EFICACIA DE EFICACIA DE PROCEDIMIENTOS DE PROCEDIMIENTOS DE

MUESTREO EN MUESTREO EN SUPERFICIES DE ACERO SUPERFICIES DE ACERO

INOXIDABLE INOXIDABLE INOXIDABLE INOXIDABLE CONTAMINADAS CON CONTAMINADAS CON

ListeriaListeria monocytogenesmonocytogenesDiego GómezAgustín AriñoJ.J. CarramiñanaCarmina RotaJavier Yangüela

� Estrategia de muestreo ambiental → Determinación

presencia de microorganismos patógenos en ambiente

� ICMSF (1988):

� Muestrear los equipos

� Tomar muestras de alimento durante el procesado

� Determinar la carga microbiana de los alimentos una� Determinar la carga microbiana de los alimentos una

vez que ya se han procesado

� Tomar muestras del ambiente

� Características de un método de muestreo: eficaz,

simple, rápido, económico, sensible y no presentar riesgo

para el operador

OBJETIVOS

• Puesta a punto y aplicación de técnicas demuestreo ambientales para el controlmicrobiológico de Listeria monocytogenes

OBJETIVOS

• Puesta a punto y aplicación de técnicas demuestreo ambientales para el controlmicrobiológico de Listeria monocytogenesmicrobiológico de Listeria monocytogenes

• Elección del procedimiento que se muestremás eficaz

microbiológico de Listeria monocytogenes

• Elección del procedimiento que se muestremás eficaz

Material y métodos

• Listeria monocytogenes 935 -ATCC 13932- serovar 4b (humana)• Listeria monocytogenes 437/07 serovar 1/2b (cárnica)

Suspensión Bacteriana

Ajuste

105 UFC/100 cm2

Cultivo puro de L. monocytogenes

(BHI)

Ajuste transmitancia a

61% (1,9x108

UFC/ml)

1,26 ml

15 g carne picada de cerdo

135 ml agua peptona 0,1%

TOTAL

151,26 ml

1,6x106 UFC/ml

0,1 ml 100 cm2

Contaminación de las superficies

25 min a Tª ambiente

• Extender con asa Drigalski de vidrio

estéril

• Secado de la superficie (10-15 min)

Esponja

Toalla prehumedecida

Hisopo de algodón

Bolitas de estropajo de acero inoxidable

Métodos de toma de muestras

Minirrodillo de nailon (MRN)

Sistema Petrifilm

Placas RODAC de agar PALCAM y ALOA

� Inóculo 0,15 ml/150 cm 2 (≈103 L.m.)

�500 g/10 s (ISO 18593)

� 104 y 105 L.m./150 cm2 NO RECUENTO

Placas RODAC de agar PALCAM y de agar ALOA

105 L.m./150 cm2 104 L.m./150 cm2105 L.m./150 cm2 104 L.m./150 cm2

Stomacher → en bolsa de Stomacher, 5 minutos

HOMOGENEIZACIÓN

SIEMBRA EN PLACA Y RECUENTOS

Medios de cultivo:

Agar PCA: 1 ml homogeneización en masa (control)

Agar PALCAM: 0,25 ml con asa de Drigalski estéril

Agar ALOA: 0,25 ml con asa de Drigalski estéril

Resultados y discusión

Listeria monocytogenes 935

� Cada uno de los procedimientos ensayados se sometió a 5réplicas

� Los resultados se expresan como Porcentajes deRecuperación de los recuentos obtenidos en las 5repeticiones (PR)

Procedimiento PRMRN 7,8

Esponja 6,1RODAC ALOA 2,6

Hisopo algodón 1,4RODAC PALCAM 1,4Bolita estropajo 1,0

Petrifilm 0,4Toalla prehumedecida 0,3

p < 0,001

Listeria monocytogenes 437/07

Procedimiento PRRODAC ALOA 4,2RODAC ALOA 4,2

RODAC PALCAM 3,9Petrifilm 2,1

MRN 1,5Esponja 1,2

Bolita estropajo 0,4Hisopo algodón 0,2

Toalla prehumedecida 0,1

p < 0,001

Procedimiento PRMRN 4,7

Esponja 3,7RODAC ALOA 3,4

RODAC PALCAM 2,7Petrifilm 1,3

Hisopo algodón 0,8Bolita estropajo 0,7

Toalla prehumedecida 0,2

2 cepas Listeria monocytogenes

p < 0,01

Toalla prehumedecida 0,2

PCA 24h PCA 48hPALCAM

24hPALCAM

48hALOA 24h ALOA 48h

MEDIA 1,8 1,8 1,9 2,0 2,3 2,4

No diferencias significativas entre agar PALCAM y AL OA

No diferencias significativas entre tiempo de incub ación 24 ó 48 horas

� Resultados convenientes con cualquier agar tras 24 h incubación

7 métodos L. monocytogenes 935

vs7 métodos L.

monocytogenes437/07

ANOVA 2

vías

Cepa

Método82% de variación

EsponjaHisopo algodónToalla prehumedecida

vs MRN

MRN (4,7%)

ESPONJA (3,7%)

Conclusiones

El nuevo sistema de toma de muestras en superficie de

acero inoxidable “ MINIRRODILLO DE NAILON ” , utilizado poracero inoxidable , utilizado por

primera vez en este estudio, ha demostrado ser el que

recupera mayor cantidad de Listeria monocytogenes

MUCHAS

GRACIAS

POR SU POR SU

ATENCIÓN