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ELISAを 用 いた風疹IgG・IgM抗 体 の平行線定量法 による解析

北里研究所病院研究部

森 田 稔 鈴 木 達 夫

北里研究所研究部

鈴 木 雄 次 郎

群馬大学医学部衛生学

星 野 洪 郎

(平成4年2月28日 受付)

(平成4年4月10日 受理)

Key words: ELISA, parallel line assay method,

rubella antibodies, relative potency

要 旨

平行 線定 量法 を用 い たELISAで 風疹 抗体 を測定 し,相 対 力価 とHI価 との比較検 討 を行 った.

IgG・ELISAに おけ る平行 線定 量法 は,標 準 血清 お よび被検 血 清 におい て直線 性 を示 し,被 検 血 清 は

標 準血 清 に対 して平 行性 を示 した.し か し,IgM捕 捉ELISAで の風疹IgM抗 体 陽性血 清 は,抗 体 量 の

違 い に よって用 量反 応 回帰直 線 のパ タ ーンが違 うた め,被 検血 清 の希釈 倍数 の範 囲 を高 めに変 更す る必

要 が あ った.

風疹IgG抗 体 の相対 力価 とHI抗 体価 の比較 におい て相 関性(相 関係 数0.781)が 認 め られた.ま た,

相 対力価 で表 す こ とで変 動係 数の 小 さい結果 が得 られた.

平行 線定 量法 を用 いたELISAに よって得 られ る相対 力価 は,風 疹感 染者 とMMRワ クチ ン被 接種 者

の経時 的抗 体価 の変 動 を良 く反 映 していた.

以上 よ り平行 線定 量法 を応 用 したELISAに よる抗体 測定 は,抗 体 保有 状 況 の指 標 として有 用 な方 法

で あ る こ とが示 唆 された.

序 文

風疹は,特 有の発疹 ・リンパ節の腫脹および軽

微な発熱を主症状 とす る小児に好発する急性の発

疹性疾患である.し かし,妊 娠早期に感受性のあ

る妊婦が風疹に罹患すると生まれてくる子供に先

天性の奇形(先 天性風疹症候群)を 生ずることが

高頻度にみ られる.

風疹の抗体検査は,発 疹性疾患の鑑別に用いら

れるだけではな く,妊 婦の人工流産中絶の適応に

対 しても重要性がある.さ らに,ワ クチン接種後

の効果判定にも用い られている.

現在風疹抗体価の測定方法 として最 も普及して

いるのは,赤 血球凝集抑制試験(Hemagglutina-

tion Inhibition,HI)で ある.急 性期 と回復期血

清(ペ ァ血清)を 用いてHI抗 体価の上昇が確認さ

れれば,ご く最近感染した と判定される.

しかし,急 性時期の採血が遅れた り,ま たペア

血清の採血がで きなかった りして確実な診断が困

難な場合が多い.そ こで,単 一血清で風疹IgM抗

体を証明することができれぽ,診 断の有力な助け

となる1)2).

近年,ELISAに よる風疹IgG抗 体 と風疹IgM

抗体の測定法が開発 されて きた.し か し,実 際の

診断に用い られている各商業検査施設の報告 と臨

別刷請求先:(〒108)港 区白金5-9-1

北里研究所病院研究部 森 田 稔

平成4年8月20日

1076 森田 稔 他

床 所 見 との 不 一 致 が,時 と して み られ る3)4).

ELISAは,抗 体 量 を 吸光 度 の 値(O.D.値)で 表

わ す た め に 抗 体 価 の 変 動 がつ か み に くい,そ の た

め に定 量 を 目的 に 測 定 す る場 合,O.D.値 を 生 物 定

量 法 の 中 心 的 な 分 析 方 法 で あ る平 行 線 定 量 法 を 用

い て統 計 的 に処 理 す る こ とが 必 要 で あ る5).

我 々 は,風 疹IgG抗 体 検 出 系 に は プ ロ テ イ ン

G,風 疹IgM抗 体 検 出系 に は 抗 風 疹 モ ノ ク ロー ナ

ル 抗 体 を 用 い るELISAに よ って 特 異 性 と実 用 性

に優 れ た 測 定 試 薬 を 開 発 し,さ らに この 新 し く確

立 した 検 出系 で 平 行 線 検 定6)～9)を行 う こ とに よ り

風 疹IgG抗 体 と風 疹IgM抗 体 の 定 量 が 可 能 で あ

る こ とを 明 らか に した10).

本 研 究 で は,風 疹 感 染 者 血 清 とMMR(麻 疹,

ム ン プ ス,風 疹)ワ ク チ ン被 接 種 者 血 清 を 用 い て

風 疹 抗 体 価 の 定 量 を行 い,抗 体 価 の 変 動 と測 定 の

再 現 性 につ い て 検 討 した.

材 料 と方 法

1)抗 原 の 作 製

風 疹 ウ イ ル スM-33株 をBHK-21細 胞 に感 染 さ

せ て,35℃ で3日 間 培 養 〔Medium:E-MEM+

10%Tryptose Phosphate Broth(TPB)十6%

FBS〕 した.3日 後 に培 地 を除 去 し,新 しい培 地

〔Medium:E-MEM+2%FBS〕 を 入 れ た.以 後,

毎 日培 地 〔Medium:E-MEM,FBS(-)〕 交i換

を 行 い,3日 間 の培 養 上 清 を採 取 した.そ の培 養

上 清 を 用 い て 次 の方 法 で 精 製 風 疹 ウ イル ス抗 原 を

作 製 した.

培 養 上 清 に 最 終 濃 度8%ポ リエ チ レン グ リコ ー

ル と0.5%NaClと を加 え,4℃ で 一 晩 静 置 した.

10,000rpm20分 遠 心 し,沈 渣 を0.15MTNE液

〔0.01MTris-HC1,0.15MNaCl,0.001MEDTA,

pH8.0〕 に加 え た.さ ら に10,000rpm20分 遠 心 し,

この 上 清 を25%(W/W)蕉 糖 に 重 層 し,25,000rpm

150分 遠 心 した.25%薦 糖 を 通 過 した 沈 渣 を0.15M

TNE液(pH8.0)に 添 加 して 溶 解 した.

次 に,こ の 溶 解 液 を25%と50%(W/W)薦 糖 不

連 続 勾 配 に 重 層 し,25,000rpm4時 間 遠 心 した.

25%薦 糖 を 通 過 し,50%薦 糖 ク ッシ ョン上 の 白濁

層 を 採 取 した.こ れ を精 製 風 疹 ウ イル ス抗 原 と し

た.

2)対 象 検 体

風 疹 感 染 患 者 血 清 とMMR(麻 疹 ・ム ン プ ス ・

風 疹)ワ クチ ン接 種 前 後 の小 児血 清 お よび 健 常 人

血 清 を用 い た.

3)酵 素 標 識 抗 体

風 疹IgG抗 体 測 定 に は,ペ ル オ キ シ ダ ーゼ 標 識

ProteinG(Zeymed社 製,USA)を 使 用 した.風

疹IgM抗 体 測 定 に は,我 々 が 作 製 し た ペ ル オ キ シ

ダ ー ゼ 標 識 抗 風 疹 モ ノ ク ロ ーナ ル 抗 体 を 用 い

た10).

4)IgG・ELISA

O.1M炭 酸 重 炭 酸 緩 衝 液(pH9.8)で 風 疹 ウ イ

ル ス 抗 原 を 希 釈 し,EIAマ イ ク ロ プ レ ー ト(Flow

Lab社 製,USA)に100μ1/wel1分 注 した.マ イ ク

ロプ レ ー トを4℃ で 一 晩 静 置 し て 固相 化 した .

次 に0.05%Tween-20を 含 む0.1MTris-HCI緩

衝 液(pH7.6)で3回 洗 浄 し,1%BSAを 含 む0.1

MTris-HCI緩 衝 液 で37℃1時 間 ブ ロ ッキ ン グ し

た.ブ ロ ッキ ン グ後,1%Tween-20と1%BSAを

含 む0.1MTris-HCI緩 衝 液 で 被 検 血 清 を 希 釈 し,

37℃ で1時 間反 応 を 行 った.洗 浄 後,1%Tween-

20と1%BSAを 含 む0.1MTris-HCI緩 衝 液 で 希

釈 した ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ 標 識ProteinGを100μ1/

well加 え,室 温(20～23℃)で1時 間 反 応 され た.

洗 浄 後,0.1Mリ ン酸 緩 衝 液(pH6.0)100mlに

オ ル トフ ェ ニ レ ン ジ ア ミン ・2塩 酸 塩150mgを 溶

解 し,1%過 酸 化 水 素 水1m1を 添 加 した 基 質 液 を

反 応 さ せ 発 色 させ た.4N-H2SO4で 反 応 を 停 止 さ

せ,波 長492nmで 吸 光 度 を測 定 した.

5)IgM捕 捉ELISA

O.1Mリ ン酸 緩 衝 液(pH7.5)を 用 い て ア フ ィ

ニテ ィー ク ロマ トグ ラ フ ィ ーで 再 精 製 した ヤ ギ 抗

ヒ トIgM抗 体(Zymed社 製)を1μg/ml濃 度 で

EIAマ イ ク ロ プ レー トに100μ1/we11ず つ 分 注 し

た.マ イ ク ロ プ レー トを4℃ で1晩 静 置 して 固 相

化 した.

0.1MTris-HCI緩 衝 液(0.05%Tween-20含)で

3回 洗 浄 後,1%BSAを 含 む0.1MTris.HCI緩

衝 液 で37℃,1時 間 ブ ロ ッキ ン グ し,100倍 に 希 釈

した 被 検 血 清 を100μ1加 えて37℃,1時 間 反 応 さ

せ た.洗 浄 後,蛋 白濃 度0.5μg/mlの 精 製 した 風 疹

感染症学雑誌 第66巻 第8号

平行線定量法 による風疹抗体の測定 1077

ウ イ ル ス を100μl/wellで 分 注 し37℃1時 間 反 応

させ た.さ らに洗 浄 後,ペ ル オ キ シ ダ ーゼ 標 識 抗

風 疹 モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体(蛋 白濃 度;10μg/ml)を

100μ1/wel1加 え,室 温 で1時 間 反 応 させ た.洗 浄

後,0.1Mリ ン酸 緩 衝 液(pH6.0)100mlに オ ル

トフ ェニ レ ン ジ ア ミ ン ・2塩 酸 塩150mgを 溶 解

し,1%過 酸 化 水 素 水1mlを 添 加 した 基 質 液 を 反

応 させ 発 色 させ た.4N-H2SO4で 反 応 を 停 止 させ,

波 長492nmで 吸 光 度 を 測 定 した.

6)赤 血 球 凝 集 抑 制 試 験(HI試 験)

予 研 法11)に 準 じ て 赤 血 球 凝 集 抑 制 試 験 を 行 っ

た.

7)平 行 線 定 量 法

北 山 ら12)の開 発 した プ ロ グ ラ ム を用 い て 平 行 線

定 量13)14)を行 った.

こ の プ ロ グ ラ ムは,下 記 の 手 順 で 測 定 値 の 検 定

お よ び相 対 力 価 の 算 出 を行 う.

(1)標 準 血 清 と被 検 血 清 の 希 釈 倍 数 と吸 光 度 を

対 数 変 換 す る.

(2)標 準 血 清 及 び 被 検 血 清 の 直 線 性 を 検 定 す

る.

(3)2本 の 回 帰 線 の 平 行 性 を 検 定 す る.

(4)相 対 力 価(relative potency:RP)を 計 算

す る.

直 線 性 お よ び 平 行 性 の 検 定 は,危 険 率1%で

行 っ た.

ELISAを 行 う時,プ レー ト毎に標準血清を配置

する.標 準血清は100倍 から1,600倍 に,被 検血清

は100倍 から800倍 まで2倍 段階希釈を行った.1

希釈については,標 準血清は4回,被 検血清は2

回繰 り返 し試験 した.な お,2種 類の自家製標準

血清(A)・(B)は,プ ールした風疹感染 ヒト血清

を用いた.風 疹IgG抗 体には標準血清(A),風 疹

IgM抗 体には標準血清(B)を 使用 した.

成 績

1)標 準血清 と被検血清の平行線定量法

Fig.1は,風 疹IgG抗 体測定における標準血清

と被検血清の用量反応回帰直線である.標 準血清

(A)は,直 線性が認められた.被 検血清も直線性

および(A)と の平行性が認め られた.相 対力価は,

No.1血 清(HI価:2,048倍)で は2.476,No.8血

清(HI価:64倍)で は0.235が 得 られた.

風疹IgM抗 体測定でも標準血清(B)は,直 線

性 が認め られ た.被 検血 清No.2は800倍 か ら

1,600倍,No.3は100倍 から800倍,No.4は200倍

か ら1.600倍 で直線性を示 した.各 被検血清は,希

釈倍数を変 えることで標準血清(B)と の平行性 も

認め られた(Fig.2).

2)同 時再現性と日差再現性の検討

HI抗 体価の異なる被検血清を用いて各血清を

3回 繰 り返 し測定 し,吸 光度 と相対力価の再現性

をTable1に 示 した.

Fig. 1 Anti-rubella IgG antibody titration by the parallel line assay method

平成4年8月20日

1078 森田 稔 他

Fig. 2 Anti-rubella IgM antibody titration by the parallel line assay method

Table 1 Technical variations of ELISA results

Repeatability of three independent experiments

Reproducibility of three independent experiments

HI: Hemagglutination inhibition, O.D: Optical density, RP: Relative potency,

SD: Standard deviation, CV: Coefficient of variation

同時 再 現 性 は,用 い た 被 検 血 清(A:HI価8倍

以 下,B:16倍,C:64倍,D:128倍)に お い て 相

対 力 価 と吸 光 度 共 に標 準 偏 差(SD)で は0.1以 下,

変 動 係 数(CV%)で も10%以 下 とバ ラ ッ キ は 小 さ

か った.日 差 再 現 性 は,用 い た 被 検 血 清(E:HI価

8倍 以 下,F:32倍,G:128倍,H:256倍)で は

吸 光 度 で 表 示 した 場 合,HI価 の 高 い血 清(G・H)

で標 準 偏 差 が0.1以 上,変 動 係 数10%以 上 に な った

感染症学雑誌 第66巻 第8号

平行線定量法による風疹抗体の測定 1079

Fig. 3 Correlation between rubella HI titers and

IgG-ELISA values of 294 sera

Fig. 4 Correlation between anti-rubella IgG anti-body titers of 294 serum samples from healthy

subjects determined by the HI test and the paral-lel line assay method

が,相 対 力 価 で表 した 場 合 は,標 準 偏 差0.1以 下 で

変 動 係 数10%以 下 と共 に低 値 を示 し,バ ラ ツキ の

小 さい 結 果 が 得 られ た.

3)健 常 人 血 清 に よ る風 疹IgG抗 体 のHI価 と

相 対 力 価 お よ び吸 光 度 の 比 較

健 常 人 血 清294例 を 用 い て 吸 光 度 とHI価 の 比

較 で は,相 関 係 数0.897(Y=0.174X-0.189)で

あ った(Fig.3).ま た,相 対 力 価 とHI価 の 比 較

は,相 関 係 数0.781(Y=0.067X-0.110)で あ っ

た(Fig.4).

4)風 疹IgM抗 体 陽 性 血 清 で の 風 疹IgG抗 体

の測 定

Fig. 5 Correlation between rubella HI titers and

IgG-ELISA by the parallel line assay method of

sera

風疹抗体検査依頼のあった100検 体 について風

疹IgG抗 体をELISAとHI法 で測定 した.風 疹

IgM抗 体 は,我 々の 開 発 したELISAと 市 販

ELISA試 薬(ル ベラIgM-EIA「 生研」(R):デンカ

生研社製)の2法 で確認 した.

風疹IgG抗 体は,100例 中76例 がELISAとHI

法で陽性であった.風 疹IgM抗 体は,76例 中6例

がELISA(2法)で 陽性を示 した.

この風疹IgG抗 体陽性 ・IgM抗 体陽性血清は,

風疹IgG抗 体陽性・IgM抗 体陰性血清に比 し,RP

値の低値が見 られた(Fig.5).

5)MMRワ クチン 接種前後血清での風疹IgG

抗体の測定

MMRワ クチン接種前の血清(HI抗 体価8倍

以下)94例 とMMRワ クチン接種後の血清(接 種

後3日 か ら1年 間経過 に採血)58例 を用いて風疹

IgG抗 体 と風疹IgM抗 体の測定を行った.

MMRワ クチン接種前の血清は,ELISAに よる

風疹IgG抗 体 と風疹IgM抗 体の測定ではすべて

陰性であった.

MMRワ クチン接種後の血清では,風 疹IgG抗

体陽性 ・風疹IgM抗 体陽性血清は25例,風 疹IgG

抗体陽性 ・風疹IgM抗 体陰性血清は33例 であっ

た.

このMMRワ クチン接種後 の血清 においても

平成4年8月20日

1080 森田 稔 他

Fig. 6 Correlation between rubella HI titers and

IgG-ELISA by the parallel line assay method of

152 sera samples obtained before and after vacci-

nation

風疹IgG抗 体陽性 ・IgM抗 体陽性血清は,風 疹

IgG抗 体陽性・IgM抗 体陰性血清に比 し,RP値 の

低値が見 られた(Fig.6).

6)HI価 の相対力価区間の換算(推 定)

Table2は553例 を用いてHI法 とELISAを 行

い,得 られた相対力価 とHI価 を比較 した.さ ら

に,相 対力価をHI価 に換算 した場合の相対力価

区間を推定 した結果である.HI価8倍 以下のす

べての血清は,相 対力価0 .001以 下であった.HI

Table 2 Comparison of anti-rubella antibody

levels obtained by IgG-ELISA and hemagg-

lutination inhibition test (HI)

*RP: Relative potency # SD : Standard deviation

価8倍 の血 清は,相 対力価0.012～0.075で 平均

0.031で あった ことより風疹IgG抗 体の有無が明

確に判定された.

また,相 対力価が低 くなるに従い,変 動係数が

大 きくなる傾向が認め られた.

7)風 疹感染者血清を用いた抗体価 の経時的変

化

症例(A)は,8歳 の学童児(女)で 発疹出現後

2日 ・9日 ・195日に採血 し,風 疹抗体を測定 した.

HI価 は,9日 目で ピークを示 したが風疹IgG抗

体の相対力価では195日 目まで抗体上昇が確認 さ

れた.

症例(B)は,23歳 の男性で発疹出現後2日 ・9

日 ・29日 ・57日に採血 し,同 様に風疹抗体を測定

Table 3 Detection of rubella antibody in 2 cases with rubella

Case (A)

Case (B)

# N.D: Not Done

感染症学雑誌 第66巻 第8号

平行線定量法による風疹抗体の測定 1081

Table 4 Detection of rubella antibody in 3 cases after MMR vaccination

Case (C)

Case (D)

Case (E)

した.HI価 はすべて256倍 で抗体変動は見 られな

かったが,相 対力価で表す と風疹IgG抗 体におい

て抗体価の変動が確認 された.さ らに,風 疹IgM

抗体の相対力価の減少傾向が明らかに観察 された

(Table3).

8)MMRワ クチン接種者血清を用いた経時的

変化

症例(C)・ 症例(D)・ 症例(E)は,MMRワ

クチン接種 日から抗体価を経時的に追跡 した結果

である.

風疹IgG抗 体 と風疹IgM抗 体の抗体価 がHI

価 に比 し,抗 体 量を よ り明確 に反 映 していた

(Table4).

考 察

我々は,感 度 ・特異性の面でより精度の高い風

疹抗体測定試薬を作製 した.風 疹IgG抗 体測定は

特異IgG抗 体を測定するペルナキシダーゼ標識

プロテインGを 用いた.風 疹IgM抗 体測定 には

抗風疹 モ ノク ローナル抗 体を用 いたIgM捕 捉

ELISAを 確立 した.こ の確立 した系に平行線定量

法を用 いてその定量性 と特異性について検討 を

行 った.

ELISAは,各 種感染症において術式の標準化が

確立されているにもかかわらず,測 定 された吸光

度によって抗体価を表示する方法は,再 現性や正

確性に関 して必ずしも十分に検討されていない.

さらに,ELISAは,測 定者あるいは施設問によ

りぼ らつ きが多いこと,ま た,他 の測定方法 との

比較 が困 難 で あ る こ と等,多 くの 問題 が あ

る8)9)15).

平行線定量法によって得 られ る抗体価は標準血

清に対する相対力価であるので標準化を正確 に

行った標準血清を用いて測定することでELISA

における変動因子を十分にコントロールできる.

平行線定量法は,相 対力価によって表示するた

めELISA単 位に換算す ることが容易である.そ

のためELISAに よる精度管理に極めて有用な方

法 と考えられる.

平成4年8月20日

1082 森田 稔 他

マイクロELISAに おける平行線定量法は,標

準血清(A・B)の すべてにおいて直線性が認めら

れた.被 検血清については風疹IgG抗 体は,用 い

た被検血清すべて標準血清(A)と 平行線定量法が

成立した.し かし,風 疹IgM抗 体は,抗 体量の違

いによって用量反応回帰直線のパ ターンが違 うた

め,被 検血清の希釈範囲を高めに変更する必要が

あった.

健常人血清におけるHI価 と吸光度お よび相対

力価 との比較において良い相関を示 した.し かし,

風疹IgM抗 体を含む血清を用いてスク リーニン

グした結果,Fig.1よ り各HI価 を相対力価で表

す相対力価区間 より明 らかに外れる血清があっ

た.こ の血清の多 くは,低 い相対力価を示してい

た.

す なわち,標 準管理血清 の統一 を行 うことに

よって相対力価区間を明確にし,そ の区間か ら外

れた り,疑わ しい検体については風疹IgM抗 体の

有無を確認する必要があると思われる.

また,同 時再現性の検討では相対力価 と吸光度

は,と もにバラツキの小さい結果が得 られた.日

差再現性は,吸 光度で表す と標準偏差 と変動係数

にノミラツキがみられたが,相 対力価で表す ことに

よりバ ラッキの小 さい結果が得 られた.各 市販

ELISA試 薬の違 いや ロット間の誤差および検査

施設問の測定誤差等から生じる問題は,標 準管理

血清の統一および吸光度から相対力価へ表示す る

ことでELISAの 精度管理に極めて有用であると

考えられる.

今回,自 家製の標準血清を使用 したが,早 急に

公的機関によって標準管理血清の標準品が確立さ

れ,全 国の検査施設において使用されることを期

待 したい.

ELISAに よる風疹感染者 とMMRワ クチン接

種者血清 の経時的変化において風疹IgG抗 体 と

風疹IgM抗 体の相対力価は,抗 体価の推移をより

良 く反映 していた.

この ことから平行線定量法を応用 したELISA

による抗体価の定量は,風 疹IgG抗 体のみならず

風疹IgM抗 体においてもHI価 より,抗 体量の変

動をより明確に反映することが示唆 された.

本研究は千代 田生命健康開発事業団に よる社会更生事業

助成の援助 を受けて行われた.ま た,本 論文 の要 旨の一部

は,第37回 日本臨床病理学会総会(1990年2月,東 京)に

おいて発表 した.

平行線定量法の プログラムを供与頂いた国立公衆衛生院

北 山秋雄博士,千 葉県衛生研究所春 日邦子氏 に感謝いたし

ます.ま た,MMRワ クチ ン接種血清を分与頂いた済生会

中央病院中山哲夫博士 に感謝いた します:

文 献

1) 吉 田 晃, 槻 舘 由美子, 引 地 一 昌, 畠野 靖子, 甲

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平行線定量法による風疹抗体の測定 1083

12) 北 山秋 雄, 内 村 真 佐子, 市 村 博, 大 田原 美 作雄:

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13) 北 山秋 雄, 春 日邦 子, 十 川 知 子, 時枝 正 吉, 市 村

博, 大 田原 美 作雄, 平 山 宗: マ イ ク ロELISA法

に よる ム ン プス抗 体 測 定:-第1報. 平 行 線定 量

法 の有 効 性-. 臨 床 と ウ イル ス, 15: 369-372,

1987.

14) 北 山秋 雄, 春 日邦 子, 十川 知 子, 時枝 正 吉, 市 村

博, 大 田原 美 作 雄, 平 山 宗: 平 行 線定 量 を 用 い

たELISA法 に よる ム ンプ ス抗 体 瀬定.-第2報.

相 対 力 価 と中和 抗体 価 の比 較 ・検 討-. 臨 床 と ウ

イ ル ス, 17: 411-414, 1989.

15) Sedgwik, A. K., Ballow, M., Spanks, K. &Yilton, C.: Rapid quantitative microen-zymelinked immunosorbent assay for tetanusantibodies. J. Clin. Microbiol., 18: 104-109,

1983.

Microtiter Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Rubella Antibodies in Human Sera―Analysis by Parallel Line Assay Method―

Minoru MORITA & Tatsuo SUZUKIDepartment of Biomedical Laboratory, The Kitasato Institute Hospital

Yujiro SUZUKIDepartment of Virology, The Kitasato Institute

Hiroo HOSHINODepartment of Hygiene, Gunma University School of Medicine

Antibodies against rubella virus in human sera were measured by ELISA and antibody titers werecalculated by the parallel line assay method.

The dose response regression curves of standard sera and test sera containing IgG antibodycalculated by the parallel line assay method showed linearity, and were parallel to one another.However, the regression lines of sera positive for IgM antibody against rubella virus were not parallelto one another in the low dilution region, but parallel in the higher dilution region.

A good correlation was observed between the rubella IgG antibody titers measured by thehemagglutination-inhibition (HI) test and those calculated by the parallel line assay method. Thecoefficient of the correlation was 0.781.

Time-course studies of IgG or IgM antibody titers against rubella virus in rubella patients or invaccines with MMR vaccine indicated that the ELISA was more precise and specific method than theHI test.

Thus, the parallel line assay method using ELISA is considered to be a more useful method for thedetection and quantification of antibodies to rubella than the conventional HI test.

平成4年8月20日