Felkészítő tanár:Kiss Székely ZoltánFelkészítő tanár:Kiss Székely Zoltán

Králik Eszter12. osztályKrálik Eszter12. osztály

Szentendrei Református Gimnázium

Szentendrei Református Gimnázium

Felkészítő tanár:Kiss Székely ZoltánFelkészítő tanár:Kiss Székely Zoltán

Králik Eszter12. osztályKrálik Eszter12. osztály

Szentendrei Református Gimnázium

Szentendrei Református Gimnázium

rvostudományiK O K I

agyar kadémiaudományosM T A

ísérleti

utatóntézet

Molekuláris biológia

Polimeráz láncreakcióPCR

• molekuláris biológiai technika DNS enzimatikus amplifikálására élő szervezet igénybevétele nélkül

• a technika lehetővé teszi a DNS egy kis darabjának megsokszorosítását analízis vagy mennyiségi felhasználás céljából

DNS sokszorozódása a PCR reakció során

• Hozzávalók: templát DNS, 2 primer, dezoxi-nukleotid-trifoszfátok, DNS polimeráz enzim, reakcióközeg (víz, sók)

• Az energiát a trifoszfátok két foszfátcsoportjának lehasadása szolgáltatja.

Primer

• A primer rövid, egyes szálú, mesterségesen előállított DNS darab.

• A sokszorosítani kívánt DNS mindkét végére 1-1 primer kapcsolódik komplementer módon.

PCR termék kimutatása gélelektroforézissel

• a DNS savként képes protont leadni →önmaga negatív töltésűvé válik

• méret szerinti szétválogatáshoz egy kocsonyás anyagba (gélbe) helyezzük, amelynek végeire elektródákat kapcsolunk

• mivel negatív töltésű az elektromágneses erő hatására a pozitív sarok felé kezd vándorolni a gélben

• szivacsszerű szerkezet→ a rövidebb DNS-ek szabadabban mozognak, míg a hosszabbak akadályoknak ütköznek és lelassulnak

• adott idő alatt a rövidebb DNS-ek nagyobb utat tesznek meg, mint a hosszabbak

• ismert méretű DNS-ek együttes futtatásával megbecsülhető a DNS-ek hossza

• festési eljárással láthatóvá tehetőek

500 bp

400 bp

300 bp

200 bp

100 bp

APA GENOTIPUSA: M/V

IVARSEJTJEIK

GENOTIPUSA

M(mutáns) V

ANYA GENOTIPUSA V/V

V(vad) V/M V/V

V V/M V/V

A PCR alkalmazásai

• Apasági viszgálat

• Genetikai ujjlenyomat

• Örökletes betegségek kimutatása

• Fertőző betegségek kimutatása

• Ősi DNS konzerválása

• Történelmi minták azonosítása

Immunhisztokémia

patkány agyszeletAA B

BC

CB

Y

anti BY

anti B

Y

anti B Y

anti B

Y

anti B

Y

anti B

patkány agyszeletAA B

BC

CB

Y

anti BY

anti B

Y

anti B Y

anti B

Y

anti B

Y

anti B

patkány agyszeletAA B

BC

CB

Yanti B Y

anti B

Yanti B

YYYY

YY

patkány agyszeletAA B

BC

CB

Yanti B

Yanti B Y

anti B

Y YY

Elektrofiziológia