hanya
diinduksi karagenin 4,5% tanpa adanya intervensi lain. Oleh karena itu, persentase
ekspresi COX-2 pada KNK 4,5% dibandingkan dengan kelompok lainnya agar
diketahui berapa persentase penekanan COX-2 yang dapat dihasilkan oleh
kelompok kontrol positif dan kelompok perlakuan untuk menentukan efektivitas
antiinflamasi pada masing-masing kelompok. Profil persentase (%) penekanan
ekspresi COX-2 pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan dapat dilihat
pada gambar 9 berikut.
Gambar 9. Persentase (%) Penekanan Ekspresi COX-2 Pada Kelompok Kontrol Positif dan
Kelompok Perlakuan.
*Keterangan :
= Kontrol Positif Voltaren (KPV) 1%.
= Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 0,5%.
= Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1%.
= Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1,5%.
Berdasarkan diagram batang di atas, menunjukkan hasil bahwa
penekanan ekspresi COX-2 paling tinggi pada kelompok KPV 1%. Kemudian,
persentase penekanan ekspresi COX-2 tertinggi kedua adalah kelompok EEBT
0.00%
10.00%
20.00%
30.00%
40.00%
50.00%
60.00%
Kelompok
Per
sen
tase
(%
) P
enek
anan
Ek
spre
si C
OX
-2
KPV 1%
EEBT 0,5%
EEBT 1%
EEBT 1,5%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
1,5% dan diikuti oleh kelompok EEBT 1%. Persentase penekanan terendah
ditunjukkan oleh kelompok EEBT 0,5% yang menunjukkan bahwa EEBT dengan
konsentrasi 0,5% tidak dapat memberikan efek sebagai antiinflamasi pada kulit
punggung mencit yang terinduksi karagenin.
Basis krim yang digunakan untuk membuat sediaan topikal ekstrak etanol
bunga telang adalah Biocream® yang diperoleh dari Apotek Sari Dewi Paingan,
Maguwoharjo, Depok, Sleman, Yogyakarta. Biocream® ini bersifat ambifilik
yang bersifat sebagai A/M atau M/A (Yanhendri and Yenny, 2012). Pada
penelitian ini, tidak dilakukan pengujian Biocream® sebagai kelompok kontrol
karena menurut penelitian Wulansari et al., (2018), kelompok basis krim
Biocream® tidak menunjukkan hasil penurunan selisih tebal lipat kulit selama
pengamatan enam jam yang berarti bahwa Biocream® tidak mempengaruhi dan
tidak memberikan efek sebagai antiinflamasi sama seperti dengan kelompok
kontrol negatif.
Pada penelitian ini, terjadi penurunan migrasi jumlah sel neutrofil dan
penurunan ekspresi COX-2 yang menunjukkan perbedaan hasil yang cukup
signifikan antar konsentrasi pada kelompok perlakuan setelah diujikan pada kulit
punggung mencit terinduksi karagenin. Pada ketiga variasi konsentrasi dosis
sediaan topikal ekstrak etanol bunga telang terdapat hubungan kenaikan dosis
dengan efektivitas sebagai antiinflamasi karena semakin tinggi konsentrasi ekstrak
yang diberikan menghasilkan penurunan rerata jumlah sel neutrofil dan rerata
persentase penekanan ekspresi COX-2 yang semakin baik. Hal tersebut
menunjukkan bahwa semakin besar dosis yang digunakan memberikan efek
antiinflamasi yang semakin baik. Kemudian, untuk pengobatan tradisional sebagai
antiinflamasi dapat dipilih dosis EEBT 1,5% sebagai konsentrasi optimum karena
efektivitasnya sebagai antiinflamasi paling baik dibandingkan dengan konsentrasi
EEBT yang lainnya dilihat dari penurunan migrasi jumlah sel neutrofil dan
penekanan ekspresi COX-2.
Metabolit sekunder yang terkandung pada bunga telang, seperti flavonoid
dan antosianin dapat memberikan efek sebagai antiinflamasi setelah dilakukan
pengujian pada kulit punggung mencit. Hal tersebut dapat disebabkan oleh karena
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
flavonoid termasuk dalam senyawa fenolik alam yang potensial sebagai
antioksidan. Antioksidan tersebut dapat berperan sebagai antiinflamasi dengan
berbagai cara, yaitu : (1) Menghambat produksi oksidan (O2) oleh neutrofil,
monosit dan makrofag. Penghambatan produksi oksidan (O2) akan mengurangi
pembentukan H2O2 yang mengakibatkan produksi HOC1 dan juga OH ikut
terhambat. (2) Menghambat langsung oksidan reaktif seperti radikal hidroksil
(OH) dan asam hipoklorid (HOC1)16
dengan dihambatnya oksidasi dari asam
arakidonat dan penangkapan radikal bebas yang berperan, maka proses
pembentukan prostaglandin akan terhambat. Akibat terhambatnya prostaglandin,
inflamasi pada jaringan menjadi berkurang. Semakin banyak senyawa flavonoid
sebagai antioksidan yang mampu menangkap radikal penginduksi inflamasi, maka
kemampuannya untuk menghambat inflamasi juga semakin besar (Djunarko et al.,
2016). Antioksidan dalam flavonoid dapat mengurangi inflamasi dengan
menghambat aktivasi NFkB sehingga menghambat sintesa IL-1 dan TnFα.
Penghambatan sintesa IL-1 dan TnFα menyebabkan tidak terjadinya vasodilatasi
pembuluh darah dan peningkatan permeabilitas kapiler, serta menghambat adhesi
neutrofil pada dinding pembuluh darah. Penghambatan adhesi neurofil pada
dinding pembuluh darah menyebabkan infiltrasi neutrofil ke dalam jaringan turun
sehingga inflamasi akan berkurang (Kusumastuti et al., 2014).
Kemudian, antosianin dapat berperan sebagai antiinflamasi karena
antosianin memiliki kemampuan untuk menghambat tingkat ekspresi protein
COX-2 dan juga dapat menghambat aktivitas sintesa prostaglandin. Antosianin
merupakan bagian dari flavonoid memiliki efek fisiologis terkuat dari senyawa
tanaman lain. Struktur fenol dari senyawa antosianin dapat menangkap radikal
bebas dan berperan sebagai antioksidan (Kumar and More, 2019). Sebagai
senyawa bioaktif, adanya susunan ikatan rangkap terkonjugasi pada struktur
antosianin membuat antosianin mampu memfungsikan antosianin sebagai
senyawa penghancur dan penangkal radikal bebas alami atau yang lebih dikenal
sebagai senyawa antioksidan alami pada manusia (Priska et al., 2018).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
KESIMPULAN
Sediaan topikal ekstrak etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) dengan
konsentrasi 1% dan 1,5% memiliki efek sebagai antiinflamasi yang dapat dilihat
dari penurunan jumlah migrasi sel neutrofil dan penurunan ekspresi COX-2 pada
daerah inflamasi kulit punggung mencit betina galur Swiss yang terinduksi
karagenin.
SARAN
Perlu dilakukan lagi penelitian terkait dengan khasiat tanaman telang
sebagai antiinflamasi dengan menggunakan bagian tanaman telang lainnya,
seperti daun, akar, dan batangnya dalam bentuk sediaan topikal ataupun oral.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
DAFTAR PUSTAKA
Agustin, R., Dewi, N., Rahardja, S.D., 2016. Efektivitas Ekstrak Ikan Haruan
(Channa striata) dan Ibuprofen terhadap Jumlah Sel Neutrofil pada Proses
Penyembuhan Luka Studi in Vivo pada Mukosa Bukal Tikus (Rattus
norvegicus) Wistar. Jurnal Kedokteran Gigi, 1(1), 69.
Al-snafi, A.E., 2016. Pharmacological Importance of Clitoria ternatea - A Review.
IOSR Journal of Pharmacy, 6(3), 68.
Alfaridz, F., Amalia, R., 2015. Review Jurnal : Klasifikasi dan Aktivitas
Farmakologi dari Senyawa Aktif Flavonoid. Farmaka, 16, 1–9.
Andriani, D., Murtisiwi, L., 2018. Penetapan Kadar Fenolik Total Ekstrak Etanol
Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) dengan Spektrofotometri UV Vis.
Cendekia Journal of Pharmacy, 2(1), 35.
Depkes RI, 1979. Farmakope Indonesia, 3rd ed, Departemen Kesehatan Republik
Indonesia, Jakarta.
Djunarko, I., Yanthre, D., Manurung, S., Sagala, N., 2016. Efek Antiinflamasi
Infusa Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) dan Kombinasi dengan Infusa
Daun Iler (Coleus atropurpureus L. Benth) Dosis 140 mg/kg BB Pada Udema
Telapak Kaki Mencit Betina Terinduksi Karagenin. Prosiding Rakernas dan
Pertemuan Ilmiah Tahunan Ikatan Apoteker Indonesia, 6–15.
Ergina., Nuryanti, S., Pursitasari, I.D., 2014. Uji Kualitatif Senyawa Metanolit
Sekunder pada Daun Palado (Agave angustifolia) yang Diekstraksi dengan
Pelarut Air dan Etanol. Jurnal Akademika Kimia, 3(3), 169.
FHI, 2008. Farmakope Herbal Indonesia Edisi I.
Futagami, A., Ishizaki, M., Fukuda, Y., Kawana, S., Yamanaka, N., 2002. Wound
Healing Involves Induction of Cyclooxygenase-2 Expression in Rat Skin.
Laboratory Investigation, 82(11), 1505.
Groves, R.W., Mizutani, H., Kieffer, J.D., Kupper, T.S., 1995. Inflammatory Skin
Disease in Transgenic Mice That Express High Levels of Interleukin 1α in
Basal Epidermis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the
United States of America, 92(25), 11876.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
Handayani, S., Wirasutisna, K.R., Insanu, M., 2017. Penapisan Fitokimia Dan
Karakterisasi Simplisia Daun Jambu Mawar ( Syzygium jambos Alston)
Selpida. Jf Fik Uinam, 5(3), 179–180.
Ikawati, Z., Nugroho, A.E., Astutiningsih, W., 2014. Penekanan Ekspresi Enzim
COX-2 pada Kultur Sel Raji oleh Ekstrak Kloroform Daun Cangkring
(Erythrina fusca Lour.). Jurnal Universitas Gadjah Mada, 3.
Kemenkes RI, 2014. Persyaratan Mutu Obat Tradisional. BPOM RI, 8.
Khristian, E., Inderiati, D., 2017. Sitohistoteknologi. Kementrian Kesehatan
Republik Indonesia, 208–217.
Kumar, M., More, 2019. Phytochemical Analysis and Bioactivity of Selected
Medicinal Plant of Butterfly-Pea (Clitoria ternatea L.) Used by Kolam Tribe
Addjoing Region of Telangana and Maharashtra States. The Pharma
Innovation Journal, 8(1), 418–420.
Kusrini, E., Tristantini, D., Izza, N., 2017. Uji Aktivitas Ekstrak Bunga Telang
(Clitoria ternatea L.) sebagai Agen Anti-Katarak. Jurnal Jamu Indonesia,
2(1), 30.
Kusumastuti, E., Handajani, J., Susilowati, H., 2014. Ekspresi COX-2 dan Jumlah
Neutrofil Fase Inflamasi pada Proses Penyembuhan Luka Setelah Pemberian
Sistemik Ekstrak Etanolik Rosela (Hibiscus sabdariffa) (studi in vivo pada
Tikus Wistar). Jurnal Universitas Gadjah Mada, 21(1), 18.
Mariana, L., Andayani, Y., Gunawan, E.R., 2014. Analisis Senyawa Flavonoid
Hasil Fraksinasi Ekstrak Diklorometana Daun Keluwih (Artocarpus
camansi). Chemistry Progress, 6(2), 52.
Maulida, R., Guntarti, A., 2015. Pengaruh Ukuran Partikel Beras Hitam (Oryza
sativa L.) terhadap Rendemen Ekstrak dan Kandungan Total Antosianin.
Pharmaciana, 5(1), 13.
Necas, J., Bartosikova, L., 2013. Carrageenan : A Review. Veterinarni Medicina,
58(4), 187–188.
Neliyanti, Idiawati, N., 2014. Ekstraksi dan Uji Stabilitas Zat Warna Alami dari
Buah Lakum (Cayratia trifolia (L.) Domin). JKK, 3(2), 35.
Novianti, D., 2017. Potensi dan Pengembangan Jenis Tanaman Obat di Desa
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
Meranjat Kecamatan Indralaya Selatan. ISSN, 14(1), 45–46.
Nugrahani, R., Andayani, Y., Hakim, A., 2016. Skrining Fitokimia dari Ekstrak
Buah Buncis (Phaseolus vulgaris L.) dalam Sediaan Serbuk. Jurnal
Penelitian Pendidikan IPA, 2(1), 99.
Nur, A., Ma’ruf, D., Sari, I.W., Djide, N., Kabo, P., 2018. Uji Efek Analgetik dan
Antiinflamasi Ekstrak Etanol 70% Daun Beruwas Laut (Scaevola taccada
(Gaertn.( Roxb.) pada Tikus Putih (Rattus novergicus). Media Farmasi,
14(1), 62.
Obouayeba, A.P., Diarrassouba, M., Soumahin, E.F., Kouakou, H., 2015.
Phytochemical Analysis , Purification and Identification of Hibiscus
Anthocyanins. Journal of Pharmaceutical, Chemical, and Biological, 3(2),
159.
PDR, 2020. Diclofenac Sodium Topikal, https://www.pdr.net/drug-
summary/Diclofenac-Sodium-Topical-Solution-1-5--diclofenac-sodium-
24018., accessed 27 Januari 2020.
Ponnusamy, S., Gnanaraj, W.E., Antonisamy, J.M., 2014. Flavonoid Profile of
Clitoria ternatea Linn. Traditional Medicine Journal, 19(1), 1.
Prihandari, R., Muniroh, L., 2016. Jus Semangka Menurunkan Neutrofil Tikus
Jantan Galur Wistar yang Terpapar Asap Rokok. Media Gizi Indonesia,
11(2), 170.
Priska, M., Peni, N., Carvallo, L., Ngapa, Y.D., 2018. Review : Antosianin dan
Pemanfaatannya. Cakra Kimia E-Journal of Applied Chemistry, 6(2), 84.
Riskesdas, 2018. Hasil Utama Riskesdas 2018. Kementrian Kesehatan Republik
Indonesia, 50–57.
Riyani, A., Adawiah, R., 2015. Ekstraksi Flavonoid Metode Soxhletasi dari
Batang Pohon Pisang Ambon (Musa paradisiaca var. sapientum) dengan
Berbagai Jenis Pelarut. Prosiding Simposium Nasional Inovasi dan
Pembelajaran Sains (Snips), 626.
Rosales, C., 2018. Neutrophil : A Cell with Many Roles in Inflammation or
Several Cell Types. Frontiers in Physiology, 9, 1.
Samatha, T., Srinivas, P., Shyamsundarachary, R., Rajinikanth, M., Swamy, N.R.,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
2012. Phytochemical Analysis of Seeds, Stem Bark and Root of An
Endangered Medicinal Forest Tree Oroxylum indicum (L) Kurz.
International journal of pharma and bio sciences, 3(3), 1066.
Sani, R.N., Nisa, F.C., Andriani, R.D., Maligan, J.M., 2014. Analisis Rendemen
dan Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Mikroalga Laut Tetraselmis chuii.
Jurnal Pangan dan Agroindustri, 2(2), 124.
Setiabudi, D.., Tukiran, 2017. Uji Skrining Fitokimia Ekstrak Metanol Kulit
Batang Tumbuhan Klampok Watu (Syzygium litorale). UNESA Journal of
Chemistry, 6(3), 159.
Soeratri, W., Erawati, T., Rahmatika, D., Rosita, N., 2014. Penentuan Dosis Asam
p-metoksisinamat (APMS) Sebagai Antiinflamasi Topikal dan Studi
Penetrasi APMS Melalui Kulit Tikus dengan dan Tanpa Stratum Korneum.
Jurnal Farmasi dan Ilmu Kefarmasian Indonesia, 1(1), 28.
Solihin, I., Silitonga, F.S., Khoirunnisa, F., 2013. Penentuan Trayek pH Ekstraksi
Daun Andong Merah (Cordyline fruticosa L.) dan Buah Senduduk
(Melastoma malabathricum L.) sebagai Indikator Asam dan Basa. Journal of
Chemical Information and Modeling, 53(9), 3–4.
Stankov, S. V, 2012. Definition of Inflammation, Causes of Inflammation and
Possible Anti-inflammatory Strategies. The Open Inflammation Journal, 5, 2.
Sukmawati, Yuliet, Hardani, R., 2015. Uji Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Etanol
Daun Pisang Ambon (Musa paradisiaca L.) terhadap Tikus Putih (Rattus
norvegicus L.) yang Diinduksi Karagenan. Galenika Journal of Pharmacy,
1(2), 130.
Supiyanti, W., Dwi, E., Dan, W., Kusmita, L., 2010. Uji Aktivitas Antioksidan
dan Penentuan Kandungan Antosianin Total Kulit Buah Manggis (Garcinia
Mangostana L). Majalah Obat Tradisional, 15(2), 67.
Sutedi, E., 2013. Potensi Kembang Telang (Clitoria ternatea) sebagai Tanaman
Pakan Ternak. Wartazoa, 23(2), 52–53.
Unitly, A.J.A., Sahertian, D.E., 2010. Deteksi Kandungan Antioksidan
Superoksida Dismutase (SOD) pada Organ Ginjal Tikus Ratus norvegicus
dengan Pewarnaan Imunohistokimia. Seminar Nasional Basic Science II, 16.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
Vifta, R.L., Wansyah, M.A., Hati, A.K., 2017. Perbandingan Total Rendemen dan
Skrining Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Sirih Hijau (Piper betle L.) secara
Mikrodilusi. Journal of Science and Applicative Technology, 1(2), 90.
Virliantari, D.A., Maharani, A., Lestari, U., Ismiyati, 2018. Pembuatan Indikator
Alami Asam-Basa daei Ekstrak Kulit Bawang Merah (Allium ascalonicum
L.). Seminar Nasional Sains dan Teknologi, 1(1), 4.
Wahyuni, N.L.D.A., 2018. The Unity Color Of Kembang Telang. Institut Seni
Indonesia Denpasar, 4–5.
Wulansari, E.D., Wahyuono, S., Widyarini, S., 2018. Aktivitas Antiinflamasi
Topikal Ekstrak Etanolik Rimpang Bangle ( Zingiber cassumunar Roxb .)
pada Mencit yang Diinduksi Karagenin. Traditional Medicine Journal,
23(2), 124.
Yanhendri, Yenny, S.W., 2012. Berbagai Bentuk Sediaan Topikal dalam
Dermatologi. CDK-194, 39(6), 425.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
LAMPIRAN
Lampiran 1. Alat dan Bahan yang Digunakan dalam Penelitian
Gambar 1. Biocream® sebagai Basis Ekstrak.
Gambar 2. Serbuk Karagenin yang Digunakan sebagai Kontrol Negatif.
Gambar 3. Alat Spuit Injeksi.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
37
Gambar 4. Tanaman Telang (Clitoria ternatea L.) (Sutedi, 2013).
Gambar 5. Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) (Wahyuni, 2018).
Gambar 6. Serbuk Bunga Telang (Clitoria ternatea L.).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
38
Gambar 7. Ekstrak Bunga Telang (Clitoria ternatea L.).
Gambar 8. Ekstrak Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) yang Sudah Dibuat dalam Basis
Biocream®. (a) Konsentrasi 0,5%, (b) Konsentrasi 1%, (c) Konsentrasi 1,5%.
Gambar 9. Krim Ekstrak Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) Konsentrasi 0,5%.
(a) (b) (c)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
39
Gambar 10. Krim Ekstrak Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) Konsentrasi 1%.
Gambar 11. Krim Ekstrak Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) Konsentrasi 1,5%.
Gambar 12. Hasil Uji Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria ternatea L.). (a) Uji Flavonoid,
(b) dan (c) Uji Antosianin, (d) Hasil Uji Flavonoid dan Uji Antosianin.
(a) (b) (c) (d)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
40
Gambar 13. Hasil Uji Homogenitas Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria ternatea
L.). (a) EEBT 0,5%, (b) EEBT 1% dan (c) EEBT 1,5%.
Lampiran 2. Hewan Uji yang Digunakan dalam Penelitian
Gambar 14. Mencit Betina Galur Swiss dan Kulit Punggung Mencit Sesudah Dicukur.
Gambar 15. Kulit Punggung Mencit yang Diinjeksikan Karagenin.
(a) (b) (c)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
41
Gambar 16. Kulit Punggung Mencit yang Dioleskan Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria
ternatea L.).
Lampiran 3. Pemotongan Kulit Untuk Histopatologi
Gambar 17. Pemotongan Kulit Punggung Mencit.
Gambar 18. Kulit Punggung Mencit yang Diawetkan dengan Formalin 10%.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
42
Lampiran 4. Hasil Preparat Histopatologi Kulit Punggung Mencit Galur
Swiss
Gambar 19. Preparat Kontrol Negatif Karagenin, (a) Pewarnaan HE dan (b) Pewarnaan
IHC.
Gambar 20. Preparat Kontrol Positif Voltaren, (a) Pewarnaan HE dan (b) Pewarnaan IHC.
Gambar 21. Preparat Kontrol Perlakuan Bunga Telang Hasil Pewarnaan HE, (a)
Konsentrasi 0,5%, (b) Konsentrasi 1%, dan (c) Konsentrasi 1,5%.
(a) (b) (c)
(a) (b)
(a) (b)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
43
Gambar 22. Preparat Kontrol Perlakuan Bunga Telang Hasil Pewarnaan IHC, (a)
Konsentrasi 0,5%, (b) Konsentrasi 1%, dan (c) Konsentrasi 1,5%.
(a) (b) (c)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
44
Lampiran 5. Surat Keterangan Hasil Determinasi Tanaman Telang (Clitoria
ternatea L.)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
45
Lampiran 6. Surat Ethical Clearance
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
46
Lampiran 7. Surat Kalibrasi Jangka Sorong
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
47
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
48
Lampiran 8. Hasil Analisis Statistik Rerata Jumlah Sel Neutrofil pada
Masing-Masing Kelompok
Descriptives
Mencit Statistic Std. Error
Mean
Kontrol
Negatif
Karagenin
4,5%
Mean 28.0000 2.36112
95% Confidence
Interval for Mean
Lower Bound 21.4445
Upper Bound 34.5555
5% Trimmed Mean 27.8517
Median 25.0000
Variance 27.874
Std. Deviation 5.27963
Minimum 23.67
Maximum 35.00
Range 11.33
Interquartile Range 9.83
Skewness .713 .913
Kurtosis -2.464 2.000
Kontrol
Positif
Voltaren
1%
Mean 9.4680 .74164
95% Confidence Interval for Mean
Lower
Bound 7.4089
Upper
Bound 11.5271
5% Trimmed Mean 9.4828
Median 10.3300
Variance 2.750
Std. Deviation 1.65835
Minimum 7.67
Maximum 11.00
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
49
Range 3.33
Interquartile Range 3.17
Skewness -.516 .913
Kurtosis -3.199 2.000
EEBT
0,5%
Mean 24.6680 1.74563
95% Confidence Interval for Mean
Lower
Bound 19.8214
Upper
Bound 29.5146
5% Trimmed Mean 24.7050
Median 25.6700
Variance 15.236
Std. Deviation 3.90335
Minimum 19.00
Maximum 29.67
Range 10.67
Interquartile Range 6.51
Skewness -.402 .913
Kurtosis .956 2.000
EEBT 1%
Mean 15.1360 1.28497
95% Confidence Interval for Mean
Lower
Bound 11.5683
Upper
Bound 18.7037
5% Trimmed Mean 15.0767
Median 14.6700
Variance 8.256
Std. Deviation 2.87329
Minimum 11.67
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
50
Maximum 19.67
Range 8.00
Interquartile Range 4.17
Skewness .902 .913
Kurtosis 2.399 2.000
EEBT
1,5%
Mean 9.6000 1.00294
95% Confidence Interval for Mean
Lower
Bound 6.8154
Upper
Bound 12.3846
5% Trimmed Mean 9.5739
Median 9.0000
Variance 5.029
Std. Deviation 2.24264
Minimum 7.00
Maximum 12.67
Range 5.67
Interquartile Range 4.17
Skewness .437 .913
Kurtosis -1.027 2.000
Lampiran 9. Hasil Analisis Statistik Uji Normalitas dengan Uji Shapiro-Wilk
Tests of Normality
Mencit
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Mean
Kontrol Negatif
Karagenin 4,5% .315 5 .117 .816 5 .110
Kontrol Positif
Voltaren 1% .298 5 .166 .784 5 .060
EEBT 0,5% .201 5 .200* .962 5 .821
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
51
EEBT 1% .319 5 .107 .882 5 .318
EEBT 1,5% .205 5 .200* .968 5 .862
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Test of Homogeneity of Variances
Mean
Levene Statistic df1 df2 Sig.
3.049 4 20 .041
Lampiran 10. Hasil Pengujian ANOVA Rerata Jumlah Sel Neutrofil pada
Masing-Masing Kelompok
ANOVA
Mean
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 1470.314 4 367.579 31.074 .000
Within Groups 236.584 20 11.829
Total 1706.898 24
Lampiran 11. Hasil Pengujian Uji Post Hoc Test dengan Uji Tamhane
Multiple Comparisons
Dependent
Variable:Mean
(I) Mencit (J) Mencit
Mean
Difference
(I-J)
Std. Error Sig.
95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
Tamhane
Kontrol
Negatif
Karagenin
4,5%
Kontrol
Positif
Voltaren
1%
18.53200* 2.47486 .008 6.4470 30.6170
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
52
EEBT
0,5% 3.33200 2.93634 .968 -8.2131 14.8771
EEBT 1% 12.86400* 2.68813 .028 1.4773 24.2507
EEBT
1,5% 18.40000
* 2.56530 .006 6.7548 30.0452
Kontrol
Positif
Voltaren
1%
Kontrol
Negatif
Karagenin
4,5%
-18.53200* 2.47486 .008 -30.6170 -6.4470
EEBT
0,5% -15.20000
* 1.89664 .003 -23.8094 -6.5906
EEBT 1% -5.66800 1.48364 .075 -11.8519 .5159
EEBT
1,5% -.13200 1.24736 1.000 -5.0362 4.7722
EEBT
0,5%
Kontrol
Negatif
Karagenin
4,5%
-3.33200 2.93634 .968 -14.8771 8.2131
Kontrol
Positif
Voltaren
1%
15.20000* 1.89664 .003 6.5906 23.8094
EEBT 1% 9.53200* 2.16757 .028 1.0026 18.0614
EEBT
1,5% 15.06800
* 2.01323 .002 6.6664 23.4696
EEBT 1%
Kontrol
Negatif
Karagenin
4,5%
-12.86400* 2.68813 .028 -24.2507 -1.4773
Kontrol
Positif
Voltaren
1%
5.66800 1.48364 .075 -.5159 11.8519
EEBT
0,5% -9.53200
* 2.16757 .028 -18.0614 -1.0026
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
53
Lampiran 12. Hasil Analisis Statistik Perhitungan Rerata Persentase (%)
Ekspresi COX-2 Pada Masing-Masing Kelompok
Descriptives
Mencit Statistic Std. Error
Mean Kontrol Negatif
Karagenin 4,5%
Mean 91.9400 1.95870
95% Confidence
Interval for Mean
Lower Bound 86.5018
Upper Bound 97.3782
5% Trimmed Mean 92.0500
Median 94.1600
Variance 19.183
Std. Deviation 4.37979
Minimum 86.36
Maximum 95.54
Range 9.18
Interquartile Range 8.31
EEBT
1,5% 5.53600 1.63004 .098 -.8130 11.8850
EEBT
1,5%
Kontrol
Negatif
Karagenin
4,5%
-18.40000* 2.56530 .006 -30.0452 -6.7548
Kontrol
Positif
Voltaren
1%
.13200 1.24736 1.000 -4.7722 5.0362
EEBT
0,5% -15.06800
* 2.01323 .002 -23.4696 -6.6664
EEBT 1% -5.53600 1.63004 .098 -11.8850 .8130
*. The mean difference is
significant at the 0.05 level.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
54
Skewness -.625 .913
Kurtosis -2.744 2.000
Kontrol Positif
Voltaren 1%
Mean 41.3540 1.82401
95% Confidence Interval for Mean
Lower
Bound 36.2897
Upper
Bound 46.4183
5% Trimmed Mean 41.5033
Median 41.5600
Variance 16.635
Std. Deviation 4.07862
Minimum 34.69
Maximum 45.33
Range 10.64
Interquartile Range 6.59
Skewness -1.335 .913
Kurtosis 2.215 2.000
EEBT 0,5%
Mean 90.9040 .45578
95% Confidence Interval for Mean
Lower
Bound 89.6386
Upper
Bound 92.1694
5% Trimmed Mean 90.9289
Median 90.9100
Variance 1.039
Std. Deviation 1.01916
Minimum 89.29
Maximum 92.07
Range 2.78
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
55
Interquartile Range 1.61
Skewness -.998 .913
Kurtosis 2.046 2.000
EEBT 1%
Mean 47.7100 2.65788
95% Confidence Interval for Mean
Lower
Bound 40.3305
Upper
Bound 55.0895
5% Trimmed Mean 47.7906
Median 49.2100
Variance 35.322
Std. Deviation 5.94321
Minimum 40.48
Maximum 53.49
Range 13.01
Interquartile Range 11.67
Skewness -.368 .913
Kurtosis -2.713 2.000
EEBT 1,5%
Mean 42.4400 3.73750
95% Confidence Interval for Mean
Lower
Bound 32.0630
Upper
Bound 52.8170
5% Trimmed Mean 42.2600
Median 37.7400
Variance 69.844
Std. Deviation 8.35730
Minimum 34.55
Maximum 53.57
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
56
Range 19.02
Interquartile Range 15.43
Skewness .670 .913
Kurtosis -2.263 2.000
Lampiran 13. Hasil Uji Normalitas dengan Uji Shapiro Wilk
Tests of Normality
Mencit
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Mean
Kontrol Negatif
Karagenin 4,5% .294 5 .183 .813 5 .103
Kontrol Positif
Voltaren 1% .298 5 .169 .887 5 .342
EEBT 0,5% .302 5 .152 .917 5 .508
EEBT 1% .209 5 .200* .878 5 .302
EEBT 1,5% .313 5 .123 .860 5 .228
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Test of Homogeneity of Variances
Mean
Levene Statistic df1 df2 Sig.
7.098 4 20 .001
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
57
Lampiran 14. Hasil Pengujian ANOVA Rerata Persentase (%) Ekspresi
COX-2 pada Masing-Masing Kelompok
ANOVA
Mean
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 13705.594 4 3426.399 120.629 .000
Within Groups 568.090 20 28.405
Total 14273.684 24
Lampiran 15. Hasil Pengujian Uji Post Hoc Test dengan Uji Tamhane
Multiple Comparisons
Dependent
Variable:Mean
(I) Mencit (J) Mencit
Mean
Difference
(I-J)
Std. Error Sig.
95% Confidence Interval
Lower
Bound
Upper
Bound
Tamhane
Kontrol
Negatif
Karagenin
4,5%
Kontrol
Positif
Voltaren 1%
50.58600* 2.67648 .000 40.3538 60.8182
EEBT 0,5% 1.03600 2.01103 1.000 -9.3061 11.3781
EEBT 1% 44.23000* 3.30165 .000 31.2407 57.2193
EEBT 1,5% 49.50000* 4.21964 .000 31.4361 67.5639
Kontrol
Positif
Voltaren
1%
Kontrol
Negatif
Karagenin
4,5%
-50.58600* 2.67648 .000 -60.8182 -40.3538
EEBT 0,5% -49.55000* 1.88010 .000 -59.1185 -39.9815
EEBT 1% -6.35600 3.22357 .605 -19.2250 6.5130
EEBT 1,5% -1.08600 4.15883 1.000 -19.2512 17.0792
EEBT
0,5%
Kontrol
Negatif
Karagenin
4,5%
-1.03600 2.01103 1.000 -11.3781 9.3061
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
58
Kontrol
Positif
Voltaren 1%
49.55000* 1.88010 .000 39.9815 59.1185
EEBT 1% 43.19400* 2.69668 .001 28.8538 57.5342
EEBT 1,5% 48.46400* 3.76518 .002 28.0074 68.9206
EEBT 1%
Kontrol
Negatif
Karagenin
4,5%
-44.23000* 3.30165 .000 -57.2193 -31.2407
Kontrol
Positif
Voltaren 1%
6.35600 3.22357 .605 -6.5130 19.2250
EEBT 0,5% -43.19400* 2.69668 .001 -57.5342 -28.8538
EEBT 1,5% 5.27000 4.58620 .966 -12.9003 23.4403
EEBT
1,5%
Kontrol
Negatif
Karagenin
4,5%
-49.50000* 4.21964 .000 -67.5639 -31.4361
Kontrol
Positif
Voltaren 1%
1.08600 4.15883 1.000 -17.0792 19.2512
EEBT 0,5% -48.46400* 3.76518 .002 -68.9206 -28.0074
EEBT 1% -5.27000 4.58620 .966 -23.4403 12.9003
*. The mean difference is
significant at the 0.05 level.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
59
Lampiran 16. Surat Keterangan Analisis Data Statistik di Pusat Kajian CE
& BU
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
60
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi dengan judul “Efek
Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga
Telang (Clitoria Ternatea L.) Terhadap Jumlah Sel
Neutrofil dan Ekspresi COX-2 Pada Kulit Mencit
Terinduksi Karagenin” bernama lengkap Ni Made
Kuswindayanti, lahir di Denpasar, 18 Februari 1999,
merupakan anak kedua dari tiga bersaudara pasangan
I Ketut Agus Pancana dan Ni Wayan Wirawati.
Pendidikan formal yang ditempuh penulis, yaitu TK Kumara Lilawati II (2003-
2004), pendidikan Sekolah Dasar di SD Negeri 1 Sukawati (2004-2010),
pendidikan Sekolah Menengah Pertama di SMP Negeri 1 Sukawati (2010-2013),
dan pendidikan Sekolah Menengah Atas di SMA Negeri 3 Denpasar (2013-2016).
Penulis melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma pada tahun 2016. Penulis terlibat dalam berbagai organisasi, kepanitiaan,
dan asisten praktikum, antara lain menjadi Koordinator Divisi Hubungan
Masyarakat pada acara Desa Mitra (2016), Anggota Divisi Hubungan Masyarakat
pada acara Seminar Nasional (2017), Anggota UKM Komunitas Mahasiswa
Hindu Dharma (KMHD) Universitas Sanata Dharma (2017), Anggota Divisi
Hubungan Masyarakat pada acara KPU Fakultas Farmasi (2018), Volunteer pada
acara Bakti Sosial YPMJ (2018), Koordinator Divisi Pengabdian Masyarakat
BEMF Farmasi Universitas Sanata Dharma (2018), Koordinator Divisi Acara
pada acara FACTION#3 (2018), Asisten Praktikum Kimia Dasar (2018), penulis
pernah menjadi perempatfinalis dalam kompetisi Clinical Pharmacy Skill Event
(CPSE) KOFEIN di Universitas Airlangga Surabaya (2019), dan penulis pernah
menjadi Juara III dalam kompetisi Pharmanation (National OSCE Competition)
di Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta (2019).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI