ES 細胞 & iPS 細胞研究用試薬Products for pluripotent stem cel ls2012-2013

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ES/iPS ce l l sRe search

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Contents

ES細胞・iPS細胞研究用製品ES細胞・iPS細胞研究用製品..................................................................................................4

多能性幹細胞の維持培養ヒトES/iPS細胞維持培養システム.......................................................................................５

Definedな基底膜マトリックス（StemAdhere.Defined.Matrix.for.hPSC）..........6

ヒト　リコンビナント　ラミニン..........................................................................................7

ウイルスフリーのiPS細胞誘導ベクター（STEMcircles）４つの因子.（Lin28,.Nanog,.Sox2,.Oct4）でiPS細胞を誘導.............................................................8

ヒト多能性幹細胞のキャラクタリゼーション染色用抗体.............................................8

胚様体（EB）形成胚様体形成用プレート（AggreWell）................................................................................9

多能性幹細胞クラスター及び胚様体の分離装置......................................................... 10

分化誘導ヒト多能性幹細胞からの神経前駆細胞分化用培地.（STEMdiff.Neural.Induction.Medium）.....................................................................11

ヒト多能性幹細胞からの分化用培地（STEMdiff.APEL.Medium）........................12

簡単・迅速なヒト多能性幹細胞分離　細胞分離用磁気ビーズ（EasySep）........13

ヒト多能性幹細胞のためのDEFINEDな凍結保存用培地.（mFreSR.and.CryoStorCS10）.........................................................................................13

非常にソフトな特殊表面の2Ｄ細胞培養ハイドロゲル（Softwell）....................... 14

ヒトES/iPS細胞研究の為のサポート試薬.........................................................................15

価格表価格表. ....................................................................................................................................... 16

4

ES 細胞・iPS 細胞研究用製品多能性幹細胞研究の様々な場面でご利用いただける製品を多数ラインアップしています。

mTeSR1 または TeSR2 を用いた培養 世界で最も使用されているフィーダー不要な ES, iPS 細胞維持培養用無血清培地

多能性幹細胞の維持培養維持用培地

基底膜マトリックスDefined な基底膜マトリックス (StemAdhere Defined Matrix for hPSC)ヒト多能性幹細胞の接着及び、維持の為のヒトリコンビナントタンパク質。Feeder Cell、MatrigelTM の代わりに利用することで不確定要素のない条件でヒト ES 細胞 /iPS 細胞を培養が可能。

ヒト リコンビナント ラミニン 注目は、トリプシン処理後 ROCK inhibitor を必要とせずに single cell suspension でヒト多能性幹細胞の増殖をサポートする Laminin-521 です（例、Laminin-411: 血管系、免疫系、神経系、膵臓系、Laminin-211: 運動神経、心筋系、骨格筋など）。

胚様体（EB) 形成

胚様体形成用プレート (AggreWell) サイズ、形が均一なEBの培養作成用プレート。EBのサイズをコントロールすることで分化の効率が大幅に向上。

分化誘導

ヒト多能性幹細胞からの神経前駆細胞分化用培地（STEMdiff Neural Induction Medium)高品質なヒト多能性幹細胞を神経前駆細胞 (neural rosettes) に誘導する培地です。STEMdiff Neural Rosette Selection Reagent との併用で、高純度のヒト神経前駆細胞を回収。

ヒト多能性幹細胞からの分化用培地（STEMdiff APEL Medium)ヒト多能性幹細胞分化をサポートする多用途培地です。心筋細胞、造血細胞、内胚葉細胞への誘導系の利用が可能。

ウイルスフリー　ヒト iPS 細胞誘導ベクターiPS 細胞の作製

細胞のキャラクタリゼーション多能性マーカー検出用抗体iPS ポピュレーションにおける未分化状態の分析、多能性幹細胞の評価可能。

多能性幹細胞の分離精製分離精製用磁気ビーズ試薬未分化な細胞や分化後の細胞を磁気ビーズで分離精製。

多能性幹細胞の凍結保存多能性幹細胞の凍結保存培地

多能性幹細胞クラスター及び胚様体の分離装置（COPAS 及び BioSorter） 10-1500um の大きさの物体を分析できるフローサイトメーター

非常にソフトな特殊表面の２D 細胞培養ハイドロゲル（Softwell） 9 種類あるハイドロゲルの硬度を選択いただくことで、ES/iPS 細胞の多様性維持、幹細胞から特定の細胞系列への誘導などの再生医学研究分野に幅広くご利用いただけます。

Softwell 従来の培養

ハイドロゲル上にECMをコートすることで、生体内により近い2D培養を実現

一般的な培養ディッシュSoftwell

培養目的に応じてハイドロゲルを選択可能

ゲルの弾性率E (kPa) 0.01 0.1 1 10 100 1,000 10,000 105 106 107

5

ヒト ES/iPS 細胞維持培養システム

mTeSR1 または TeSR2 は、ヒト多能性幹細胞をフィーダーフリーで培養する為に標準化された培地です。mTeSR1 は、血清フリー defined の組成で、ヒト多能性幹細胞（ヒト ES 細胞 /iPS 細胞）の維持培地として 26 ヵ国で50 以上の独自に樹立されたセルラインに利用されております。TeSR2 は、さらに動物由来タンパク質フリーでリコンビナントタンパク質だけを使用した完全 defined なヒト用培地です。mTeSR1 または TeSR2 とStemAdhere を組み合わせて使用することで defined な条件で培養することが可能となり、不確定要素のない安定した細胞増殖や、再現性のある結果を得ることができます。

• Defined な培養システムで各実験のバラツキを最小化• フィーダーフリー、調整済み培地で培養方法を最適化• 細胞は長期培養後も表現型は一定で核型も正常を維持

特長

■mTeSR1 Defined 培地■TeSR2 　 Defined 動物タンパクフリー

商品コード 商品名 梱包単位ST-05850 mTeSR1 500 mLST-05860 TeSR2 500 mL

mTeSR 1 で培養したヒトES細胞は、長期継代培養でも正常な核型を維持します。

mTeSR1 で長期継代培養 (48 passage) した H1 ヒト ES 細胞の染色体分析の結果。正常な核型を示しています。

*Dr.T Ludwig,WiCell Research Institute により提供頂いたデータ。

mTeSR 1で培養したヒトES細胞は、多能性があります。

軟骨 筋肉 神経

H9 ヒト ES 細胞を mTeSR1 で、6 passage の継代培養を行った後、免疫不全マウスの皮下に移植。形成されたテラトーマは、3 胚葉すべての細胞種を含んでいます。図は代表的な組織型。

Figure 1

Figure 2

多能性幹細胞の維持培養

6

Defined な基底膜マトリックス /StemAdhere Defined Matrix for hPSCStemAdhere は、ヒト多能性幹細胞の接着及び、維持の為のヒトリコンビナントタンパク質です。フィーダー細胞、　MatrigelTM の代わりに利用することで不確定要素のない条件でヒトES 細胞/iPS 細胞を培養できます。

特長• ヒトリコンビナント E- カドヘリン融合タンパク質• ヒト ES 細胞及び iPS 細胞の接着及び増殖をサポート• 多能性マーカーを維持し、正常な核型及び、in vivo のテラトーマ形成可能• MatrigelTM の代替物 (MatrigelTM からの変更も簡単 )• コストパフォーマンスが良い• 細胞表面上の接着分子を切断・破壊しない酵素フリーでの解離• mTeSR1 及び TeSR2 の両方でヒト多能性幹細胞を 20 継代以上の維持に成功• StemAdhere は、ウィスコンシン医科大学の Dr. Stephan Duncan’ s lab の文献を基に開発

キット構成はじめにご使用の際は、StemAdhere Kit (ST-07170) をご利用ください。StemAdhere Kit には、下記の 4 つが梱包されています。単品での販売もございます。

StemAdhere Kit (ST-07170) (1) StemAdhere Defined Matrix for hPSC　 2mL(250ug/mL) (2) StemAdhere dilution Buffer 1x100mL (3) Gentle Cell Dissociation Buffer 1x100mL (4) non TC-treated plates 8x6-well

Figure 3

商品コード 商品名 梱包単位ST-07170 StemAdhere Kit 1 kitST-07160 StemAdhere Defined Matrix for hPSC 2 mLST-07163 StemAdhere Dilution Buffer 100 mLST-07174 Gentle Cell Dissociation Reagent 100 mLST-27147 Non Tissue Culture-Treated 6-well Plates 8 packs

StemAdhere と mTeSR1 または TeSR2 を使用し培養した未分化なヒト多能性幹細胞は、他のマトリックスで成長したものと比較して形態がわずかに異なります。この違いは、培養の質または多能性を示すものではありません。

（A）StemAdhere 、TeSR2で5日間培養後のH9 hESCsは、コロニーの辺縁部の細胞の広がりに注目するとより緩くパックした状態でコロニーを形成する傾向があります。

（B）は、コロニーが大きくなり、融合を始めて、中心が辺縁部と比べて密度が高く、phase-bright の継代の準備ができたコロニーです。

（C、D）StemAdhere 、TeSR2 で 6 日 間 培 養 後 の H9 hiPSC-4D1 です。

（E、F） StemAdhere 、mTeSR1 で 5 日間培養後の H9 hESCs は、コロニーが大きくなり、融合を始めて、中心が辺縁部と比べて密度が高く、phase-bright の継代の準備ができたコロニーです。注目すべきはこれらの培養はphase-brightness にわずかな違いはあるがこれが培養の質または多能性を示すものではないということです。

C

100 µm

T

B

D F

500 µm

A

100 µm

500 µm500 µm

E

100 µm

多能性幹細胞の維持培養

A

D E F

B C

7

Defined な基底膜マトリックス /StemAdhere Defined Matrix for hPSC

ヒト リコンビナント ラミニンLaminin-521特長1. Single cell suspension で培養が可能2. プレーティング操作が簡単3. 単層培養が可能

Laminin-521 は、通常ヒト ES 細胞で発現分泌されるラミニンです。（その他、腎臓、神経筋接合部、肺、胎盤でも見つかっています。）ヒ ト ES/iPS 細 胞 は Laminin-521 を coating し た 表 面 で はMonolayer で増殖し、均質な細胞として培養され、トリプシン消化または、EDTA 処理（酵素を使用しないで）して single cell

suspention をプレーティングする簡単な方法で継代培養可能です。ROCK inhibitor 不要、defined、フィーダーフリー、動物由来成分フリーの培養システムで多能性マーカーを発現するヒト ES/iPS 細胞の自己再生を長期にわたり促進します。その増殖は Matrigel 上での増殖より早く安定しています。弊社下記アドレスより ES 細胞が Monolayer で増殖する様子をビデオでご覧頂けます。(http://www.veritastk.co.jp/cat/MED-BLA-01-01-0004/)。

Human recombinant Laminin-521、mouse laminin-111、Matrigel上で酵素処理しバラバラにさ れ た hES 細 胞 を ROCK inhibitor なしで培養した細胞生存についての結果です。また、培地に mTeSR1 を使用し single cell suspension でプレーティン グ さ れ hES 細 胞 は ROCK inhibitor (Y-27632) を添加したもの及び添加しないもので 24時間培養後にクリスタルバイオレット染色されました。Human recombinant Laminin-521上で培養した hES 細胞のみROCK inhibitor なしでの生存が確認されました。

ROCK inhibitor なし、single-cells で Human ES 細胞は急速にまた、数ヶ月間連続して増殖しました。Human ES 細胞を clumps の状態で Matrigel 上で培養するよりも簡単で長期間効率的に培養ができます。

Laminin-111: 初期上皮系細胞の発生及びエピブラストの分化をサポートするタンパク質です。Laminin-211: 運動神経、心筋系、骨格筋等を含む、広い範囲の組織をサポートするタンパク質です。Laminin-411: 血管系、免疫系、神経系や膵臓系の細胞等広い範囲の組織をサポートするタンパク質です。Laminin-511: フィーダー細胞を用いることなく、ヒト ES 細胞を未分化のまま数カ月維持培養することができます。

商品コード 商品名 梱包単位BLA-LN111-02 Human recombinant laminin 111 100 ugBLA-LN111-03 1 mgBLA-LN211-02 Human recombinant laminin 211 100 ugBLA-LN211-03 1 mgBLA-LN411-02 Human recombinant laminin 411 100 ugBLA-LN411-03 1 mgBLA-LN511-02 Human recombinant laminin 511 100 ugBLA-LN511-03 1 mgBLA-LN521-02 Human recombinant laminin 521 100 ugBLA-LN521-03 1 mg

Laminin-521 をプレートへコーティング

PBS でコンフルエントになった細胞を洗浄及びTrypLE/Trypsin/EDTA を添加1-5 分インキュベーション

Single cell suspension を遠心後、新しい培地で細胞ペレットを再懸濁

Laminin-521 をコートしたプレート上に最適な量の細胞及び培地を加える

Figure 4 Figure 5

多能性幹細胞の維持培養

Laminin-521 のプレーティング操作

8

STEMcircles - LGNSO Vector

• 遺伝子発現に必要な最小限の DNA シークエンスが含まれています• 通常使用されるプラスミド DNA より小さく、バクテリア DNA を含みません• 細胞が外来の DNA に対して自然に作用するサイレンシングのメカニズムを避け

ることが出来ます

この結果、安定した遺伝子発現が行えるため、通常のプラスミド DNA よりも優れたリプログラミングが可能です。このウイルスを使用せず、ゲノムにインテグレートされない方法は、iPS 細胞作製に理想的な方法です。

ウイルスフリーの iPS 細胞誘導ベクター / STEMcircles

ヒト多能性幹細胞のキャラクタリゼーション染色用抗体Primary Antibodies （一次抗体）

ターゲット抗原 クローン ISOタイプ 商品コード 梱包単位

Oct-3/4 40 Mouse IgG1

ST-01550 50 µg

ST-01551 150 µg

SSEA-1 MC-480 Mouse IgM ST-01552 100 tests

SSEA-3 MC-631 Rat IgM ST-01553 100 tests

SSEA-4 813-70 Mouse IgG3 ST-01554 100 tests

TRA-1-60 TRA-1-60 Mouse IgM ST-01555 100 tests

TRA-1-81 TRA-1-81 Mouse IgM ST-01556 100 tests

TRA-2-49 TRA-2-49/6E Mouse IgG1 ST-01557 100 tests

TRA-2-54 TRA-2-54/2J Mouse IgG1 ST-01558 100 tests

mTeSR 1で培養したヒトES細胞のImmunohistochemistry

A B

Figure 6

商品コード 商品名 梱包単位ST-05820 STEMcircles-LGNSO 100µg

STEMcircles-LGNSO ミニサークル DNA は、体細胞のリプログラミング能を有する４つの因子（Lin28、Nanog、Sox2，Oct4）および GFP レポーター遺伝子を含みます。

特長

mTeSR1 で培養した H1 ヒト ES 細胞のコロニー全体に多能性マーカーが発現している事が immunohistochemistry によりわかります。

A. Oct-3/4（ST-01550/ST-01551） を FITC-conjugated secondary antibody（ST-10210）で検出

B. SSEA-4（ST-01554） を FITC-conjugated secondary antibody（ST-10210）で検出、核は DAPI による染色

４つのリプログラミング因子及び GFP の発現はCMV プロモーターで誘導される（Jia et al.,2010）

多能性幹細胞の維持培養

9

ヒト ES 細胞 /iPS 細胞を分化させるプロトコルの多くは、胚様体（Embryoid body:ED) と呼ばれる３次元の集合体を形成することから始まります。従来の EB 形成方法は、細胞クランプを得るために未分化細胞をスクレイピングし、浮遊培養により凝集体を得ます。スクレイピング法で回収したEB は、サイズや形が不均一なため、分化は非効率的でコントロールすることができないという問題がありました。Aggrewell は、1 つのウェルの中が 400um あるいは 800um の径のマイクロウェルに分割されており、シングルセルサスペンションセルをプレーティングして、遠心後 24~48 時間培養する事で高度に均一なサイズの EB が形成されます(Figure 6)。均一なサイズの EB は、効率的に様々な細胞に分化させることが可能です。Aggrewell を使用することによりEB 作成が標準化され、実験の再現性が向上します。

・ サイズと形の均一な EB の形成・ 高い再現性・ EB サイズのコントロールが可能 *

(A) スクレーピング法で形成されたサイズと形の不均一な EB(B) Aggrewell 400 で形成されたサイズと形の均一な EB(C) AggreWell で得られる EB サイズは従来のスクレイピング法と　 違い、厳密にコントロールすることが可能です。

商品コード 商品名 商品説明 梱包単位

ST-27845AggreWell 400

50-3000 個の細胞を含む EB 作成用 1/pack, 8 wells (1200microwells/well)

ST-27945 50-3000 個の細胞を含む EB 作成用 5/pack, 40 wells (1200microwells/well)

ST-27865AggreWell 800

3000-20000 個の細胞を含む EB 作成用 1/pack, 8 wells(300microwells/well)

ST-27965 3000-20000 個の細胞を含む EB 作成用 5/pack, 40 wells(300microwells/well)

ST-27840AggreWell 400Ex

50-3000 個の細胞を含む EB 作成用 1/pack, 6 wells(4700microwells/well)

ST-27940 50-3000 個の細胞を含む EB 作成用 5/pack, 30wells(4700microwells/well)

ST-05893 AggreWell Medium AggreWell プレートを使用した EB 形成・培養用培地 100 mL

ST-27215 37µm Reversible Cell Strainers (15mL) 37µm ナイロンメッシュフィルター 15mL チューブ用

ST-27250 37µm Reversible Cell Strainers ( 50mL) 37µm ナイロンメッシュフィルター 50mL チューブ用

胚様体形成用プレート / AggreWell

Figure 7

特長

* シングルセルサスペンションの細胞量を調製する事で希望する細胞数の EB を作成できます。

Ａ B

Coun

t

C

500 cells/EB2000 cells/EBscraped EBs

回収される EB のサイズ分布

Reversible Cell Strainer（Catalog#ST-27215/ST-27250）は、AggreWell を使用して形成した EB を含む細胞凝集体のフィルトレーションや単離に使用可能です。シングルセルであればフィルターを通ることができますが、50 cellsよりも大きなサイズの EB であればフィルターにトラップされます。その後、Reversible Cell Strainer をひっくり返し回収用のチューブにセットすることにより凝集体のウォッシュや回収を行うことが可能です。mTeSR1 あ る い は TeSR2 で 培 養 し た 細 胞 か ら の EB 形 成 に は Aggrewell Medium をお薦めします。神経系への分化には STEMdiff Neural Induction Medium のご利用をお薦めします。また、心筋細胞への分化では STEMdiff APEL Medium のご使用例がございます。

AggreWell 法 スクレイピング法

胚様体（EB）形成

10

多能性幹細胞クラスター及び胚様体の分離装置COPAS 及び BioSorterUnion Biometrica 社は 10-1500µm の⼤きさの物体を分析できるフローサイトメーターを取り扱っています。

Time of fl ight（TOF）は、670nm の⾚⾊のレーザーをあてて得られる時間を反映した値でサイズを⽰す。Extinction（EXT）は、光学密度を⽰す。⼤きな ESC clusters（＞ 20 cells/cluster）の TOF 及び EXT の値とシングルセルや⼩さなクラスターの値は異なる。※ソーティングのパラメーターを最適化する為に分離したクラスターを測定した。

シングルセルソーティングは、通常の FACS で⾏われた。ESC cluster の分離は⼝径が500µm の COPAS ⼜は BioSorter で⾏われた。クラスターのサイズは顕微鏡で測定された（A 及び B）。BioSorter の Flow rate は〜 100 events/second。分離した細胞⼜はクラスターのバイアビリティーは、２⽇間培養後に alkaline phosphatase assay を⾏いコロニー形成効率をもとに測定された（C）。⼤きいコロニーでより良いコロニー形成効率を⽰した。

※サンプリングエラーにより 20-cell cluster の⽅が 10-cell cluster よりバイアビリティーが減少。

Fluorescent EB だけを回収する為のソーティング領域が⽰された。プロモーター領域にGFP を結合させ、確かな実験条件下で細胞種特異的に GFP を発現する EB を使⽤した。Lg [TOF]:Log scale of Time Of Flight（⼤きさを⽰す値）。Lg [Green]:Log scale of green fl uorescence intensity（緑⾊の蛍光強度）。

• COPAS 及び BioSorter は、通常の FACS ではできない多能性幹細胞クラスター（ESC clusters）の分離及び解析が可能です。また、COPAS 及び BioSorter は、通常の FACS よりバイアビリティー及びコロニー形成効率が良い ESC clusters を分離します。

• COPAS 及び BioSorter により定量多項⽬解析および⾃動化ソーティングは ESC clusters をベースとした薬剤及び⽣物学研究の為のハイスループット法としてご利⽤いただけます。

• BioSorter は、胚葉体（EB）を解析及び分離することができます。

特⻑

COPAS BioSorter

Figure 8  hESC clusters 分離の為のパラメータ

Figure 9 分離した hESC clusters のバイアビリティー

Figure 10 蛍光をベースにした胚様体（EB）の分離

＊アプリケーションに応じて、カスタマイズが必要になりますので価格等の詳細はお問合せください。

分化誘導

TOF

EXT

A B

C

11

製品

STEMdiff Neural Induction Medium(STEMdiff NIM) はヒト多能性幹細胞を 12 日間で神経前駆細胞に分化する際に使用する defined な serum free 培地です。Aggrewell 800 と STEMdiff NIM で効率良く均一な neural aggregate を作成、さらに PLO/L* プレート上で neural rosette へ誘導できます。STEMdiff Neural Rosette Selection Reagent は、STEMdiff NIM を使用してヒト多能性幹細胞から得られた接着性神経凝集体から選択的に neural rosette cluster を解離させるための酵素フリー試薬です。この試薬は穏やかな機械的粉砕と併用して使用することで神経前駆細胞（NPCs）を高純度で回収でき、さらに single cells として継代培養することを可能にします。STEMdiff NIM と STEMdiff Neural Rosette Selection Reagent の併用で、高純度のヒト神経前駆細胞を短期間で得ることができます。＊ PLO/L : poly-L-ornithine/laminin の略。

• Defined• 無血清• 迅速及び効率的な神経誘導

-6 日以内に Neural rosettes へ誘導-12 日以内に Single cell の神経前駆細胞集団を回収

用語

Neural RosetteNeural Rosette は、胚性幹細胞のin vitro 分化培養で神経前駆細胞の発生のサインです。また、Neural Rosette は、神経管の発生において Pax6、Sox1、Nestin のような神経前駆細胞に発現する多くのタンパク質を発現する円柱細胞の放射性配列です。Neural Rosette は、多くの神経の分化プロトコルの最初のステップである神経誘導成功の形態学的サインとして広く認められています。

Neural progenitor cells (NPCs)NPCs は、自己再生及び central nervous system（CNS) の分化した主な組織タイプ（神経細胞、星状細胞、オリゴデンドロサイト）を生む能力を有するものです。NPCs は、胚または成人哺乳類の脳から分離できますが、ヒトプライマリー NPCs のin vitro での増殖は、細胞入手の問題及びdoubling time がゆっくりである為大変チャレンジングです。hPSC から誘導した NPCs は、in vitro でヒトプライマリー NPCs と同等の制限のないソースを意味します。

Flat cellsFlat cells は、通常 NPCs を含む neural rosette cluster の末端で見つかります。Flat cells は文献では、neural-crest cells とも呼ばれておりその混在率は、スタートの多能性幹細胞の質に大きく依存しています（質が高いと flat cells は少なくなります）（Terskikh 2010）。我々は、NPCs の集団中の flat cells が、最終的に得られる分化した細胞種の収率を減少させ、希釈してしまうことを実験的に見つけており、STEMdiff Neural Rosette Selection Reagent を使い flat cells を培養物から除去することを強く推奨致します。

ヒト多能性幹細胞からの神経前駆細胞分化用培地 /STEMdiff Neural Induction Medium

商品コード 商品名 梱包単位ST-05831 STEMdiff Neural Induction Medium 100 mLST-05832 STEMdiff Neural Rosette Selection Reagent 100 mL

特長1. ヒト多様性　幹細胞

2. 神経凝集体　形成

3. 神経凝集体の　プレーティング

4. Neural Rosette　の回収

5. Neural Progenitor 　cells (NPCs) の　培養

mTeSR®1 AgreeWellTM 800 STEMdiffTM NeuralInduction Medium

STEMdiffTM NeuralRosette Selection

Reagent

Neural Rosetteの回収 Flat cells の除去

神経前駆細胞へ誘導 NPCs の培養

分化誘導

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製品STEMdiff APEL Medium は、ヒト多能性幹細胞分化をサポートする多用途培地です。心筋細胞、造血細胞、内胚葉細胞への誘導系で利用例がございます。特に、心筋細胞の分化では、Aggrewell 400 を使用し EB 形成させた例がございます。汎用性のある培地ですので、その他の細胞系の分化でも基本培地としてご利用頂けます。

特長、用途• Defined、動物由来タンパク質フリー：臨床応用への移行に最適• 成長因子フリー：最適なサイトカインと条件の組み合わせを変えることでフレキシブルに多系統への分化に使用可能• Nature Protocols に掲載された文献をもとに開発した多能性幹細胞分化をサポートする基本培地• 均一で再現性のあるヒト多能性幹細胞分化を促進• mTeSR1 のフィーダーフリー培養で最適化• 適切なサイトカインを加える事で 3 胚葉への分化をサポート

□ ヒト多能性幹細胞の造血系細胞への分化

mTeSR1 で少なくとも 10 継代培養した多能性幹細胞をSTEMdiff APELと適切なサイトカインを加えて造血系細胞へ分化させた結果です *。hiPS-4D1 cells ( 左 ) 及び、H9 cells ( 右 ) は、13 日間分化培養後、造血系マーカー CD34,CD45 の発現をフローサイトメトリーで確認し

ました。

□ ヒト多能性幹細胞の心筋細胞への分化mTeSR1 で少なくとも 10 継代培養した多能性幹細胞を Aggrewell 400、STEMdiff APEL と適切なサイトカインを加えて心筋細胞へ分化させた結果です *。拍動する EB は、16 日間培養後にカウント、トータルの EBs (n=9) の5-95% で変化。

□ ヒト多能性幹細胞の最終的な内胚葉細胞への分化

mTeSR1で少なくとも10 継代培養した多能性幹細胞を STEMdiff APELと適切なサイトカインを加えて内胚葉細胞へ分化させた結果です *。H9 ヒト ES 細胞は、4 日間 Rezania らの文献に基づいて分化させ、最終的な内胚葉細胞マーカーのCXCR4 及び、SOX-17 が陽性でした。

ヒト多能性幹細胞からの分化用培地 / STEMdiff APEL Medium

商品コード 商品名 梱包単位ST-05210 STEMdiff APEL Medium 100 mL

* 分化の方法の詳細は、TECHNICAL BULLETIN (STEMdiff APEL Medium) ステムセルテクノロジーズ社発行をご参考下さい。

2.45% 5.63%

11.5%80.4%

CD45

APC

CD 34 PE

10 4

10 3

10 2

10 1

10 0

0 101 10 2 10 3 10 4

6.10% 5.30%

19 .1%69.5%

CD45

APC

CD 34 PE

10 4

10 3

10 2

10 1

10 0

0 101 10 2 10 3 10 4

H9 cells hiPS -4D1 cells

STEMdif f TM APEL TM Medium: Basal Medium for Difof Human PSCs to Multiple Lineages

Perc

ent B

eat

ing

EBs

Expe riment Numbe r

10 0

90

80

70

60

50

40

30

20

10

01 2 3 4 5 6 7 8 9

ferentiation

CXCR

4-PE

SO X17- AP C

10 4

10 3

10 2

10 1

10 0

10 0 10 1 10 2 10 3 10 4

SO X17- APC

10 4

10 3

10 2

10 1

10 0

10 0 10 1 10 2 10 3 10 4

CXCR

4-PE

左 : サイトカインを添加していない STEMdiff APEL Medium 単独で培養した細胞右 : STEMdiff APEL Medium にサイトカインを添加し培養後 の分化した細胞

分化誘導

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簡単・迅速なヒト多能性幹細胞分離 細胞分離⽤磁気ビーズ /EasySep

*EasySep を使⽤するには専⽤磁⽯が別途必要です

EasySep hESC/hiPSC SSEA-4 Positive Kit

未分化なヒト ES 細胞または iPS 細胞（SSEA-4+ 細胞）を分離する為の磁気ビーズ試薬です。純度：85％ -95％（およそ 10％のヒト ES 細胞もしくは iPS 細胞を含む細胞懸濁液をスタートのサンプルとした場合）

商品コード 商品名 梱包単位ST-18165 EasySep Human SSEA-4 Positive Kit* 1 x 109 cells 用ST-18167 EasySep hESC-Derived CD34 Positive Selection Kit* 5 x 109 cells 用

グラフに⽰した Passage の H9 ヒト ES 細胞を mFreSR で凍結保存。Thawing effi ciency は融解後の⽣存 clump 数をカウントすることで解析しています。

ヒト多能性幹細胞における従来の凍結保存⽅法では FBS を使⽤していたため、培養時に undefi ned なコンポーネントが混⼊することにつながっていました。mFreSR は、ヒト ES 細胞及び iPS 細胞のために最適化された defi ned な凍結保存⽤の培地です。mFreSR と mTeSR1 を併せて使⽤することによりヒト ES 細胞培養のバラつきの原因となる⾎清とフィーダー細胞という2 つの要素を取り除くことができます。CryoStor CS10 は、 ヒ ト ES 細 胞 及 び iPS 細 胞 の た め のdefi ned かつ、アニマルプロテインフリーな凍結保存⽤培地です。

% c

lum

ps g

ivin

g ris

eto

und

iffer

entia

ted

colo

nies

Figure 11

商品コード 商品名 梱包単位ST-05854

mFreSR110 x 5 mL

ST-05855 50 mLST-07930 CryoStorCS10 10 mL

凍結融解後に得られる未分化コロニーの数が 5-10 倍に向上します。

ヒト多能性幹細胞のための DEFINED な凍結保存⽤培地 /mFreSR and CryoStorCS10

Tetrameric Antibody Complex (TAC) を介して⽬的細胞に磁性ナノビーズを結合させ、磁⽯で回収する簡便で迅速な細胞分離システムです。

細胞分離の原理

MagneticParticle

Tetrameric Antibody Complex (TAC)

Cell

Anti-Dextran

Anti-Cell

Start 11.85% SSEA-4+ cells Enriched 98.84% SSEA-4+ cells

分化誘導

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⾮常にソフトな特殊表⾯の 2D 細胞培養ハイドロゲル /Softwell製品Matrigen 社が提供するハイドロゲル「Softwell」は、⾮常にソフトな表⾯上での２次元（2D）細胞培養を可能にします。従来の培養では難しいとされる、⽣体組織に近い条件での 2D 培養を実現させます。脳組織の様なソフトな表⾯上でのニューロン細胞の培養、平滑筋の様な表⾯上での⼼筋細胞の培養などに適しています。また、ハイドロゲルの硬度を選択いただくことで、ES/iPS 細胞の多様性維持、幹細胞から特定の細胞系列への誘導などの再⽣医学研究分野にも幅広くご利⽤いただけます。

特⻑• 表⾯活性化ハイドロゲル「EasyCoat」は、たった15分のインキュベーションでお⼿持ちのECMのコーティングが完了します。• 既にゼラチンまたはコラーゲンがコーティングされた製品、あるいはハイドロゲルの表⾯が⾮活性の製品もございます。• ハイドロゲルの硬度（弾性率：0.5kPa 〜 50kPa）、ディッシュ / ウェルの⼤きさが選択可能です。• ほとんどの細胞ベースのアッセイや検出に影響を及ぼしません。

ECM がコーティングされた Softwell 上に細胞をスプレッドすることで、従来の表⾯が硬い培養ディッシュに⽐べより⽣体内に近い 2D 培養を可能にします。ゲル硬度は培養⽬的に応じて 9 段階（弾性率：0.5kPa 〜 50kPa）から選択できます。⼀般的にゲルの硬度が低い製品は多能性細胞や脳細胞に、またゲルの硬度が⾼い製品は眼細胞や⼼筋細胞に適しています。

Softwell の使⽤⽅法

1. コーティングしたい ECM を PBS または HBSS に希釈します。（初めて⾏う場合は、10µg/mL の I 型コラーゲンから検討されることを推奨しています）

2. Softwell がコーティングされたディッシュまたはウェルに " 1 " で調整した ECM をアプライし、室温で少なくとも15 分間インキュベートします。

3. PBS を除去後、細胞をスプレッドします。

※ EasyCoat 製品の使⽤⽅法です。コラーゲンコーティング、ゼラチンコーティング製品はそのままご使⽤いただけます。

Softwell（ウェルプレート型）

Petrisoft（ポリプロプレン製ディッシュ型）

Softview（ガラス底ディッシュ型）

Softwell 従来の培養

ハイドロゲル上にECMをコートすることで、生体内により近い2D培養を実現

一般的な培養ディッシュSoftwell

培養目的に応じてハイドロゲルを選択可能

ゲルの弾性率E (kPa) 0.01 0.1 1 10 100 1,000 10,000 105 106 107

製品のコード等は、P16 の価格リストをご参照ください。

分化誘導

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ヒト ES/iPS 細胞研究の為のサポート試薬

商品コード 商品名 梱包単位ST-07920 ACCUTASE® 100 mLST-07902 Collagenase 5 mLST-07909 Collagenase Type IV 100 mLST-07923 Dispase (1mg/mL) 100 mLST-07913 Dispase (5mg/mL) 100 mLST-07900 DNase I (1mg/mL) 1 mLST-07910 Trypsin-EDTA (0.05%) 500 mLST-07901 Trypsin-EDTA (0.25%) 500 mLST-07400 Trypsin in Citrate Saline 100 mL

商品コード 商品名 梱包単位ST-07060 3% Acetic Acid with Methylene Blue 100 mLST-27305 Cell Strainers, 40µm 50 / caseST-04902 Collagen Solution (3mg/mL) 35 mLST-07159 Fibronectin (1mg/mL) 1 mLST-07903 Gelatin (0.1% in water) 500 mLST-27310 Hypoxia Chamber 1 chamberST-13551 Rat Serum 2 mLST-07000 Sodium Pyruvate (100mM) 100 mLST-07050 Trypan Blue 100 mLST-07171 Y-27632 1 mgST-07172 5 mg

商品コード 商品名 梱包単位ST-02514 Activin A 5 µgST-02517 BAFF 20 µgST-02523 Bone Morphogenetic Protein-2 10 µgST-02524 Bone Morphogenetic Protein-4 10 µgST-02525 Noggin 20 µgST-02634 Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF) 25 µgST-02647

Transforming Growth Factor- β 12 µg

ST-02847 10 µg

Enzymes

Miscellaneous Tissue Culture Reagents and Supplies

Recombinant Cytokines

分化誘導

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Softwellの商品コードについてSoftwell の商品コードは、ディッシュまたはウェルの種類、サイズ、コーティングの種類およびゲルの硬度により、以下の様に決まります。

商品コード：MAT○○▲▲▲▲ -□□□ -＃＃

○○：ディシュまたはウェル

▲▲▲▲：ディシュまたはウェルのサイズ

SW:Softwell ポリスチレン製ウェルプレート（6 ウェル、12 ウェル、24 ウェルまたは 96 ウェル）PS :PetriSoft ポリスチレン製ディッシュ（35mm、100mm または 150mm）SV :Softview ガラス底ディッシュ（35mm のみ）

0035：35mm ディッシュ 20 枚⼊0100：100mm ディッシュ 20 枚⼊0150：150mm ディッシュ 20 枚⼊

0006：6 ウェルプレート 10 枚⼊0012：12 ウェルプレート 10 枚⼊0024：24 ウェルプレート 10 枚⼊0096：96 ウェルプレート 10 枚⼊

□□□：コーティングの種類ＥＣ：EasyCoat- お⼿持ちの ECM を簡便にコーティングする ためにハイドロゲル表⾯が活性化された 製品ですCOL：コラーゲンコーティングGLN：ゼラチンコーティングＮＡ：ハイドロゲルの表⾯が⾮活性の製品です

＃＃：ゲルの硬度（弾性率）ＵＳ：Ultra soft0.5 ：0.5kPa1 ：1kPa2 ：2kPa3 ：4kPa

8 ：8kPa12 ：12kPa25 ：25kPa50 ：50kPa

Screen : 全 9 種類の硬度のゲルとハイドロゲルフリーのゲルのセット製品です

(Coming Soon)(Coming Soon)

商品コード 希望⼩売価格MATPS0035-COL-0.5 ¥16,000 MATPS0035-COL-1 ¥16,000 MATPS0035-COL-12 ¥16,000 MATPS0035-COL-2 ¥16,000 MATPS0035-COL-25 ¥16,000 MATPS0035-COL-4 ¥16,000 MATPS0035-COL-50 ¥16,000 MATPS0035-COL-8 ¥16,000 MATPS0035-COL-Screen ¥16,000 MATPS0035-COL-US ¥16,000 MATPS0035-EC-0.5 ¥12,000 MATPS0035-EC-1 ¥12,000 MATPS0035-EC-12 ¥12,000 MATPS0035-EC-2 ¥12,000 MATPS0035-EC-25 ¥12,000 MATPS0035-EC-4 ¥12,000 MATPS0035-EC-50 ¥12,000 MATPS0035-EC-8 ¥12,000 MATPS0035-EC-Screen ¥12,000 MATPS0035-EC-US ¥12,000 MATPS0035-GLN-0.5 ¥14,000 MATPS0035-GLN-1 ¥14,000 MATPS0035-GLN-12 ¥14,000 MATPS0035-GLN-2 ¥14,000 MATPS0035-GLN-25 ¥14,000

商品コード 希望⼩売価格MATPS0035-GLN-4 ¥14,000 MATPS0035-GLN-50 ¥14,000 MATPS0035-GLN-8 ¥14,000 MATPS0035-GLN-Screen ¥14,000 MATPS0035-GLN-US ¥14,000 MATPS0035-NA-0.5 ¥12,000 MATPS0035-NA-1 ¥12,000 MATPS0035-NA-12 ¥12,000 MATPS0035-NA-2 ¥12,000 MATPS0035-NA-25 ¥12,000 MATPS0035-NA-4 ¥12,000 MATPS0035-NA-50 ¥12,000 MATPS0035-NA-8 ¥12,000 MATPS0035-NA-Screen ¥12,000 MATPS0035-NA-US ¥12,000 MATPS0100-COL-0.5 ¥30,000 MATPS0100-COL-1 ¥30,000 MATPS0100-COL-12 ¥30,000 MATPS0100-COL-2 ¥30,000 MATPS0100-COL-25 ¥30,000 MATPS0100-COL-4 ¥30,000 MATPS0100-COL-50 ¥30,000 MATPS0100-COL-8 ¥30,000 MATPS0100-COL-Screen ¥30,000 MATPS0100-COL-US ¥30,000

商品コード 希望⼩売価格MATPS0100-EC-0.5 ¥25,000 MATPS0100-EC-1 ¥25,000 MATPS0100-EC-12 ¥25,000 MATPS0100-EC-2 ¥25,000 MATPS0100-EC-25 ¥25,000 MATPS0100-EC-4 ¥25,000 MATPS0100-EC-50 ¥25,000 MATPS0100-EC-8 ¥25,000 MATPS0100-EC-Screen ¥25,000 MATPS0100-EC-US ¥25,000 MATPS0100-GLN-0.5 ¥27,000 MATPS0100-GLN-1 ¥27,000 MATPS0100-GLN-12 ¥27,000 MATPS0100-GLN-2 ¥27,000 MATPS0100-GLN-25 ¥27,000 MATPS0100-GLN-4 ¥27,000 MATPS0100-GLN-50 ¥27,000 MATPS0100-GLN-8 ¥27,000 MATPS0100-GLN-Screen ¥27,000 MATPS0100-GLN-US ¥27,000 MATPS0100-NA-0.5 ¥25,000 MATPS0100-NA-1 ¥25,000 MATPS0100-NA-12 ¥25,000 MATPS0100-NA-2 ¥25,000 MATPS0100-NA-25 ¥25,000

価格表

価格表

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Matrigen社商品コード 希望小売価格

MATPS0100-NA-4 ¥25,000 MATPS0100-NA-50 ¥25,000 MATPS0100-NA-8 ¥25,000 MATPS0100-NA-Screen ¥25,000 MATPS0100-NA-US ¥25,000 MATPS0150-COL-0.5 ¥39,000 MATPS0150-COL-1 ¥39,000 MATPS0150-COL-12 ¥39,000 MATPS0150-COL-2 ¥39,000 MATPS0150-COL-25 ¥39,000 MATPS0150-COL-4 ¥39,000 MATPS0150-COL-50 ¥39,000 MATPS0150-COL-8 ¥39,000 MATPS0150-COL-Screen ¥39,000 MATPS0150-COL-US ¥39,000 MATPS0150-EC-0.5 ¥30,000 MATPS0150-EC-1 ¥30,000 MATPS0150-EC-12 ¥30,000 MATPS0150-EC-2 ¥30,000 MATPS0150-EC-25 ¥30,000 MATPS0150-EC-4 ¥30,000 MATPS0150-EC-50 ¥30,000 MATPS0150-EC-8 ¥30,000 MATPS0150-EC-Screen ¥30,000 MATPS0150-EC-US ¥30,000 MATPS0150-GLN-0.5 ¥34,000 MATPS0150-GLN-1 ¥34,000 MATPS0150-GLN-12 ¥34,000 MATPS0150-GLN-2 ¥34,000 MATPS0150-GLN-25 ¥34,000 MATPS0150-GLN-4 ¥34,000 MATPS0150-GLN-50 ¥34,000 MATPS0150-GLN-8 ¥34,000 MATPS0150-GLN-Screen ¥34,000 MATPS0150-GLN-US ¥34,000 MATPS0150-NA-0.5 ¥30,000 MATPS0150-NA-1 ¥30,000 MATPS0150-NA-12 ¥30,000 MATPS0150-NA-2 ¥30,000 MATPS0150-NA-25 ¥30,000 MATPS0150-NA-4 ¥30,000 MATPS0150-NA-50 ¥30,000 MATPS0150-NA-8 ¥30,000 MATPS0150-NA-Screen ¥30,000 MATPS0150-NA-US ¥30,000 MATSV0035-COL-0.5 ¥30,000 MATSV0035-COL-1 ¥30,000 MATSV0035-COL-12 ¥30,000 MATSV0035-COL-2 ¥30,000 MATSV0035-COL-25 ¥30,000 MATSV0035-COL-4 ¥30,000 MATSV0035-COL-50 ¥30,000 MATSV0035-COL-8 ¥30,000 MATSV0035-COL-Screen ¥30,000 MATSV0035-COL-US ¥30,000 MATSV0035-EC-0.5 ¥25,000 MATSV0035-EC-1 ¥25,000 MATSV0035-EC-12 ¥25,000 MATSV0035-EC-2 ¥25,000 MATSV0035-EC-25 ¥25,000 MATSV0035-EC-4 ¥25,000 MATSV0035-EC-50 ¥25,000 MATSV0035-EC-8 ¥25,000

商品コード 希望小売価格MATSV0035-EC-Screen ¥25,000 MATSV0035-EC-US ¥25,000 MATSV0035-GLN-0.5 ¥27,000 MATSV0035-GLN-1 ¥27,000 MATSV0035-GLN-12 ¥27,000 MATSV0035-GLN-2 ¥27,000 MATSV0035-GLN-25 ¥27,000 MATSV0035-GLN-4 ¥27,000 MATSV0035-GLN-50 ¥27,000 MATSV0035-GLN-8 ¥27,000 MATSV0035-GLN-Screen ¥27,000 MATSV0035-GLN-US ¥27,000 MATSV0035-NA-0.5 ¥25,000 MATSV0035-NA-1 ¥25,000 MATSV0035-NA-12 ¥25,000 MATSV0035-NA-2 ¥25,000 MATSV0035-NA-25 ¥25,000 MATSV0035-NA-4 ¥25,000 MATSV0035-NA-50 ¥25,000 MATSV0035-NA-8 ¥25,000 MATSV0035-NA-Screen ¥25,000 MATSV0035-NA-US ¥25,000 MATSW0006-COL-0.5 ¥36,000 MATSW0006-COL-1 ¥36,000 MATSW0006-COL-12 ¥36,000 MATSW0006-COL-2 ¥36,000 MATSW0006-COL-25 ¥36,000 MATSW0006-COL-4 ¥36,000 MATSW0006-COL-50 ¥36,000 MATSW0006-COL-8 ¥36,000 MATSW0006-COL-Screen ¥36,000 MATSW0006-COL-US ¥36,000 MATSW0006-EC-0.5 ¥27,000 MATSW0006-EC-1 ¥27,000 MATSW0006-EC-12 ¥27,000 MATSW0006-EC-2 ¥27,000 MATSW0006-EC-25 ¥27,000 MATSW0006-EC-4 ¥27,000 MATSW0006-EC-50 ¥27,000 MATSW0006-EC-8 ¥27,000 MATSW0006-EC-Screen ¥27,000 MATSW0006-EC-US ¥27,000 MATSW0006-GLN-0.5 ¥32,000 MATSW0006-GLN-1 ¥32,000 MATSW0006-GLN-12 ¥32,000 MATSW0006-GLN-2 ¥32,000 MATSW0006-GLN-25 ¥32,000 MATSW0006-GLN-4 ¥32,000 MATSW0006-GLN-50 ¥32,000 MATSW0006-GLN-8 ¥32,000 MATSW0006-GLN-Screen ¥32,000 MATSW0006-GLN-US ¥32,000 MATSW0006-NA-0.5 ¥27,000 MATSW0006-NA-1 ¥27,000 MATSW0006-NA-12 ¥27,000 MATSW0006-NA-2 ¥27,000 MATSW0006-NA-25 ¥27,000 MATSW0006-NA-4 ¥27,000 MATSW0006-NA-50 ¥27,000 MATSW0006-NA-8 ¥27,000 MATSW0006-NA-Screen ¥27,000 MATSW0006-NA-US ¥27,000 MATSW0012-COL-0.5 ¥46,000

商品コード 希望小売価格MATSW0012-COL-1 ¥46,000 MATSW0012-COL-12 ¥46,000 MATSW0012-COL-2 ¥46,000 MATSW0012-COL-25 ¥46,000 MATSW0012-COL-4 ¥46,000 MATSW0012-COL-50 ¥46,000 MATSW0012-COL-8 ¥46,000 MATSW0012-COL-Screen ¥46,000 MATSW0012-COL-US ¥46,000 MATSW0012-EC-0.5 ¥37,000 MATSW0012-EC-1 ¥37,000 MATSW0012-EC-12 ¥37,000 MATSW0012-EC-2 ¥37,000 MATSW0012-EC-25 ¥37,000 MATSW0012-EC-4 ¥37,000 MATSW0012-EC-50 ¥37,000 MATSW0012-EC-8 ¥37,000 MATSW0012-EC-Screen ¥37,000 MATSW0012-EC-US ¥37,000 MATSW0012-GLN-0.5 ¥41,000 MATSW0012-GLN-1 ¥41,000 MATSW0012-GLN-12 ¥41,000 MATSW0012-GLN-2 ¥41,000 MATSW0012-GLN-25 ¥41,000 MATSW0012-GLN-4 ¥41,000 MATSW0012-GLN-50 ¥41,000 MATSW0012-GLN-8 ¥41,000 MATSW0012-GLN-Screen ¥41,000 MATSW0012-GLN-US ¥41,000 MATSW0012-NA-0.5 ¥37,000 MATSW0012-NA-1 ¥37,000 MATSW0012-NA-12 ¥37,000 MATSW0012-NA-2 ¥37,000 MATSW0012-NA-25 ¥37,000 MATSW0012-NA-4 ¥37,000 MATSW0012-NA-50 ¥37,000 MATSW0012-NA-8 ¥37,000 MATSW0012-NA-Screen ¥37,000 MATSW0012-NA-US ¥37,000

価格表

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StemCell Technologies社商品コード 希望小売価格

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商品コード 希望小売価格BLA-LN111-01 ¥13,000 BLA-LN111-02 ¥66,000 BLA-LN111-03 ¥465,000 BLA-LN211-01 ¥15,000 BLA-LN211-02 ¥87,000 BLA-LN211-03 ¥649,000 BLA-LN411-01 ¥15,000 BLA-LN411-02 ¥87,000 BLA-LN411-03 ¥649,000 BLA-LN511-01 ¥15,000 BLA-LN511-02 ¥71,000 BLA-LN511-03 ¥524,000 BLA-LN521-01 ¥15,000 BLA-LN521-02 ¥71,000 BLA-LN521-03 ¥524,000

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RSTF-11-0132