Évaluation in vitro de la sensibilité de bactéries

5/12/2018 Évaluation in vitro de la sensibilité de bactéries - slidepdf.com

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Évaluation in vitro de la sensibilitéde bactéries aux antibiotiquesCatégories cliniques

Classes thérapeutiques



INTRODUCTION

Quelle est la nécessité pour un

clinicien d'effectuer nécessairement unantibiogramme de la souche pathogène?

o Spectre d'activité des antibiotiques

o Résistance naturelle des bactéries



INTRODUCTION

Situation beaucoup plus complexe car

o bactéries peuvent acquérir résistance

aux antibiotiques par modificationcapital génétique

ímutation,

íacquisition de plasmides,íacquisition de transposons



INTRODUCTION

La seule identification de l'espècebactérienne ne permet plus de prédirel'efficacité d'une antibiothérapie

En pathologie infectieuse :o bactérie résistante à un antibiotique

lorsqu¶elle peut tolérer une concentration

d'antibiotique notablement plus élevée quela concentration qu'il est possibled'obtenir in vivo à la suite d'un traitement.



INTRODUCTION

Traitement maladie bactérienne :

o sélectionner antibiotique le plus efficace

o

concentrations atteignent un tauxthérapeutique au sein du foyer infectieux.

Rôle laboratoire de bactériologie =

o isoler et d'identifier les bactéries

o déterminer in vitro activité agentsantimicrobiens (méthodes rigoureusementstandardisées)



L'ANTIBIOGRAMME Principe

o déterminer la Concentration MinimaleInhibitrice (CMI) d'une souchebactérienne vis-à-vis des diversantibiotiques.

Définition (O.M.S.)o CMI = plus faible concentration

d'antibiotique capable de provoquer une inhibition complète de lacroissance d'une bactérie donnée,appréciable à l'il nu, après unepériode d'incubation donnée.



L'ANTIBIOGRAMME

Définition :

o Détermination sensibilité d'une bactérieaux antibiotiques

o

Examen quotidien de laboratoire, enparticulier hospitalier, pas toujoursnécessaire



L'ANTIBIOGRAMME

Méthodologies:Techniques classiques



L'ANTIBIOGRAMME

En milieu liquide

o CMI est indiquée par le tube qui

contient la plus faible concentration

d'antibiotique et où aucunecroissance n'est visible

Méthodes de dilution



L'ANTIBIOGRAMME


Détermination de la CMI par dilution en milieu liquide



L'ANTIBIOGRAMME


Détermination de la CMI par dilution en milieu liquide



L'ANTIBIOGRAMME


Détermination de la CMI par dilution en milieu gélosé



L'ANTIBIOGRAMME

Disques de papier buvard, imprégnésdes antibiotiques

Milieu gélosé

Culture pure de la souche à étudier

Méthodes de diffusion : antibiogramme standard



L'ANTIBIOGRAMME

Application des disques

Antibiotiques diffusent de manièreuniforme

Concentrations inversementproportionnelles à la distance dudisque




L'ANTIBIOGRAMME

Incubation Disques s'entourent de zones

d'inhibition circulaires correspondant àune absence de culture

Technique parfaitement standardisée,

Ä diamètres des zones d'inhibitiondépendent uniquement de la sensibilitédu germe




L'ANTIBIOGRAMME

Il existe une relation simple entre lesdiamètres des zones d'inhibition et les log2

des CMI mesurées par les techniques dedilution = Droites de concordance ou droites de

régression

En théorie, les mesures des diamètres deszones d'inhibition et leurs reports sur lescourbes de concordance donnent les valeursdes CMI en µg/mL




Courbe de concordance



L'ANTIBIOGRAMME

Standardisation de l¶antibiogramme

Paramètres rigoureusement contr

ô

lés. Standardisation régie par documents

émanant de l'OMS et des diverscomités nationaux




L'ANTIBIOGRAMME

Principales recommandations

Le milieu de culture doit permettre lacroissance de nombreuses bactéries etil ne doit pas contenir d'inhibiteurs des

antibiotiques.




L'ANTIBIOGRAMME


Les teneurs en calcium et enmagnésium doivent être contr ôlées car des concentrations trop élevées

inhibent l'action des aminosides La teneur en thymidine doit être fixe car

elle nuit à l'activité des sulfamides.




L'ANTIBIOGRAMME


Le pH influence l'activité de plusieursantibiotiques

L'épaisseur de la gélose va

conditionner la concentration de lasource d'antibiotique et elle doit être de4 mm.




L'ANTIBIOGRAMME


Les antibiotiques ainsi que les disquesdoivent être standardisés.




L'ANTIBIOGRAMME


La densité de l'inoculum bactérien estun élément primordial et elle doit êtreajustée à l'aide d'un photomètre ou par

comparaison avec un étalon d'opacité(échelle de McFarland).




L'ANTIBIOGRAMME


Une phase de pré-diffusion desantibiotiques peut conduire àl'obtention de zones d'inhibition plus

importantes. Selon les pays, une pré-diffusion est ou non préconisée.




L'ANTIBIOGRAMME


L

a température et la durée d'incubationdoivent être fixes.

o Pour la majorité des bactériesl'incubation est effectuée à 35-37 °Cdurant 18-24 heures dans uneatmosphère normale




L'ANTIBIOGRAMME


Recherche de la résistance à la méthicillinede S taphylococcus aureus subsp. Aureus

o une gélose de Mueller-Hinton hypersaléeet incubée à 37 °C

o

une gélose de Mueller-Hinton incubée à30 °C. Dans ce dernier cas, la durée del'incubation peut être de 48 heures.




L'ANTIBIOGRAMME


La technique doit être régulièrementcontr ôlée avec des souches deréférence (souches ATCC ou CIP)




L'ANTIBIOGRAMME


Souches AT

CC ou CI

Po P seudomonas aeruginosa : ATCC

27853 (= CIP 76.110)

o S

taphylococcus aureus subsp.aureus : ATCC 25923 (= CIP 76.25)

o E scherichia coli : ATCC 25922 (= CIP76.24)




Résultats de l¶antibiogramme





L'ANTIBIOGRAMME

Résultats Principe de la lecture d'un

antibiogramme Pas des courbes de concordance mais

bandelettes de lecture sur lesquelles

sont reportées les diamètrescorrespondant aux concentrationscritiques.




L'ANTIBIOGRAMME

Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme

Concentration critique supérieure = plusgrande quantité d'antibiotique actif que l'onpeut obtenir dans le sérum et les tissus à lasuite d'un traitement effectué à la posologiehabituelle

Concentration critique inférieure = plus faibleconcentration humorale et tissulaired'antibiotique actif




L'ANTIBIOGRAMME

Résultats : Principe de la lecture d'un antibiogramme

Tableau des concentrations Ä catégorisation

clinique.o CMI inférieure à la concentration critique

inférieure, la souche est qualifiée de sensible.

o CMI supérieure à la concentration critique

supérieure, la souche est qualifiée de résistante.o CMI comprise entre les deux concentrations

critiques, la souche est dite de sensibilitéintermédiaire.




L'ANTIBIOGRAMME





L'ANTIBIOGRAMME


Expression des résultats Résultats quantitatifs (CMI en µg/mL) = le

plus souvent interprétés par les laboratoiresen terme de possibilité thérapeutique.

Cette interprétation consiste à comparer lesvaleurs des CMI avec les concentrationscritiques établies pour chaque antibiotique.




L'ANTIBIOGRAMME


Critères permettant d'établir les valeurs desconcentrations critiques sont multiples :. Critères bactériologiques. Critères pharmacocinétiques. Critères cliniques. Critères techniques




L'ANTIBIOGRAMME


Critères bactériologiqueso basés sur les distributions des CMI des

populations bactériennes des différentesespèces et possédant ou non des

caractères de résistance acquisebiochimiquement et génétiquementidentifiés




L'ANTIBIOGRAMME

Résultats : Principe de la lecture d'un antibiogramme Critères bactériologiques




L'ANTIBIOGRAMME


Critères pharmacocinétiqueso posologies normales et maximales et

selon les différentes voiesd'administration

o

études pharmacocinétiques Ä informations sur l'absorption, ladistribution, la biotransformation etl'élimination des antibiotiques




L'ANTIBIOGRAMME


Critères cliniqueso permettent de moduler les données

pharmacologiquesíUn individu infecté par une bactérie

dont les CMI sont connues est-il ou nonguéri par un traitement qui semblait bienadapté compte tenu des résultatsobtenus in vitro ?




L'ANTIBIOGRAMME


Critères cliniqueso permettent de moduler les données

pharmacologiques

í les données reliant les CMI auxrésultats thérapeutiques ontlargement contribué à la validité del'antibiogramme (Sirot)




L'ANTIBIOGRAMME


Critères techniques

o

Reproductibilité des résultats




L'ANTIBIOGRAMME


Interprétation = classement encatégorie clinique

o Sensible

o Résistant

o Intermédiaire




L'ANTIBIOGRAMME


SENSIBLE :o Souches S : probabilité de succès

thérapeutique forte dans le cas d¶untraitement par voie systémique avec la

posologie recommandéeo Effet thérapeutique +++ : traitement à dose

habituelle par voie générale




L'ANTIBIOGRAMME


RESISTANT :

o Souches R : forte probabilité d'échecthérapeutique

o Effet thérapeutique (-) : quel que soitle traitement




L'ANTIBIOGRAMME


INTERMEDIAIREo Souches I : succès thérapeutique

imprévisible

o

Ensemble hétérogène pour lequel laseule valeur de la CMI n'est pasprédictive




L'ANTIBIOGRAMME


SPECTRE CLINIQUE DES ANTIBIOTIQUES

o L'antibiogramme n'est pas nécessaire siprise en compte du spectre clinique des

antibiotiques (SCA). , donc pour deuxclasses thérapeutique: habituellementsensibles et modérément sensibles




L'ANTIBIOGRAMME


SCA basé sur :o c, C,o données pharmacocinétiques,o spectre naturel de l'antibiotique (CMI

modales, CMI 50%, CMI 90%)o résultats cliniques




L'ANTIBIOGRAMME


4 classes sont proposées au clinicien par espèce bactérienne:

HABITUELLEMENT SENSIBLE

MOD

ER

EMENT

SEN

SIBL

E INCONSTAMMENT SENSIBLE

RESISTANTE




L'ANTIBIOGRAMME






L'ANTIBIOGRAMME






L'ANTIBIOGRAMME



o Spectre naturel de l'antibiotique

o Pourcentage de souches résistantes nedépasse pas 10%

o Le médecin peut choisir cet antibiotiquepour une infection peu sévère et

o L'antibiogramme n'est pas nécessaire




L'ANTIBIOGRAMME


MODEREMENT SENSIBLE




L'ANTIBIOGRAMME


MODEREMENT SENSIBLE




L'ANTIBIOGRAMME


MODEREMENT SENSIBLEo

naturellement peu sensibles àl'antibiotiqueo mais pas de résistance acquise (CMI 50%

comprises entre c et C)o

Le traitement impose de fortes doseso ou infection de localisation particulière

avec des concentrations très élevées del'antibiotique




L'ANTIBIOGRAMME


INCONSTAMMENT SENSIBLE




L'ANTIBIOGRAMME


INCONSTAMMENT SENSIBLE




L'ANTIBIOGRAMME


INCONSTAMMENT SENSIBLEo Spectre naturel de l'antibiotique mais

la fréquence de résistance acquisedépasse 10%.

o

Sensibilité imprévisible, doncl'antibiogramme est nécessaire.o Risque d'échec inacceptable




L'ANTIBIOGRAMME


RESISTANTE




L'ANTIBIOGRAMME


RESISTANTE




L'ANTIBIOGRAMME


RESISTANTE

o Fréquence de résistance > 90%,

o Catégorie hétéroclite

í espèce naturellement résistante

í espèce habituellement sensible mais %R > 90%

í espèce S in vitro mais R cliniquement




L'ANTIBIOGRAMME

Résultats : Principe de la lecture d'un antibiogramme Érythromycine (macrolide) :

o

Espèce habituellement sensible:S.

pyogenes:CMI modale de 0,03 mg/lo Espèce modérément sensibles: H . influenzae: CMI

modale de 4 mg/l)o Espèce inconstamment sensible: S. pneumoniae:

CMI modale de 0,03 mg/l mais 30-40% de souchesrésistantes en 2000o Espèce résistante: E. coli : CMI modale de 32 à 64

mg/l : résistance naturelle incompatible avec untraitement




L'ANTIBIOGRAMME

Résultats : Principe de la lecture d'un antibiogramme Érythromycine (macrolide) :




L'ANTIBIOGRAMME

Résultats : Principe de la lecture d'un antibiogramme Lecture interprétative de l¶antibiogramme

o Fondée sur la connaissance des phénotypes de

résistance.o But : transformer un résultat catégorisé

"sensible" en un résultat "intermédiaire" ou"résistant" en raison d'un risque d'échecthérapeutique.

o

Nécessite :í Une identification correcte de la soucheí Une méthode d'antibiogramme parfaitement

standardisée




L'ANTIBIOGRAMME

Résultats : Principe de la lecture d'un antibiogramme Généralisation des résultats à des antibiotiques non

testéso Choix des antibiotiques testés repose

í identification du germeí connaissance de sa résistance naturelleí site de l'infection

o Connaissance des familles d'antibiotiques et desmécanismes de résistance croisée permet de nefaire figurer dans l'antibiogramme qu'un nombrerestreint de molécules représentatives.




L'ANTIBIOGRAMME

Techniques en milieu liquide La détermination de la sensibilité peut

se réaliser en milieu liquide en testantla sensibilité de la souche bactériennevis-à-vis des concentrations critiquessupérieures et inférieures desdifférents antibiotiques ou uniquementvis-à-vis des concentrations critiquesinférieures.

Autres techniques de l¶antibiogramme



L'ANTIBIOGRAMME

Technique en milieu gélosé : le Etest® La détermination précise de la CMI par

la méthode de référence estdifficilement utilisable en pratiquequotidienne. La commercialisationd'une technique rapide et simple, leEtest (AB Biodisk), permet à unlaboratoire de diagnostic de mesurer laCMI.

Autres techniques de l¶antibiogramme



L'ANTIBIOGRAMME

Technique en milieu gélosé : le Etest® Autres techniques de l¶antibiogramme



L'ANTIBIOGRAMME

Limites techniques

Réalisation d'un antibiogramme Ä

respect de conditions techniques qui

sont parfois incomplètement et

insuffisamment respectées.

Limites de l¶antibiogramme



L'ANTIBIOGRAMME

Limites techniques

Culture pure et identifiée. Un antibiogramme réalisé de manière

non standardisée et sur un mélange de

germes non identifiés est dépourvu de

sens




L'ANTIBIOGRAMME

Limites techniques

Vérification validité technique au moins1 fois/mois

o sensibilité des souches de référence

ídiamètres des zones d'inhibitionconformes valeurs publiées par Comité Antibiogramme.




L'ANTIBIOGRAMME

Limites techniques :

Les bactéries appartenant aux genresH aemophilus, Brucella, P asteurella,Campylobacter , Nocardia... requièrentl'emploi de milieux et de conditions de

culture adaptés à leurs exigences decroissance.




L'ANTIBIOGRAMME


Les espèces des genres Chlamydia,Chlamydophila, Rickettsia... sont desparasites intracellulaires obligatoires




L'ANTIBIOGRAMME


L'antibiogramme ne permet pas dedéterminer la sensibilité desmycobactéries à croissance lente




L'ANTIBIOGRAMME


Les techniques de diffusion appliquéesaux anaérobies ont été critiquées car elles ne peuvent être appliquées ni àtoutes les espèces ni à tous les

antibiotiques. Et elles sont peureproductibles




L'ANTIBIOGRAMME


La technique des disques s'appliquemal à l'évaluation de la sensibilité à desmolécules qui diffusent peu dans lagélose (toute résistance à confirmer

par mesure CMI) :o Polymyxines ou des Glycopeptides




L'ANTIBIOGRAMME

Limites dans l'interprétation desrésultats

Incertitude sur l'étiologie de l'infection Évaluation de l'intensité d'action d'un

antibiotique

L'antibiogramme ne renseigne que sur l'activité bactériostatique




L'ANTIBIOGRAMME

Synergies ou antagonismes :o tests complémentaires

o respect des lois de Jawetz

Association d¶antibiotiques



L'ANTIBIOGRAMME

Utilisation d'une association d'antibiotiquesest justifiée dans quatre cas :

o Élargir le spectre d'activité dans les casd'infections à germes multiples.

o Traiter en urgence une infection grave nondiagnostiquée.

o Prévenir la sélection de mutants résistantslors des traitements de longue durée.

o Obtention d'un effet synergique




L'ANTIBIOGRAMME

Lois de Jawetz et Gunisson Association de deux antibiotiques

bactéricides peut produire un effetsynergique Association de deux antibiotiques

bactériostatiques donne généralement un

effet additif Association d¶un antibiotique bactéricide etd¶un antibiotique bactériostatique peutdonner un effet antagoniste.




L'ANTIBIOGRAMMEAssociation d¶antibiotiques




L'ANTIBIOGRAMME




L'ANTIBIOGRAMME




L'ANTIBIOGRAMME






L'ANTIBIOGRAMME

Comme toutes lois, celles de Jawetz etGunisson présentent des exceptions :

Les associations triméthoprime-sulfamide sont synergiques alors que

ces deux antibiotiques sontbactériostatiques.




L'ANTIBIOGRAMME

Comme toutes lois, celles de Jawetz etGunisson présentent des exceptions :

Les associations macrolide-chloramphénicol ou macrolide-

lincosamide ou macrolide-macrolidesont antagonistes alors que tous cesantibiotiques sont bactériostatiques.


Autres méthodes d¶évaluation de



Autres méthodes d¶évaluation del¶activité des antibiotiques

Recherche des bêta-lactamaseso Méthode acidimétrique

í Acidification : production d'acidepénicilloïque ou céphalosporoïqueíDétection : changement coloration

indicateur de pH (rouge de phénol ou

pourpre de bromocrésol)íBandelettes ou des disques imprégnés

de pénicilline G ou de céphalosporine etd'un indicateur de pH





Recherche des bêta-lactamases

o Méthode iodométrique

íAcide pénicilloïque réduit iode

íDétection : décoloration mélangeiode - amidon.





Recherche des bêta-lactamaseso Méthode chromogénique

íCéphalosporine change decoloration après hydrolyse

íDétection : nitrocéfine, après action

d'une bêta-lactamase vire du jauneau rouge (disques de papier imprégnés de nitrocéfine)




Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques

Épreuves de bactéricidie

Effet bactériostatique souvent suffisantpour traiter une infection :

o inhibition multiplication bactérienne

Ä destruction agent infectieux par système immunitaire






Effet bactériostatique souvent suffisantpour traiter une infection :o Infections graves ou touchant des

individus immunodéprimés :

traitement bactéricide.






o Bactéricidie : concentration minimale

bactéricide (CMB)o CMB = plus faible concentration

d'antibiotique capable de détruire 99,99%

d'un inoculum bactérien

o 99,99 % = choix arbitraire





Épreuves de bactéricidie CMB déterminée après recherche CMI en

milieu liquide (technique de macrodilution oude microdilution) :o Milieu gélosé dépourvu d'antibiotiqueo Quantité définie de tous les tubes ne

présentant pas de croissance visibleo Dénombrement bactéries survivanteso Comparaison avec tube témoin sans

antibiotique





Épreuves de bactéricidie Epreuves bactéricidie dépendent de 2

facteurso Facteurs biologiques :

íBactéries persistantes :Les bactéries persistantes, bactéries en

phase stationnaire ou en phase demultiplication lente, échappent à l'actiondes antibiotiques actifs sur labiosynthèse du peptidoglycane.





Épreuves de bactéricidie Les épreuves de bactéricidie dépendent de 2

facteurso Facteurs biologiques :

í Effet paradoxal :augmentation proportion de bactériessurvivantes lorsque concentration enantibiotique augmente au-delà de laCMB.

í Phénomène, observé principalementavec les bêta-lactamines (mal comprismais complique l'interprétation du test)





Épreuves de bactéricidie Les épreuves de bactéricidie

dépendent de 2 facteurs :o Facteurs biologiques :

íBactéries tolérantes échappent àaction létale antibiotique alors quela croissance est inhibée et que laCMI n'est pas modifiée.

íLa tolérance : rapport CMB / CMI égal ou supérieur à 32.





Épreuves de bactéricidie Les épreuves de bactéricidie dépendent de 2

facteurs :

o

Facteurs biologiques :o Facteurs techniques

í standardisation de l'inoculum,í précision des volumes transférésí composition des milieux utilisés,í transfert d'antibiotique particulièrement

important lorsque l'épreuve est faite sur des bactéries ayant une CMI élevée...





Recherche des pouvoirs bactériostatique etbactéricide du sérum

o Sérum (ou tout autre liquide organique) d'unmalade recevant une antibiothérapie :pouvoir bactériostatique ou bactéricide sur lasouche responsable de l'infection

o Dilution maximale du sérum capable d'inhiber la croissance du germe après 18 heuresd'incubation= activité bactériostatique.





Recherche des pouvoirsbactériostatique et bactéricide du

sérum Numération survivants dans les tubes

où aucune culture n'est visible permet

de déterminer le pouvoir bactéricide(survivants = 0,01 %).





Recherche des pouvoirs

bactériostatique et bactéricide du

sérum Détermination pouvoirs

bactériostatique et bactéricide du

sérum = examen de laboratoirepermettant d'affirmer traitement correct






Deux prélèvements de sérum

Tenir compte pharmacocinétique de l'antibiotiqueutilisé

o Premier prélèvement : au moment du pic sérique

í soit 45 à 60 minutes après une injection

intramusculaire,í 15 minutes après une injection intraveineuse,

í 90 minutes après une administration orale (cestemps ont été définis pour l'espèce humaine)





Recherche des pouvoirsbactériostatique et bactéricide du

sérum Deux prélèvements de sérum sont

nécessaires.o Second prélèvement : au plus bas

des concentrations sériques (vallées)= juste avant une nouvelleadministration d'antibiotique.






Effet bactériostatique suffisant = la plusgrande dilution inhibitrice =o 1/32 pour les pics

o 1/2 pour les vallées.

Effet bactéricide satisfaisant (99,99 %) =o 1/32 pour les pics

o 1/8 pour les vallées

C l i



Conclusion

Les difficultés techniques et les limitesde validité ne doivent pas faireconclure à l'inutilité de l'antibiogramme

Les laboratoires doivent rendre, le plusrapidement possible, des résultats plusexplicites et plus sélectifs (sélectionner les antibiotiques utilisables sur le

terrain, ne pas rendre des résultats nonadaptés au cas clinique...)

C l i



Conclusion Les cliniciens doivent interpréter les

résultats Une indication de résistance, doit inciter à ne

pas utiliser l'antibiotique Mais une indication de sensibilité doit

conduire à une réflexion : l'antibiotique actif in vitro a-t-il une chance d'être efficace invivo compte tenu du contexte clinique ?

L'antibiogramme n'est qu'un des élémentspermettant d'instaurer une antibiothérapie

D'autres considérations cliniques,pharmacologiques, toxicologiques,financières... participent au choix dutraitement.

C l i



Conclusion

A l'occasion de l'analysebactériologique, un dialogue doits'instaurer entre le praticien et le

responsable du laboratoire Trop souvent, l'un ou l'autre des deux

participants attribue à son interlocuteur

des connaissances qu'il n'a pasobligatoirement

Lecture interprétative de



Lecture interprétative del¶antibiogramme

Aminosides (Entérobactéries)o Phénotypes

í gentamicine résistant, tobramycine sensible,nétilmicine résistant et amikacine sensible

í gentamicine sensible, tobramycine résistant,nétilmicine résistant et amikacine sensible

í gentamicine sensible, tobramycine sensible,nétilmicine résistant et amikacine résistant

í

gentamicine sensible, tobramycine résistant,nétilmicine sensible et amikacine résistanto doivent conduire à vérifier l'identification et

l'antibiogramme car de tels phénotypes sontimprobables.





Aminosides (entérocoques, S treptococcus sp. àl'exception de S treptococcus pneumoniae )o Seuls des disques fortement chargés en

streptomycine, kanamycine et gentamicine

doivent être utilisés pour les entérocoques etpour les streptocoques car ces bactéries sontnaturellement résistantes à bas niveau vis-à-visdes aminosides.

o Ils permettent de détecter une résistance acquise

de haut niveau qui abolit l'effet synergiquebactéricide de l'association des aminosidesconcernés avec les pénicillines. Les autresaminosides restent utilisables en association.





Aminosides (entérocoques, S treptococcussp. à l'exception de S treptococcus

pneumoniae )o Diamètre supérieur ou égal à 14 mm pour

la streptomycine ou la kanamycine,diamètre supérieur ou égal à 17 mm pour la gentamicine : synergie possible avec lespénicillines en cas de sensibilité à cesantibiotiques.

o Diamètre inférieur à 12 mm pour lastreptomycine : la streptomycine ne peutêtre utilisée.




ecture interprétative del¶antibiogramme

Aminosides (entérocoques, S treptococcussp. à l'exception de S treptococcus

pneumoniae )

o Diamètre inférieur à 10 mm pour lakanamycine : la kanamycine, l'amikacineet l'isépamicine ne peuvent être utilisés.

o Diamètre inférieur à 11 mm pour la

gentamicine : gentamicine, kanamycine,tobramycine, dibékacine, amikacine,sisomicine, nétilmicine et isépamicine nepeuvent être utilisés.




pl¶antibiogramme

Aminosides (P rovidencia sp.)

o Les résultats gentamicine sensible,

tobramycine sensible et nétilmicine

sensible doivent être interprétés

comme intermédiaires (résistancenaturelle).




pl¶antibiogramme

Ampicilline (Entérobactéries)o Interprétation valable pour laBacampicilline, la Métampicilline et laPivampicilline.

Amoxycilline + acide clavulaniqueo L'observation d'un phénotype

amoxicilline sensible et amoxycilline

+ acide clavulanique résistant révèleune mauvaise conservation desdisques d'antibiotique.




pl¶antibiogramme

Ampicilline (Entérocoques)o La sensibilité des entérocoques aux

pénicillines est appréciée à l'aide d'undisque d'ampicilline chargé à 10 µg.

o Pour E nterococcus faecalis,l'interprétation est valable pour lapénicilline G, l'amoxicilline, la pipéracillineet l'imipénème.

o Le traitement des infections sévères dues

à des souches deE

nterococcus sp.ampicilline S/I nécessite des dosesélevées d'une pénicilline associée à unaminoglycoside pour obtenir une activitébactéricide.




pl¶antibiogramme

Céfalotine (Entérobactéries)

o Réponse valable pour toutes lescéphalosporines de première génération.

Chloramphénicol ( Acinetobacter sp.,entérobactéries, entérocoques, P seudomonas

aeruginosa, staphylocoques , streptocoques

S tenotrophomonas maltophilia)o Réponse valable pour le thiamphénicol




pl¶antibiogramme

Clindamycine (anaérobies)

o La lecture doit être effectuée après 48heures d'incubation car après 24heures d'incubation les souchespeuvent apparaître faussementsensibles.




pl¶antibiogramme

Colistine

o Réponse valable pour les autrespolymyxines.

Colistine (P roteus sp., P rovidencia sp.,S erratia sp.)

o Phénotype colistine sensible

improbable : vérifier identification etantibiogramme




pl¶antibiogramme

Érythromycine (Entérocoques,Staphylocoques, Streptocoques)

o Réponse valable pour azithromycine,clarithromycine




pl¶antibiogramme

Gentamicine (Staphylocoques)

o Interprétation valable pour lanétilmicine.

o Souches résistantes à la gentamicine= résistantes à l'ensemble desaminoglycosides sauf streptomycine




pl¶antibiogramme

Kanamycine (Entérobactéries)

o Réponse valable pour la néomycine,la framycétine et la paromomycine.

Kanamycine (Staphylocoques)

o Interprétation valable pour lanéomycine, la framycétine, la

paromomycine, l'amikacine etl'isépamicine.




l¶antibiogramme

Métronidazole (anaérobies)

o Réponse valable pour l'ornidazole.Certaines souches apparaissentfaussement résistantes sil'anaérobiose n'est pas correcte.




l¶antibiogramme

Oxacilline (Staphylocoques)o Les souches résistantes à l'oxacilline

(résistance homogène ou résistancehétérogène) = résistantesí toutes les pénicillines (associées ou

non à un inhibiteur des bêta-lactamases),

í céphalosporinesí carbapénèmes, même s'il existe une

sensibilité apparente in vitro.




l¶antibiogramme

Oxacilline (Staphylocoques)

o Les souches pénicillines résistantes -oxacilline sensibles sont sensibles

aux associations pénicilline -inhibiteur de bêta-lactamase, auxcéphalosporines et aux

carbapénèmes.o Il n'est pas utile de tester ces

molécules en routine.




l¶antibiogramme

Oxacilline (Staphylocoques)o Le test doit être effectué dans des

conditions permettant la détection de

la résistance hétérogène : milieu deMueller-Hinton hypersalé incubé à37 °C ou milieu de Mueller-Hintonincubé à 30 °C.

o La résistance hétérogène se traduitpar la présence de microcoloniesdans la zone d'inhibition.




l¶antibiogramme

PénicillineG (Staphylocoques)

o Résistance à la pénicilline G par production de pénicillinase : grosses

colonies en bordure de la zoned'inhibition et éventuelle présence decolonies "squatters" dans la zone

d'inhibition




l¶antibiogramme


o Réponse "résistant" est valable pour la pénicilline G et pour les autres

pénicillines sensibles auxpénicillinases

ípénicilline V,

íaminopénicillines,ícarboxypénicillines,

íuréidopénicillines




l¶antibiogramme


o Seule la pénicilline G doit être testée

íSi diamètre correspond à unesouche sensible, absence deproduction de pénicillinase devrait

être recherchée.




l¶antibiogramme

PénicillineG (Streptocoques sauf S treptococcus pneumoniae)

o Sensibilité des streptocoques à la

pénicillineG

est appréciée avec undisque d'oxacilline chargé à 5 µg.

o Si diamètre à 21 mm, souche =sensible à la pénicilline G

o Interprétation valable pour les autresbêta-lactamines incluant lesStreptocoques dans leur spectre.




l¶antibiogramme

PénicillineG (Streptocoques sauf S treptococcus pneumoniae)

o Si le diamètre < à 21 mm souche =

résistante ou de sensibilitéintermédiaire à la pénicilline G.

o Diamètre < 21 mm, déterminer CMI

í

ampicilline,íamoxicilline

íou céfotaxime.




l¶antibiogramme

Quinolone de première génération(Entérobactéries)

o Réponse valable pour toutes les

quinolones de première génération. Spiramycine (Staphylocoques)

o Interprétation valable pour la

josamycine et la midécamycine.




l¶antibiogramme

Tétracycline (Entérobactéries,Entérocoques, P seudomonas

aeruginosa, Staphylocoques,

Streptocoques)o Réponse valable pour oxytétracycline

et doxycycline.




l¶antibiogramme

Tétracyclines (Coques à Gram positif)

o Phénotype tétracycline sensible et

minocycline résistant = improbable

donc vérifier identification et

antibiogramme




l¶antibiogramme

Triméthoprime-sulfaméthoxazole

o Réponse valable pour les autres

associations triméthoprime-

sulfamide.

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Évaluation in vitro de la sensibilité de bactéries