Enzymatisk extrahering och konvertering av lignin för ...publications.lib.chalmers.se/records/fulltext/219796/219796.pdf · 2 Teori Produktion av geler och plast från hemicellulosa

KANDIDATPROJEKTSRAPPORT 2015

Enzymatisk extrahering och konvertering av ligninfoumlr framtida bioraffinaderier

KBTX01-15-14

Christoffer Baumlckberg

Arvid Hagelberg

Rebecka Johansson

Linn Kullberg

Louise SamuelssonClara Sundstroumlm

Handledare Carl Johan Franzeacuten och Sylvia KlaubaufInstitutionen foumlr Biologi och BioteknikAvdelningen foumlr Industriell bioteknik

CHALMERS UNIVERSITY OF TECHNOLOGY

Gothenburg Sweden 2015-05-16

Christoffer Baumlckberg chrbackstudentchalmersseArvid Hagelberg arvidhastudentchalmersseRebecka Johansson rebjohastudentchalmersseLinn Kullberg klinnstudentchalmersseLouise Samuelsson lousamustudentchalmersseClara Sundstroumlm clarasustudentchalmersse

Handledare Carl Johan Franzeacuten och Sylvia Klaubauf Institutionenfoumlr Biologi och Bioteknik

Examinator Eva Albers Institutionen foumlr Biologi och Bioteknik

Kandidatprojektsrapport 2015Institutionen foumlr Biologi och BioteknikAvdelningen foumlr Industriell bioteknikChalmers Tekniska HoumlgskolaSE-412 96 GothenburgTelephone +46 31 772 1000

Skriven i LATEXGoumlteborg Sverige 2015

AbstractEnzymatic Extraction and Conversion of Ligninfor Use in Future Biorefineries

The current methods of producing organic chemicals and fuel from oil are not sustain-able in the long term However lignin based organic chemistry has the potential to be arenewable alternative to oil but is today an underused resource This report contributesto research in this field by studying possible valorization of lignin suitable enzymes forseparation of lignin and hemicellulose and by examining fungi which may potentiallydegrade lignin

Literature studies allowed for construction of a potential pathway from coniferyl alcoholto the pharmaceuticals L-dopamine and adrenalin By dehydrogenation amination anddemethylation L-dopamine can be made from coniferyl alcohol Adrenaline is made fromL-dopamine using enzymes found in the human biosynthesis pathway The suggestedpathway may require modification of the catalysing enzymes Production of these com-pounds requires further study but could provide an economic incentive in the develop-ment of biorefineries

Phylogenetic studies showed that a hypothetical enzyme DICSQDRAFT_107426 fromDichomitus squalens could be of interest for future studies of separation of lignin fromlignocellulose Characterized glucuronoyl esterases capable of breaking ester bonds be-tween lignin and glucuronic acid residues in hemicellulose in organisms closely relatedto D squalens makes this organism a good candidate for finding new enzymes able todegrade lignin The organism is of further interest for Swedish industry as it usually growson coniferous trees which are prevalent in Sweden Protocols for characterization havebeen compiled

Plating of fungal samples collected from a wooded area in the vicinity of the ChalmersJohanneberg campus show good prospects of finding filamentous fungi capable of utili-zing lignin Further studies may identify additional fungi and enzymes able to separatepurify and degrade lignin

Extraction of lignin will also impact availability of hemicellulose which is of interest tothe polymer industry This project can hopefully lay a foundation for future studies ondegradation and usage of lignin where the pathway can be tested and D squalens studied

Keywords lignin enzymes valorization sustainability phylogeny field samples

Sammanfattning

Oljebaserad kemikalie- och braumlnsleframstaumlllning aumlr inte laringngsiktigt haringllbart Ligninbaseradkemi har potential att vara ett foumlrnyelsebart alternativ men aumlr idag en underutnyttjadresurs Denna rapport bidrar till forskningen inom detta faumllt genom att undersoumlka moumljligvalorisering av lignin och laumlmpliga enzym foumlr separering av lignin och hemicellulosa samtgenom att testa olika svampar som har potential att bryta ned lignin

Utifraringn studier av kaumlnda enzymkatalyserade reaktioner kunde en potentiell reaktionsvaumlgfraringn koniferylalkohol till laumlkemedelssubstanserna L-dopa och adrenalin tas fram Viadehydrogenering aminering och demetylering kan L-dopa bildas fraringn koniferylalkoholAdrenalin foumlreslarings bildas ur L-dopa med hjaumllp av enzym fraringn den maumlnskliga biosyntesenDenna reaktionsvaumlg kan kraumlva modifiering av de ingaringende katalyserande enzymen Fram-staumlllning av L-dopa och adrenalin ur lignin kraumlver fortsatta studier men kan komma att bliett ekonomiskt incitament foumlr utvecklingen av bioraffinaderier

Foumlr extraktion av lignin och hemicellulosa kraumlvs en metod att bryta esterbindningar mellanlignin och glucuronsyror i hemicellulosa Fylogenetiska studier visade att ett hypotetisktenzym DICSQDRAFT_107426 fraringn Dichomitus squalens aumlr laumlmpligt foumlr fortsatta studierkring separation av lignin fraringn lignocellulosa Karakteriserade ligninnedbrytande glucu-ronoylsyraesteraser hos organismer naumlrbeslaumlktade till D squalens goumlr organismen till engod kandidat att hitta nya ligninnedbrytande enzym i Organismen aumlr av ytterligare viktfoumlr svensk industri daring den vanligtvis vaumlxer paring barrtraumld Protokoll foumlr karakterisering avenzymet har sammanstaumlllts

Uppodling av svampprover fraringn omraringdet kring Chalmers Johanneberg visade att moumljlig-heten att hitta filamentoumlsa svampar som kan tillgodogoumlra sig lignin aumlr god Fortsattastudier kan identifiera fler svampar och enzym med foumlrmaringga att separera rena och brytaner lignin

Extraktion av lignin paringverkar ocksaring tillgaumlngligheten av hemicellulosa vilket aumlr av intressefoumlr polymerindustrin Detta projekt kan foumlrhoppningsvis vara en grund foumlr framtida studierkring nedbrytning av och anvaumlndningsomraringden foumlr lignin daumlr reaktionsvaumlgarna kan testasoch D squalens studeras

Nyckelord lignin enzym valorisering haringllbarhet fylogeni faumlltprover

Inneharingll1 Inledning 1

11 Syfte och maringl 112 Bakgrund 113 Avgraumlnsningar 2

2 Teori 221 Lignin 222 Enzym foumlr separation och valorisering av lignin 323 Fylogenetiska traumld 424 Ligninnedbrytande svampar 6

3 Metod 731 Enzymatiska reaktionsvaumlgar 732 Separationsenzym 733 Ligninnedbrytande svampar 8

331 Insamling av prover 8332 Agarplattor 8333 Odlingsbetingelser 9334 Utstryk av prover 9335 Renstryk av kolonier 9336 Inokulering av renstrykta kolonier 10337 Identifiering av svampar 10

4 Resultat 1041 Enzymatiska reaktionsvaumlgar 10

411 L-dopa och adrenalin 10412 Konvertering av koniferylalkohol till L-dopa 11413 Konvertering av L-dopa till adrenalin 13

42 Separationsenzym 1443 Ligninnedbrytande svampar 16

431 Uppodling av svampar 16432 Identifiering av svampar 17

5 Diskussion 1851 Enzymatiska reaktionsvaumlgar 1852 Separationsenzym 1953 Ligninnedbrytande svampar 2054 Slutsats 20

Kaumlllfoumlrteckning 22

Bilaga A Agarplattor med lignin I

Bilaga B Agarplattor med potatisextrakt och dextros III

Bilaga C LB-media samt agarplattor med LB-media IV

Bilaga D PCR-reaktion V

Bilaga E Restriktion med EcoRI och XbaI VII

Bilaga F Gelelektrofores VIII

Inneharingll

Bilaga G Upprening av DNA fraringn Agarosgel X

Bilaga H Ligering med T4-ligas XII

Bilaga I Transformation XIII

Bilaga J Genuttryck XIV

Bilaga K Proteinextraktion och 6x His-tag proteinrening XV

Bilaga L SDS-PAGE XVII

Bilaga M Bradfordanalys XX

Bilaga N Detektion av aktivitet XXII

Bilaga O Beskrivningar av svampkoloniernas utseende efter renstryk XXIII

Bilaga P Foton av renstrykta kolonier XXXIII

Bilaga Q Plasmidsekvens aminosyrasekvens och foumlr E coli kodonoptimeradnukleinsyrasekvens foumlr DICSQDRAFT_107426 XLV

1 Inledning

11 Syfte och maringl

Syftet med detta arbete aumlr att bidra till forskning som aumlmnar att ersaumltta dagens oljebaseradeorganiska kemi med foumlrnyelsebar ligninbaserad bioteknik Inom detta projekt har tre maringlsatts upp foumlr att bidra till denna forskning

1 Ta fram ett foumlrslag paring en enzymatisk reaktionsvaumlg som kan anvaumlndas foumlr att synte-tisera en vaumlrdefull kemikalie fraringn lignin

2 Identifiera ett enzym som foumlrmodas kunna bryta bindningar mellan lignin och hemi-cellulosa samt planera arbetsgaringng foumlr att karaktaumlrisa dess aktivitet

3 Identifiera svamparter fraringn faumlltprov som kan bryta ner lignin

12 Bakgrund

Dagens samhaumllle aumlr paring flera saumltt beroende av olja Framfoumlrallt anvaumlnds fraktioner av oljantill att framstaumllla flera olika typer av braumlnsle men aumlven maringnga av de kemiska produktersom anvaumlnds i stora maumlngder idag tillverkas med raringolja som bas [1] Oljebaserade kemi-kalier anvaumlnds aumlven foumlr att goumlra plast ett material med maringnga olika anvaumlndningsomraringden[2] Eftersom oljan foumlrr eller senare kommer ta slut [3] kommer tillverkning av braumlnslekemikalier och plast fraringn olja inte kunna uppraumlttharingllas foumlr alltid Det skulle alltsaring vara braatt redan nu boumlrja tillverka dessa produkter paring ett mer haringllbart saumltt Trauml har potential attfylla alla dessa behov

Vaumlxtcellernas cellvaumlgg bestaringr av polysackariderna cellulosa och hemicellulosa som aumlrinbaumlddade i lignin [4] [5] Cellulosan bestaringr av laringnga kedjor av glukos vilka kan hydro-lyseras och fermenteras till bioetanol [6] som aumlr ett alternativ till fossila braumlnslen Idagproduceras etanol av staumlrkelsebaserade groumldor vilket medfoumlr konkurrens av produktion avmat [7] Cellulosabaserad etanol har potential att reducera denna konflikt och har dess-utom baumlttre haringllbarhetsperspektiv [8]

Foumlr att oumlka den cellulosabaserade bioetanolproduktionens konkurrenskraft i framtidenanses det vara viktigt att aumlven kunna producera vaumlrdefulla material eller kemikalier urbestaringndsdelar i trauml och restprodukter fraringn jordbruk [9] Hemicellulosa aumlr intressant urmaterialsynpunkt daring det har visat sig kunna omvandlas till plastfilm [10] Ligninet harocksaring intressanta egenskaper daring det aumlr en komplex polymer bestaringende av maringnga olikatyper av aromatiska komponenter vilka skulle kunna utgoumlra en grund foumlr biobaseradorganisk kemi [11] Foumlr dessa applikationer kraumlvs bra metoder foumlr att separera de olikakomponenterna i lignocellulosa Ligninet verkar haumlmmande i fermenteringen av cellu-losa vilket saumlnker reaktionshastighet och utbyte vid bioetanolproduktionen [12] Nu-varande separeringsmetoder fragmenterar hemicellulosan tillsammans med ligninet [11]

2 Teori

Produktion av geler och plast fraringn hemicellulosa kraumlver att tvaumlrbindning utfoumlrs [13] vilketskulle kunna undvikas om hemicellulosan kan separeras ofragmenterad Lignin kan ocksaringanvaumlndas foumlr tillverkning av geler [14] och kolfiber [15] vilket goumlr det intressant att kunnagoumlra foumlrsoumlk med intakt lignin

I detta projekt har litteraturstudier gjorts foumlr att ta fram en potentiell enzymatisk reaktions-vaumlg fraringn en bestaringndsdel i lignin till en vaumlrdefull produkt Med hjaumllp av fylogeni har aumlvenett enzym identifierats som tros kunna bryta bindningar mellan lignin och hemicellulosaEn arbetsgaringng foumlr karaktaumlrisering av detta enzym har aumlven tagits fram Utoumlver detta harfilamentoumlsa svampar fraringn naturen odlats fram paring lignin som kolkaumllla varparing en enklareidentifiering gjordes paring ett urval av dem

13 Avgraumlnsningar

Naumlr det gaumlller de enzymatiska reaktionsvaumlgarna lades fokus paring en enda slutprodukt fraringnmonolignolerna aumlven om ett flertal intressanta slutprodukter kunde identifieras Resone-manget kring detta var att mer information kring en enda slutprodukt ansaringgs mer passandeaumln mindre information om flertalet produkter Oumlvriga slutprodukter kan istaumlllet behandlas iframtida projekt Av samma anledning valdes en specifik organism E coli foumlr produktionav separationsenzym Denna organism studerades daumlrfoumlr noga och protokoll foumlr framtidalaborationer foumlr att extrahera dessa enzym gjordes enbart foumlr denna organism

Det laborativa arbetet med de ligninnedbrytande svamparna begraumlnsades till sju natur-prover Daring proven faringtt vaumlxa paring olika typer av plattor inokulerades och identifierades baraen andel av det totala antalet prov Detta gjordes daring det var troligt att flera plattor innehoumlllsamma arter och paring saring saumltt kunde upprepande identifieringar undvikas

2 Teori

Att paring ett effektivt och kontrollerat saumltt kunna separera lignin ur lignocellulosa har laumlngevarit ett problem foumlr forskare Att loumlsa problemet aumlr noumldvaumlndigt foumlr att moumljliggoumlra enzy-matisk valorisering av lignin det vill saumlga att via en enzymatisk process ta fram en vaumlrde-full produkt ur ligninet

21 Lignin

Lignin byggs upp av tre byggstenar vilka gemensamt kallas foumlr monolignoler via enradikaliseringsprocess i vaumlxtcellernas cellvaumlgg [16] De tre byggstenarna aumlr p-kumaryl-alkohol koniferylalkohol och sinapylalkohol vars strukturer visas till houmlger i Figur 21Radikaliseringsprocessen innebaumlr att var och en av monolignolerna radikalieras via olikatyper av lackas- och peroxidasenzym foumlr att sedan reagera med varandra [16] Detta

2 Teori

(Xyl)n

(Xyl)nOHO

(Xyl)n

Xyl)n(

p-kumarylalkohol

Koniferylalkohol

Sinapylalkohol

Figur 21 Ett exempel paring en ligninstruktur bunden till glucuronoxylan en typ av hemi-cellulosa samt schematiska bilder av monolignolerna α- och γ-esterbindninarna mellanlignin och glucuronatresten aumlr markerade α-esterbindningen i roumltt och γ-esterbindningeni blaringtt Figur delvis baserad paring en bild paring glucuronoxylan samt lignin fraringn databasenMetaCyc [18] och ritad i LATEX

innebaumlr att ligninsyntesen sker vaumlldigt slumpartat daring maringnga olika typer av monolignol-radikaler kan reagera med varandra foumlr att bilda stora och komplexa molekyler Till vaumlnsteri Figur 21 visas en hypotetisk molekylstruktur foumlr en saringdan molekyl Att extrahera naringgon-ting ur ligninet aumlr daumlrfoumlr svaringrt eftersom det ej aumlr ett homogent material Idag finns olikakemiska processer foumlr extraktion av lignin i sin helhet men det aumlr oklart hur den mole-kylaumlra strukturen ser ut foumlr det framtagna ligninet [17]

22 Enzym foumlr separation och valorisering av lignin

Enzym aumlr katalyserande protein som tillverkas och anvaumlnds av levande celler foumlr att effekt-ivisera metabolism biosyntes samt oumlvriga livsuppeharingllande funktioner [19] De aumlr eff-ektiva specifika och kan till skillnad fraringn kemiska katalysatorer verka vid relativt mildafoumlrharingllanden Enzym aumlr ocksaring stereospecifika vilket goumlr dem extra intressanta att utnyttjavid produktion av kirala molekyler [19] Maringnga enzym kraumlver en extern komponent en

2 Teori

saring kallad kofaktor foumlr att fungera [19] Denna kan exempelvis vara en vitamin eller enmetalljon

Det aumlr moumljligt att paring bioteknisk vaumlg modifiera enzym foumlr att paringverka deras egenskaper[19] Paring detta saumltt kan anvaumlndningsomraringdet foumlr enzymer oumlkas Att valorisera lignin medhjaumllp av enzym aumlr daumlrmed en intressant moumljlighet Ett steg paring vaumlgen aumlr att hitta reaktions-vaumlgar mellan hypotetiska ligninfragment och en saumlrskild produkt Ett exempel paring en saringdanreaktionsvaumlg presenterades av Gutman et al aringr 2014 [20] daumlr man taumlnkte sig konverterapara-xylen till tereftalsyra

Foumlr att baumlttre kunna utnyttja lignin och aumlven hemicellulosa vore det ocksaring bra att kunnaseparera dessa utan att foumlrstoumlra dess inre struktur Foumlr detta behoumlver bindningarna mellanmaterialen brytas utan att naringgra inre bindningar bryts Daring enzym ofta aumlr specifika foumlr ensorts bindning kan ett eller flera separationsenzym vara en bra loumlsning paring problemet Detsom haumlr kallas separationsenzym aumlr ett enzym som ska kunna bryta α- och γ-arylalkyl-esterbindningar mellan hemicellulosa och lignin Dessa bindningar visas i Figur 21 Nyaupptaumlckter av glucuronoylsyraesteraser har gjort att effektiv separering av lignin snartkan komma att bli moumljligt Dessa enzym aumlr mycket specifika och bryter bindningar somandra kolhydratesteraser inte bryter [21] Man har funnit att de hydrolyserar α- och γ-arylalkylesterbindningar mellan glucuronoxylan i hemicellulosa och de monolignolersom bygger upp ligninet [22] [21] [23] Glucuronoylsyraesteraserna har placerats inomfamiljen kolhydratesteraser med betaumlckningen CE15 [24]

23 Fylogenetiska traumld

Ett fylogenetiskt traumld aumlr en avbildning av slaumlktskap mellan olika organismer eller homo-loger av samma gener och proteiner Slaumlktskap visas genom att likheter mellan genomeller aminosyrasekvenser hittas Paring saring saumltt skapar fylogenin en karta oumlver evolutionaumlrafoumlraumlndringar i datan [25] Figur 22 visar en skiss av ett fylogenetiskt traumld A markeraren klad vilken bestaringr av en foumlrfader och alla organismer som haumlrstammar ur just denfoumlrfadern och B markerar grenar [25] C markerar noder eller gemensamma hypotetiska

Figur 22 En skiss av ett fylogenetiskt traumld med klad (A) gren (B) och nod (C) mark-erade Egenritad figur

2 Teori

foumlrfaumlder [26]

Det finns flera olika metoder foumlr att skapa ett fylogenetiskt traumld Gemensamt foumlr alla dessametoder aumlr att man foumlrst maringste goumlra en linjering aumlven kallat alignment av de olika sekven-serna Linjeringen studeras sedan och abnormaliteter hanteras genom exkludering ellerbeskaumlrning

De olika metoderna foumlr att utvaumlrdera slaumlktskapet baserat paring linjeringen aumlr huvudsakligenParsimoni Neighbour-joining Maximum likelihood och Bayesisk analys daumlr Maximumlikelihood aumlr den mest anvaumlnda metoden Maximum likelihood (ML) aumlr en skattning somaumlr vaumlldigt vanlig inom statisktik [25] ML klarar av att avbilda slaumlktskap aumlven daring fleramutationer kan ha skett paring samma plats [27] Som namnet antyder kommer daumlrmed MLatt producera det traumld som med houmlgst sannolikhet beskriver likheter och olikheter i sekven-serna foumlr de undersoumlkta organismerna saring att ett troligt slaumlkttraumld skapas [27] En stor foumlrdelmed ML aumlr att den aumlr robust och oftast ger mer korrekta resultat aumln Neighbour-joiningeller Parsimoni [27] Dock tar metoden laumlngre tid eftersom den aumlr mycket beraumlknings-intensiv Foumlr mindre set av data inneharingllande cirka 20 sekvenser aumlr dagens datorer dockmer aumln tillraumlckligt snabba foumlr att konsekvent anvaumlnda ML

Naumlr ett traumld har konstruerats aumlr det oftast intressant att se hur robust traumldet aumlr foumlr att saumlker-staumllla att resultatet inte aumlr en slump Ett vanligt saumltt att testa det aumlr genom bootstrappingBootstrapping bygger paring att nya traumld konstrueras ur stickprov fraringn maumlngden sekvenser

Figur 23 Exempel paring cutoff och kollaps med cutoff-vaumlrde paring 60 Alla noder medbootstrapvaumlrde under 60 har kollapsats Egenritad bild

[27] Stickprovet goumlrs med aringterlaumlggning vilket goumlr det moumljligt att vissa sekvenser vaumlljsflera garingnger eller inte vaumlljs alls Efter att cirka 100 traumld har konstruerats paring detta saumltt raumlknashur maringnga garingnger traumlden inneharingller de olika kladerna fraringn originaltraumldet Detta uttryckssedan som en procentsats som kallas bootstrapvaumlrde [27] Ett traumld kan daring reduceras tillbara de statistiskt vaumll underbyggda noderna se Figur 23 daumlr man har tagit bort alla nodersom inte dyker upp i en viss maumlngd av traumlden Detta kallas att man kollapsar traumldet Detbootstrapvaumlrde noden behoumlver ha foumlr att inkluderas kallas cutoff-vaumlrde [27]

2 Teori

24 Ligninnedbrytande svampar

De filamentoumlsa svampar som kan bryta ner trauml och daumlrmed maringste hantera lignin paring naringgotsaumltt delas in i tre grupper brunroumlte- vitroumlte- och mjukroumltesvampar [28] Brunroumlte- ochmjukroumltesvamparna aumlr mer specificerade paring att bryta ned cellulosa och hemicellulosamedan de endast modifierar ligninet [28] Naumlr det kommer till nedbrytning av lignin aumlrvitroumltessvamparna av intresse

Vitroumltesvamparna tillhoumlr divisionen basidiesvampar (Basidiomycota) och aumlr tillsammansmed vissa bakterier de organismer man kaumlnner till som kan bryta ned lignin till kol-dioxid vatten och andra mindre molekyler [28] Foumlr att kunna bryta ned lignin anvaumlndersig vitroumltesvamparna av extracellulaumlra oxiderande enzym lackaser och peroxidaser [28]Svamparna kan inte vaumlxa paring lignin som enda kolkaumllla utan bryter troligen ner ligninet foumlratt komma aringt cellulosan och hemicellulosan [28] Foumlrsoumlk har gjorts daumlr man odlat uppsvampar fraringn skandinaviska jordprover extraherat deras enzym och lyckats visa att dessakan bryta ned lignin till mindre fragment [29]

Naumlr det kommer till identifiering av svampar brukar spormorfologi det vill saumlga hursvampens sporer vaumlxer och ser ut ge en god indikation paring vilken art vilket slaumlkte elleraringtminstone vilket fylum svampen tillhoumlr Zygomyceter aumlr ett fylum av svampar som vaumlxersnabbt paring agarplattor i rumstemperatur och kan paring 2-3 dagar taumlcka hela plattan med sittljusa fluffiga sockervaddsliknande mycel [30] Deras sporer kallas sporangium och serut som smaring svarta sfaumlrer vilka sitter placerade laumlngst ut paring hyferna de celltraringdar somtillsammans bildar mycelet Varje sporangium inneharingller hundratals haploida sporer

En annan vanligt foumlrekommande fylum aumlr Ascomyceter [30] aumlven kallat sporsaumlcksvamparHit houmlr de vanligt foumlrekommande slaumlktena Trichoderma Penicillium och Alternaria Tri-choderma karakteriseras av att dess konidioforer de celltraringdar hos svampar som baumlr a-sexuella sporer [30] aumlr kraftigt grenade [30] Slaumlktet Penicillium karakteriseras av sinaasexuella sporer aumlven kallade konidiosporer vilka ser ut som borstar [30] medan Alter-naria karakteriseras av dess droppformade sporer vilka sitter paring rad som ett paumlrlband [30]Sporerna hos Alternaria aumlr uppdelade i flera avdelningar som skiljs aringt av skiljevaumlggar vilkakallas septa [31] Dessa kan skilja cellerna aringt paring horisontellt led eller baringde horisontellt ochvertikalt led

Foumlr att foumlrstaring hur vaumll en svamp vaumlxer paring ett media undersoumlks kolonins diameter ochdensitet samt dess sporulering1 En svamp som vaumlxer paring ett rikt media producerar oftastmycel foumlrst och sedan sporer Dessa svampar blir ofta stora och fluffiga med mycketmycel Naumlr de vaumlxer paring naumlringsfattigt media bildas det inte lika kraftigt mycel men sporerkan fortfarande bildas Foumlr att hyfer ska vaumlxa kraumlvs enbart vatten Hyferna vaumlxer daring ihopp om att hitta naumlring och sporer bildas som oumlverlevnadsmekanism Detta innebaumlr attsvamparna trots brist paring kolkaumllla kan vaumlxa och sporulera

1Personlig kommunikation med Sylvia Klaubauf

3 Metod

Foumlljande avsnitt behandlar arbetet som skett under projektets garingng Foumlr framtagning aven potentiell reaktionsvaumlg och en planering foumlr fortsatta studier kring separationsenzymutfoumlrdes fraumlmst litteraturstudier och databassoumlkningar medan odling och identifiering avsvampar innebar laborativt arbete

31 Enzymatiska reaktionsvaumlgar

Som laumlmplig produkt att ta fram ur lignin eftersoumlktes en kiral aromatisk molekyl Foumlratt hitta foumlrslag till produkt gjordes struktursoumlkningar i databaserna Chemspider [32]Chemicals Data Base [33] och SciFinder [34] Soumlkningarna utgick fraringn bensenringarsamt strukturer som liknade monolignolerna Aumlven listor av aromatiska molekyler genom-soumlktes Moumljliga produkter rangordnades efter anvaumlndningsomraringde och potential att hittaen marknad att saumllja produkten paring

Efter konsultation med handledare bestaumlmdes det att gruppen skulle ta fram en reaktions-vaumlg fraringn koniferylalkohol till L-dopa vidare till adrenalin Foumlr att hitta enzym som kata-lyserar noumldvaumlndiga reaktioner mellan koniferylalkohol och L-dopa anvaumlndes databasernaKegg [35] och Brenda [36] Foumlr reaktioner mellan L-dopa och adrenalin gjordes litteratur-studier foumlr att undersoumlka huruvida steg ur biosyntesen av adrenalin i maumlnniska kan an-vaumlndas foumlr produktion av adrenalin i Saccharomyces cerevisiae Homologisoumlkningar foumlrdessa enzym gjordes med BLAST-algoritmen foumlr proteiner genom databasen NCBI [37]foumlr att undersoumlka om liknande enzym finns i slaumlktet Saccharomyces

32 Separationsenzym

Arbetet boumlrjade med homologisoumlkningar mot karataumlriserade eukaryotiska enzym paring CAZy[24] samt de enzym som var karaktaumlriserade i artikeln rdquoFunctional expression of a thermo-philic glucuronoyl esterase from Sporotrichum thermophile identification of the nucleo-philic serinerdquo [38] Homologisoumlkningarna utfoumlrdes med hjaumllp av BLAST-algoritmen gent-emot databasen NCBI [37] Med hjaumllp av BLAST-soumlkningarna byggdes ett bibliotekav liknande och foumlrhoppningsvis naumlrbeslaumlktade enzymer Dessa sekvenser linjaumlriseradessedan i programmet MEGA via algoritmen MUSCLE [39] och fylogenetiska traumld konstru-erades se Figur 45 och 46 Traumlden konstruerades med Maximum likelihood som al-goritm bootstrap med 500 iterationer och ett cutoff-vaumlrde paring 60 Utifraringn de fylogene-tiska traumlden samt diskussioner med handledare valdes att garing vidare med ett hypotetisktprotein DICSQDRAFT_107426 fraringn organismen Dichomitus squalens

Naumlr enzymet valts utvaumlrderades olika organismer och vektorer som kan anvaumlndas foumlr attuttrycka det Efter diskussion med handledare valdes Escherichia coli som organism foumlratt oumlveruttrycka enzymet i och ett passande media foumlr att odla E coli valdes ut En vektorfoumlr proteinuttryck med hjaumllp av T7lac-systemet i E coli erharingllen av Joakim Norbeck

3 Metod

utvaumlrderades Utoumlver uttrycket av proteinet planerades aumlven foumlrsoumlk foumlr karakterisering avenzymet

Protokoll och tillvaumlgagaringngssaumltt foumlr transformation och karakterisering sammanstaumllldestillsammans med recept foumlr de olika media och reagens som kraumlvs Informationen in-haumlmtades fraringn litteraturstudier och direkt kontakt med forskare paring institutionen foumlr Bio-logi och Bioteknik Plasmiden lades in i SnapGene [40] foumlr att underlaumltta konstruktion avprimers

Foumlr att undersoumlka enzymets kinetik kraumlvs ett reagens som ger en tydlig signal daring α- ochγ-arylalkylesterbindningar markerade i Figur 21 bryts av enzymet Artiklar om liknandefoumlrsoumlk med de redan karakteriserade enzymen studerades eftersom det aumlr rimligt attsamma reagens kan anvaumlndas foumlr detta enzym daring det foumlrvaumlntas ha samma funktion

Foumlr att hitta svampar som kan tillgodogoumlra sig lignin odlades insamlade prover fraringnomraringdet kring Chalmers Johanneberg samt prover erharingllna fraringn handledare paring olika lignin-inneharingllande media Foumlr oumlkad chans att hitta intressanta svampar skedde odling i olikatemperatur samt anaerobt respektive aerobt Identifiering utfoumlrdes med hjaumllp av spor-morfologi

331 Insamling av prover

Prover haumlmtades i ett groumlnomraringde (5741rsquo49rdquo N 1158rsquo32rdquo Ouml) i naumlrheten av Goumltabergs-gatan i Goumlteborg den 2a mars 2015 Prover togs av torr bark vitroumlta fuktigt trauml en tickasamt fuktig jord Torra prover foumlrvarades i kuvert och fuktiga prover i 50 ml falconroumlr irumstemperatur oumlver natten Loumlvprover och svampprover erhoumllls ocksaring fraringn handledareSylvia Klaubauf

332 Agarplattor

Proverna odlades paring plattor med lignin som fraumlmsta kolkaumllla foumlr att undersoumlka derasfoumlrmaringga att tillgodogoumlra sig ligninet Tre sorters lignin anvaumlndes Lignoboost (LiB) Sigma-Aldrich Lignin kraft alkali (AL) samt Sigma-Aldrich Lignin alkali low sulfonate (ALLS)Daring foumlrsoumlket kretsar kring att hitta svampar som kan tillgodogoumlra sig lignin tillsattes ampi-cillin till alla plattor foumlr att foumlrhindra bakterietillvaumlxt Ligninplattorna goumlts enligt protokolli Bilaga A

Som negativ kontroll anvaumlndes agarplattor som goumlts enligt protokoll i Bilaga A dock utantillsats av lignin Agarn som plattorna bestaringr av kan potentiellt utnyttjas som kolkaumllla Dennegativa kontrollen anvaumlndes daumlrfoumlr foumlr att undersoumlka om det finns naringgon skillnad i tillvaumlxt

3 Metod

paring plattor utan respektive med lignin Foumlr att verifiera att det finns viabla mikroorganismerodlas aumlven prov paring plattor med potatisextrakt- och dextrosagar (PDA) som en positivkontroll Dessa goumlts enligt protokoll i Bilaga B Nya plattor gjordes infoumlr foumlrsta utstryketsamt infoumlr inokulering av renstrykta prov

Foumlr uppodling av utstryk anvaumlndes glukosplattor samt Yeast Peptone Dextrose-plattor(YPD-plattor) YPD-plattorna erhoumllls av handledare Sylvia Klaubauf och innehoumlll inteantibiotika Glukosplattorna goumlts enligt Bilaga A dock utan lignin med tillsats av glukostill 25 mM efter autoklavering Dessa plattor anvaumlndes aumlven vid utvaumlrdering av svamparsfoumlrmaringga att vaumlxa paring lignin

333 Odlingsbetingelser

Foumlr att oumlka sannolikheten att hitta intressanta svampar odlades proven under flera olikabetingelser Lignin- och PDA-plattor odlades i rumstemperatur respektive 30degC samtaerobt respektive anaerobt Paring grund av begraumlnsad moumljlighet att odla anaerobt prioriteradesodling paring PDA-plattor oumlver ligninplattor i anaeroba betingelser daring proverna foumlrvaumlntadesvaumlxa baumlttre paring dessa Enstaka ligninplattor odlades i anaeroba foumlrharingllanden Av dessavaldes plattor med prover som rimligtvis skulle kunna inneharinglla svamp som kan vaumlxaanaerobt

334 Utstryk av prover

En spaumldningsserie gjordes av jordprovet 1g jord i 10 ml MQ-vatten blev spaumldning 1xUr denna loumlsning gjordes aumlven spaumldning 10x 100x och 1000x Spaumldning 10x och 100xanvaumlndes till odling paring ligninplattorna medan spaumldning 100x och 1000x anvaumlndes tillPDA-plattorna 10 microl loumlsning stroumlks ut paring varje platta

Bark- loumlv- och traumlprov smulades soumlnder medan oumlvriga prov hackades Proven placeradesutspritt paring lignin- och PDA-plattorna Provets yta steriliserades i 70 etanol innan deplacerades paring PDA-plattorna Daring kolonibildning och sporulering syntes paring plattorna foumlr-seglades de med parafilm och flyttades till kylrum tills dess renstryk skulle ske

335 Renstryk av kolonier

Av 84 aeroba plattor renstroumlks totalt 33 De med tydligast kolonier och sporer valdes foumlrrenstryk paring glukos medan resten stroumlks paring YPD I de fall sporer syntes skedde renstrykmed en ympnaringl I andra fall skars tre bitar av kolonier ut med skalpell och placeradesparing en ny platta Foumlr alla prover kraumlvdes tvaring renstryk daumlr alla renstryk i andra omgaringngenskedde paring PDA foumlr att faring fram rena kulturer som kunde inokuleras Foumlr tvaring prov kraumlvdesytterligare ett renstryk paring PDA

4 Resultat

336 Inokulering av renstrykta kolonier

Av de renstrykta plattorna valdes 23 stycken vilka ansaringgs ha god tillvaumlxt tydlig spor-ulering och rena kolonier det vill saumlga kolonier som inte bestod av flera arter 3-5 mlvatten tillsattes till de renstrykta plattorna och med hjaumllp av en rackla suspenderadessporer i vattnet 1 ml av suspensionen oumlverfoumlrdes med pipett till ett Eppendorfroumlr Fraringndetta Eppedorfroumlr pipetterades sedan 5 microl upp och placerades som en droppe i en av defem nytillverkade plattorna med olika foumlrharingllanden Fraringn varje renstrykt koloni placeradestre droppar paring varje typ av ligninplatta samt glukos- och agarplatta Plattorna placeradesi laringdor i rumstemperatur Naumlr tillraumlcklig tillvaumlxt skett flyttades plattorna till kylrum Slut-ligen jaumlmfoumlrdes svamparnas tillvaumlxt paring glukos agar och lignin

337 Identifiering av svampar

Som sista steg identifieras naringgra av de olika typerna av svampar De som saringg mest olika utoch visat naringgon tillvaumlxt paring ligninplattorna valdes foumlr identifiering Ett litet prov av spor-ulerande koloni blandades i en droppe mjoumllksyra och observerades i mikroskop Provenslaumlktbestaumlmdes med hjaumllp av boken Food and Indoor Fungi av Samson et al [30] Deidentifierade svamparna sparades i glycerol i -80C

4 Resultat

I detta avsnitt presenteras resultaten av de litteratur- och databassoumlkningar som gjordesinom arbetet med enzymatiska reaktionsvaumlgar och separationsenzym samt det praktiskaarbetet som gjorts foumlr att hitta ligninnedbrytande svampar

I denna del av projektet gjordes litteratursoumlkningar foumlr att finna en enzymatisk reaktions-vaumlg fraringn en monolignol till laumlmpliga produkter Startmolekylen valdes till koniferylalkoholprodukterna valdes till L-dopa samt adrenalin och en reaktionsvaumlg mellan start- och slut-produkt foumlreslogs vilken presenteras i detta avsnitt

411 L-dopa och adrenalin

Som laumlmpliga produkter att ta fram ur lignin valdes L-dopa och adrenalin De aumlr baringdaetablerade laumlkemedelssubstaner inom sjukvaringrden och borde saringledes vara relevanta foumlrproduktion aumlven paring laringng sikt Initialt granskades aumlven de potentiella laumlkemedlen apocyanin

4 Resultat

och gingerol [41] [42] [43] smakaumlmnet etylvanillin samt den redan kaumlnda laumlkemedels-substansen paracetamol Dessa valdes dock bort foumlr att de ansaringgs vara svaringra att modifieraalternativt inte lika efterstraumlvansvaumlrda som molekyler

L-dopa aumlr en intermediaumlr i maumlnniskans biosyntes av dopamin och adrenalin [44] Detanvaumlnds som behandling mot Parkinsons sjukdom vilken orsakar en brist av dopamin ihjaumlrnan Behandling med L-dopa sker kontinuerligt och kan ge naringgra aringrs foumlrdroumljning avsjukdomssymptomen [44] Aringr 2004 uppgavs produktionen av L-dopa vara 250 ton per aringrvarav 50 producerades via en dyr och laringngsam kemisk process [45] [46] Det kan daumlrfoumlrvara av intresse att ta fram en enzymatisk tillverkning av L-dopa

Adrenalin ges via injektion foumlr behandling av anafylaxi en ploumltslig och potentiellt doumldligallergisk reaktion vanligen mot mat eller insektsstick [47] [48] [49] Det foumlrhindrar akutasymptom genom att vidga luftroumlr och foumlrhindra utslaumlpp av inflammationsorsakande aumlmnensom histamin och tryptas [47] [49]

412 Konvertering av koniferylalkohol till L-dopa

Koniferylalkohol eller 4-(3-hydroxi-1-propenyl)-2-metoxifenol visas i Figur 21 Foumlr attkonvertera denna molekyl till L-dopa kraumlvs en rad foumlraumlndringar som var och en kata-lyseras av ett laumlmpligt enzym I Figur 41 redovisas hela den taumlnkta reaktionsvaumlgen fraringnkoniferylalkhohol till adrenalin via L-dopa

Foumlrst modifieras koniferylalkoholens kolsvans Koniferylalkoholdehydrogenas (EC 111194) [50] kan konvertera koniferylalkohol till koniferylaldehyd genom att oxidera alkohol-gruppen paring koniferylalkoholens kolkedjesvans till en aldehyd Daumlrefter kan aldehydenkonverteras med hjaumllp av koniferylaldehyddehydrogenas (EC 12168) [51] som oxiderarmolekylen vidare till en karboxylsyra vid namn ferulasyra

Efter detta kraumlvs en aminering addition av en amingrupp oumlver dubbelbindningen hosferulasyra Foumlr denna reaktion hittades tvaring enzym som tros kunna utfoumlra amineringenReaktionerna dessa enzym katalyserar syns i Figur 42 L-aspartat ammoniaklyas (EC4311) [52] utfoumlr en deaminering av L-aspartat foumlr att bilda fumarat och ammoniak Denandra L-histidin ammoniaklyas (EC 4313) [53] utfoumlr en deaminering av L-histidin foumlratt bilda urokansyra och ammoniak Av dessa tvaring valdes L-histidin ammoniaklyas till denkonstruerade reaktionsvaumlgen daring urokansyrans ringstruktur goumlr den mer lik ferulasyra Denenzymatiska reaktionen foumlr L-histidin ammoniaklyas aumlr reversibel [54] vilket aumlr positivteftersom den omvaumlnda reaktionen aumlr oumlnskvaumlrd i detta fall Paring saring saumltt skulle den taumlnktaamineringen eventuellt kunna utfoumlras

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Figur 42 Reaktioner som katalyseras av L-aspartat ammoniaklyas respektive L-histidinammoniaklyas Figur ritad i LATEX

Slutligen byts metoxigruppen paring kol 2 hos koniferylalkohol mot en hydroxidgrupp Choris-matas (EC 33213) kan hydrolysera en eterbindning mellan en aromatisk molekyl ochpyruvat [55] Detta enzym skulle eventuellt kunna utfoumlra den oumlnskade demetyleringen

413 Konvertering av L-dopa till adrenalin

Reaktionsvaumlgen som presenteras i detta avsnitt bestaringr av de tre sista enzymen maumlnniskansbiosyntes av adrenalin Homologisoumlkningarna som gjordes foumlr de tre enzymen resulteradei saring laringga vaumlrden att ingen av dem kan antas ha naringgra homologa sekvenser i slaumlktet Saccha-romyces Daumlrfoumlr boumlr enzym fraringn maumlnniska anvaumlndas foumlr att utfoumlra reaktionerna

Det foumlrsta steget aumlr en dekarboxylering av L-dopa foumlr att bilda dopamin Detta skervia enzymet L-dopa dekarboxylas (EC 41128) [56] Det andra steget aumlr en hydroxy-lering av dopamin foumlr att bilda noradrenalin med enzymet dopamin-β-hydroxylas (EC114171) Reaktionen kraumlver tillgaringng till syre och askorbinsyra [57] Saccharomycescerevisiae producerar inte sjaumllv askorbinsyra men har en reaktionsvaumlg foumlr att produceraett liknande aumlmne D-erytroaskorbinsyra [58] vars struktur visas i Figur 43

Askorbinsyra

D-erytroaskorbinsyra

Figur 43 Askorbinsyra vilket behoumlvs foumlr maumlnniskans biosyntes av adrenalin och D-erytroaskorbinsyra vilket produceras i Saccharomyces cerevisiae Figur ritad i LATEX

Produktionen av D-erytroaskorbinsyra i S cerevisiae liknar vaumlxters produktion av askorbin-syra Studier har visat att S cerevisiae kan ta upp L-galaktos ur loumlsning och omvandladenna till askorbinsyra via enzymen som deltar i produktion av D-erytroaskorbinsyra [58][59] [60] Oumlveruttryck av tvaring enzym fraringn Saccharomyces D-arabinosdehydrogenas (EC111117) och D-arabinono-14-laktonoxidas (EC 11337) foumlrstaumlrker dess foumlrmaringga attproducera askorbinsyra [58]

Den tredje reaktionen metylering av kvaumlvet katalyseras av fenyletanolamin-N-metyl-

4 Resultat

transferas (PNMT) (EC 21128) och kraumlver S-adenosylmetionin (SAM) [61] SAM finnsnaturligt i Saccharomyces och kan ansamlas i cellen vid behov En modifierad stamSCY4 kunde ackumulera mer aumln 100 garingnger saring mycket SAM som omodifierad Saccha-romyces [62]

42 Separationsenzym

Foumlr att kunna identifiera ett nytt potentiellt glucuronoylsyraesteras gjordes homologi-soumlkningar mot redan kaumlnda saringdana Signifikant homologa sekvenser anvaumlndes sedan foumlratt producera fylogenetiska traumld Detta med avsikt att faring en ide om vilka enzym som varmest lika de redan karakteriserade enzymen och daumlrmed faring en utgaringngspunkt foumlr att kunnavaumllja ett enzym foumlr fortsatta studier Naumlr sekvenserna linjerades blev det tydligt att fleradelar var konserverade hos enzymen vilket talar foumlr att de boumlr ha liknande funktion

Resultatet av de fylogenetiska studierna se Figur 45 och 46 visar att alla vitroumltesvamparsamlar sig i samma klad Det framgaringr i baringda traumld att dessa enzym aumlr vaumlldigt naumlrbeslaumlktadeDet moumlrkgroumlnt markerade enzymet finns i en svamp som i huvudsak vaumlxer paring barrtraumldmedan de ljusgroumlnt markerade enzymen finns i svampar som huvudsakligen vaumlxer paringloumlvtraumld [63] Det moumlrkgroumlnt markerade enzymet fraringn Dichomitus squalens valdes ut foumlrfortsatta studier

Paring handledares inraringdan kommer uttrycket planeras foumlr E coli Fraringn Joakim Norbeckerhoumllls sekvensen foumlr en plasmid pbluescript_KS+_variant_LacI_LacO (haumldanefter pBlue-script) som anvaumlnder T7lac-systemet Sekvensen foumlr enzymet med en tillsatt 6xHis-taghar kodonoptimerats foumlr E coli En karta oumlver plasmiden och genen finns i Figur 44

Figur 44 Plasmiden pBluescript med insert (GE) Bild gjord i SnapGene

4 Resultat

Protokoll foumlr uttryck och karaktaumlrisering av enzymet fraringn D squalens har konstruerats ochsamlats Protokoll foumlr beredning av media foumlr odling av E coli finns i Bilaga C Upplaumlggetav protokollen foumlrutsaumltter att genen foumlr enzymet bestaumllls Det planerade foumlrsoumlket boumlrjarmed PCR-amplifiering av genen med primrarna 5rsquo-ATCGCATCGGATCTAGTCTAGA-CGA-3rsquo (uppstroumlms) samt 5rsquo-CGATGCCTAGCAGCTGATAGTGAA-3rsquo (nedstroumlms) en-ligt Bilaga D Detta foumlljs av restriktion av plasmid och amplifierad gen med XbaI ochEcoRI enligt Bilaga E och en gelelektrofores enligt Bilaga F foumlr att rena upp DNA ochbekraumlfta att korrekt PCR och restriktion skett

Figur 45 Fylogenetiskt traumld framtaget i MEGA med 60 cutoff Redan karakteriseradeenzym aumlr markerade i blaringtt enzym fraringn vitroumltessvampar som vaumlxer huvudsakligen paringloumlvtraumld aumlr markerade i ljusgroumlnt och enzym fraringn vitroumltesvampar som vaumlxer huvudsakligenparing barrtraumld aumlr markerade i moumlrkgroumlnt

Efter extraktion och upprening av vektor och plasmid fraringn gel enligt Bilaga G ligeras demed T4 DNA Ligas se Bilaga H Daumlrefter transformeras E coli med hjaumllp av vaumlrmechockenligt Bilaga I Proteinet uttrycks sedan genom att cellerna odlas i naumlrvaro av IPTG se

4 Resultat

Bilaga J och skoumlrdande av enzymet sker via lysering och rening med 6xHis-tag-systemenligt Bilaga K Med hjaumllp av en SDS-PAGE och Bradfordanalys kan sedan enzymetsmassa respektive koncentration bestaumlmmas se Bilaga L och M

Enzymets aktivitet kommer sedan bestaumlmmas med hjaumllp av en bensyl-D-glucuronat-assayenligt Bilaga N Hydrolys av esterbindningen i aumlmnet av ett glucuronoylsyraesteras bildarfenol som sedan kan detekteras med hjaumllp av kromatografi

Oumlverlag skedde maringttlig till god tillvaumlxt paring naumlstan alla aeroba initiala plattor Ingen tillvaumlxtuppvisades paring de anaeroba plattorna Av de kolonier som renstroumlks ansaringgs flertalet vara avsamma art och sex stycken identifierades Vid identifikationen faststaumllldes det att svam-parna var av slaumlktena Penicillium Trichoderma och Alternaria samt fylumet Zygomycota

431 Uppodling av svampar

Av de 23 prover som inokulerades paring glukos- lignin- och agarplattorna uppvisades till-vaumlxt paring 110 av de totalt 115 plattorna se Bilaga O och P Det uppvisades en baumlttre tillvaumlxtav svamparna paring glukosplattorna jaumlmfoumlrt med baringde agarplattorna och de olika lignin-plattorna se till exempel Figur P1 i Bilaga P Naringgra plattor uppvisade ingen tillvaumlxt somi Figur P10 men de flesta sorters svampar uppvisade baumlttre tillvaumlxt paring ligninplattorna aumlnparing agarplattorna se till exempel Figur P19 De enda prov som verkade vaumlxa baumlttre paringagarplattorna aumln paring ligninplattorna var 18 och 31 se Figur P15 och Figur P23 Detta aumlraumlven mer utfoumlrligt beskrivet i Bilaga O

4 Resultat

1 Kolonin var beige i mitten med groumlna kanter De var15-2 cm i diameter Kolonin var platt men mycelet hadeen houmljd i mitten paring 3-4 mm Den hade taumltt mycel ochtydliga sporuleringsborstar Svampen identifierades somtillhoumlrande slaumlktet Penicillium

2 Kolonierna var ljusgula med svarta prickar De var 3-4cm i diameter och mycelet var mycket fluffigt Sporernasatt paring hyferna Svampen identifierandes som tillhoumlrandefylumet Zygomyceter

4 Kolonierna var transparenta i mitten och hade en gulytterkant med naringgra gula flaumlckar Diametern hos koloni-erna var ungefaumlr 4 cm och de hade ett platt och ganska taumlttmycel Svampen sporulerade i kluster och i mikroskaringpetkunde man se som traumldgrenar hos mycelet Svampenidentifierades som tillhoumlrande slaumlktet Tricoderma

5 Kolonierna var blaringgroumlna med vit mitt och ytterkanttaumlckta av mycel Kolonierna var ungefaumlr 15 cm i diameteroch mycelet i mitten var tydligt houmlgre aumln resten cirka 4mm jaumlmfoumlrt med 2 mm Sporerna var formade som borstaroch svampen identifierades som tillhoumlrande slaumlktet Peni-cillium

6 Kolonierna var ljust beige med vit mitt Diameternhos kolonierna var 25-3 cm och mycelet var vaumlldigtplatt Sporerna satt paring tunna hyfer och var formade somborstar Svampen identifierades som tillhoumlrande slaumlktetPenicillium

123 Kolonierna var ljust beigerosa och diametern varcirka 3 cm Mycelet var laumltt fluffigt och inte saring taumlttSporerna var droppformade med horisontella och verti-kala septa Svampen identifierades som tillhoumlrande slaumlktetAlternaria

5 Diskussion

I detta avsnitt diskuteras varfoumlr reaktionsvaumlgen fraringn lignin till adrenalin via L-dopa aumlr avintresse varfoumlr Dichomitus squalens valdes vilka foumlr- och nackdelar det finns med attanvaumlnda E coli i de planerade foumlrsoumlken samt vad tillvaumlxten paring de olika plattorna saumlger ossom svamparna

Valet av L-dopa och adrenalin som slutprodukter gjordes av flera skaumll Till att boumlrja medansaringgs de vara goda kandidater eftersom molekylerna aumlr naringgorlunda lika monolignolenkoniferylalkohol samt att de aumlr kirala molekyler Detta goumlr dem intressanta foumlr mikrobiellproduktion eftersom enzym aumlr kiralt specifika Dessutom tros efterfraringgan paring dessa mole-kyler oumlka i framtiden vilket goumlr dem intressanta att ta fram genom metoder som skiljer sigfraringn den traditionella laringngsamma och dyra kemiska framstaumlllningen [45] Med en aringldrandebefolkning i Sverige och resten av Europa [64] [65] aumlr det rimligt att anta att fler personerriskerar att insjukna i Parkinsons sjukdom vilket skulle innebaumlra en oumlkad efterfraringgan paringL-dopa Det finns aumlven forskning som pekar paring att fler personer blir allergiska [66] [67]vilket innebaumlr att efterfraringgan paring adrenalinsprutor med stor sannolikhet kommer att oumlka

Som startmolekyl i reaktionsvaumlgen har monolignolen koniferylalkohol valts Detta innebaumlratt reaktionsvaumlgen inte kan utfoumlras i dagslaumlget eftersom extraktion av specifika struktureraumln mindre omaumlttade monolignoler ur lignin aumlnnu inte aumlr moumljligt En monolignol ansaringgsaumlndaring vara en rimlig utgaringngsmolekyl daring det aumlr en struktur som alltid foumlrekommer i lignin inaringgon form

Foumlr oumlkad kontroll kan det vara oumlnskvaumlrt att utfoumlra reaktionsvaumlgen i ett cellysat Haumlr skulleolika organismer kunna testas foumlr korrekt uttryck av de enzym som behoumlvs Haumlr kan ocksaringhoumlg produktion av protein kunna prioriteras oumlver robusthet hos mikroorganismen Dettakan dock vara svaringrt i syntesen av adrenalin daring dessa reaktioner kraumlver tillsats av meta-boliter I detta fall kunde det vara enklare att laringta reaktionerna ske i levande celler

Foumlr syntes av adrenalin har S cerevisiae undersoumlkts som laumlmplig organism eftersom denaumlr robust och kan ansamla houmlga koncentrationer av baringde SAM [62] och L-askorbinsyraintracellulaumlrt [58] [59] [60] Tyvaumlrr saknas tidigare studier kring uttryck av biosyntes-enzymen DOPA-dekarboxylas DBH och PMNT i S cerevisiae och homologisoumlkningarefter dem hos S cerevisiae gav inga lovande resultat Detta innebaumlr att enzym fraringn maumlnn-iska behoumlver uttryckas i S cerevisiae vilket kan innebaumlra problem med veckning ochposttranslationella modifikationer Det skulle kunna vara intressant att vidare undersoumlkamoumljligheterna med att uttrycka dessa enzym i naringgon annan vaumlrdorganism exempelvisPichia pastoris

Syntesen av L-dopa behoumlver ocksaring studeras innan reaktionsvaumlgen garingr att implementeraChorismatas avlaumlgsnar vanligtvis en pyruvat fraringn en kolring istaumlllet foumlr en metoxigruppvilket aumlr foumlreslaget i reaktionsvaumlgen Detta enzym kan behoumlva modifieras foumlr att kunna

5 Diskussion

utfoumlra denna reaktion Aumlven L-histidin ammoniaklyas kan behoumlva modifieras daring den rea-gerar med L-histidin snarare aumln ferulasyra Skillnaden mellan dessa tvaring molekyler aumlrdock relativt liten och det aumlr moumljligt att enzymet fungerar utan modifikation Ordningeni vilken chorismatas och L-histidin ammoniaklyas boumlr anvaumlndas kan diskuteras Det aumlrsvaringrt att avgoumlra laumlmpligast ordning utifraringn teorin och det boumlr daumlrfoumlr snarare undersoumlkaslaborativt Daumlremot aumlr det av stoumlrsta vikt att baringde amineringen och demetyleringen skerefter att koniferylalkholen oxiderats till ferulasyra Detta eftersom koniferylalkohol ochkoniferylaldehyd aumlr de naturliga substraten till respektive oxiderande enzym varfoumlr dessareaktioner boumlr ske foumlrst

52 Separationsenzym

Fylogenetiska traumld gjordes med Maximum likelihood Traumlden kan anses vara paringlitligamen det aumlr moumljligt att annorlunda resultat erharingllits om en annan metod anvaumlnts De gene-rerade traumlden ansaringgs vara rimliga eftersom alla vitroumltessvampar hamnat i samma kladoch de flesta vaumlrden var goda De fylogenetiska traumlden pekade dock inte entydigt mot attett specifikt enzym vore mest laumlmpligt foumlr fortsatta studier Daumlrfoumlr undersoumlktes organis-mernas egenskaper foumlr att laumlttare kunna vaumllja en laumlmplig kandidat D squalens brukar tillskillnad fraringn de andra vitroumltesvamparna vaumlxa paring barrtraumld [63] vilket goumlr den intressantfoumlr svensk industri daumlr den huvudsakliga tillgaringngen till lignocellulosa kommer fraringn justbarrtraumld [68]

Problem kan uppstaring om genen amplifieras ur D squalens och sedan inte uttrycks i ennaumlrbeslaumlktad organism Daumlrfoumlr valde vi att utgaring fraringn att genen bestaumllls eftersom den daring garingratt kodonoptimera Vi loumlser daring problemet med att E coli inte kan hantera gener inneharingll-ande introner eftersom man kan utesluta intronerna i den bestaumlllda genen Kostnaden foumlratt bestaumllla syntetiska gener har sjunkit kraftigt de senaste aringren och aumlr nu nere kring 5000kronor foumlr en gen av varingr storlek [69] Det aumlr alltsaring inte orimligt att bestaumllla den Naumlr viuttrycker genen i E coli finns aumlndaring risken att den inte uttrycks korrekt eftersom posttrans-lationell modifikation fungerar annorlunda i E coli Daumlremot kan E coli snabbt producerastora maumlngder av enzymet med hjaumllp av T7lac-systemet Generellt kan alla plasmidermed detta system anvaumlndas foumlr foumlrsoumlket Vi valde dock att planera utifraringn att pBluescript-plasmiden eftersom den finns tillgaumlnglig foumlr oss Det finns risk att icke-kommersiellaplasmider fungerar saumlmre men daring pBluescript aumlr etablerad paring Chalmers har vi anledningatt tro att den aumlr laumlmplig foumlr det planerade arbetet

6xHis-tag-rening aumlr en snabb och enkel metod foumlr att rena protein daumlr sex stycken histidin islutet av proteinet fungerar som reningsmarkoumlr men markoumlren kan ha effekt paring proteinetsfunktion Om N-terminalen aumlr viktig foumlr proteinets katalytiska foumlrmaringga kan den foumlraumlndraeller foumlrstoumlra enzymets funktion Vad vi har sett i arbetet med fylogenin aumlr att de bevaradesekvenserna aumlr laumlngre in i enzymet och vi tror alltsaring inte att reningsmarkoumlren kommervara i vaumlgen

Alla svampar utom tvaring visade en baumlttre tillvaumlxt paring ligninplattorna i jaumlmfoumlrelse med dennegativa kontrollen se Bilaga O och P vilket innebaumlr att de med stor sannolikhet kanutnyttja ligninet som kolkaumllla Dock kan det finnas sparingr av andra kolkaumlllor i ligninpulvretsom anvaumlndes foumlr att gjuta plattor Detta innebaumlr att vi inte saumlkert kan saumlga att svamparnavaumlxt enbart paring lignin Att vidare undersoumlka dessa svampar genom att ta fram cellysatoch undersoumlka vilka enzym dessa kan taumlnkas inneharinglla aumlr oumlnskvaumlrt foumlr att identifiera nyaenzym med intressanta egenskaper

De tvaring svamparterna som vaumlxte baumlttre paring den negativa kontrollen kan ses i Figur P15 ochP23 i Bilaga P Troligtvis har ligninet en inhiberande effekt paring dessa svampar Det fannsaumlven ligninplattor utan tillvaumlxt till exempel baringde AL-och LiB-plattan i Figur P23 Aumlvenhaumlr kan ligninet antas ha en inhiberande effekt Vidare tenderar tillvaumlxten paring AL-plattornaatt vara saumlmre aumln paring LiB- och ALLS-plattorna Detta skulle kunna vara en indikation paring attsvamparna generellt sett inte kan tillgodogoumlra sig kraftigt sulfonerat lignin eftersom AL-mediet inneharingller mer sulfonatgrupper aumln ALLS-mediet Huruvida AL-mediet inneharingllerhoumlgre halter av sulfonatgrupper aumln LiB vore interessant att undersoumlka

Av de sex olika svampar som identifierades var fem svaringra att faring mer specifika aumln slaumlktetoch foumlr den sista lyckades bara fylum bestaumlmmas Detta beror bland annat paring att vi odladedessa svampar paring glukosplattor vilket goumlr att man inte kan jaumlmfoumlra faumlrg och storlek paring varingrauppodlade kolonier med de bilder som fanns i boken rdquoFood and indoor fungirdquo Oavsett aumlrdet svaringrt om inte omoumljligt att artbestaumlmma svampar utan sekvensering saring foumlrvaumlntan attkunna mer aumln slaumlktbestaumlmma svamparna under mikroskop aumlr inte rimlig

Valet att anvaumlnda tvaring typer av alkaliligninplattor en med faumlrre sulfonatgrupper och Ligno-boost gjordes i samraringd med handledaren daring dessa aumlr intressanta media vid studerandet avsvampar Foumlr ytterligare information om svamparnas nedbrytningsfoumlrmaringga hade det varitav intresse att testa andra ligninbaserade media

Trots att arbetet har skett i sterilt dragskaringp saringg vi kontaminiering paring tvaring av plattorna Dettakan bero paring att plattan raringkat oumlppnas naumlr den skulle foumlrflyttas att kontamineringen funnitsdaumlr innan vi haumlllde paring mediet eller att kvalster lyckats ta sig in

54 Slutsats

En reaktionsvaumlg fraringn koniferylalkohol till L-dopa och adrenalin har foumlreslagits Moumljlig-heten att genomfoumlra denna reaktionsvaumlg beror paring framtida foumlrmaringga att separera omaumlttademonolignoler ur lignin samt moumljligheten att uttrycka enzymen i S cerevisiae eller naringgonannan vaumlrdorganism Vidare har en organism som producerar ett enzym med potentialatt kunna bryta bindningar mellan lignin och hemicellulosa identifierats och protokoll foumlrextraheringen och karakteriseringen av detta enzym har sammanstaumlllts Identifiering avsvampar har inte lyckats ske paring artnivaring utan paring slaumlkt- och ordningsnivaring Dessa svamparklarade sig maringttligt med lignin som kolkaumllla

5 Diskussion

Tack till

Tack till Joakim Norbeck som tillhandaharingllit sekvensen foumlr T7lac-systemets plasmidTack till David Jullesson som varit saring vaumlnlig att dela med sig av sina protokoll foumlr diverserutinarbete i ett labb Tack till Jonatan Kilhamn foumlr all hjaumllp med LATEX Slutligen ett storttack till varingra handledare Carl Johan Franzeacuten och Sylvia Klaubauf

Kaumlllfoumlrteckning

[1] J G Speight Petrochemical AccessScience McGraw-Hill Education 2014 URLhttpwwwaccesssciencecomcontentpetrochemical502100 (haumlmtad 2015-02-12)

[2] J G Speight Petroleum Processing and Refining AccessScience McGraw-HillEducation 2014 URL httpwwwaccesssciencecomcontentpetroleum-processing-and-refining503100 (haumlmtad 2015-02-12)

[3] W V Reid Conservation of Resources AccessScience McGraw-Hill Education2014 URL httpwwwaccesssciencecomcontentconservation-of-resources157900 (haumlmtad 2015-02-12)

[4] I Soslashrensen och J R K Campbell Cell Walls (plants) AccessScience McGraw-Hill Education 2014 URL httpwwwaccesssciencecomcontentcell-walls-plant117510 (haumlmtad 2015-02-12)

[5] I S Goldstein Wood Chemicals AccessScience McGraw-Hill Education 2014URL httpwwwaccesssciencecomcontentwood-chemicals748300 (haumlmtad 2015-02-12)

[6] T Nakata H Miyafuji och S Saka rdquoBioethanol from cellulose with supercriticalwater treatment followed by enzymatic hydrolysisrdquo I Applied biochemistry andbiotechnology 1301-3 (2006) s 476ndash485 DOI 101385ABAB1301476

[7] R Rathmann A Szklo och R Schaeffer rdquoLand use competition for production offood and liquid biofuels An analysis of the arguments in the current debaterdquo IRenewable Energy 351 (2010) s 14 ndash22 DOI 101016jrenene200902025

[8] J I Zerbe Ethanol from wood AccessScience McGraw-Hill Education 2008URL httpwwwaccesssciencecomcontentethanol-from-woodYB081420 (haumlmtad 2015-05-15)

[9] H M N Iqbal G Kyazze och T Keshavarz rdquoAdvances in the valorization oflignocellulosic materials by biotechnology an overviewrdquo I BioResources 82 (2013)s 3157ndash3176 DOI 1015376biores823157-3176

[10] P Oinonen D Areskogh och G Henriksson rdquoEnzyme catalyzed cross-linking ofspruce galactoglucomannan improves its applicability in barrier filmsrdquo I Carbo-hydrate polymers 952 (2013) s 690ndash696 DOI 101016jcarbpol201303016

[11] J Zakzeski et al rdquoThe catalytic valorization of lignin for the production of rene-wable chemicalsrdquo I Chemical reviews 1106 (2010) s 3552ndash3599 DOI 101021cr900354u

[12] S D Mansfield K-Y Kang och C Chapple rdquoDesigned for deconstructionndashpoplartrees altered in cell wall lignification improve the efficacy of bioethanol produc-tionrdquo I New Phytologist 1941 (2012) s 91ndash101 DOI 101111j1469-8137201104031x

[13] M Soumlderqvist Lindblad et al rdquoBiodegradable polymers from renewable sourcesrheological characterization of hemicellulose-based hydrogelsrdquo I Biomacromo-lecules 62 (2005) s 684ndash690 DOI 101021bm049515z

[14] J Hartman et al rdquoOxygen barrier materials from renewable sources Material proper-ties of softwood hemicellulose-based filmsrdquo I Journal of Applied Polymer Science1004 (2006) s 2985ndash2991 ISSN 1097-4628 DOI 101002app22958

[15] J F Kadla et al rdquoLignin-based carbon fibers for composite fiber applicationsrdquoI Carbon 4015 (2002) s 2913ndash2920 DOI 101016S0008- 6223(02)00248-8

[16] D Fengel och G Wegener Wood chemistry ultrastructure reactions Walter deGruyter 1983

[17] D R Dimmel Lignin McGraw-Hill Education 2014 URL httpwwwaccesssciencecomcontentlignin382150 (haumlmtad 2015-04-21)

[18] R Caspi etal rdquoThe MetaCyc database of metabolic pathways and enzymes andthe BioCyc collection of PathwayGenome Databasesrdquo I Nucleic acids research42D1 (2014) s D459ndashD471 DOI 101093nargkt1103

[19] D Wellner G P Royer och E J Stellwag Enzyme McGraw-Hill Education 2015URL httpwwwaccesssciencecomcontentenzyme236000(haumlmtad 2015-04-23)

[20] J Gutman et al Mikrobiell biokonvertering av para-xylen fraringn lignin foumlr produk-tion av tereftalsyra i framtida bioraffinaderier 2014

[21] X-L Li et al rdquoIdentification of genes encoding microbial glucuronoyl esterasesrdquoI FEBS letters 58121 (2007) s 4029ndash4035 DOI 101016jfebslet200707041

[22] S Špaacutenikovaacute och P Biely rdquoGlucuronoyl esterasendashnovel carbohydrate esterase producedby Schizophyllum communerdquo I FEBS letters 58019 (2006) s 4597ndash4601 DOI101016jfebslet200607033

[23] C drsquoErrico et al rdquoEnzymatic degradation of lignin-carbohydrate complexes (LCCs)Model studies using a fungal glucuronoyl esterase from Cerrena unicolorrdquo I Biote-chnology and Bioengineering (2015) nandashna ISSN 1097-0290 DOI 101002bit25508

[24] V Lombard et al Carbohydrate-active enzymes database (CAZy) URL httpwwwcazyorg

[25] M Thollesson Phylogenetic interference Evolutionary Biology Centre UppsalaUniversitet 2001 URL httpartediebcuusecourseEmbo01Phylogenyphylogeny_readmehtml (haumlmtad 2015-04-16)

[26] M Keesey och P Cantino The PhyloCode Ohio University 2000 URL httpwwwohioeduphylocodeglossaryhtml (haumlmtad 2015-04-14)

[27] M Holder och P O Lewis rdquoPhylogeny estimation traditional and Bayesian appro-achesrdquo I Nature reviews genetics 44 (2003) s 275ndash284 DOI 101038nrg1044

[28] C G Dosoretz T M Salame och Y Hadar Lignin-degrading fungi AccessSci-ence McGraw-Hill Education 2014 URL httpwwwaccesssciencecomcontentlignin-degrading-fungi900151 (haumlmtad 2015-02-12)

[29] R Bi et al rdquoIsolation and identification of microorganisms from soil able to live onlignin as a carbon source and to produce enzymes which cleave the beta-O-4 bondi a lignin model compoundrdquo I CELLULOSE CHEMISTRY AND TECHNOLOGY463-4 (2012) s 227ndash242 ISSN 0576-9787

[30] R A Samson et al rdquoFood and indoor fungirdquo I CBS-KNAW Fungal BiodiversityCentre Utrecht 2010

[31] P W Crous et al rdquoFungal Biodiversityrdquo I CBS-KNAW Fungal Biodiversity CentreUtrecht 2009

[32] ChemSpider URL httpwwwchemspidercom

[33] Chemicals Data Base URL httpwwwinternetchemistrycomchemicalschemicalshtm

[34] CAS - SciFinder URL httpwwwcasorgproductsscifinder

[35] Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) Reaction Database IUBMBreactions URL httpwwwgenomejpkeggreaction

[36] BRENDA (BRaunschweig ENzyme DAtabase) URL httpwwwbrenda-enzymesorg

[37] Protein BLASTsearch protein databases using a protein query URL httpblastncbinlmnihgovBlastcgiPROGRAM=blastpampPAGE_TYPE=BlastSearchampLINK_LOC=blasthome

[38] E Topakas et al rdquoFunctional expression of a thermophilic glucuronoyl esterasefrom Sporotrichum thermophile identification of the nucleophilic serinerdquo I Appliedmicrobiology and biotechnology 875 (2010) s 1765ndash1772 DOI 101007s00253-010-2655-7

[39] R C Edgar rdquoMUSCLE multiple sequence alignment with high accuracy and highthroughputrdquo I Nucleic acids research 325 (2004) s 1792ndash1797 DOI 101093nargkh340

[40] SnapGene URL httpwwwsnapgenecom

[41] G S Madretsma et al rdquoAnti-inflammatory effect of apocynin a plant-derivedNADPH oxidase antagonist in acute experimental colitisrdquo I The NetherlandsJournal of Medicine 472 (1995) 41ndash41(1) DOI 1010160300-2977(95)97052-Q

[42] J L Funk et al rdquoComparative Effects of Two Gingerol-Containing Zingiber offici-nale Extracts on Experimental Rheumatoid Arthritisrdquo I Journal of natural products723 (2009) s 403ndash407 DOI 101021np8006183

[43] HS Lee et al rdquo[6]-Gingerol inhibits metastasis of MDA-MB-231 human breastcancer cellsrdquo I The Journal of Nutritional Biochemistry 195 (2008) s 313 ndash319DOI 101016jjnutbio200705008

[44] P Tuite Parkinsonrsquos Disease McGraw-Hill Education 2014 URL httpwwwaccesssciencecomcontentparkinson-s-disease489900(haumlmtad 2015-04-15)

[45] R Krishnaveni et al rdquoTransformation of L-tyrosine to L-DOPA by a novel fungusAcremonium rutilum under submerged fermentationrdquo I Current microbiology582 (2009) s 122ndash128 DOI 101007s00284-008-9287-5]

[46] T Koyanagi et al rdquoEffective production of 3 4-dihydroxyphenyl-L-alanine (L-DOPA) with Erwinia herbicola cells carrying a mutant transcriptional regulatorTyrRrdquo I Journal of biotechnology 1153 (2005) s 303ndash306 DOI 101016jjbiotec200408016

[47] S H Sicherer et al rdquoSelf-injectable Epinephrine for First-Aid Management ofAnaphylaxisrdquo I Pediatrics 1193 (2007) s 638ndash646 DOI 101542peds2006-3689 eprint httppediatricsaappublicationsorgcontent1193638fullpdf+html

[48] R J Kemppainen och C H Li Epinephrine McGraw-Hill Education 2014 URLhttpwwwaccesssciencecomcontentepinephrine238400(haumlmtad 2015-04-15)

[49] S F Kemp et al rdquoEpinephrine the drug of choice for anaphylaxis A statementof the World Allergy Organizationrdquo I Allergy 638 (2008) s 1061ndash1070 ISSN1398-9995 DOI 101111j1398-9995200801733x

[50] EC 111194 - coniferyl-alcohol dehydrogenase BRENDA (BRaunschweig ENzymeDAtabase) URL httpbrenda-enzymesorgenzymephpecno=111194 (haumlmtad 2015-03-17)

[51] EC 12168 - coniferyl-aldehyde dehydrogenase BRENDA (BRaunschweig ENzymeDAtabase) URL httpwwwbrenda-enzymesorgenzymephpecno=12168 (haumlmtad 2015-03-17)

[52] EC 4311 - aspartate ammonia-lyase BRENDA (BRaunschweig ENzyme DAta-base) URL httpwwwbrenda-enzymesorgenzymephpecno=4311 (haumlmtad 2015-05-05)

[53] HAL histidine ammonia-lyase [ Homo sapiens (human) ] NCBI - National Centerfor Biotechnology Information Search database URL httpwwwncbinlmnihgovgeneDb=geneampCmd=ShowDetailViewampTermToSearch=3034 (haumlmtad 2015-03-17)

[54] EC 4313 - histidine ammonia-lyase BRENDA (BRaunschweig ENzyme DAta-base) URL httpwwwbrenda-enzymesorgenzymephpecno=4313 (haumlmtad 2015-05-06)

[55] ENZYME 33213 KEGG Kyoto Encyclopedia of Genes och Genomes URLhttpwwwgenomejpdbget-binwww_bgetK18239+33213+R10583 (haumlmtad 2015-03-17)

[56] M F Bear B W Connors och M A Paradiso rdquoNeuroscience Exploring theBrain 3rd Editionrdquo English I 3rd edition Philadelphia PA Lippincott Williamsoch Wilkins febr 2006 s 143ndash146 ISBN 9780781760034

[57] Expasy - Dopamine-beta-monooxygenase URL httpenzymeexpasyorgEC114171 (haumlmtad 2015-04-16)

[58] M Sauer et al rdquoProduction of L-ascorbic acid by metabolically engineered Saccha-romyces cerevisiae and Zygosaccharomyces bailiirdquo I Applied and environmentalmicrobiology 7010 (2004) s 6086ndash6091 DOI 101128AEM70106086-60912004

[59] R D Hancock och R Viola rdquoBiotechnological approaches for L-ascorbic acidproductionrdquo I TRENDS in Biotechnology 207 (2002) s 299ndash305 DOI 10 1016S0167-7799(02)01991-1

[60] R D Hancock J R Galpin och R Viola rdquoBiosynthesis of L-ascorbic acid (vitaminC) by Saccharomyces cerevisiaerdquo I FEMS microbiology letters 1862 (2000)s 245ndash250 DOI 101111j1574-69682000tb09112x

[61] Expasy - Phenylethanolamine N-methyltransferase URL httpenzymeexpasyorgEC21128 (haumlmtad 2015-04-16)

[62] S Y Chan och D R Appling rdquoRegulation of S-adenosylmethionine levels inSaccharomyces cerevisiaerdquo I Journal of Biological Chemistry 27844 (2003) s 43051ndash43059 DOI 101074jbcM308696200

[63] D Floudas et al rdquoThe Paleozoic origin of enzymatic lignin decomposition recon-structed from 31 fungal genomesrdquo I Science 3366089 (2012) s 1715ndash1719 DOI101126science1221748

[64] Aringldrande befolkning Statistiska Centralbyraringn (SCB) URL httpwwwscbsesv_Hitta-statistikRegional-statistik-och-kartorStatistikatlasenVisletBehallareAldrande- befolkning(haumlmtad 2015-05-06)

[65] Population structure and ageing Eurostat - staistics explained URL httpeceuropaeueurostatstatistics-explainedindexphpPopulation_structure_and_ageingFurther_Eurostat_information(haumlmtad 2015-05-06)

[66] J Johnson et al rdquoTen-year review reveals changing trends and severity of allergicreactions to nuts and other foodsrdquo I Acta Paediatrica 1088 (2014) s 862ndash867DOI 101111apa12687

[67] F E R Simons et al rdquoWorld Allergy Organization Anaphylaxis Guidelines 2013Update of the Evidence Baserdquo I International Archives of Allergy and Immunology162193 (2013) s 193ndash204 DOI 101159000354543

[68] Hur mycket finns det av olika skogstyper Laumlnsstyrelsen Norrbotten URL httpwwwlansstyrelsensenorrbottenSvmiljo-och-klimattillstandet-i-miljonskogstatistik-om-miljotillstandet-i- skogenhur- mycket- finns- det- av- olika- skogstyperPagesdefaultaspx (haumlmtad 2015-04-23)

[69] Eurofins Genomics homepage Eurofins Genomics URL httpseurofinsgenomicscom en products gene - synthesis standard - genes aspx(haumlmtad 2015-04-28)

A Agarplattor med lignin

Bilaga A Agarplattor med lignin

Foumlljande protokoll har baserats paring protokoll fraringn artikeln Isolation and identification ofmicroorganisms from soil able to live on lignin as a carbon source and to produce enzymeswhich cleave the beta-O-4 bond i a lignin model compound2

A1 Material

En liter loumlsning ger ungefaumlr 40 plattor

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

5 MgSO4 middot 7H2O (025 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

8 Lignin av foumlljande sort (10 gl)

(a) Lignoboost

(b) Aldrich Lignin kraft alkali

(c) Aldrich Lignin alkali low sulfonate

9 Ampicillin (100 mgl)

10 Destillerat vatten

11 70 etanol

2R Bi et al Isolation and identification of microorganisms from soil able to live on lignin as a carbonsource and to produce enzymes which cleave the beta-O-4 bond i a lignin model compoundI CELLU-LOSE CHEMISTRY AND TECHNOLOGY 463-4 (2012) s 227-242ISSN 0576-9787

A2 Metod

1 Standardloumlsningar blandas av alla salter samt ampicillin i destillerat vatten

(a) 25 gliter MgSO4 middot 7H2O

(b) 25 gliter KH2PO4

(c) 1324 gliter CaCl2(d) 00183 g10 ml FeCl3(e) 05 g5 ml ampicillin

2 Standardloumlsning av alla salter utom FeCl3 blandas och beharingllaren fylls med desti-llerat vatten till oumlnskad volym

3 Agar tillsaumltts under omroumlrning

4 pH justeras till 5 med 025M NaOH

5 Lignin tillsaumltts loumlsningen

6 pH testas med pH-papper foumlr att kontrollera att pH inte aumlndrats vid tillsats av ligninOm saring aumlr fallet justeras pH igen

7 Loumlsningen autoklaveras

8 Innan loumlsningen stelnat sterilfiltreras FeCl3 och ampicillin ner i beharingllaren i steriltdragskaringp

9 Loumlsningen haumllls i petriskaringlar och tillaringts stelna innan anvaumlndning

B Agarplattor med potatisextrakt och dextros

Bilaga B Agarplattor med potatisextrakt och dextros

Protokoll erhoumllls fraringn handledare Sylvia Klaubauf

B1 Material

1 liter loumlsning ger ungefaumlr 40 plattor

1 Potatisextrakt- och dextrosagarpulver

B2 Metod

1 39 g potatisextrakt- och dextrosagarpulver per liter faumlrdig agarloumlsning haumllls i vattnetunder omroumlrning och tillaringts loumlsas upp

3 Innan loumlsningen svalnat sterilfiltreras ampicillin ner i loumlsningen i sterilt dragskaringpHaumlr anvaumlnds en standardloumlsning om 05 g5 ml ampicillin i destillerat vatten

4 Loumlsningen haumllls i petriskaringlar och tillaringts svalna innan anvaumlndning

C LB-media samt agarplattor med LB-media

Bilaga C LB-media samt agarplattor med LB-media

Foumlljande protokoll har haumlmtats fraringn artiklarna rdquoMethods for general and molecular bacte-riologyrdquo3 och rdquoMolecular cloning a laboratory manualrdquo4

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

4 Agar (om LB-agarplattor oumlnskas)

6 NaOH (aq)

C1 Metod

1 Destillerat eller avjonat vatten haumllls upp till haumllften av den totala volymen faumlrdigloumlsning

2 10 g trypton per liter faumlrdig loumlsning tillsaumltts

3 5 g jaumlstextrakt per liter faumlrdig loumlsning tillsaumltts

4 10 g NaCl par liter faumlrdig loumlsning loumlses upp under uppvaumlrmning i destillerat elleravjonat vatten

5 Loumlsningens pH justeras till 70 med NaOH (aq)

6 Om agarplattor oumlnskas tillsaumltts 15 g agar per liter faumlrdig loumlsning och tillaringts loumlsas

8 Om agarplattor oumlnskas haumllls loumlsningen i petriskaringlar och tillaringts stelna innan an-vaumlndning

3P Gerhardt W A Wood och N R Krieg Methods for general and molecularbacteriology Vol 1325American Society for Microbiology Washington DC 1994

4M R Green och J Sambook Molecular cloning a laboratory maunal I Cold Spring Harbor Labo-ratory Press New York (2012) ISBN9781936113422

D PCR-reaktion

Bilaga D PCR-reaktion

Foumlljande protokoll har haumlmtats fraringn rdquoPCR Protocol for PhusionT M High-Fidelity DNAPolymerase (M0530)rdquo5

D1 Material

Protokollet utgaringr ifraringn en reaktionsvolym paring 50 microl

1 Phusion High-Fidelity DNA Polymerase (2 microM)

2 Sterilt milli-Q vatten

3 Phusion HF buffert (5x)

4 dNTP-blandning (10 microM vardera av ATP CTP TTP och GTP)

5 Uppstroumlms (Forward) primer (10 microM)

6 Nedstroumlms (Reverse) primer (10 microM)

7 Phusion (2 Umicrol)

8 Templat-DNA

D2 Metod

1 Paring is tillsaumltts mellan 0001 och 250 ng templat-DNA i en volym som inte oumlverstiger325 microl till ett Eppendorfroumlr

2 Milli-Q vatten tillsaumltts till en totalvolym paring 325 microl

3 Om det behoumlvs samlas blandningen i botten av roumlret med ett par sekunders centri-fugering

4 10 microl 5x Phusion HF buffert tillsaumltts

5 1 microl dNTP-blanding tillsaumltts

6 3 microl uppstroumlms primer tillsaumltts

7 3 microl nedstoumlms primer tillsaumltts

8 05 microl Phusion DNA polymeras tillsaumltts Det aumlr viktigt att tillsaumltta DNA-polymerasetsist eftersom det har exonukleasaktivitet i avsaknad av dNTP-blandning

5PCR Protocol for PhusionT M High-Fidelity DNA Polymerase (M0530) New England BioLabs incURLhttpswwwnebcomprotocols10101pcr-protocol-m0530

D PCR-reaktion

9 Blandningen (som hittills haringllits paring is) pipetteras oumlver till ett PCR-roumlr som skynd-samt flyttas till en foumlrvaumlrmd PCR-maskin

10 PCR-maskinen programmeras och koumlrs med program enligt tabell D1

Tabell D1 Program foumlr PCR med hjaumllp av Phusion DNA polymeras

Steg Temperatur Tid Antal cyklerFoumlrsta denaturering 98 30 s 1

Denaturering 98 10 s25-40Hybridisering Laumlgre Tm+3 10-30 s

Foumlrlaumlngning 72 15-30 skbpSlutgiltig foumlrlaumlngning 72 5-10 min 1

E Restriktion med EcoRI och XbaI

Bilaga E Restriktion med EcoRI och XbaI

Foumlljande protokoll baseras paring ett produktblad fraringn Thermo Scientific kallat rdquoPRODUCTINFORMATION Thermo Scientific FastDigest EcoRIrdquo6 och utgaringr ifraringn en rektionsvolymparing 50 microl

E1 Material

1 FastDigest buffert

2 FastDigest EcoRI (30 Umicrol)

3 FastDigest XbaI (30 Umicrol)

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

Haringll staumlndigt enzymet paring is

1 5 microl FastDigest buffert saumltts till ett sterilt 15 ml Eppendorfroumlr

2 Upp till 2 microg DNA tillsaumltts

3 5 microl FastDigest EcoRI och 5 microl FastDigest XbaI restriktionsenzym tillsaumltts ochdaumlrefter fylls roumlret upp till en totalvolym av 50 microl med milli-Q vatten

4 Loumlsningen blandas foumlrsiktigt och centrifugeras sedan ned i botten av roumlret

5 Loumlsningen inkuberas i 37C i 5-60 min

6 Enzymerna inaktiveras genom att inkubera loumlsningen i 80C i 5 minuter

6PRODUCT INFORMATION Thermo Scientific FastDigest EcoRI Thermo Fisher Scientific URLhttpstoolslifetechnologiescomcontentsfsmanualsMAN0012438_FastDigest_EcoRI_800uL_UGpdf

F Gelelektrofores

Bilaga F Gelelektrofores

Foumlljande protokoll har haumlmtats fraringn ett protokoll fraringn Addgene kallat rdquoAgarose Gel Electro-phoresisrdquo7 samt produktbladet foumlr GelRed8

F1 Material

1 Agaros

2 TAE-buffert (Tris-Acetat EDTA) (1x)

3 GelRed eller GelGreen stock (10 000x)

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

1 Agaros tillsaumltts under omroumlrning till 1xTAE-buffert till en slutkoncentration paring 10gL

2 Blandningen vaumlrms upp i en mikrovaringgsugn i ungefaumlr 1-3 min och agarosen tillaringtsloumlsas upp

3 1 microl GelRed per 10 ml agarosloumlsning tillsaumltts

4 En kam faumlsts i traringget foumlr att goumlra brunnarna i kanten av gelen

5 Loumlsningen haumllls i traringget och tillaringts svalna i ungefaumlr 30 min foumlr att stelna

6 Loading dye tillsaumltts till proverna

7 Naumlr gelen stelnat placeras den i gelelektroforesapparaten och apparaten fylls uppmed 1xTAE buffer saring att gelen taumlcks ordentligt

8 Den foumlrsta brunnen laddas med en molekylviktsstege och prover laddas sedan i deoumlvriga brunnarna

9 80 Volts spaumlnning appliceras oumlver gelen tills faumlrglinjen flyttat sig ca 75-80 avgelens laumlngd Detta tar ungefaumlr 1-15 h

10 Naumlr gelen aumlr klar staumlngs spaumlnningen av och gelen plockas ut ur gelelektroforesap-paraten

7Agarose Gel Electrophoresis Addgene URLhttpswwwaddgeneorgplasmid-protocolsgel-electrophoresisfaq

8GelRed Nucleic Acid Gel Stain 10000x Water Biotium URL httpsbiotiumcomwp-contentuploads201307PI-41003pdf

F Gelelektrofores

11 Gelen studeras med hjaumllp av en transilluminator (302 eller 312 nm) och fotograferassedan

G Upprening av DNA fraringn Agarosgel

Bilaga G Upprening av DNA fraringn Agarosgel

G1 Material

Alla dessa materiel finns i kittet rdquoillustra GFX PCR DNA and Gel Band Purification Kitrdquo9

fraringn GE Healthcare

1 Mikrocentrifugroumlr

2 GFX MicroSpin kolonn

3 Capture buffert typ 3

4 Wash buffert typ 1

5 Elution buffert typ 4

6 Natriumacetat (3 M)

G2 Metod

1 Ett 15 ml mikrocentrifugroumlr vaumlgs och vikten antecknas

2 Med hjaumllp av en ren skalpell och 365 nm UV-ljus (och minimal exponeringstid)skaumlrs ett agarosband ut och placeras i mikrocentrifugroumlret

3 Mikrocentrifugroumlret inneharingllande agarosbandet vaumlgs och agarosbandets vikt raumlknasut

4 10 microl Capture buffert typ 3 tillsaumltts per 10 mg agarosband dock minst 300 microl perprov

5 Blandningen inkuberas i 60C i 15-30 minuter tills agarosen aumlr helt loumlst och blandasgenom invertering var tredje minut

6 Naumlr allt loumlst sig kontrolleras det om loumlsningen aumlr gul eller ljust orange Om saring inteaumlr fallet tillsaumltts ca 10 microl 3 M natriumacetat pH 5 och loumlsningen blandas saring att denblir gul eller ljust orange

7 Foumlr varje rening som genomfoumlrs placeras en GFX MicroSpin kolonn i ett kollektions-roumlr

8 Upp till 800 microl av loumlsningen tillsaumltts till en GFX MicroSpin kolonn

9 Kolonnerna inkuberas sedan i rumstemperatur i 1 min

9GFX PCR DNA and Gel Band Purification Kit GE Healthcare URL httpswwwgelifesciencescomgehcls_imagesGELSRelated20ContentFiles1314774443672litdoc28933585_20150413221957pdf

10 Kolonnerna centrifugeras 16 000 x g i 30 sekunder

11 Vaumltskan i kollektionsroumlret haumllls ur och kolonnen placeras aringter i kollektionsroumlret

12 Om det finns loumlsning kvar upprepas steg 8-11 tills all loumlsning aumlr slut

13 500 microl Wash buffert typ 1 tillsaumltts till kolonnen

14 Kolonnen centrifugeras 16 000 x g i 30 s

15 Kollektionsroumlret slaumlngs och kolonnen placeras i ett nytt 15 ml mikrocentrifugroumlr

16 10-50 microl Elution buffert typ 4 tillsaumltts till mitten av membranet i kolonnen

17 Daumlrefter inkuberas kolonnen i 1 min varefter den centrifugeras 16 000 x g i 1 minfoumlr att utvinna det renade DNAt

H Ligering med T4-ligas

Bilaga H Ligering med T4-ligas

Foumlljande protokoll baseras paring ett protokoll fraringn Invitrogen kallat ExpressLink T4 DNALigase10 och utgaringr ifraringn en reaktionsvolym paring 20 microl

H1 Material

1 Ligase reaction buffer (5x)

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

4 Expresslink T4 DNA ligase (5 Umicrol)

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

1 4 microl 5x Ligase reaction buffer tillsaumltts till ett sterilt 15 ml mikrocentrifugroumlr

2 20-100 ng vektor DNA tillsaumltts och daumlrefter tillsaumltts aumlven 60-300 ng av insert DNA(3x maumlngden av vektor DNA)

3 02 microl Expresslink T4 DNA ligase tillsaumltts och daumlrefter fylls roumlret upp till en total-volym av 20 microl med milli-Q vatten

4 Loumlsningen blandas foumlrsiktigt och centrifugeras sedan snabbt foumlr att samla loumlsningeni botten av roumlret

5 Loumlsningen inkuberas i minst 5 minuter i rumstemperatur

10ExpressLink T4 DNA Ligase Invitrogen URL httpstoolslifetechnologiescomcontentsfsmanualsexpresslink_dna_ligasepdf

I Transformation

Bilaga I Transformation

Foumlljande protokoll har haumlmtats fraringn ett protokoll fraringn Addgene kallat rdquoBacterial Trans-formationrdquo11 samt ett protokoll fraringn EMBL kallat rdquoTransformation of competent Ecolicells with plasmid DNArdquo12

I1 Material

1 Kompetenta celler

2 DNA i form av plasmid

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

1 Kompetenta celler (E coli BL21(DE3)) plockas fram ur -80C och tinas paring is i20-30 min

2 1-5 microl gt10 ng DNA och 20-50 microl kompetenta celler tillsaumltts till ett mikrocentrifugroumlroch blandas genom att knaumlppa foumlrsiktigt paring botten av roumlret naringgra garingnger

3 Blandningen placeras paring is i 20-30 min

4 Varje mikrocentrifugroumlr vaumlrmechockas i 42C i 30-60 sekunder (45 s aumlr optimalt)

5 Roumlren placeras aringterigen paring is i 2 min

6 250 microl LB-media (utan antibiotika) tillsaumltts och cellerna tillaringts vaumlxa i en 37Cskakinkubator i 45 min

7 Blandningen med de transformerade cellerna placeras paring en eller flera LB-agarplattorinneharingllande Ampicillin (100 mgl) och inkuberas oumlver natt

11Bacterial Transformation Addgene URL httpswwwaddgeneorgplasmid-protocolsbacterial-transformation

12Transformation of competent Ecoli cells with plasmid DNA EMBL European Molecular BiologyLaboratory URL httpswwwembldepepcorepepcore_servicescloningtransformation

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

Foumlljande protokoll har haumlmtats fraringn ett protokoll fraringn Boddylab kallat Gene expression inand protein extraction from E coli13

J1 Material

1 LB-media inneharingllande Ampicillin (100 mgl)

2 IPTG

3 Lysis buffert (100 mM natriumfosfat 300 mM NaCl 10 vikt- glycerol 1 microgmllysozym 1 microgml pepstatin A 1-2 microgml leupeptin pH 80)

J2 Metod

Cellerna foumlrvaras hela tiden paring is

1 Cellerna odlas oumlver natt genom att 10 ml LB-media inokuleras med en koloni ochinkuberas i 37C i en skakinkubator vid 180 rpm

2 Nytt LB-media inokuleras med 05 vikt- av den tidigare kulturen och cellernatillaringts tillvaumlxa vid 37C i en skakinkubator vid 180 rpm

3 Naumlr OD600=03-06 induceras proteinuttrycket med hjaumllp av IPTG (slutkoncentration05 mM) och cellerna skakinkuberas vid 30C tills expressionen aumlr maximal (ca 4h)

13Gene expression in and protein extraction from E coli Boddylab URL httpwwwboddylab cafi-leGene_expression_and_protein_extractionpdf

K Proteinextraktion och 6x His-tag proteinrening

Bilaga K Proteinextraktion och 6x His-tag proteinrening

Foumlljande protokoll aumlr baserat paring Invitrogens kit Ni-NTA Purification System14

K11 Material Extraktion

1 Native Binding buffert

2 Lysozym

3 RNas A (10 microgml)

4 DNas I (5 microgml)

K12 Metod Extraktion

1 Cellerna skoumlrdas genom att 50 ml odling centrifugeras 5000 rpm i 5 min

2 Cellerna resuspenderas i 8 ml Native Binding buffert

3 8 mg lysosym tillsaumltts och loumlsningen inkuberas paring is i 30 min

4 Loumlsningen ultraljudsbehandlas med houmlg intensitet sex garingnger 10 sekunder varjegaringng och tillaringts vila paring is i 10 sekunder mellan varje behandling Behandlingen skermed hjaumllp av en Sonicator utrustad med microtip

5 Om lysatet aumlr vaumlldigt viskoumlst tillsaumltts RNas A (10 microgml) och DNas I (5 microgml) ochloumlsningen inkuberas paring is i 10-15 min

6 Lysatet centrifugeras 3000 x g i 15 minuter foumlr att pelletera cellresterna och super-natanten flyttas till ett rent roumlr

7 5 microl av lysatet avlaumlgsnas foumlr att koumlras i SDS-PAGE

K21 Material Proteinrening

1 Foumlrberedd Ni-NTA reningskolonn

2 Native Wash buffert

3 Native Elution buffert14Ni-NTA Purification System Invitrogen URL httptoolslifetechnologiescomcontentsfsmanuals

ninta_system_manpdf

K22 Metod Proteinrening

1 8 ml lysat tillsaumltts till en foumlrberedd reningskolonn

2 Proteinet laringts binda till kolonnen i 30-60 minuter paring en skakplatta

3 Hartset tillaringts sedimentera genom centrifugering paring laringg hastighet (800 x g) ochsupernatanten avlaumlgsnas foumlrsiktigt foumlr att sparas vid 4C och sedan koumlras i en SDS-PAGE

4 Kolonnen tvaumlttas med 8 ml Native Wash buffert hartset tillaringts sedimentera genomcentrifugering paring laringg hastighet (800x g) och supernatanten avlaumlgsnas foumlrsiktigt foumlratt sparas vid 4C och sedan koumlras i en SDS-PAGE

5 Steg 4 upprepas 3 garingnger till

6 Kolonnen monteras saring att den hela tiden haringlls uppraumltt och locket i nedre aumlndantas bort Proteinet elueras med 8-12 ml Native Elution buffert fraktioner om 1 mlsamlas och dessa analyseras sedan med SDS-PAGE

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

Foumlljande protokoll baseras paring protokoll fraringn Assay-Protocol kallade SDS-PAGE15 ochPAGE staining16

L11 Material Separating gel

Foumlr material se Tabeller L2 L3 L4 och L5

L12 Material Coomassie staining

Foumlr material se Tabeller L6 och L7

L211 Metod Separating gel

1 Gjutningsramarna foumlrbereds genom att tvaring glasplattor faumlsts i gjutningsramarna somplaceras i gjutningsharingllaren

2 Gelloumlsningen foumlrbereds enligt Tabell L2 och blandas noggrant men foumlrsiktigt

3 En laumlmplig maumlngd av loumlsningen (se Tabell L1) pipetteras ner i springan mellan detvaring glasplattorna

4 Foumlr att oumlvre kanten av gelen ska bli horisontell fylls resten av gjutningsramen medvatten

5 Gelen tillaringts sedan stelna i 20-30 min

L212 Metod Stacking gel

1 Vattnet ovanparing Separating gelen haumllls av

2 Stacking gel foumlrbereds enligt Tabell L3 och pippeteras i ovanparing Separating gelentills vaumltska rinner oumlver

3 Den brunnformande kammen saumltts i gjutningsramen och gelen tillaringts stelna i 20-30minuter

15SDS-PAGE preparation and protocol Assay-Protocol URL httpwwwassay-protocolcommolecular-biologyelectrophoresisdenaturing-page

16PAGE staining Assay-protocol URL httpwwwassay-protocolcomindexphppage=PAGE-staining

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

1 Det kontrolleras att gelen aumlr helt stelnad och kammen tas ur

2 Glasplattorna flyttas fraringn gjutningsramen och placeras i apparaturen

3 Den inre kammaren fylls med Running buffert (se Tabell L5) tills den svaumlmmaroumlver och bufferten naringr raumltt nivaring i den yttre kammaren

4 Proven blandas med sample buffer (se Tabell L4) och hettas upp i kokande vatten i5-10 min

5 Den foumlrsta brunnen laddas med en molekylviktsstege och daumlrefter laddas proven ide resterande brunnarna

6 Locket monteras paring apparaturen och stroumlmkaumlllan kopplas paring

7 En laumlmplig spaumlnning staumllls in exempelvis 180 V och gelen koumlrs tills den nederstadelen av molekylviktsstegen naringr botten av gelen

L22 Metod Coomassie staining

1 Gelen laumlggs i en beharingllare taumlcks med Staining solution foumlrberedd enligt Tabell L6och placeras paring en skakplatta i 20-30 min

2 Loumlsningen byts ut mot Destaining solution foumlrberedd enligt Tabell L7 och placerasaringterigen paring skakinkubatorn i 20-30 min

3 Steg tvaring upprepas 3-5 garingnger tills banden i gelen blir klara och den blaringa bakgrunds-faumlrgen aumlr saring gott som borta

Tabell L1 Geltjocklek

Geltjocklek Volym stacking gel Volym separating gel075 mm 2 ml 4 ml10 mm 3 ml 6 ml15 mm 4 ml 8 ml

L SDS-PAGE

Tabell L2 10 ml Separating gel Notera att Ammoniumpersulfat och TEMED maringstetillsaumlttas precis foumlre anvaumlndning

Procent akrylamid 10 H2O 38 ml

AkrylamidBis-akrylamid (3008 wv) 34 ml15 M Tris (pH=88) 26 ml

10 (wv) SDS 01 ml10 (wv) Ammoniumpersulfat 100 microl

TEMED 10 microl

Tabell L3 5 ml Stacking gel Notera att Ammoniumpersulfat och TEMED maringste till-saumlttas precis foumlre anvaumlndning

H2O 2975 ml05 M Tris-HCl pH 68 125 ml

10 (wv) SDS 005 mlAkrylamidBis-akrylamid (3008 wv) 067 ml

10 (wv) Ammoniumpersulfat 005 mlTEMED 0005 ml

Tabell L4 5x Sample buffert

10 (wv) SDS10 mM β-mercaptoetanol

20 (vv) Glycerol02 M Tris (pH=68)

005 (wv) Bromophenolblue

Tabell L5 1x Running buffert

25 mM Tris-HCl200 mM Glycin

01 (wv) SDS

Tabell L6 Staining solution

03 (wv) Coomassie Brilliant Blue R-25045 (vv) Metanol10 (vv) Vattenfri aumlttiksyra

Tabell L7 Destaining solution

20 (vv) Metanol10 (vv) Vattenfri aumlttiksyra

M Bradfordanalys

Bilaga M Bradfordanalys

Foumlljande protokoll aumlr baserat paring produktbladet foumlr Bradfordreagenset17

M1 Material

1 Bradfordreagens

2 BSA proteinstandard (2 mgml)

3 Native Elution buffert

4 Kyvetter

5 Prov med okaumlnd proteinkoncentration

M2 Metod

01 ml av 01-14 mgml proteinprov anvaumlnds

1 Bradfordreagensen blandas foumlrsiktigt och vaumlrms till rumstemperatur

2 Proteinstandarder med laumlmplig koncentration foumlrbereds enligt tabell M1

Tabell M1 Visar exempel paring standardanalys Nummer 6 representerar ett okaumlnt provmed 2x spaumldning Denna spaumldning kan aumlndras beroende paring vilken proteinkoncentrationprovet foumlrvaumlntas ha

Nummer Prov (ml) [BSA] protein (mgml) Bradford-reagens1 01 0 32 01 025 33 01 05 34 01 10 35 01 14 36 01 Okaumlnd 3

3 Naumlr loumlsningar foumlrberetts enligt Tabell M1 vortexas roumlren foumlr att blanda loumlsningenordentligt

4 Proven inkuberas sedan i rumstemperatur i 5-45 min

17Product information Bradford Reagent Sigma-Aldrich URL httpswwwsigmaaldrichcomcontentdamsigma-aldrichdocsSigmaBulletinb6916bulpdf

M Bradfordanalys

5 Proven flyttas oumlver till kyvetter och absorbans maumlts vid 595 nm Absorbansen foumlralla prov maringste maumltas inom 10 minuter och den sista absorbansen maringste maumltas inom60 minuter fraringn det att proven foumlrbereddes

6 De prov med kaumlnda koncentrationer anvaumlnds foumlr att producera en standardkurva(Absorbans mot [BSA]) och utifraringn den bestaumlms proteinkoncentrationen i det okaumlndaprovet

N Detektion av aktivitet

Bilaga N Detektion av aktivitet

Foumlljande protokoll aumlr baserat paring artikeln rdquoEnzymatic degradation of lignin-carbohydratecomplexes (LCCs) Model studies using a fungal glucuronoyl esterase from Cerrena unicolorrdquo18

N1 Material

1 Bensyl-D-glucuronat

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

1 Bensyl-D-glucuronat loumlses upp i milli-Q vatten och spaumldes till en koncentration av30 mM

2 Loumlsningens pH justeras till 6 med 05 M HCl

3 1 ml bensyl-D-glucuronat (30 mM) saumltts till ett 15 ml Eppendorfroumlr

4 Enzymet pipetteras ned i loumlsningen

5 Loumlsningen inkuberas i 30C i 48 h

6 Prover tas efter 2 18 och 48 h och analyseras med HPLC foumlr fenol

18C drsquoErrico et al rdquoEnzymatic degradation of lignin-carbohydrate complexes (LCCs) Model studiesusing a fungal glucuronoyl esterase fron Cerrena Unicolorrdquo 1Biotechnology and Bioengineering 0 ISSN1097-0290

O Beskrivningar av svampkoloniernas utseende efter renstryk

Bilaga O Beskrivningar av svampkoloniernas utseende efterrenstryk

Tabell O1 Sammanstaumlllning av alla renstrykta faumlltprover Alla renstrykningar gjordes avsporloumlsningar

Medium Tillvaumlxt Utseende Diameter Namn

Renstrykning av barkprovet odlat paring ALLS i rumstemperatur fraringn vita sporer

Glukos 6 dagar Tre kolonier sammanvaumlxta kanterVita och fluffiga med cirka 1 cmin en ring (cirka 05 cm bred)med gula och vita sporer Fluffig imitten

5 cm 30 glukos

Agar 6 dagar Tre kolonier graringgroumlna sporerojaumlmnt utspridda i yttre kant

3 cm 30 agar

ALLS 7 dagar Tre kolonier Taumlta platta genom-skinliga naumltverk med smaring vitaflagor inom 05 cm

5 cm 30 ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier Glesa vita naumltverksom vaumlxer platt med vitaljusgroumlnaflagor jaumlmnt utspritt inom en 2 cmradie fraringn koloniernas mitt

3 cm 30 LiB

AL 7 dagar Tre kolonier Otydliga taumlta plattanaumltverk

3 cm 30 AL

Renstrykning av svampprovet odlat paring ALLS i rumstemperatur fraringn mycel

Glukos 5 dagar Tre kolonier Vittljusrosa mycelganska taumlt

2-3 cm 121glukos

Agar 7 dagar Otydliga kolonier helt samman-vuxna Tunt genomskinligt mycelsom taumlcker hela plattan

Helaplattan

121 agar

ALLS 7 dagar Tvaring kolonier Tunt genomskinligtmycel vaumlldigt lite vitt fluff som aumlrkoncentrerat i mitten av kolonierna

4 cm 121ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier sammanvaumlxta kanterTaumltt genomskinligt mycel Lite vittfluff i mitten av kolonierna

4 cm 121 LiB

AL 7 dagar Tre kolonier Tunt genomskinligtmycel med tunt vitt fluff jaumlmntutspritt oumlver kolonierna

4 cm 121 AL

Fortsaumlttning paring tabell O1

Glukos 20 dagar Tre kolonier Vitbeige mycel 2-3 cm 122glukos

Agar 7 dagar Tre kolonier Taumltt genomskinligtmycel

3-4 cm 122 agar

ALLS 7 dagar Tre kolonier Taumlta genomskinligaLite vitt fluff i centrum av en koloni

3 cm 122ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier Taumltt genomskinligtmycel Helt platta

3 cm 122 LiB

AL 7 dagar Tre kolonier Taumltt genomskinligtmycel Lite vitt fluff jaumlmnt utsprittoumlver tvaring kolonier

3 cm 122 AL

Glukos 5 dagar Tre kolonier Vitbeige mycel aringt detlite luftigare haringllet

3 cm 123glukos

Agar 7 dagar Tunt genomskinligt ganska taumlttmycel som taumlcker hela plattan

Helaplattan

123 agar

ALLS 7 dagar Tvaring kolonier Tunt genomskinligttaumltt mycel

3 cm 123ALLS

LiB 7 dagar Tom inget har haumlnt - 123 LiB

AL 7 dagar Tvaring kolonier Glest tunt vitt fluffmest i centrum av kolonierna

3 cm 123 AL

Renstrykning av jordprovet (100x spaumldning) odlat paring LiB i rumstemperatur fraringnvita sporer

Glukos 6 dagar Fem kolonier varav tvaring smaringTydligt vitt naumltverk Platta Vit flaumlcki mitten

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

Agar 7 dagar Tre kolonier Tydliga platta taumltagenomskinliga naumltverk

5-6 cm 23 agar

ALLS 11 dagar Tre kolonier Vitt pulver mengroumlnaktiga i mitten och mycel ikanterna

2-3 cm 23 ALLS

LiB 7 dagar Tre stora kolonier Taumlta plattagenomskinliga tydliga naumltverk vitafaumllt inom 05 cm radie fraringn koloni-ernas mitt Tio smaring kolonier

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

AL 11 dagar Sju kolonier Tre ursprungliga ochfyra utoumlver Ser ut som lagermed vitt pulver De smaring vaumlxerutefter kanterna och runt en av deursprungliga kolonierna

2-3 cm 23 AL

Renstrykning av barkprovet odlat paring LiB i rumstemperatur fraringn groumlna sporer

Glukos 6 dagar Tre kolonier otydliga kanterFluffig laumlngs kanterna med treringar (05 cm breda) med vita ochgula sporer

5 cm 26 glukos

Agar 6 dagar Tre kolonier moumlrkgroumlna sporerojaumlmnt utspritt i yttre kant

3 cm 26 agar

ALLS 7 dagar Tre kolonier Otydliga taumlta genom-skinliga naumltverk Smaring vita prickarjaumlmnt utspritt

2 cm 26 ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier Glesa vita naumltverksom till viss del vaumlxer upp som fluffVita flaumlckar inom 15 cm radie fraringnkoloniernas mitt

3 cm 26 LiB

AL 7 dagar Tre kolonier Otydliga naumltverk medvita flagor i mitten - dessa aumlr tydli-gast i en av kolonierna och finnsknappt i en annan

3 cm 26 AL

Renstrykning av svampprovet odlat paring LiB i rumstemperatur fraringn mycel

Glukos 6 dagar Tre kolonier tydliga beiga naumltverkVaumlxer vitt fluff upparingt tydligast imitten

3 cm 2 glukos

Agar 6 dagar Tre kolonier svaringra att se endastnaumltverk

3-4 cm 2 agar

ALLS 22 dagar Vitt fluff jaumlmnt spritt (glest) oumlverhela plattan

Helaplattan

2 ALLS

LiB 22 dagar Vitt fluff jaumlmnt spritt (glest) oumlverhela plattan

Helaplattan

AL 22 dagar Tomt inget har haumlnt - 2 AL

Renstrykning av roumltprovet odlat paring AL i rumstemperatur fraringn groumlna sporer

Glukos 6 dagar Fem kompakta kolonier varav tvaringaumlr smaring Vita med vitt fluff i mitten

1 cm 5 glukos

Agar 6 dagar Tre kolonier Mestadels mycelmen aumlven sporer Vaumlxt laumlngs medplattan Taumltare i mitten av kolonin

2-3 cm 5 agar

ALLS 7 dagar Tre kolonier Vita naumltverk lite fluf-figa med sporer ut fraringn centrumGroumlnaktiga i centrum och i ett band05 cm ut fraringn koloniernas centrum

3 cm 5 ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier Vita naumltverk lite fluf-figa med sporer ut fraringn centrumGroumlnaktiga i centrum och i ett band05 cm ut fraringn koloniernas centrum

3 cm 5 LiB

AL 7 dagar Tre kolonier Vitt naumltverk medsporer ut fraringn centrum Groumlnaktigai centrum och i ett band 05 cm utfraringn koloniernas centrum

3 cm 5 AL

Renstrykning av barkprovet odlat paring AL i rumstemperatur fraringn groumlna sporer

Glukos 6 dagar Tre otydliga kolonier samman-vaumlxta Mestadels vita sporer menaumlven vissa gula i 1 cm breda bandlaumlngs koloniernas kanter Grumligagar

5 cm 25 glukos

Agar 6 dagar Tre kolonier ljusgroumlna sporer i yttrekant

3-4 cm 25 agar

ALLS 7 dagar Tre kolonier Taumltt naumltverk lite vitaprickar mot och i centrum

3 cm 25 ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier Glest naumltverk Litefluffiga bitar och groumlnvita klumparganska utspridda

3 cm 25 LiB

AL 7 dagar Tre kolonier Taumltt naumltverk mycketvita prickar mot och i centrum

3-4 cm 25 AL

Renstrykning av traumlprovet odlat paring AL i rumstemperatur av groumlna sporer

Glukos 6 dagar Tre kolonier Klara vita sporer sominte vaumlxt samman Finns aumlven liteljusare vita sporer runt cirklarna

3-4 cm 14 glukos

Agar 6 dagar Tre kolonier otydliga foumlr blottaoumlgat endast mycel syns Enstakagraring sporer syns

3-4 cm 14 agar

ALLS 11 dagar Tre kolonier Vaumlldigt svaga med litevitt i mitten

2-3 cm 14 ALLS

LiB 7 dagar Mycket glesa vita naumltverk som tillviss del vaumlxer upparingt som fluffEnstaka vita flagor jaumlmnt utspritt

5 cm 14 LiB

AL 11 dagar Tre kolonier Svaringrt att se mycelLite vita sporer i centrum av kolo-nierna

3 cm 14 AL

Renstrykning av svampprov odlat paring AL i rumstemperatur av moumlrkgraring sporer

Glukos 6 dagar Tre kolonier tydligt beiga naumltverkVitt fluff som vaumlxer upparingt tydligasti mitten

3 cm 16 glukos

Agar 6 dagar Tre kolonier Mestadels mycel litesvaringrt att se har vaumlxt ihop helt ochtaumlcker hela plattan

Helaplattan

16 agar

ALLS 22 dagar Vaumlldigt otydliga kolonier Vitt tuntfluff jaumlmnt spritt (glest) oumlver helaplattan

Helaplattan

16 ALLS

LiB 22 dagar Tre kolonier Vitt fluff jaumlmnt spritt(glest) oumlver alla kolonier

4 cm 16 LiB

Renstrykning av jordprov (100x spaumldning) odlat paring ALLS i 30degC i av vita sporer

Glukos 6 dagar Tre klara kolonier Mycel runt en vitspor-cirkel i mitten (05 cm bred)

2-3 cm 6 glukos

Agar 7 dagar Tre kolonier Tydliga taumlta plattagenomskinliga naumltverk

5 cm 6 agar

ALLS 11 dagar Tre klara kolonier med massamindre runt om Vitt pulver icentrum och mycel runt

2-3 cm 6 ALLS

LiB 11 dagar Tre klara kolonier med massamindre runtomkring utspridda oumlverhela plattan Vaumlldigt klart vitt icentrum med mycel runt

3 cm 6 LiB

AL 11 dagar Sju kolonier varav tre ursprungligaVissa vaumlxter ihop och aumlr mindreTunt vitt pulver med mycel

3 cm 6 AL

Renstrykning av roumltprovet odlat paring ALLS i rumstemperatur fraringn mycel

Glukos 6 dagar Tre kolonier Vita och fluffigaTaumltare i mitten

3-4 cm 31 glukos

Agar 6 dagar Tre kolonier Vaumlldigt tunna svaringraatt se och mestadels mycel

2-3 cm 31 agar

ALLS 22 dagar En koloni Taumltt mycel Vaumlxer ikanten av plattan

4-5 cm 31 ALLS

AL 22 dagar Tom inget har haumlnt - 31 AL

Renstrykning av barkprovet odlat paring ALLS i 30degC fraringn vita sporer

Glukos 6 dagar Tre kolonier sammanvaumlxta Vitaoch naringgra faring gulaktiga sporerlaumlngsmed koloniernas kanter cirka1 cm breda band

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

ALLS 7 dagar Tre kolonier Taumltt naumltverk naringgraenstaka vita prickar i centrum

3-4 cm 10 ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier Glesa vita naumltverkmed sporer Lite fluffiga

3 cm 10 LiB

AL 7 dagar Tre kolonier Taumltt naumltverk maringngavita prickar vid och i centrum

3 cm 10 AL

Renstrykning av traumlprovet odlat paring ALLS i 30degC fraringn vita sporer

Glukos 6 dagar Tre sammanvaumlxta kolonier Vita ochgula sporer mestadels laumlngs koloni-ernas kanter Grumlig agar

5 cm 20 glukos

Agar 6 dagar Tre kolonier vitaljusgroumlna sporer iyttre kant

3-4 cm 20 agar

ALLS 7 dagar Tre kolonier Glest naumltverk 3-4 cm 20 ALLS

XXVIII

LiB 7 dagar Tre otydliga kolonier Glestnaumltverk mycket vitt fluff i mittenVissa med lite groumlnaktig tonKlumpar av dessa

3-4 cm 20 LiB

AL 7 dagar Tre kolonier Glest naumltverk mer vittoch fluffigt i centrum

3 cm 20 AL

Renstrykning av tickprovet odlat paring ALLS i 30degC fraringn vita sporer

Glukos 6 dagar Tre kolonier naumlstan sammanvaumlxtaVita (och gula inslag) tydligasporer Taumlcker inte riktigt helaplattan

4-5 cm 19 glukos

Agar 6 dagar Tre kolonier enstaka groumlnaktigasporer som bildar en gles ring ikolonins kanter

5 cm 19 agar

ALLS 7 dagar Tre kolonier Svagt vita naumltverksmaring vita flagor i mitten av koloni-erna

25 cm 19 ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier Ljusgroumlna flaumlckar i enring

2 cm 19 LiB

AL 7 dagar Tre kolonier Otydliga naumltverk medkompakt vit flaumlck i mitten

2 cm 19 AL

Renstrykning av jordprovet (100x spaumldning) odlat paring LiB i rumstemperatur fraringngroumlna sporer

Glukos 6 dagar Tre otydliga kolonier oumlvervuxenplatta Vita och fluffiga laumlngskanterna med tre ringar (cirka 1cm breda) med vita och naringgra gulakolonier Grumlig agar

5 cm 17 glukos

Agar 6 dagar Tre kolonier vitaljusgroumlna sporer iyttre kant jaumlmt utspridda

2-4 cm 17 agar

ALLS 7 dagar Tre kolonier Tydliga taumlta plattagenomskinliga naumltverk

4 cm 17 ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier Glesa vita naumltverkmed vissa delar som vaumlxer upparingtsom fluff Stora vita flagor inom 2cm radie fraringn koloniernas mitt

4 cm 17 LiB

AL 7 dagar Tre kolonier Otydliga taumlta genom-skinliga naumltverk Vita smaring flagorinom 1 cm radie fraringn koloniernasmitt fraumlmst i mitten

3 cm 17 AL

Renstrykning av roumltprovet odlat paring LiB i 30degC fraringn groumlna sporer

Glukos 6 dagar Aringtta kolonier daumlr tre aumlr de dropparvi placerade och saring finns det femstycken till kanten av plattornaTydligt vita med lite gulorangemitten

2-3 cm(smaring 1-2cm)

1 glukos

Agar 7 dagar Tre kolonier Tydliga genomskin-liga naumltverk med graringtt faumllt (05 cm)i mitten

4 cm 1 agar

ALLS 11 dagar Tre kolonier Ser ut som tunt vittpulver med mycket mycel somsticker ut fraringn koloniernas centrum

3 cm 1 ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier Vitt naumltverk som tillviss del vaumlxer som fluff upparingt Graringttfaumllt i mitten (05 cm)

15 cm 1 LiB

AL 11 dagar Tre kolonier Tunt vitt pulver medhoumlgt utstickande mycel Tydligarepulverboll i mitten

3 cm 1 AL

Renstrykning av barkprovet odlat paring LiB i 30degC fraringn groumlna sporer

Glukos 6 dagar Tre kolonier med sammanvaumlxtakanter Vita fluffiga kanter ochcirka 1 cm in en ring (cirka 05 cmbred) med gula och vita sporer Tomi mitten

5 cm 13 glukos

ALLS 7 dagar Tre kolonier Taumltt naumltverk Ganskamaringnga vita prickar i och motcentrum

3-4 cm 13 ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier Glesa vita naumltverkVita flagor jaumlmnt utspridda

2 cm 13 LiB

AL 7 dagar Tre kolonier Otydliga naumltverk Smaringflagor inom 1 cm radie fraringn koloni-ernas mitt

2 cm 13 AL

Renstrykning av traumlprovet odlat paring LiB i 30degC fraringn groumlna sporer

Glukos 6 dagar Tre kolonier sammanvaumlxta kanterVita och fluffiga med cirka 1 cm inen ring (cirka 15 cm bred) med vitaoch gula kolonier

5 cm 18 glukos

Agar 6 dagar Tre otydliga kolonier Faring vitasporer ojaumlmnt utspridda i yttrekant

15-2 cm 18 agar

ALLS 7 dagar Tre kolonier Otydliga taumlta plattanaumltverk

2 cm 18 ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier Glesa vita naumltverkmed vita flagor inom 15 cm radiefraringn koloniernas mitt

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

Renstrykning av barkprovet odlat paring AL i 30degC fraringn groumlna sporer

Glukos 6 dagar Tre kolonier stora flaumlckar medvitagula sporer i yttre kantGrumlig agar

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

ALLS 7 dagar Tre kolonier Naumltverk med smaring vitaprickar i mitten

3 cm 4 ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier Vita naumltverk vitaflagor jaumlmnt utspridda i en ring(cirka 1 cm bred)

2 cm 4 LiB

AL 7 dagar Tre kolonier Otydliga naumltverk medsmaring vita flagor fraumlmst i mitten menaumlven inom en radie paring 1 cm

3 cm 4 AL

Renstrykning av traumlprovet odlat paring AL i 30degC fraringn groumlna sporer

Glukos 6 dagar Tre kolonier sammanvaumlxta kanterVitt fluff laumlngs de yttersta kanternaoch 1 cm in en ring (1 cm bred)med gula kolonier Ganska tomma imitten bara enstaka vita kolonier

5-6 cm 28 glukos

ALLS 11 dagar Tre kolonier Glest naumltverk mer vitti mitten som aumlr sporer

3 cm 28 ALLS

LiB 7 dagar Tre otydliga kolonier Vitt fluff naumlrakanterna vita och groumlnvita prickarutspridda i kolonierna

4 cm 28 LiB

AL 11 dagar Tre otydliga kolonier Glestnaumltverk ganska mycket vita sporeri mitten och ganska centrerat

3 cm 28 AL

Renstrykning av tickprovet odlat paring AL i 30degC fraringn groumlna sporer

Glukos 6 dagar Tre otydliga kolonier samman-vaumlxta Vita sporer jaumlmnt utspriddai 15 cm band runt yttre kantGrumlig agar

5 cm 9 glukos

Agar 6 dagar Tre kolonier Mestadels mycelnaumlstan ihopvaumlxta kanter och taumlckerdaumlrmed naumlstan hela plattan

5-6 cm 9 agar

ALLS 7 dagar Tre kolonier Taumlta platta genom-skinliga tydliga naumltverk

4 cm 9 ALLS

LiB 7 dagar Tre kolonier Vita glesa naumltverkmed viss tendens att vaumlxa upparingtsom fluff En koloni har stora vitaflagor

3 cm 9 LiB

AL 7 dagar Tre kolonier Taumlta platta genom-skinliga tydliga naumltverk vita faumlltinom 05 cm radie fraringn koloniernasmitt

3 cm 9 AL

P Foton av renstrykta kolonier

Bilaga P Foton av renstrykta kolonier

Haumlr presenteras alla bilder paring de tre olika ligninplattorna glukosplattorna och agarplat-torna som de svampprover som valdes ut foumlr vidare studering inokulerades paring

Figur P1 Svampprov 1 renstruken paring de olika plattorna Fraringn houmlgst upp till vaumlnsterGlukos agar ALLS LiB och AL

XXXIII

XXXVII

Figur P11 Svampprov 13 renstruken paring de olika plattorna Fraringn houmlgst upp till vaumlnsterGlukos ALLS LiB och AL

XXXVIII

Figur P14 Svampprov 17 renstruken paring de olika plattorna Fraringn houmlgst upp till vaumlnsterGlukos tom agar ALLS LiB och AL

Q Plasmidsekvens aminosyrasekvens och foumlr E coli kodonoptimeradnukleinsyrasekvens foumlr DICSQDRAFT_107426

Bilaga Q Plasmidsekvens aminosyrasekvens och foumlr Ecoli kodonoptimerad nukleinsyrasekvens foumlr DI-CSQDRAFT_107426

Plasmidsekvens erharingllen fraringn Joakim Norbeck institutionen foumlr biologioch bioteknik paring Chalmers tekniska houmlgskola

CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGCGTAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCGAGCTCGGATCCCTGCAGTCTAGAGAATTCCTCGAGATCCCGGACACCATCGAATGGCGCAAAACCTTTCGCGGTATGGCATGATAGCGCCCGGAAGAGAGTCAATTCAGGGTGGTGAATGTGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCCGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTAAGTTAGCTCACTC

ATTAGGCACCGTCGAGGGGGGGCCCGGTACCCAGCTTTTGTTCCCTTTAGTGAGGGTTAATTGCGCGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC

Aminosyrasekvens DICSQDRAFT_107426

MHFFASVTVAFALLQVALSQEHSPVWGQCGGIEWSGATSCVAGSTCTVVNPYYSQCLPAVASPTTTSVPTSTPPSVPAACSTPSTVSNFSNSALPDPFLFDDGTPVTTVDDWSCRRAQILALVQGYEAGALPGKPSSLAGTLTTSGNTSTLSITASNNDTSITFEPTITFPSGDPPAGGWPLVIVYDSPSLPIPSGIATMIYSNSQMAQQNDQSSRGVGLFYDLFGQNATASAMTAWAWGVSRIIDVLEQTPSANINTQKIAVTGCSRDGKGALMAGALEPRIALTIPQESGSGGDTCWRLSLFEQEQGSDVQTATEIVQENVWFSTNFANYVDDLNALPYDHHLLAALIAPRPMISFENTDVVWLSPMSAFGCMSAAHTVWEALSIADFHGFEQVGGHQHCAWPSSLTPQLNAFFDRFLLGQNVSTDFFATNDEFNGVTWTPSQWINWTTPTLN

Nukleotidsekvens DICSQDRAFT_107426 kodonoptimerad foumlr E coli

ATGCACTTCTTTGCGTCGGTAACCGTCGCATTCGCACTGCTGCAGGTGGCGTTAAGCCAGGAACATTCTCCGGTTTGGGGGCAGTGCGGTGGCATTGAATGGAGTGGTGCCACCTCCTGTGTCGCAGGAAGCACTTGTACCGTGGTGAACCCGTATTATTCTCAGTGTCTGCCAGCTGTCGCATCACCAACGACGACCTCTGTTCCTACTAGCACCCCGCCGAGCGTGCCTGCCGCATGTAGCACCCCGAGCACCGTGAGTAACTTCAGTAATTCAGCCCTGCCTGATCCGTTTCTGTTCGACGATGGCACACCGGTAACTACTGTGGACGACTGGAGTTGTCGCCGCGCGCAGATCCTGGCACTCGTTCAGGGCTATGAAGCTGGAGCTCTGCCCGGTAAACCGAGCAGCCTTGCGGGTACCTTAACGACGTCTGGAAACACGTCGACTTTGAGCATTACCGCATCAAATAATGACACCAGCATTACCTTTGAACCAACGATTACCTTTCCGAGTGGTGATCCACCTGCGGGAGGTTGGCCGCTGGTTATCGTGTACGATTCCCCGAGCCTGCCGATTCCGAGTGGTATCGCGACCATGATTTATAGCAACTCACAGATGGCTCAGCAGAATGACCAGAGTTCGCGTGGAGTCGGCCTGTTTTATGATTTATTCGGCCAAAACGCTACGGCGTCTGCCATGACCGCGTGGGCCTGGGGCGTTTCTCGGATCATCGACGTACTGGAGCAAACCCCGTCAGCTAATATCAACACCCAAAAAATTGCCGTAACGGGTTGCTCCCGTGATGGGAAAGGCGCCTTAATGGCGGGCGCACTCGAACCCCGCATTGCCCTTACTATCCCACAGGAAAGCGGTTCCGGTGGCGATACGTGTTGGCGCCTGAGCCTTTTTGAGCAGGAGCAAGGATCCGATGTCCAGACGGCAACCGAAATTGTGCAGGAGAACGTATGGTTTTCCACAAACTTCGCCAATTACGTGGATGACCTGAACGCGCTGCCATACGATCACCACTTACTTGCGGCACTGATCGCCCCTCGTCCAATGATCTCTTTTGAAAACACAGACGTGGTGTGGTTGAGCCCGATGTCGGCATTTGGCTGTATGTCTGCTGCGCATACGGTGTGGGAGGCCCTGAGCATTGCGGATTTCCATGGTTTCGAACAGGTCGGGGGCCATCAGCATTGCGCTTGGCCTTCGAGTCTGACCCCTCAGTTGAATGCGTTTTTCGATCGTTTCCTGTTAGGCCAAAACGTTAGCACCGATTTTTTTGCGACCAATGATGAGTTCAACGGTGTCACCTGGACTCCGTCTCAGTGGATCAACTGGACGACCCCGACGCTGAAC

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin

Enzym foumlr separation och valorisering av lignin

Fylogenetiska traumld

Ligninnedbrytande svampar

Metod

Enzymatiska reaktionsvaumlgar

Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover

Renstryk av kolonier

Inokulering av renstrykta kolonier

Identifiering av svampar

Resultat


L-dopa och adrenalin

Konvertering av koniferylalkohol till L-dopa

Konvertering av L-dopa till adrenalin

Separationsenzym


Uppodling av svampar


Diskussion


Separationsenzym


Slutsats


Bilaga Agarplattor med lignin

Bilaga Agarplattor med potatisextrakt och dextros

Bilaga LB-media samt agarplattor med LB-media

Bilaga PCR-reaktion

Bilaga Restriktion med EcoRI och XbaI

Bilaga Gelelektrofores

Bilaga Upprening av DNA fraringn Agarosgel

Bilaga Ligering med T4-ligas

Bilaga Transformation

Bilaga Genuttryck

Bilaga Proteinextraktion och 6x His-tag proteinrening

Bilaga SDS-PAGE

Bilaga Bradfordanalys

Bilaga Detektion av aktivitet

Bilaga Beskrivningar av svampkoloniernas utseende efter renstryk

Bilaga Foton av renstrykta kolonier

Bilaga Plasmidsekvens aminosyrasekvens och foumlr E coli kodonoptimerad nukleinsyrasekvens foumlr DICSQDRAFT_107426

Christoffer Baumlckberg chrbackstudentchalmersseArvid Hagelberg arvidhastudentchalmersseRebecka Johansson rebjohastudentchalmersseLinn Kullberg klinnstudentchalmersseLouise Samuelsson lousamustudentchalmersseClara Sundstroumlm clarasustudentchalmersse

Handledare Carl Johan Franzeacuten och Sylvia Klaubauf Institutionenfoumlr Biologi och Bioteknik

Examinator Eva Albers Institutionen foumlr Biologi och Bioteknik

Kandidatprojektsrapport 2015Institutionen foumlr Biologi och BioteknikAvdelningen foumlr Industriell bioteknikChalmers Tekniska HoumlgskolaSE-412 96 GothenburgTelephone +46 31 772 1000

Skriven i LATEXGoumlteborg Sverige 2015

Sammanfattning

Inneharingll

1 Inledning

12 Bakgrund

2 Teori

13 Avgraumlnsningar

2 Teori

21 Lignin

2 Teori

(Xyl)n

(Xyl)nOHO

(Xyl)n

Xyl)n(

p-kumarylalkohol

Koniferylalkohol

Sinapylalkohol

2 Teori

foumlrfaumlder [26]

2 Teori

3 Metod

32 Separationsenzym

3 Metod

332 Agarplattor

3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Sammanfattning

Inneharingll

1 Inledning

12 Bakgrund

2 Teori

13 Avgraumlnsningar

2 Teori

21 Lignin

2 Teori

(Xyl)n

(Xyl)nOHO

(Xyl)n

Xyl)n(

p-kumarylalkohol

Koniferylalkohol

Sinapylalkohol

2 Teori

foumlrfaumlder [26]

2 Teori

3 Metod

32 Separationsenzym

3 Metod

332 Agarplattor

3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Sammanfattning

Inneharingll

1 Inledning

12 Bakgrund

2 Teori

13 Avgraumlnsningar

2 Teori

21 Lignin

2 Teori

(Xyl)n

(Xyl)nOHO

(Xyl)n

Xyl)n(

p-kumarylalkohol

Koniferylalkohol

Sinapylalkohol

2 Teori

foumlrfaumlder [26]

2 Teori

3 Metod

32 Separationsenzym

3 Metod

332 Agarplattor

3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Inneharingll

1 Inledning

12 Bakgrund

2 Teori

13 Avgraumlnsningar

2 Teori

21 Lignin

2 Teori

(Xyl)n

(Xyl)nOHO

(Xyl)n

Xyl)n(

p-kumarylalkohol

Koniferylalkohol

Sinapylalkohol

2 Teori

foumlrfaumlder [26]

2 Teori

3 Metod

32 Separationsenzym

3 Metod

332 Agarplattor

3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Inneharingll

1 Inledning

12 Bakgrund

2 Teori

13 Avgraumlnsningar

2 Teori

21 Lignin

2 Teori

(Xyl)n

(Xyl)nOHO

(Xyl)n

Xyl)n(

p-kumarylalkohol

Koniferylalkohol

Sinapylalkohol

2 Teori

foumlrfaumlder [26]

2 Teori

3 Metod

32 Separationsenzym

3 Metod

332 Agarplattor

3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






1 Inledning

12 Bakgrund

2 Teori

13 Avgraumlnsningar

2 Teori

21 Lignin

2 Teori

(Xyl)n

(Xyl)nOHO

(Xyl)n

Xyl)n(

p-kumarylalkohol

Koniferylalkohol

Sinapylalkohol

2 Teori

foumlrfaumlder [26]

2 Teori

3 Metod

32 Separationsenzym

3 Metod

332 Agarplattor

3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






2 Teori

13 Avgraumlnsningar

2 Teori

21 Lignin

2 Teori

(Xyl)n

(Xyl)nOHO

(Xyl)n

Xyl)n(

p-kumarylalkohol

Koniferylalkohol

Sinapylalkohol

2 Teori

foumlrfaumlder [26]

2 Teori

3 Metod

32 Separationsenzym

3 Metod

332 Agarplattor

3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






2 Teori

(Xyl)n

(Xyl)nOHO

(Xyl)n

Xyl)n(

p-kumarylalkohol

Koniferylalkohol

Sinapylalkohol

2 Teori

foumlrfaumlder [26]

2 Teori

3 Metod

32 Separationsenzym

3 Metod

332 Agarplattor

3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






2 Teori

foumlrfaumlder [26]

2 Teori

3 Metod

32 Separationsenzym

3 Metod

332 Agarplattor

3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






2 Teori

foumlrfaumlder [26]

2 Teori

3 Metod

32 Separationsenzym

3 Metod

332 Agarplattor

3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






2 Teori

3 Metod

32 Separationsenzym

3 Metod

332 Agarplattor

3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






3 Metod

32 Separationsenzym

3 Metod

332 Agarplattor

3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






3 Metod

332 Agarplattor

3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






3 Metod

4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






4 Resultat

3 L-hi

H2O Cho

1Fouml

gparing

vaumlg

fraringn

naumlr

maumln

behouml

foumlra

4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






4 Resultat

L-aspartat

L-aspartatammoniak-

Fumarat

L-histidin

L-histidinammoniak-

Urokansyra

Askorbinsyra

4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






4 Resultat

42 Separationsenzym

4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






4 Resultat

5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






5 Diskussion

52 Separationsenzym

54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






54 Slutsats

5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






5 Diskussion

Tack till

A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






A1 Material

1 KH2PO4 (025 gl)

2 (NH4)2SO4 (0695 gl)

3 NaNO3 (089 gl)

4 CaCl2 (10 gl)

6 FeCl3 (107 mgl)

7 Agar (15 gl)

(a) Lignoboost

11 70 etanol

A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






A2 Metod

B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






B1 Material

B2 Metod

C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






C1 Material

1 Trypton

2 Jaumlstextrakt

3 NaCl

6 NaOH (aq)

C1 Metod

D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






D PCR-reaktion

D1 Material

8 Templat-DNA

D2 Metod

D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






D PCR-reaktion

E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






E1 Material

5 Milli-Q vatten

E2 Metod

F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






F Gelelektrofores

F1 Material

1 Agaros

4 Loading dye

5 Molekylviktsstege

F2 Metod

F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






F Gelelektrofores

G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






G1 Material

G2 Metod

H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






H1 Material

2 Vektor DNA

3 Insert DNA

5 Milli-Q vatten

H2 Metod

I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






I Transformation

I1 Material

1 Kompetenta celler

3 LB-media

4 LB-agarplattor

I2 Metod

J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






J Genuttryck

Bilaga J Genuttryck

J1 Material

2 IPTG

J2 Metod

2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






2 Lysozym

ninta_system_manpdf

L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






L SDS-PAGE

Bilaga L SDS-PAGE

L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






L SDS-PAGE

L213 Metod SDS-PAGE

L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






L SDS-PAGE

TEMED 10 microl

01 (wv) SDS

M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






M Bradfordanalys

M1 Material

1 Bradfordreagens

4 Kyvetter

M2 Metod

M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






M Bradfordanalys

N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






N1 Material

2 Upprenat enzym

3 HCl (05 M)

4 Milli-Q vatten

N1 Metod

5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






5 cm 30 glukos

3 cm 30 agar

5 cm 30 ALLS

3 cm 30 LiB

3 cm 30 AL

2-3 cm 121glukos

Helaplattan

121 agar

4 cm 121ALLS

4 cm 121 LiB

4 cm 121 AL

3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






3-4 cm 122 agar

3 cm 122ALLS

3 cm 122 LiB

3 cm 122 AL

3 cm 123glukos

Helaplattan

123 agar

3 cm 123ALLS

3 cm 123 AL

2 cm (1cm smaring)

23 glukos

5-6 cm 23 agar

2-3 cm 23 ALLS

2 cm (smaring05 cm)

23 LiB

2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






2-3 cm 23 AL

5 cm 26 glukos

3 cm 26 agar

2 cm 26 ALLS

3 cm 26 LiB

3 cm 26 AL

3 cm 2 glukos

3-4 cm 2 agar

Helaplattan

2 ALLS

Helaplattan

1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






1 cm 5 glukos

2-3 cm 5 agar

3 cm 5 ALLS

3 cm 5 LiB

3 cm 5 AL

5 cm 25 glukos

3-4 cm 25 agar

3 cm 25 ALLS

3 cm 25 LiB

3-4 cm 25 AL

3-4 cm 14 glukos

3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






3-4 cm 14 agar

2-3 cm 14 ALLS

5 cm 14 LiB

3 cm 14 AL

3 cm 16 glukos

Helaplattan

16 agar

Helaplattan

16 ALLS

4 cm 16 LiB

2-3 cm 6 glukos

5 cm 6 agar

2-3 cm 6 ALLS

3 cm 6 LiB

3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






3 cm 6 AL

3-4 cm 31 glukos

2-3 cm 31 agar

4-5 cm 31 ALLS

4 cm 10 glukos

cirka 3cm

10 agar

3-4 cm 10 ALLS

3 cm 10 LiB

3 cm 10 AL

5 cm 20 glukos

3-4 cm 20 agar

XXVIII

3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






3-4 cm 20 LiB

3 cm 20 AL

4-5 cm 19 glukos

5 cm 19 agar

25 cm 19 ALLS

2 cm 19 LiB

2 cm 19 AL

5 cm 17 glukos

2-4 cm 17 agar

4 cm 17 ALLS

4 cm 17 LiB

3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






3 cm 17 AL

1 glukos

4 cm 1 agar

3 cm 1 ALLS

15 cm 1 LiB

3 cm 1 AL

5 cm 13 glukos

3-4 cm 13 ALLS

2 cm 13 LiB

2 cm 13 AL

5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






5 cm 18 glukos

15-2 cm 18 agar

2 cm 18 ALLS

2 cm 18 LiB

2 cm 18 AL

3 cm 4 glukos

2 cm 4 agar

3 cm 4 ALLS

2 cm 4 LiB

3 cm 4 AL

5-6 cm 28 glukos

3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






3 cm 28 ALLS

4 cm 28 LiB

3 cm 28 AL

5 cm 9 glukos

5-6 cm 9 agar

4 cm 9 ALLS

3 cm 9 LiB

3 cm 9 AL

XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






XXXIII

XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






XXXVII

XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






XXXVIII

Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Inledning

Syfte och maringl

Bakgrund

Avgraumlnsningar

Teori

Lignin




Metod


Separationsenzym


Insamling av prover

Agarplattor

Odlingsbetingelser

Utstryk av prover




Resultat





Separationsenzym




Diskussion


Separationsenzym


Slutsats





Bilaga PCR-reaktion






Bilaga Genuttryck


Bilaga SDS-PAGE






Documents

Enzymatisk extrahering och konvertering av lignin för ...publications.lib.chalmers.se/records/fulltext/219796/219796.pdf · 2 Teori Produktion av geler och plast från hemicellulosa