ELISA – Enzyme Linked ELISA – Enzyme Linked ImmunoSorbent AssayImmunoSorbent Assay

ELISA si EIA Metode imunologiceMetode imunologice Replici a imunodeterminarilor Replici a imunodeterminarilor

realizate cu izotopi radioactivi (IRMA, realizate cu izotopi radioactivi (IRMA, RIA)RIA)

ELISA/EIA Incepand din 1980, a fost dezvoltata

utilizarea enzimelor si fluoroforilor ca substante de marcaj in imunodeterminari, in timp ce cea a izotopilor a scazut la 25%.

In prezent, enzimele se utilizeaza in proportie de 35%, iar substantele de marcaj fluorescente in proportie de 15%.

Dintre enzime, peroxidaza din hrean (HRP) si fosfataza alcalina sunt cele mai utilizate.

ELISA Metoda predominanta in Metoda predominanta in

determinarile din domeniul determinarile din domeniul medicinei, biotehnologiei si stiintelor medicinei, biotehnologiei si stiintelor agricoleagricole

Metoda care masoara cantitatea de Metoda care masoara cantitatea de antigen dintr-o probaantigen dintr-o proba

Cautari ELISA in ScienceDirect database

Utilizarea ELISA in diferite domenii de activitate

Utilizarea ELISA in analiza alimentelor OMGOMG MicotoxineMicotoxine Substante alergeneSubstante alergene AntibioticeAntibiotice Originea carnii/laptelui/pesteluiOriginea carnii/laptelui/pestelui Alimente iradiate Alimente iradiate

ELISAELISA competitiva cu competitiva cu antigene marcateantigene marcate Competitie Competitie

intre intre antigene antigene marcate si marcate si antigene antigene nemarcate nemarcate pentru legare pentru legare la anticorpla anticorp

ELISAELISA competitiva cu competitiva cu anticorpi marcatianticorpi marcati

CompetitCompetitie intre ie intre antigene antigene imobilizaimobilizate si te si antigene antigene libere libere pentru pentru legare la legare la anticorpanticorp

ELISAELISA tip sandwich tip sandwich

ELISA sandwich in care marcarea anticorpului se realizeaza cu biotina-biotina-streptavidina -HRPstreptavidina -HRP

ELISA

ELISA

ELISAELISA necompetitiva necompetitiva cu anti-anticorp marcatcu anti-anticorp marcat

High Sensitivity ELISA

ELISA sandwich conventionala, care utilizeaza pentru detectie marcajul Biotina-Streptavidina-HRP

High Sensitivity ELISA

Reactivul de amplificare I contine biotinil-tiramide. HRP Reactivul de amplificare I contine biotinil-tiramide. HRP converteste moleculele de biotinil-tiramida in derivati inalt converteste moleculele de biotinil-tiramida in derivati inalt reactivi (radicali liberi), care se leaga covalent de orice reactivi (radicali liberi), care se leaga covalent de orice proteina din godeu (ex. Proteine de blocare). proteina din godeu (ex. Proteine de blocare).

High Sensitivity ELISACantitatea de biotinil-tiramida care a reactionat este direct proportionala cu cantitatea de HRP din godeu. Dupa incubare, biotinil-tiramida care nu s-a legat de proteinele din godeu este indepartata prin spalare. Se adauga reactivul II, care contine Streptavidin-HRP, care se leaga biotina. Astfel, se obtine o amplificare a activitatii enzimatice.

ELISAELISA

ELISAELISA – folii de protectie a – folii de protectie a placilorplacilor

Cititoare ELISA

ELISAELISA - carti - carti

http://sciencebookss.blogspot.com/2009/05/elisa-guidebook.html

ELISA – avantaje fata de alte metode utilizate in detectia melaminei in laptele praf

ELISA – avantaje fata de alte metode utilizate in analiza alimentelor

• Simpla• Reproductibila• Permite cuantificarea • Permite determinarea simultana a mai multor probe• Mai ieftina decat alte metode