1
Filipa S. Reis 1,2,3 , Dejan Stojković 4 , Lillian Barros 1 , Jasmina Glamočlija 4 , Ana Ćirić 4 , Marina Soković 4 , Anabela Martins 1 , M. Helena Vasconcelos 3,5 , Patricia Morales 2 , Isabel C.F.R. Ferreira 1 Valor nutricional Métodos AOAC Cinzas Proteínas Gordura total Hidratos de carbono Energia Extratos metanólicos da espécie S. granulatus Compostos hidrofílicos Açúcares solúveis Ácidos orgânicos Ácidos fenólicos O consumo de cogumelos tem vindo a aumentar ao longo dos anos, sendo considerados alimentos funcionais ricos em compostos bilogicamente ativos [1- 3]. Este estudo apresenta uma caracterização química detalhada da espécie Suillus granulatus (proveniente de Portugal e Sérvia), assim como as propriedades antioxidante e antimicrobiana dos seus extratos metanólicos. METODOLOGIA ESTADO DE ARTE OBJETIVO 1. V ALOR NUTRICIONAL DA ESPÉCIE EM ESTUDO PROVENIENTE DE PORTUGAL E SÉRVIA Tabela 1. Valor nutricional da espécie S. granulatus (média±DP) Suillus granulatus (L.) Roussel Portugal Sérvia Cinzas(g/100 g ps) 8,0 ± 0,9 b 10,38 ± 0,08 a Proteínas (g/100 g ps) 14,8 ± 0,4 a 7,93 ± 0,01 b Gordura total (g/100 g ps) 3,7 ± 0,2 a 0,27 ± 0,09 b Hidratos de carbono (g/100 g ps) 73,5 ± 0,5 b 81,42 ± 0,01 a Energia (kcal/100 g ps) 387 ± 3 a 359,8 ± 0,6 b RESULTADOS Embora ambas as amostras tenham revelado perfis químicos semelhantes, as espécies provenientes da Sérvia demonstraram maior potencial antioxidante e antimicrobiano. Em conclusão, verificamos que a espécie S. granulatus poderá ser considerada um alimento funcional, uma vez que é uma boa fonte de nutracêuticos e de compostos bioativos. CONCLUSÕES 2. CARACTERIZAÇÃO QUÍMICA 2.1. COMPOSTOS HIDROFÍLICOS A espécie S. granulatus proveniente de ambas as origens é rica em proteínas e hidratos de carbono, evidenciando baixos níveis de gordura Esta espécie, tal como os cogumelos no geral, é um alimento pouco calórico AGRADECIMENTOS FCT, Portugal e FEDER no âmbito do programa PT2020 pelo apoio financeiro ao CIMO (UID/AGR/00690/2013). FCT pela bolsa de F.S. Reis (SFRH/BD/111753/2015). Serbian Ministry of Education, Science and Technological Development for financial support (grant number 173032). REFERÊNCIAS 1. Kalac, P. (2013) J Sci Food Agric 93: 209-218. 2. Ferreira, I.C.F.R. et al. (2009) Cur Med Chem 16: 1543-1560. 3. Ferreira, I.C.F.R. et al. (2010) Anti Canc Agents Med Chem 10: 424-436. S. granulatus de ambas as origens Letras diferentes em cada linha significam diferenças entre amostras (p<0.05). ps- peso seco. 2.2. COMPOSTOS LIPOFÍLICOS 3. PROPRIEDADES BIOATIVAS DOS EXTRATOS METANÓLICOS 3.1. PROPRIEDADES ANTIOXIDANTES Extratos metanólicos de Suillus granulatus (L.) Roussel Atividade Ensaio Portugal Sérvia Poder redutor Folin-Ciocalteu (mg EAG/g extrato) 40,8 ± 0,8 b 44.4 ± 0,3 ª Ferricianeto/azul da Prússia (EC 50 ; mg/mL) 0,57 ± 0,01 ª 0,41 ± 0,01 b Atividade captadora de radicais Atividade captadora de radicais DPPH (EC 50 ; mg/mL) 0,98 ± 0,02 ª 0,89 ± 0,02 b Inibição peroxidação lipídica β-caroteno/linoleato (EC 50 ; mg/mL) 0,45 ± 0,08 ª 0,48 ± 0,06 a TBARS (EC 50 ; mg/mL) 0,03 ± 0,00 a 0,02 ± 0,01 b Tabela 2. Propriedades antioxidantes dos extratos metanólicos estudados (mg/mL; média±DP) 3.2. PROPRIEDADES ANTIMICROBIANAS Tabela 3. Propriedades antibacterianas dos extratos metanólicos estudados (média±DP) Extratos metanólicos de Suillus granulatus (L.) Roussel Portugal Sérvia Estreptomicina Ampicilina Staphylococcus aureus CMI 0,150 ± 0,007 b 0,05 ± 0,00 c 0,040 ± 0,002 d 0,25 ± 0,001 ª CMB 0,20 ± 0,02 b 0,100 ± 0,007 c 0,090 ± 0,003 c 0,370 ± 0,007ª Bacillus cereus CMI 0,10 ± 0,02 b 0,040 ± 0,001 c 0,09 ± 0,001 b 0,25 ± 0,02ª CMB 0,20 ± 0,03 b 0,05 ± 0,001 c 0,170 ± 0,007 b 0,37 ± 0,02ª Micrococcus flavus CMI 0,20 ± 0,02ª 0,10 ± 0,02 b 0,170 ± 0,007 b 0,25 ± 0,02ª CMB 0,40 ± 0,07ª 0,20 ± 0,02 c 0,340 ± 0,003 b 0,37 ± 0,01 ba Listeria monocytogenes CMI 0,2 ± 0,01 b 0,05 ± 0,03 c 0,17 ± 0,01 b 0,370 ± 0,009ª CMB 0,400 ± 0,003 b 0,20 ± 0,001 d 0,34 ± 0,01 c 0,490 ± 0,003ª Pseudomonas aeruginosa CMI 0,15 ± 0,02 b 0,050 ± 0,007 c 0,170 ± 0,007 b 0,740 ± 0,006ª CMB 0,2 ± 0,01 c 0,10 ± 0,02 d 0,340 ± 0,003 b 1,24 ± 0,02ª Salmonella typhimurium CMI 0,150 ± 0,007 c 0,05 ± 0,001 d 0,170 ± 0,007 b 0,370 ± 0,007ª CMB 0,20 ± 0,01 c 0,10 ± 0,001 d 0,340 ± 0,003 b 0,49 ± 0,01ª Escherichia coli CMI 0,15 ± 0,001 cb 0,2 ± 0,2 c 0,17 ± 0,01 b 0,25 ± 0,001 ª CMB 0,20 ± 0,01 c 0,20 ± 0,001 d 0,340 ± 0,003 b 0,49 ± 0,01ª Enterobacter cloacae CMI 0,15 ± 0,03 c 0,10 ± 0,001 d 0,260 ± 0,006 b 0,370 ± 0,007ª CMB 0,20 ± 0,01 c 0,200 ± 0,007 c 0,520 ± 0,007 b 0,740 ± 0,003 a Extratos metanólicos de Suillus granulatus (L.) Roussel Portugal Sérvia Cetoconazol Bifonazol Aspergillus fumigatus CMI 0,45 ± 0,02 ª 0,05 ± 0,001 d 0,20 ± 0,01 b 0,15 ± 0,02 c CMF 0,80 ± 0,02 ª 0,20 ± 0,02 c 0,5 ± 0,01 b 0,20 ± 0,01 c Aspergillus versicolor CMI 0,10 ± 0,01 b 0,0250 ± 0,0007 c 0,20 ± 0,02 ª 0,10 ± 0,02 b CMF 0,20 ± 0,02 b 0,10 ± 0,01 c 0,50 ± 0,02 ª 0,20 ± 0,01 b Aspergillus ochraceus CMI 0,10 ± 0,001 b 0,025 ± 0,002 c 0,15 ± 0,02 ª 0,150 ± 0,007 ª CMF 0,2 ± 0,01 ª 0,050 ± 0,007 b 0,20 ± 0,01 ª 0,20 ± 0,01 ª Aspergillus niger CMI 0,050 ± 0,003 c 0,05 ± 0,01 c 0,2 ± 0,01 ª 0,150 ± 0,001 b CMF 0,10 ± 0,02 c 0,1 ± 0,001 c 0,50 ± 0,02 ª 0,20 ± 0,007 b Trichoderma víride CMI 0,075 ± 0,008 b 0,01 ± 0,001 c 1,00 ± 0,07 ª 0,15 ± 0,02 b CMF 0,10 ± 0,01 cb 0,05 ± 0,001 c 1,50 ± 0,10 ª 0,20 ± 0,02 b Penicillium funiculosum CMI 0,050 ± 0,007 b 0,05 ± 0,01 b 0,20 ± 0,02 ª 0,2 ± 0,01 ª CMF 0,10 ± 0,02 c 0,1 ± 0,01 c 0,50 ± 0,02 ª 0,25 ± 0,02 b Penicillium ochrochloron CMI 0,075 ± 0,008 c 0,05 ± 0,001 c 1,00 ± 0,07 ª 0,20 ± 0,01 b CMF 0,10 ± 0,01 c 0,200 ± 0,007 cb 1,50 ± 0,07 ª 0,25 ± 0,01 b Penicillium verrucosum var. cyclopium CMI 0,10 ± 0,01 b 0,10 ± 0,02 b 1,50 ± 0,07 ª 0,2 ± 0,01 b CMF 0,40 ± 0,03 b 0,20 ± 0,02 b 2,00 ± 0,10 ª 0,30 ± 0,02 b Propriedades antioxidantes Poder redutor Atividade captadora radicais Inibição peroxidação lipídica Compostos lipofílicos Ácidos gordos Tocoferóis Propriedades antimicrobianas Efeito antibacteriano Efeito antifúngico Os principais açúcares livres detetados foram o manitol e a trealose A espécie S. granulatus provou ser uma fonte de ácidos orgânicos e ácidos fenólicos Figura 1. Compostos hidrofílicos identificados na espécie. Os açúcares solúveis forma analisados por HPLC-RI, os ácidos orgânicos por UFLC-PDA, e os ácidos fenólicos por HPLC-DAD/MS. Figura 2. Compostos lipofílicos identificados na espécie. Os ácidos gordos e tocoferóis foram obtidos através de GC-FID and HPLC-fluorescência, respetivamente. S. granulatus é uma fonte de ácidos gordos mono- e polinsaturados, assim como de tocoferóis Em geral, as espécies provenientes da Sérvia revelaram melhor potencial antioxidante e antimicrobiano Letras diferentes em cada linha significam diferenças entre os extratos (p<0.05). Relativamente ao ensaio de Folin-Ciocalteu, valores mais elevados significam maior poder redutor; para os restantes ensaios, os resultados são apresentados em valores de EC 50 , o que significa que valores mais elevados correspondem a poder redutor ou potencial antioxidante mais baixos. EC 50 : Concentração de extrato correspondente a 50% de atividade antioxidante ou a 0,5 de absorvância para o ensaio Ferricianeto/azul da Prússia. Tabela 4. Propriedades antifúngicas dos extratos metanólicos estudados (média±DP) 1 Centro de Investigação de Montanha (CIMO), ESA, Instituto Politécnico de Bragança, Bragança, Portugal 2 Dpto. Nutrición y Bromatología II, Facultad de Farmacia, Universidad Complutense de Madrid (UCM), Madrid, Spain 3 Cancer Drug Resistance Group, IPATIMUP – Instituto de Patologia e Imunologia Molecular da Universidade do Porto, Porto, Portugal 4 University of Belgrade, Department of Plant Physiology, Institute for Biological Research “Siniša Stanković”, Belgrado, Sérvia 5 Laboratório de Microbiologia, Departmento de Ciêsncias Biológicas, Faculdade de Farmácia da Universidade do Porto, Porto, Portugal *[email protected] Letras diferentes em cada linha indicam diferenças entre extratos (p<0.05). CMI- concentração mínima inibitória; CMB- concentração mínima bactericida. Letras diferentes em cada linha indicam diferenças entre extratos (p<0.05). CMI- concentração mínima inibitória; CMF- concentração mínima fungicida. Frutose Manitol Trealose Composição em açúcares solúveis (g/100g ps) Ácido gálico Ácido p-hidroxibenzóico Ácido cinâmico Composição em ácidos fenólicos (g/100g ps) Composição em ácidos orgânicos (g/100g ps) AGS AGP AGM Composição em ácidos gordos (%) α-tocoferol δ-tocoferol γ-tocoferol β-tocoferol Composição em tocoferóis (μg/100g ps)

Filipa S. Reis1,2,3, Dejan Stojković4, Lillian Barros1 ... · Compostos hidrofílicos Açúcares solúveis Ácidos orgânicos ... Propriedades antioxidantes dos extratos metanólicos

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Page 1: Filipa S. Reis1,2,3, Dejan Stojković4, Lillian Barros1 ... · Compostos hidrofílicos Açúcares solúveis Ácidos orgânicos ... Propriedades antioxidantes dos extratos metanólicos

Filipa S. Reis1,2,3, Dejan Stojković4, Lillian Barros1, Jasmina Glamočlija4, Ana Ćirić4, Marina Soković4, Anabela Martins1, M. Helena Vasconcelos3,5, Patricia Morales2, Isabel C.F.R. Ferreira1

Valor nutricional Métodos AOAC

Cinzas

Proteínas

Gordura total

Hidratos de carbono

Energia

Extratos metanólicos da espécie S. granulatus

Compostos hidrofílicos Açúcares solúveis Ácidos orgânicos Ácidos fenólicos

O consumo de cogumelos tem vindo a aumentar ao longo dos anos, sendo considerados alimentos funcionais ricos em compostos bilogicamente ativos [1-3].

Este estudo apresenta uma caracterização química detalhada da espécie Suillus granulatus (proveniente de Portugal e Sérvia), assim como as propriedades antioxidante e antimicrobiana dos seus extratos metanólicos.

METODOLOGIA ESTADO DE ARTE

OBJETIVO

1. VALOR NUTRICIONAL DA ESPÉCIE EM ESTUDO PROVENIENTE DE PORTUGAL E SÉRVIA Tabela 1. Valor nutricional da espécie S. granulatus (média±DP)

Suillus granulatus (L.) Roussel

Portugal Sérvia

Cinzas(g/100 g ps) 8,0 ± 0,9b 10,38 ± 0,08a

Proteínas (g/100 g ps) 14,8 ± 0,4a 7,93 ± 0,01b

Gordura total (g/100 g ps) 3,7 ± 0,2a 0,27 ± 0,09b

Hidratos de carbono (g/100 g ps) 73,5 ± 0,5b 81,42 ± 0,01a

Energia (kcal/100 g ps) 387 ± 3a 359,8 ± 0,6b

RESULTADOS

Embora ambas as amostras tenham revelado perfis químicos semelhantes, as espécies provenientes da Sérvia demonstraram maior potencial antioxidante e antimicrobiano. Em conclusão, verificamos que a espécie S. granulatus poderá ser considerada um alimento funcional, uma vez que é uma boa fonte de nutracêuticos e de compostos bioativos.

CONCLUSÕES

2. CARACTERIZAÇÃO QUÍMICA

2.1. COMPOSTOS HIDROFÍLICOS

A espécie S. granulatus proveniente de ambas as origens é rica em proteínas e hidratos de carbono, evidenciando baixos níveis de gordura

Esta espécie, tal como os cogumelos no geral, é um alimento pouco calórico

AGRADECIMENTOS FCT, Portugal e FEDER no âmbito do programa PT2020 pelo apoio financeiro ao CIMO (UID/AGR/00690/2013). FCT pela bolsa de F.S. Reis (SFRH/BD/111753/2015). Serbian Ministry of Education, Science and Technological Development for financial support (grant number 173032).

REFERÊNCIAS 1. Kalac, P. (2013) J Sci Food Agric 93: 209-218. 2. Ferreira, I.C.F.R. et al. (2009) Cur Med Chem 16: 1543-1560. 3. Ferreira, I.C.F.R. et al. (2010) Anti Canc Agents Med Chem 10: 424-436.

S. granulatus de ambas as origens

Letras diferentes em cada linha significam diferenças entre amostras (p<0.05). ps- peso seco.

2.2. COMPOSTOS LIPOFÍLICOS

3. PROPRIEDADES BIOATIVAS DOS EXTRATOS METANÓLICOS

3.1. PROPRIEDADES ANTIOXIDANTES

Extratos metanólicos de Suillus granulatus (L.) Roussel

Atividade Ensaio Portugal Sérvia

Poder redutor

Folin-Ciocalteu (mg EAG/g extrato) 40,8 ± 0,8b 44.4 ± 0,3ª

Ferricianeto/azul da Prússia (EC50; mg/mL) 0,57 ± 0,01ª 0,41 ± 0,01b

Atividade captadora de radicais Atividade captadora de radicais DPPH (EC50; mg/mL) 0,98 ± 0,02ª 0,89 ± 0,02b

Inibição peroxidação lipídica

β-caroteno/linoleato (EC50; mg/mL) 0,45 ± 0,08ª 0,48 ± 0,06a

TBARS (EC50; mg/mL) 0,03 ± 0,00a 0,02 ± 0,01b

Tabela 2. Propriedades antioxidantes dos extratos metanólicos estudados (mg/mL; média±DP)

3.2. PROPRIEDADES ANTIMICROBIANAS

Tabela 3. Propriedades antibacterianas dos extratos metanólicos estudados (média±DP)

Extratos metanólicos de Suillus granulatus (L.) Roussel

Portugal Sérvia Estreptomicina Ampicilina

Staphylococcus aureus CMI 0,150 ± 0,007b 0,05 ± 0,00c 0,040 ± 0,002d 0,25 ± 0,001ª

CMB 0,20 ± 0,02b 0,100 ± 0,007c 0,090 ± 0,003c 0,370 ± 0,007ª

Bacillus cereus CMI 0,10 ± 0,02b 0,040 ± 0,001c 0,09 ± 0,001b 0,25 ± 0,02ª

CMB 0,20 ± 0,03b 0,05 ± 0,001c 0,170 ± 0,007b 0,37 ± 0,02ª

Micrococcus flavus CMI 0,20 ± 0,02ª 0,10 ± 0,02b 0,170 ± 0,007b 0,25 ± 0,02ª

CMB 0,40 ± 0,07ª 0,20 ± 0,02c 0,340 ± 0,003b 0,37 ± 0,01ba

Listeria monocytogenes CMI 0,2 ± 0,01b 0,05 ± 0,03c 0,17 ± 0,01b 0,370 ± 0,009ª

CMB 0,400 ± 0,003b 0,20 ± 0,001d 0,34 ± 0,01c 0,490 ± 0,003ª

Pseudomonas aeruginosa CMI 0,15 ± 0,02b 0,050 ± 0,007c 0,170 ± 0,007b 0,740 ± 0,006ª

CMB 0,2 ± 0,01c 0,10 ± 0,02d 0,340 ± 0,003b 1,24 ± 0,02ª

Salmonella typhimurium CMI 0,150 ± 0,007c 0,05 ± 0,001d 0,170 ± 0,007b 0,370 ± 0,007ª

CMB 0,20 ± 0,01c 0,10 ± 0,001d 0,340 ± 0,003b 0,49 ± 0,01ª

Escherichia coli CMI 0,15 ± 0,001cb 0,2 ± 0,2c 0,17 ± 0,01b 0,25 ± 0,001ª

CMB 0,20 ± 0,01c 0,20 ± 0,001d 0,340 ± 0,003b 0,49 ± 0,01ª

Enterobacter cloacae CMI 0,15 ± 0,03c 0,10 ± 0,001d 0,260 ± 0,006b 0,370 ± 0,007ª

CMB 0,20 ± 0,01c 0,200 ± 0,007c 0,520 ± 0,007b 0,740 ± 0,003a

Extratos metanólicos de Suillus granulatus (L.) Roussel

Portugal Sérvia Cetoconazol Bifonazol

Aspergillus fumigatus CMI 0,45 ± 0,02ª 0,05 ± 0,001d 0,20 ± 0,01b 0,15 ± 0,02c

CMF 0,80 ± 0,02ª 0,20 ± 0,02c 0,5 ± 0,01b 0,20 ± 0,01c

Aspergillus versicolor CMI 0,10 ± 0,01b 0,0250 ± 0,0007c 0,20 ± 0,02ª 0,10 ± 0,02b

CMF 0,20 ± 0,02b 0,10 ± 0,01c 0,50 ± 0,02ª 0,20 ± 0,01b

Aspergillus ochraceus CMI 0,10 ± 0,001b 0,025 ± 0,002c 0,15 ± 0,02ª 0,150 ± 0,007ª

CMF 0,2 ± 0,01ª 0,050 ± 0,007b 0,20 ± 0,01ª 0,20 ± 0,01ª

Aspergillus niger CMI 0,050 ± 0,003c 0,05 ± 0,01c 0,2 ± 0,01ª 0,150 ± 0,001b

CMF 0,10 ± 0,02c 0,1 ± 0,001c 0,50 ± 0,02ª 0,20 ± 0,007b

Trichoderma víride CMI 0,075 ± 0,008b 0,01 ± 0,001c 1,00 ± 0,07ª 0,15 ± 0,02b

CMF 0,10 ± 0,01cb 0,05 ± 0,001c 1,50 ± 0,10ª 0,20 ± 0,02b

Penicillium funiculosum CMI 0,050 ± 0,007b 0,05 ± 0,01b 0,20 ± 0,02ª 0,2 ± 0,01ª

CMF 0,10 ± 0,02c 0,1 ± 0,01c 0,50 ± 0,02ª 0,25 ± 0,02b

Penicillium ochrochloron CMI 0,075 ± 0,008c 0,05 ± 0,001c 1,00 ± 0,07ª 0,20 ± 0,01b

CMF 0,10 ± 0,01c 0,200 ± 0,007cb 1,50 ± 0,07ª 0,25 ± 0,01b

Penicillium verrucosum var. cyclopium CMI 0,10 ± 0,01b 0,10 ± 0,02b 1,50 ± 0,07ª 0,2 ± 0,01b

CMF 0,40 ± 0,03b 0,20 ± 0,02b 2,00 ± 0,10ª 0,30 ± 0,02b

Propriedades antioxidantes Poder redutor

Atividade captadora radicais Inibição peroxidação lipídica

Compostos lipofílicos Ácidos gordos

Tocoferóis

Propriedades antimicrobianas Efeito antibacteriano

Efeito antifúngico

Os principais açúcares livres detetados foram o manitol e a trealose

A espécie S. granulatus provou ser uma fonte de ácidos orgânicos e ácidos fenólicos

Figura 1. Compostos hidrofílicos identificados na espécie. Os açúcares solúveis forma analisados por HPLC-RI, os ácidos orgânicos por UFLC-PDA, e os ácidos fenólicos por HPLC-DAD/MS.

Figura 2. Compostos lipofílicos identificados na espécie. Os ácidos gordos e tocoferóis foram obtidos através de GC-FID and HPLC-fluorescência, respetivamente.

S. granulatus é uma fonte de ácidos gordos mono- e polinsaturados, assim como de tocoferóis Em geral, as espécies provenientes da Sérvia revelaram melhor potencial antioxidante e

antimicrobiano

Letras diferentes em cada linha significam diferenças entre os extratos (p<0.05). Relativamente ao ensaio de Folin-Ciocalteu, valores mais elevados significam maior poder redutor; para os restantes ensaios, os resultados são apresentados em valores de EC50, o que significa que valores mais elevados correspondem a poder redutor ou potencial antioxidante mais baixos. EC50: Concentração de extrato correspondente a 50% de atividade antioxidante ou a 0,5 de absorvância para o ensaio Ferricianeto/azul da Prússia.

Tabela 4. Propriedades antifúngicas dos extratos metanólicos estudados (média±DP)

1Centro de Investigação de Montanha (CIMO), ESA, Instituto Politécnico de Bragança, Bragança, Portugal 2Dpto. Nutrición y Bromatología II, Facultad de Farmacia, Universidad Complutense de Madrid (UCM), Madrid, Spain 3Cancer Drug Resistance Group, IPATIMUP – Instituto de Patologia e Imunologia Molecular da Universidade do Porto, Porto, Portugal 4University of Belgrade, Department of Plant Physiology, Institute for Biological Research “Siniša Stanković”, Belgrado, Sérvia 5Laboratório de Microbiologia, Departmento de Ciêsncias Biológicas, Faculdade de Farmácia da Universidade do Porto, Porto, Portugal *[email protected]

Letras diferentes em cada linha indicam diferenças entre extratos (p<0.05). CMI- concentração mínima inibitória; CMB- concentração mínima bactericida.

Letras diferentes em cada linha indicam diferenças entre extratos (p<0.05). CMI- concentração mínima inibitória; CMF- concentração mínima fungicida.

Frutose Manitol Trealose

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α-tocoferol δ-tocoferol γ-tocoferol β-tocoferol

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