Enumerao de coliformes totais e coliformes termotolerantes Professora Samira Mantilla

Importncia da enumerao de coliformes em alimentos

Microrganismos indicadores de condies higinico-sanitrias insatisfatrias: so grupos de mos que quando presentes em um alimento fornecem informaes sobre a ocorrncia de contaminao de origem fecal, sobre a provvel presena de patgenos.

Caractersticas de um bom indicador de contaminao fecalRpida e fcil deteco No deve estar presente como contaminante natural do alimentodeve estar presente quando o patgeno estiverAusente nos alimentos livres de patgenosHabitat exclusivo:trato intestinalOcorrer em nmeros altos nas fezes

Caractersticas de um bom indicador de contaminao fecalE. coli como indicador:

habitat: trato intestinal de animais

Caractersticas de um bom indicador de contaminao fecalEm alimentos processados, a presena de um nmero considervel de coliformes indica:Processamento trmico inadequado e/ou recontaminao ps processamentoProliferao microbiana que poderia permitir a multiplicao de mos patognicos

COLIFORMES TOTAIS OU GRUPO COLIFORME

Famlia EnterobacteriaceaeBastonetes Gram negativos, no formadores de esporos, fermentam a lactose com produo de cido e gs a 35-37C/24-48hExistem os fermentadores tardios de lactose!!!! Gneros:

Escherichia (s a E. coli tem como habitat primrio o trato intestinal)Enterobacter Citrobacter Klebsiella

COLIFORMES FECAIS (termotolerantes)

Os coliformes termotolerantes fazem parte do grupo coliformes totais.Caracterstica: continuam fermentando a lactose com produo de cido e gs quando incubados a 44,5 0,5C /24- 48h90% das culturas de E. coli so positivasApenas algumas cepas de Enterobacter e Klebisiella apresentam esta caractersticaE. coli (vrios sorotipos)

Escherichia coliCLASSIFICAO

ENTEROPATOGNICA CLSSICA (EPEC)ENTEROTOXIGNICA (ETEC)ENTEROINVASORA (EIEC) ENTEROHEMORRGICA (EHEC)FACULTATIVAMENTE ENTEROPATOGNICA (FEEC)ENTEROAGREGATIVA (EAggEC)

Enfermidade transmitida por alimentos EPECGastroenterite em crianasDores abdominais, vmito e febreDurao 6h a 3 diasCapacidade de adeso a mucosa intestinal- destruio das vilosidades intestinais

Enfermidade transmitida por alimentos EIECDisenteria, clicas abdominais, febre, mal estar, com eliminao de sangue e muco pelas fezesPI: 8-24h

Enfermidade transmitida por alimentos ETECCapazes de produzir enterotoxinasDiarria aquosa, febre baixa, doresa bdominais, nuseasForma mais severa: semelhante a clera: fezes tipo gua de arroz desidrataoPI: 8-44h

Enfermidade transmitida por alimentos EHECGado reservatrio naturalSintomas:

E. coli: O157:H7 doena do hamburguerProduo de citotoxinasColite hemorrgica: dores abdominais severas e diarria aguda, seguida de diarria sanguinolenta, sem febrePI: 3-9 diasPode evoluir para sndrome urmica hemoltica (grave)

TESTES DA COLIMETRIADividido em:

PRESUNTIVOCONFIRMATIVO COMPLETO

Teste presuntivoEste teste realizado tanto para coliforme total como para coliforme fecal.Caldo Lauril Sulfato Triptose (LST) com tubos de Durham invertidos trs sries de trs tubosIncubao :35-37C por 24-48 h. Leitura: Os coliformes utilizam a lactose produzindo cido e gs, sendo este detectado no teste presuntivo atravs da reteno de gs no tubo de Durham.

Teste confirmativo para Coliforme Total

Os tubos positivos no teste presuntivo so semeados em Caldo Verde Brilhante Bile Lactose (VBBL) com tubos de Durham em seu interior Incubao:35-37C por 24-48 h. Leitura: os tubos com produo de gs = positivos no teste confirmativo. Clculo do Nmero Mais Provvel (NMP) para ColiformesTotais.

Exemplo de Resultado: 10-1 10-2 10-3 3 2 3NMP/g = Nmero da tabela x FDI 100

290 x 102 = 290 = 2,9 x 102 NMP/g 100

Teste confirmativo para Coliforme Fecal (coliformes termotolerantes)

Tubos positivos no teste presuntivo - Caldo Escherichia coli (EC) contendo tubos de Durham em seu interior. Incubao: 44,5 0,5C por 24-48 h. Leitura: os tubos com produo de gs = + para o teste confirmativo. Clculo do Nmero Mais Provvel (NMP) para Coliformes a 45C.

Teste completoColiformes TotaisOs tubos positivos no teste confirmativo (VBBL) foram semeados para o meio EMB (Eosina Metileno Blue) - possui sais biliares que inibem o crescimento de bactrias Gram (+), favorecendo o crescimento das Gram (-). A placa foi dividida de acordo com o nmero de diluies positivas no VBBLSemeadura por estriamento do inoculo no meio de cultura. incubao foi a 35-37C por 24hLeitura: As UFC so petras com ou sem brilho verde metlico (suspeita de E. coli), os outros CT (Enterobacter, Citrobacter e Klebisiella) apresentam UFC mucides e com tendncia a se conflurem.

gar EMBKlebisiellaEnterobacter

Teste completoColiformes fecaisOs tubos positivos no teste confirmativo (EC) so semeados para o meio EMB incubao :35-37C por 24 h.Leitura: As UFC so pretas com brilho verde metlico (suspeita de E. coli).

Enumerao de E. coliAps o teste completo segue-se para o :IMVICAs UFC tpicas para coliformes fecais, so transferidas com agulha flambada para o meio gar nutriente inclinado, sendo incubado em estufa 35-37C por 24 h, para posterior realizao da bioqumica (IMVIC): prova do indol, Prova do vermelho de metila (VM), prova do Vorges Proskauer (VP), prova do citrato

FIM