1 [SK]

Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab 1 doštička – 96 72386 5 doštičiek – 480 72388 SKRÍNINGOVÁ SÚPRAVA NA DETEKCIU ANTIGÉNU HIV P24 A PROTILÁTOK NA HIV-1 A HIV-2 V ĽUDSKOM SÉRE/PLAZME ENZÝMOVÝM IMUNOLOGICKÝM TESTOM

883637 – 2013/10

2 [SK]

OBSAH

1. PLÁNOVANÉ POUŽITIE ........................................................................... 3 2. ZHRNUTIE A VYSVETLENIE TESTU ........................................................ 3 3. PRINCÍPY POSTUPU ............................................................................... 3 4. REAGENCIE ............................................................................................ 4 5. VAROVANIA A PREVENTÍVNE OPATRENIA ............................................. 5 6. VZORKY .................................................................................................. 7 7. POSTUP .................................................................................................. 7 8. OBMEDZENIE TESTU ............................................................................ 10 9. FUNKČNÉ CHARAKTERISTIKY .............................................................. 11 10. BIBLIOGRAFICKÉ ODKAZY. ................................................................... 14

3 [SK]

1. PLÁNOVANÉ POUŽITIE Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab je súprava kvalitatívneho enzýmového imunologického testu na detegovanie antigénu HIV p24 a protilátok na HIV-1 (skupiny M a O) a HIV-2 v ľudskom sére alebo plazme. Táto súprava môže byť použitá na skríning HIV Ag a HIV Ab v krvi darcov a aj na diagnostické účely.

2. ZHRNUTIE A VYSVETLENIE TESTU Syndróm získanej imunitnej nedostatočnosti (AIDS) je vírus spôsobujúci infekčné ochorenie charakterizované silne potlačenou imunitou. Dva typy vírusov príbuzných skupine lentovírusov boli izolované z lymfocytov pacientov trpiacich na AIDS alebo jeho počiatočné príznaky. Prvý, nazvaný HIV-1, bol izolovaný vo Francúzsku a potom v Spojených štátoch. Druhý, nazvaný HIV-2, bol izolovaný z dvoch pacientov žijúcich v Afrike a bolo dokázané, že je zodpovedný za nové ohnisko epidémie AIDS v západnej Afrike. Vedomosti o genetickej variabilite vírusových kmeňov HIV boli získané sekvenovaním génov GAG, POL a ENV reprezentatívnych kmeňov každého subtypu. Vírusy HIV-1 sú rozdelené do 2 skupín: skupina M obsahujúca 9 subtypov (A až I) a skupina O. Vírus HIV-2 zahŕňa 5 subtypov. V súčasnosti je geografická distribúcia rôznych subtypov pomerne dobre definovaná. Niektoré varianty HIV-1 majú len 70 %-nú homológiu pre gény GAG a POL s hlavnými izolátmi a len 50 %-nú pre gén ENV; tieto rozdiely môžu vysvetliť nesprávnu diagnózu infekcie u niektorých pacientov. Rôzne izoláty HIV-2 majú spoločné antigény s opičím vírusom SIV vo všetkých proteínoch (obalové proteíny a proteíny jadra: heterológia = 30 %), ale vykazujú menej ako 40 %-nú homológiu s obalovými proteínmi HIV-1. Antigény HIV sa objavujú a sú detegovateľné v rôznych etapách sérokonverzie a infekcie. Súprava Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab umožňuje súčasnú detekciu protilátok anti-HIV-1 (skupiny M a O) a anti-HIV-2 a antigénov (pozrite si tiež obmedzenia postupu).

3. PRINCÍPY POSTUPU Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab je kvalitatívny enzýmový imunologický test založený na princípe sendvičovej techniky na detekciu antigénu HIV a rôznych protilátok asociovaných s vírusom HIV-1 a/alebo HIV-2 v ľudskom sére alebo plazme. Pevná fáza je potiahnutá s:

• Monoklonálnymi protilátkami proti antigénu p24 HIV-1 • Purifikovanými antigénmi: rekombinantný proteín gp160, syntetický peptid napodobňujúci plne umelý

(t. j. nekódovaný žiadnym existujúcim vírusom) epitop špecifický pre HIV-1 skupina O a peptid napodobňujúci imunodominantný epitop obalového proteínu HIV-2.

Konjugáty sú založené na použití: • Biotinylované polyklonálne protilátky na HIV Ag (konjugát 1) • Streptavidín a antigény HIV - konjugát peroxidázy (peptidy gp41 a gp36 napodobňujúce

imunodominantné epitopy obalových glykoproteínov HIV-1 a HIV-2 a ten istý syntetický peptid napodobňujúci plne umelý epitop špecifický pre HIV-1 skupina O, ako je používaný pre pevnú fázu (konjugát 2).

Postup testu obsahuje nasledujúce kroky reakcií:

1. Konjugát 1 (biotinylované polyklonálne protilátky na p24 HIV-1 Ag) je pridaný do jamiek mikrodoštičky. 2. Do jamiek sú pipetou pridané vzorky séra, ktoré majú byť testované, a kontroly.

• Ak sú prítomné, antigény HIV sa viažu s monoklonálnou protilátkou naviazanou na pevnú fázu a konjugát 1.

• Protilátky HIV-1 a/alebo HIV-2, ak sú prítomné, sa viažu na antigény imobilizované na pevnej fáze. • Usadenina konjugátu 1 a vzorky sú hodnotené prostredníctvom zmeny farby, zo žltozelenej na

modrú. 3. Po inkubácii pri 37 °C a následnom umytí je pridaný konjugát 2:

• Streptavidín reaguje s biotinylovanými komplexmi Ab-Ag-Ab. • Označené peroxidázou, purifikované antigény HIV-1 a HIV-2 sa zas viažu na protilátky IgG, IgM

alebo IgA zachytené v pevnej fáze. 4. Po inkubácii pri 18 - 30 °C je nenaviazaná frakcie konjugátu 2 odstránená umytím. Po inkubácii za

prítomnosti substrátu pri teplote miestnosti (18 - 30 °C) sa prítomnosť komplexného konjugátu ukáže zmenou farby.

5. Reakcia sa zastaví a prečíta sa absorbancia s použitím spektrofotometra pri 450/620-700 nm. Nameraná absorbancia na vzorke určuje prítomnosť alebo neprítomnosť protilátok HIV Ag alebo HIV-1 a/alebo HIV-2.

4 [SK]

4. REAGENCIE 4.1. Popis

Identifikácia na označení Popis Prezentácia/príprava

72386 72388

R1 Microplate

Mikroplatnička 12 pásikov s 8 jamkami potiahnutými monoklonálnymi protilátkami na p24 HIV-1 (myšacie) a purifikovanými antigénmi HIV-1 a HIV-2 Špecifické číslo ID = 53.

1 platnička Pripravený na

použitie

5 platničiek Pripravený na

použitie

R2 Concentrated washing solution (20X)

Koncentrovaný premývací roztok (20X) Tris pufer NaCl pH 7,4 Stabilizačný prostriedok: ProClin™ 300 0,04 %

1 ampulka 70 ml

Zriediť

1 ampulka 235 ml Zriediť

R3 Negative control

Negatívna kontrola Teplom deaktivovaná ľudská plazma negatívna na antigén HBs, antigén HIV a protilátky anti-HIV-1, anti-HIV-2 a anti-HCV Stabilizačný prostriedok: Azid sodný < 0,1 %

1 ampulka 2,5 ml

Pripravený na použitie

1 ampulka 2,5 ml

Pripravený na použitie

R4 HIV Ab positive control

Pozitívna kontrola HIV Ab Teplom deaktivovaná ľudská plazma pozitívna na protilátky anti-HIV, negatívna na antigén HBs a protilátky anti-HCV, v syntetickom riediacom roztoku Stabilizačný prostriedok: ProClin™ 300 < 0,1 %

1 ampulka 1 ml

Pripravený na použitie

1 ampulka 1 ml

Pripravený na použitie

R5 HIV Ag positive control

Pozitívna kontrola HIV Ag Purifikovaný antigén HIV-1 deaktivovaný s chaotropickým činidlom, v syntetickom riediacom roztoku Stabilizačný prostriedok: ProClin™ 300 < 0,1 %

1 ampulka 1 ml

Pripravený na použitie

1 ampulka 1 ml

Pripravený na použitie

R6 Conjugate 1

Konjugát 1 Biotinylované polyklonálne protilátky na p24 HIV-1 (ovčie) so žltozeleným zafarbením Stabilizačný prostriedok: ProClin™ 300 0,5%

1 ampulka 10 ml

Pripravený na použitie

2 ampulky 2 x 10 ml

Pripravený na použitie

R7a Conjugate 2

Konjugát 2 Lyofylizovaný peroxidázou označený Streptavidín a purifikované antigény HIV-1 a HIV-2 Stabilizačný prostriedok: ProClin™ 300 < 0,1 %

1 ampulka q.s.ad

12,5 ml Rekonštituov

ať

2 ampulky q.s.ad

2 x 30 ml Rekonštituov

ať

R7b Conjugate 2 diluent

Riediaci roztok konjugát 2 Roztok odstredeného mlieka zafarbený červenou farbou Stabilizačný prostriedok: ProClin™ 300 0,5%

1 ampulka 12,5 ml

Rekonštituovať

2 ampulky 2 x 30 ml

Rekonštituovať

R8 Substrate buffer

Pufrovací substrát Kyselina citrónová a roztok octanu sodného pH 4,0, obsahujúci H2O2 (0,015%) and dimetyl sulfoxid DMSO (4 %)

1 ampulka 60 ml

Rekonštituovať

2 ampulky 2 x 60 ml

Rekonštituovať

R9 Chromogen: TMB solution (11X)

Chromogén: Roztok TMB (11X) Roztok obsahujúci 3.3’, 5.5’ tetrametylbenzidín (TMB)

1 ampulka 5 ml

Rekonštituovať

2 ampulky 2 x 5 ml

Rekonštituovať

R10 Stopping solution

Zastavovací roztok Roztok kyseliny sírovej (H2SO4 1N)

1 ampulka 28 ml

Pripravený na použitie

3 ampulky 3 x 28 ml

Pripravený na použitie

5 [SK]

4.2. Požiadavky na skladovanie a zaobchádzanie

Táto súprava by mala byť skladovaná pri teplote +2 - 8 °C. Každá položka tejto súpravy skladovaná pri teplote +2 - 8 °C môže byť použitá až do dátumu exspirácie uvedeného na obale (pokiaľ nie je indikované inak). Po otvorení a pri absencii kontaminácie môžu byť reagencie R2, R3, R4, R6, R7, R8, R9 a R10 uchovávané pri teplote +2 - 8 °C použité až do dátumu exspirácie uvedeného na etikete.

Identifikácia Uchovávanie

R1 Po otvorení vzduchotesne uzatvoreného vrecúška môžu byť pásiky s mikrojamkami uchovávané pri teplote +2 - 8 °C používané 1 mesiac, ak sú v starostlivo uzatvorenom pôvodnom vrecúšku.

R2 Rozriedený premývací roztok môže byť dva týždne skladovaný pri teplote +2 - 30 °C. Koncentrovaný premývací roztok (R2) môže byť uchovávaný pri teplote +2 - 30 °C.

R7a + R7b Po rekonštitúcii môžu by reagencie skladované 1 mesiac pri teplote +2 - 8 °C. Až do dátumu exspirácie môže byť súprava po rekonštitúcii zamrznutého stavu znovu zmrazená a rozmrazená až 11-krát.

R8 + R9 Po rekonštitúcii môžu byť reagencie uložené v tme používané 6 hodín pri teplote miestnosti (18 - 30 °C).

5. VAROVANIA A PREVENTÍVNE OPATRENIA

Určené na diagnostické použitie in vitro. Na profesionálne používanie zdravotníckej starostlivosti.

5.1. Zdravotné a bezpečnostné opatrenia

• S touto testovacou súpravou by mal pracovať len kvalifikovaný personál vyškolený v laboratórnych postupoch a oboznámený s potenciálnymi rizikami. Noste vhodný ochranný odev, rukavice, ochranu očí/tváre a so súpravou manipulujte v súlade s požadovanými zásadami správnej laboratórnej praxe.

• Testovacia súprava obsahuje komponenty ľudskej krvi. Materiál ľudského pôvodu použitý pri príprave negatívnej kontroly (R3) bol testovaný a bolo zistené, že nereaguje na povrchový antigén hepatitídy B (HBs Ag), antigén HIV, protilátky na hepatitídu C a protilátky na vírus zlyhania ľudského imunitného systému (HIV-1 and HIV-2). Materiál ľudského pôvodu použitý pri príprave protilátok HIV-1 pozitívnej kontroly (R4) bol testovaný a bolo zistené, že nereaguje na povrchový antigén hepatitídy B (HBs Ag) a protilátky na hepatitídu C. Žiadna známa metóda testovania nedokáže ponúknuť úplnú istotu, že nie sú prítomné infekčné faktory. Preto by sa malo so všetkými derivátmi ľudskej krvi, reagenciami a ľudskými vzorkami zaobchádzať tak, ako keby prenášali infekčnú chorobu, na základe odporúčaných univerzálnych bezpečnostných opatrení pre krvné patogény stanovených miestnymi, regionálnymi a národnými nariadeniami.

• Biologické rozliatia: Rozliaty materiál z ľudského zdroja by sa mal považovať za potenciálne infekčný. Rozliaty materiál, ktorý neobsahuje kyselinu, by sa mal ihneď dekontaminovať, vrátane oblasti rozliatia, materiálov a všetkých kontaminovaných povrchov alebo zariadení s vhodným chemickým dezinfekčným činidlom, ktoré je účinné na potenciálne bioriziká spojené s príslušnými vzorkami (bežné riedenie 1:10 s bielidlom z domácnosti, 70-80 % etanolom alebo izopropanolom, jodoforom (ako je 0,5 % Wescodyne™ Plus, atď.) a do sucha zotrieť. Rozliaty materiál, ktorý obsahuje kyselinu, by sa mal vhodne absorbovať (zotrieť) alebo neutralizovať, oblasť by sa mala opláchnuť vodou a utrieť dosucha; materiály použité na absorpciu rozliateho materiálu si môžu vyžadovať likvidáciu ako biologicky nebezpečný odpad. Potom by sa mala celá oblasť dekontaminovať niektorým chemickým dezinfekčným činidlom.

POZNÁMKA: Nedávajte do autoklávu roztoky obsahujúce bielidlo! • Zlikvidujte všetky vzorky a materiály použité na vykonávanie testu, pretože môžu obsahovať infekčné

látky. Laboratórny, chemický alebo biologicky nebezpečný odpad musí byť manipulovaný a zlikvidovaný v súlade so všetkými lokálnymi, regionálnymi a národnými nariadeniami.

6 [SK]

• Odporúčania, týkajúce sa nebezpečenstva a opatrení vzťahujúcich sa na niektoré chemické komponenty v tejto testovacej súprave, nájdete na piktograme (piktogramoch) na nálepkách a v informáciách poskytnutých na konci pokynov na používanie. Karta bezpečnostných údajov je dostupná na www.bio-rad.com.

5.2. Opatrenia vzťahujúce sa na postup

5.2.1. Príprava

Spoľahlivosť výsledkov závisí od správnej implementácie nasledujúcich zásad správnej laboratórnej praxe: • Nepoužívajte exspirované reagencie. • Nezmiešavajte alebo nezdružujte reagencie z rôznych dávok v rámci vykonávania testu. • Pred použitím počkajte 30 minút, kým sa reagencie stabilizujú pri teplote miestnosti (18 - 30 °C). • Názov testu a tiež špecifické identifikačné číslo testu sú napísané v rámčeku každej mikroplatničky.

Toto špecifické identifikačné čísle je tiež uvedená na každom pásiku. Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab: Špecifické číslo ID = 53

Pred používaním si overte špecifické identifikačné číslo. Ak identifikačné číslo chýba alebo je iné, ako je uvedené číslo odpovedajúce testu, pásik by nemal byť použitý. POZNÁMKA: Pre umývací roztok (R2, identifikácia etikety: 20X zelená farba), pufrovací peroxidázový substrát (R8, identifikácia etikety: TMB buf., modrá farba), chromogén (R9, identifikácia etikety: TMB 11X purpurová farba) a zastavovací roztok (R10, identifikácia etikety: 1N červená farba), je možné použiť iné šarže ako sú obsiahnuté v súprave, za predpokladu, že je v rámci daného testu použitá tá istá šarža. Tieto reagencie môžu byť použité s niektorými inými výrobkami našej spoločnosti. Podrobnejšie informácie môžete získať od nášho technického servisu. • Opatrne rekonštituujte reagencie, aby ste sa vyhli akejkoľvek kontaminácii. • Používajte sklené výrobky, ktoré sú dôkladne umyté a opláchnuté deionizovanou vodou, alebo

radšej používajte jednorazový materiál. • Nedovoľte, aby mikroplatnička vyschla v čase medzi ukončením umývania a distribúciou reagencií. • Distribúcia vzorky sa musí začať ihneď po distribúcii konjugátu 1. Doba čakania medzi dávkovaním

konjugátu 1 a vzoriek by nemala prekročiť 30 minút. • Enzýmová reakcia je veľmi citlivá na kovové ióny. Kvôli tomu nedovoľte, aby sa do stal žiadny

kovový prvok do kontaktu s rôznymi roztokmi konjugátu alebo substrátu. • Vyvíjací roztok (pufrovací substrát + chromogén) musí mať ružové sfarbenie. Zmena tohto

sfarbenia v priebehu niekoľkých minút rekonštitúcie indikuje, že reagencia nemôže byť použitá a musí byť vymenená.

Príprava vyvíjacieho roztoku môže byť vykonaná v čistej jednorazovej plastovej miske alebo sklenej nádobe, ktorá bola najskôr umytá s 1N HCl, dôkladne opláchnutá destilovanou vodou a vysušená. Táto reagencia musí byť uchovávaná v tme.

• Nikdy nepoužívajte tú istú nádobu na distribúciu konjugátu a vyvíjacieho roztoku.

5.2.2. Spracovávanie

• Nemeňte postup testu. • Nikdy nevykonávajte test za prítomnosti reakčných výparov (kyselina, zásada, aldehydové výpary)

alebo prachu, ktoré môžu zmeniť enzymatickú aktivitu konjugátu. • Pre každú vzorku použite nový distribučný hrot. • Dobré premytie je kritický krok v tomto postupe: rešpektujte odporúčaný počet premývacích cyklov

a zaistite, aby sa všetky jamky celkom zaplnili a potom celkom vyprázdnili. Nesprávne premývanie môže viesť k nepresným výsledkom.

• Starostlivo dodržujte popísané postupy premývania, aby ste získali maximálnu výkonnosť testu. Pri niektorých nástrojoch môže byť potrebné optimalizovať postup premývania (zvýšenie počtu cyklov kroku premývania a/alebo množstva premývacieho pufra pre každý cyklus), aby ste dosiahli prijateľnú úroveň pozadia OD pre negatívnu vzorku.

Ohľadom adaptácií a špeciálnych postupov kontaktujte našu spoločnosť.

7 [SK]

6. VZORKY Odoberte vzorku krvi podľa aktuálnych praktík. Test by mal byť vykonaný na neriedenom sére alebo plazme (odobrané na EDTA, citrát sodný alebo ACD). Neodporúča sa použitie vzoriek zo skúmaviek obsahujúcich heparín lítny. Oddeľte sérum alebo plazmu zo zrazeniny alebo červených krviniek tak rýchlo, ako je to možné, aby ste sa vyhli akejkoľvek hemolýze. Extenzívna hemolýza môže ovplyvniť výkon testu. Vzorky obsahujúce zhluky musia byť pred testovaním vyčistené centrifugáciou. Suspendované fibrínové čiastočky alebo zhluky môžu dať falošne pozitívne výsledky. Vzorky môžu byť uchovávané pri teplote +2 - 8 °C, ak je skríning vykonaný do 7 dní, alebo môžu byť niekoľko mesiacov hlboko zmrazené pri teplote -20 °C. Plazma musí byť rýchlo rozmrazená niekoľkominútovým zohrievaním vo vodnom kúpeli pri teplote 40 °C (aby sa predišlo precipitácii fibrínu). Neopakujte viac ako 3 cykly zmrazenia/rozmrazenia. Vzorky obsahujúce do 90 g/l albumínu, 200 mg/l bilirubínu, 50 µg/l biotínu, lipemické vzorky obsahujúce do 36 g/l ekvivalentu triglyceridu a hemolyzované vzorky obsahujúce do 10 g/l hemoglobínu neovplyvňujú výsledky. Neodporúča sa však použitie kontaminovaných hyperlipemických alebo hyperhemolyzovaných vzoriek sér alebo plazmy. Ohrievanie vzoriek sa neodporúča. Ak majú byť vzorky prepravované, musia byť zabalené v súlade s platnými nariadeniami týkajúcimi sa prepravy etiologických činidiel a uprednostňuje sa ich preprava v zmrazenom stave.

7. POSTUP

7.1. Požadovaný materiál, ktorý sa nedodáva

• Destilovaná voda. • Chlórnan sodný (bieliaci prostriedok pre domácnosti) a bikarbonát sodný. • Absorpčný papier. • Jednorazové rukavice. • Adhezívna fólia • Ochranné okuliare • Jednorazové skúmavky • Automatické alebo poloautomatické, nastaviteľné alebo vopred nastavené pipety alebo multipipety

na meranie a dávkovanie 25 µl, 75 µl, 80 µl a 100 µl. • Odmerné valce s objemom 25 ml; 100 ml; 1000 ml. Vortex mixér. • Automatický, poloautomatický alebo manuálny systém premývania mikroplatničiek (*). • Vodný kúpeľ alebo ekvivalentný inkubátor na mikroplatničky, termostaticky nastavený na 37 °C ± 1

°C (*). • Nádoba na nebezpečný biologický odpad. • Čítačka mikroplatničiek vybavená filtrami 450nm, 490 nm a 620-700 nm (*). (*) Získajte od nás podrobnejšie informácie o vybavení odporúčanom naším technickým oddelením.

7.2. Príprava reagencií

7.2.1. Reagencie pripravené na používanie

Reagencia 1 (R1): Mikroplatnička Každý rámčekový držiak obsahujúci 12 pásikov je zabalený v utesnenom fóliovom vrecúšku. Odstrihnite vrecúško s použitím nožníc alebo skalpela 0,5 až 1 cm nad uzáverom. Otvorte vrecúško a vyberte rámček. Vložte nepoužité pásiky naspäť do vrecúška. Vrecúško opatrne uzavrite a znovu ho uskladnite pri teplote +2 - 8 °C. Reagencia 3 (R3): Negatívna kontrola Reagencia 4 (R4): Pozitívna kontrola HIV Ab Reagencia 5 (R5): Pozitívna kontrola HIV Ag Reagencia 6 (R6): Konjugát 1 Reagencia 10 (R10): Zastavovací roztok

8 [SK]

7.2.2. Reagencie na rekonštitúciu

Reagencia 2 (R2): Koncentrovaný premývací roztok (20X) Rozrieďte v pomere 1:20 v destilovanej vode, aby ste získali umývací roztok pripravený na použitie. Pre jednu platničku s 12 pásikmi pripravte 800 ml roztoku. Reagencia 7a (R7a) + Reagencia 7b (R7b): Pracovný roztok konjugátu 2 Na pracovnom stole jemne poklepte na ampulku lyofilizovaného konjugátu 2 (R7), aby ste odstránili z gumového viečka akúkoľvek substanciu. Opatrne odstráňte viečko a nalejte obsah ampulky riediaceho roztoku konjugátu (R7b) do ampulky lyofilizovaného konjugátu (R7a). Nasaďte viečko a nechajte postáť 10 minút pri občasnom jemnom potrasení a prevrátení, aby ste uľahčili rozpustenie. Reagencia 8 (R8) + Reagencia 9 (R9): Enzýmový vyvíjací roztok Rozrieďte chromogén (R9) v pufrovacom substráte (R8) v pomere 1:11 (napr. 1 ml reagencie R9 + 10 ml reagencie R8); 10 ml je potrebné a dostatočné množstvo pre 12 pásikov. Homogenizujte.

7.3. Postup testu

Dôsledne dodržiavajte postup. Použite negatívne (R3), HIV-1 Ab pozitívne (R4) a HIV Ag pozitívne (R5) kontroly pre každú sériu určení, aby ste potvrdili kvalitu testu. Dodržiavajte nasledujúce zásady správnej laboratórnej praxe:

1) Starostlivo pripravte plán distribúcie a identifikácie vzoriek. 2) Pripravte zriedený premývací roztok R2 a pracovný roztok konjugát 2 (R7a + R7b) (pozrite si 7.2). 3) Vyberte z ochranného obalu podperný rámček a potrebný počet pásikov (R1). Vložte nepoužité

pásiky naspäť do ich obalu. Zatvorte obal a uchovávajte ho pri teplote +2 - 8 °C. 4) Bez prechádzajúceho premytia platničky naplňte jamky v nasledujúcom poradí (odporúčané

poradie distribúcie): • 25 µl konjugátu 1 (R6) do každej jamky • 75 µl HIV Ag pozitívna kontrola (R5) do jamky A1 • 75 µl HIV Ab pozitívna kontrola (R4) do jamky B1 • 75 µl negatívna kontrola (R3) do jamky C1, D1 a E1 • 75 µl vzorky 1 do jamky F1 • 75 µl vzorky 2 do jamky G1 atď.

Homogenizujte roztok minimálne 3 odsatiami a 75 µl pipetou alebo s trepačkou mikroplatničky po dobu 5 sekúnd. Distribúcia vzorky sa musí začať ihneď po distribúcii konjugátu 1. Ak trvá distribúcia vzorky viac ako 30 minút, odporúča sa distribuovanie negatívnych a pozitívnych kontrol po vzorkách, ktoré majú byť testované. V závislosti od použitého systému je možné modifikovať polohu kontrol alebo poradie distribúcie. POZNÁMKA: Po distribúcii vzoriek zmení jamky obsahujúca konjugát 1 žltozelenú farbu na modrú. Prítomnosť (vzorka + konjugát 1) v jamkách môže byť overená spektrofotometrickým odčítaním pri 620 nm (pozrite si bod 7.7).

5) Keď je to možné, zakryte mikroplatničku novou adhezívnou fóliou. 6) Inkubujte mikroplatničku 1 hodinu (± 4 min.) pri teplote 37 °C ± 1 °C. 7) Ak je to potrebné, odstráňte lepiacu fóliu. Odsajte obsah všetkých jamiek do kontajnera na

nebezpečný biologický odpad (obsahuje chlórnan sodný). Do každej jamky pridajte minimálne 370 µl umývacieho roztoku. Nechajte vsiaknuť najmenej 30 sekúnd. Znovu odsajte. Opakujte tento postup minimálne dvakrát (t. j. celkovo minimálne tri umytia). Zvyškový objem musí byť menej ako 10 µl (ak je to potrebné, vysušte platničku tak, že ju prevrátite na savý papier). Ak je použitá automatická umývačka, postupujte podľa toho istého postupu.

8) Rýchlo dávkujte 100 µl konjugátu 2 (R7a + R7b) do každej jamky v rámci platničky. Konjugát musí byť pred použitím jemne potrasený. Ak je to možné, zakryte novou adhezívnou fóliou a inkubujte 30 minút (± 4 min.) pri teplote miestnosti (18 - 30 °C).

POZNÁMKA: Konjugát 2 má červenú farbu. Prítomnosť konjugátu 2 v jamkách môže byť overená spektrofotometrickým odčítaním pri 620 nm (pozrite si bod 7.7).

9) Ak je to potrebné, odstráňte adhezívnu fóliu, vyprázdnite všetky jamky pomocou odsávania a umyte minimálne 5-krát podľa vyššie uvedeného popisu.

9 [SK]

10) Pripravte enzymatický vyvíjací roztok (reagencia R8 + R9). 11) Rýchlo dávkujte 80 µl pripraveného enzymatického vyvíjacieho roztoku (R8 + R9) do všetkých

jamiek. Umožnite vývoj reakcie v tme po dobu 30 minút (± 4 min.) pri teplote miestnosti (18 - 30 °C). Počas tejto inkubácie nepoužívajte adhezívnu kryciu fóliu.

POZNÁMKA: V tomto kroku manipulácie môže byť vizuálne kontrolovaná distribúcia vyvíjacieho roztoku, ktorý je ružový. Medzi prázdnou jamkou a jamkou obsahujúcou ružový roztok substrátu je jasný rozdiel. (pozrite si bod 7.7)

12) Pridajte 100 µl zastavovacieho roztoku (R10) s použitím rovnakej sekvencie a rýchlosti distribúcie ako pre vyvíjací roztok.

POZNÁMKA: V tejto etape manipulácie môže byť distribúcia bezfarebného zastavovacieho roztoku vizuálne kontrolovaná. Ružová farba substrátu (pre negatívne vzorky) alebo modrá farba (pre pozitívne vzorky) sa stráca z jamiek, ktoré sa po pridaní zastavovacieho roztoku stávajú bezfarebné (pre negatívne vzorky) alebo žlté (pre pozitívne vzorky).

13) Opatrne utrite spodok každej platničky. Po pridaní zastavovacieho roztoku počkajte najmenej 4 minúty a do 30 minút od zastavovacej reakcie odčítajte optickú hustotu (OD) pri 450/620-700 nm s použitím čítačky platničiek.

14) Skontrolujte, či sa zhodujú spektrofotometrické a vizuálne výsledky a či bol dodržaný plán distribúcie platničky a vzorky a plán identifikácie.

7.4. Kontrola akosti

V každej sérii testov použite pozitívne a negatívne kontroly na potvrdenie platnosti testu. (pozrite si bod 7.5)

7.5. Kritériá potvrdenia testu

Platnosť tohto testu je potvrdená pri rešpektovaní nasledujúcich podmienok:

1) Pre negatívnu kontrolu R3 Absorbancia každej negatívnej kontroly (R3) by mala byť menšia ako 0,170: O.D. R3 < 0,170 Stredná hodnota absorbancie negatívnych kontrol (R3) by mala byť menšia ako 0,150: O.D. R3 < 0,150 Ak jedna z negatívnych kontrol R3 nerešpektuje túto normu, neberte jej hodnotu do úvahy a znovu vypočítajte strednú hodnotu s použitím dvoch zostávajúcich hodnôt.

2) Pre pozitívnu kontrolu R4 protilátok HIV Absorbancia HIV Ab pozitívnej kontroly (R4) by mala byť väčšia ako 0,9: O.D. R4 > 0,9

3) Pre pozitívnu kontrolu R5 antigénov HIV Absorbancia HIV Ag pozitívnej kontroly (R5) by mala byť väčšia ako 0,9: O.D. R5 > 0,9

7.6. Výpočet / interpretácia výsledkov Vylúčenie je stanovené negatívnou kontrolou R3: Vypočítajte strednú hodnotu nameranej absorbancie pre negatívnu kontrolu R3.

OD (C1) + OD (D1) + OD (E1) OD R3 = —————————————

3 Vypočítajte hodnotu vylúčenia: CO = OD R3 + 0,200 Prítomnosť alebo absencia detegovateľného antigénu HIV alebo protilátok na HIV-1 a/alebo HIV-2 je stanovená porovnaním absorbancie nameranej pre každú vzorku s vypočítanou hodnotou vylúčenia.

10 [SK]

Pre každú vzorku je vypočítaný nasledujúci pomer: Pomer = O.D. vzorky / hodnota CO Vzorky s nižšou optickou hustotou ako je hodnota vylúčenia (pomer < 1) sú považované testom Genscreen™ ULTRA HIV Ag Ab za negatívne. Výsledky tesne pod hodnotou vylúčenia (CO-10 % < O.D. < CO) by však mali byť interpretované opatrne. Keď to dovolí systém a laboratórne postupy, odporúča sa opakované testovanie duplikátu odpovedajúcich vzoriek. Vzorky s optickou hustotou väčšou alebo rovnou hodnote vylúčenia (pomer ≥ 1) sú považované testom Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab za počiatočne pozitívne. Pred konečnou interpretáciou by mali byť opakovane testované na duplikáte. Ak je po opakovanom testovaní hodnota pomeru najmenej jedného z 2 duplikátov rovnaká alebo väčšia ako 1, počiatočný výsledok je opakovateľný a vzorka je vyhlásená testom Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab za pozitívnu. Ak je hodnota pomeru 2 duplikátov nižšia ako 1, počiatočné výsledky nie sú opakovateľné a vzorka je vyhlásená za negatívnu. Neopakovateľné reakcie sú často zapríčinené:

• Neadekvátnym premývaním mikroplatničky. • Kontamináciou negatívnych vzoriek sérom alebo plazmou s titerom protilátky. • Kontamináciou roztoku substrátu oxidačnými činidlami (bielidlo, kovové ióny atď.). • Kontamináciou zastavovacieho roztoku.

Vzorky, ktoré boli dvakrát testované s Genscreen™ ULTRA HIV Ab-Ag a boli zistené ako negatívne, ale s jednou hodnotou blízkou hodnote vylúčenia (pomer medzi 0,9 and 1), by mali byť interpretované opatrne. Odporúča sa opakované testovanie pacienta inou metódou alebo testovanie ďalšej vzorky. V prípade veľmi nízkej optickej hustoty pre testované vzorky (negatívne OD) a keď je skontrolovaná prítomnosť vzoriek a tiež reagencie, výsledky môžu byť interpretované ako negatívne. Odporúča sa potvrdiť pozitívne vzorky s dodržaním aktuálnych národných odporúčaní a algoritmov.

7.7. Spektrofotometrická verifikácia pipetovania vzorky a konjugátu (voliteľná možnosť)

Verifikácia pipetovania vzorky a konjugátu 1 (R6) Súčasná prítomnosť konjugátu 1 (R6) a vzoriek v jamke môže byť verifikovaná automatickým odčítaním pri 620 nm. Každá jamka obsahujúca vzorku a konjugát 1 (R6) musí mať O.D. väčšiu ako 0,600. Verifikácia pipetovania pracovného roztoku konjugátu 2 Prítomnosť konjugátu 2 (R7a + R7b) môže byť verifikovaná automatickým odčítaním pri 450 / 620 nm. Hodnota O.D. každej jamky musí byť väčšia ako 0,100 (nižšia OD indikuje slabé dávkovanie konjugátu 2). Verifikácia pipetovania vyvíjacieho roztoku Prítomnosť ružového vyvíjacieho roztoku v jamke môže byť verifikovaná automatickým odčítaním pri 490 nm. Jamka s vyvíjacím roztokom musí mať optickú hustotu väčšiu ako 0,100 (nižšia OD indikuje zlé dávkovanie vyvíjacieho roztoku).

8. OBMEDZENIE TESTU Veľmi nízky titer antigénu alebo protilátok HIV nemusí byť detegovaný počas prvej fázy infekcie; v dôsledku toho negatívny výsledok indikuje, že testovaná vzorka neobsahuje detegovateľný antigén HIV alebo protilátky anti-HIV pri testovaní s Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab.

Takéto výsledky však nevylučujú možnosť vystavenia infekcii HIV-1 / HIV-2. Variabilita HIV-1 (skupina M a skupina O) a HIV 2 pripúšťa možnosť falošných negatívnych reakcií. Žiadna známa testovacia metóda nedokáže ponúknuť kompletné uistenie o tom, že je HIV vírus neprítomný.

11 [SK]

Vysoko citlivé techniky ELISA môžu produkovať falošne pozitívne výsledky. Na overenie špecifickosti reakcie by mal byť každý pozitívny výsledok (v súlade s kritériami interpretácie testu Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab) potvrdený vhodnou metódou (špecifickým testom HIV Ag, ako je Genscreen HIV Ag EIA a potom neutralizáciou na dokázanie prítomnosti HIV Ag alebo Western-Blot (westernový prenos) na dokázanie prítomnosti protilátok anti-HIV). Kvalita výsledkov môže byť ovplyvnená zohriatím vzoriek.

Spektrofotometrická metóda na verifikáciu vzorky, usadenina vyvíjacieho roztoku konjugátu umožňuje verifikáciu presnosti dávkovaného objemu vzoriek a konjugátu. Táto metóda ukazuje len prítomnosť vzorky a konjugátu. Početnosť chýb s touto metódou je tesne prepojená s presnosťou používaného systému (kumulovaný koeficient odchýlky viac ako 10 % pre dávkovanie a čítanie výrazne zníži kvalitu tohto kroku). Niektoré ikterické hyperlipemické alebo hyperhemolyzované vzorky môžu ovplyvniť spektrofotometrickú metódu verifikácie usadeniny konjugátu 1.

V tomto prípade môže byť verifikovaná len prítomnosť vzorky. V prípade veľmi slabej účinnosti umývania po inkubácii konjugátu môže automatická verifikácia pipetovania vyvíjacieho roztoku (odčítaním OD jamiek pri 490 nm) poskytnúť nesprávne výsledky s OD väčšou ako 0,100 pri prítomnosti vyvíjacieho roztoku. Tento fenomén však nebol pozorovaný počas hodnotenia 939 testovaných vzoriek.

9. FUNKČNÉ CHARAKTERISTIKY 9.1. Presné meranie

Presnosť merania testu Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab bola stanovená analýzou 10 vzoriek: 1 negatívna vzorka, 3 HIV-1 protilátka pozitívna, 3 HIV-2 protilátka pozitívna a 3 HIV-1 antigén pozitívna. Vnútorná opakovateľnosť testu bola hodnotená testovaním týchto 10 vzoriek 30-krát v tom istom behu. Dlhodobá presnosť bola hodnotená testovaním týchto 10 vzoriek v duplikáte počas 20 dní na 2 nezávislých behoch každý deň. Boli počítané stredné hodnoty pomeru, štandardné odchýlky (SD) a koeficienty odchýlky (CV).

9.1.1. Opakovateľnosť

Doštička vzoriek N Stredný pomer SD CV %

Negatívne 30 0,28 0,02 5,37

HIV-1 Ab Nízko pozitívne 30 1,62 0,07 4,32 Stredne pozitívne 30 2,98 0,13 4,33 Vysoko pozitívne 30 5,37 0,18 3,32

HIV-2 Ab Nízko pozitívne 30 2,5 0,18 7,20 Stredne pozitívne 30 5,35 0,45 8,48 Vysoko pozitívne 30 11,19 0,58 5,21

HIV Ag Nízko pozitívne 30 1,58 0,06 3,64 Stredne pozitívne 30 4,19 0,17 4,13 Vysoko pozitívne 30 9,21 0,34 3,65

12 [SK]

9.1.2. Medziľahlá presnosť

V rámci behu Medzi behmi Medzi deň/operátor Celková

presnosť

Vzorky N Stredný

pomer SD CV SD CV SD CV SD CV

Negatívne 72 0,26 0,01

6 6,2% 0,014 5,5% 0,01

4 5,5% 0,025 9,9%

HIV-1 Ab

Nízko pozitívne

72 1,04 0,02

9 2,8% 0,044 4,3% 0,05

6 5,4% 0,078 7,5%

Stredne pozitívne

72 2,67 0,07

6 2,8% 0,097 3,6% 0,17

0 6,4% 0,210 7,9%

Vysoko pozitívne

72 4,91 0,11

4 2,3% 0,166 3,4% 0,32

8 6,7% 0,385 7,8%

HIV-2 Ab

Nízko pozitívne

72 1,73 0,11

4 6,6% 0,121 7,0% 0,26

3 15,2% 0,311

17,9%

Stredne pozitívne

72 4,40 0,47

7 10,8%

0,000

Nedostupné**

0,484 11,0% 0,68

0 15,4%

Vysoko pozitívne

72 10,94 0,42

7 3,9% 0,319 2,9% 0,63

3 3,4% 0,647 5,9%

HIV Ag

Nízko pozitívne

72 1,29 0,05

2 4,0% 0,038 3,0% 0,05

3 4,1% 0,084 6,5%

Stredne pozitívne

72 3,47 0,08

5 2,5% 0,134 3,9% 0,06

8 2,0% 0,173 5,0%

Vysoko pozitívne

72 8,89 1,27

2 14,3%

0,000

Nedostupné**

0,000

Nedostupné**

1,272

14,3%

9.2. Diagnostický výkon

Výkonnosti Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab boli stanovené testovacími vzorkami od náhodných darcov krvi, od pacientov s infekciou HIV a komerčných panelov sérokonverzie. Navyše bol testovaný limit citlivosti HIV Ag s použitím francúzskej normy ANSM a medzinárodnej normy WHO (90/636).. Tiež boli testovaní pacienti s ochoreniami nevzťahujúcimi sa na infekciu HIV.

9.2.1. Diagnostická špecifickosť

Špecifickosť stanovená na celkovom počte 6038 náhodne vybraných darcov krvi z 3 rôznych pracovísk bola zistená ako 99,95 % s intervalom spoľahlivosti pri 95 % [99,85 – 99,99%]. (6035 negatívnych vzoriek / 6038 testovaných vzoriek). 3 opakované reakčné vzorky boli potvrdené ako negatívne na HIV westernovým prenosom (Western Blot) a testovaním HIV p24 Ag.

409 vzoriek z 2 klinických nemocničných laboratórií bolo tiež testovaných testom Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab; bolo zistené, že 14 vzoriek bolo počiatočne reakčných a 12 z nich bolo opakovane reakčných (pozitívne pri druhom testovaní): 11 bolo potvrdených westernovým prenosom (Western Blot) HIV, 1 jedna nebola potvrdená a bola považovaná za falošne pozitívnu. Špecifickosť na tejto populácii bola (397/398) 99,75%, Cl 95% [98,61 – 99,99%].

13 [SK]

9.2.2. Diagnostická citlivosť

Citlivosť bola hodnotená testovaním potvrdených HIV Ab pozitívnych vzoriek, vzoriek od akútne infikovaných pacientov, z panelov sérokonverzie a vzoriek HIV Ag (čisté alebo riedené). 1) Potvrdené pozitívne vzorky HIV Ab Bolo testovaných 763 pozitívnych vzoriek od ďalších pacientov infikovaných HIV-1 a HIV-2. Táto štúdia ukázala citlivosť 100 %.

Typy Počet vzoriek Počet reakčných

vzoriek Citlivosť

HIV-1

A, B, C (klasifikácia CDC) 200 200 100%

HIV-1 WB s kompletnými profilmi alebo so svetlými pásikmi anti-

gag Ab 200 200 100%

HIV 1 skupina M (18A, 71B, 23C, 9D, 12E, 4F) 137 137 100%

Skupina O 22 22 100%

Skupina N 1 1 100%

Panel BBI PRZ 204 7 7 100%

HIV-2 HIV-2 WB s kompletnými profilmi 196 196 100%

Bolo testovaných ďalších 25 čerstvých pozitívnych vzoriek (do 1 dňa od odobratia krvi) a všetky boli zistené ako pozitívne. 2) Vzorky od akútnych infikovaných pacientov a z komerčných panelov sérokonverzie • 81 vzoriek od akútnych pacientov alebo pacientov nedávno infikovaných HIV-1 (35 vzoriek od 28

pacientov s profilom sérokonverzie Western-Blot a 46 vzoriek z nedávnej sérokonverzie) bolo zistených testom Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab ako pozitívnych.

• 20 vzoriek na sérokonverziu (vzorky veľmi včasnej sérokonverzie s negatívnym profilom Western Blot alebo s veľmi svetlým pásikom p24 a/alebo gp160 na HIV Western Blot): 19 z nich bolo zistených ako pozitívnych.

• Celkovo 90 dobre dokumentovaných komerčných panelov sérokonverzie HIV bolo tiež študovaných a porovnaných s komerčne dostupnými testami EIA. Výsledky z tohto boli porovnané na 85 paneloch s testom Ag-Ab s označením CE: Genscreen™ PLUS HIV Ag-Ab.

Genscreen™ ULTRA HIV

Ag-Ab Výsledky porovnané s

Genscreen™ PLUS HIV Ag-Ab

Skoršia detekcia (aspoň na jednej

vzorke krvi)

Ekvivalentná detekcia (tá istá vzorka

rozpoznaná ako pozitívna)

Neskoršia detekcia

Počet sérokonverzií 44 41 0

Najmenej 170 vzoriek včasnej sérokonverzie bolo testovaných testom Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab.

9.3. Analytická citlivosť

Štandardy HIV Ag Analytická citlivosť bola zistená testovaním Prvého medzinárodného štandardného antigénu HIV p24 (90/636) WHO a bola zistená ako 0,85 IU/ml Cl 95 % [0,73 – 1,01 IU/ml]. Limit testu bol tiež stanovený na štandardnom antigéne ANSM HIV p24 extrapoláciou krivky získanej testovaním zriedených roztokov (počiatočná koncentrácia 100 pg/ml) a bol zistený ako < 25 pg/ml.

14 [SK]

Počas externých hodnotení bol určený limit detekcie na 13,6 pg/ml regresiou štandardného rozsahu panelu “Ag HIV SFTS 1998” (panel HIV Ag od Francúzskej transfúznej spoločnosti). Citlivosť na HIV Ag pozitívne vzorky Bolo testovaných 56 vzoriek: 53 vzoriek obsahujúcich najmenej 25 pg/ml HIV Ag bolo pozitívnych a 3 vzorky s hodnotami 13, 16 a 19 pg/ml HIV Ag mali hodnoty pomerov (optická hustota / vylúčenie) medzi 0,9 a 1,00. Citlivosť na supernatanty buniek kultúry Bolo testovaných 83 supernatantov z nasledujúcich genotypov: 76 vzoriek HIV-1 skupina M (16 A, 16 B, 11 C, 7D, 13 E, 4 F, 4 G, 3 H, 2 J), 4 HIV-1 skupina O, 1 HIV-1 skupina N a 2 vzorky HIV-2. Všetky vzorky HIV-1 boli reakčné okrem jednej vzorky skupiny O s koncentráciou 29 pg/ml HIV Ag, u ktorej bol zistený pomer (optická hustota / vylúčenie) 0,60.

9.4. Štúdia analytickej špecifickosti / krížovej reaktivity

9.4.1 Štúdia krížovej reaktivity

404 pacientov s rôznymi patológiami alebo stavom nesúvisiacim s HIV (tehotné ženy, reumatický faktor, autoimúnni (SLE), cirhotickí, chronické zlyhanie obličiek, dialýza, anti-myšacie Ig alebo iné vírusové alebo bakteriálne infekcie (hepatitída A, B, C, rubeola, toxoplazmóza, mumps, osýpky, CMV, HSV, EBV, VZV, HTLVI, malária, pacienti očkovaní proti chrípke) bolo testovaných testom Genscreen™ UTLRA HIV Ag-Ab. Na 4 vzorkách bola zistená falošná opakovaná reakčnosť (1 osýpky IgG, 1 HSV IgG, 1 rubeola, 1 SLE). Špecifickosť bola 99,0 % Cl 95 % [97,5 – 99,7 %] (400/404).

9.5. Hákový efekt

HIV Ag pozitívna vzorka: 19 zriedených roztokov bolo vytvorených z neriedeného 1000ng/mL do 3,125 pg/ml p24 HIV antigénu v negatívnej sérovej matrici. Pri porovnaní s riedenými vzorkami neboli na neriedených vzorkách nájdené žiadne negatívne výsledky. HIV Ab pozitívna vzorka: Bolo testovaných päť (5) veľmi vysoko pozitívnych vzoriek anti HIV Ab od čistého až po zriedený roztok 1/512e. Pri porovnaní s riedenými vzorkami neboli na neriedených vzorkách nájdené žiadne negatívne výsledky. 10. BIBLIOGRAFICKÉ ODKAZY. 1. BARRE-SINOUSSI F., CHERMANN J.C., REY F. et al. Isolation of a T.lymphotropic retrovirus from a patient at risk for acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), Science 1983, 220, 868-871.

2. BRUN-VEZINET F., ROUZIOUX C., BARRE-SINOUSSI F. et al. Detection of IgG antibodies to lymphadenopathy-associated in patients with Aids or lymphadenopathy syndrome. Lancet 1984, june, 1253-1256

3. CLAVEL F., GUYADER M., GUETARD D. et al. Molecular cloning and polymorphism of the human immune deficiency virus type 2. Nature 1986, 324, 691-695.

4. NORRBY E., BIBERFELD G., JOHNSON PR. et al. The chemistry of site-directed serology for HIV infections. AIDS Res Human Retroviruses 1989, 5, 487-493

5. MATHIESEN T., CHIODI F., BROLIDEN P.A., et al. Analysis of a subclass restricted HIV-1 gp 41 epitope by omission peptides. Immunology 1989, 67,1-7

6. PASQUALI J.L., KIENY M.P., KOLBE H. et al. Immunogenicity and epitope mapping of a recombinant soluble gp 160 of the human immunodeficiency virus type 1 envelope glycoprotein AIDS Res. Human Retroviruses 1990, 6, 1107-1113.

7. ZAAIJER H.L., EXEL-OEHLERS P.V., KRAAIJEVELD T. et al. Early detection of antibodies to HIV-1 by third-generation assays. The Lancet 1992, 340, 770-772.

15 [SK]

8. COUROUCE AM. and the other members of the retrovirus study group of the french society of blood transfusion. Effectiveness of assays for antibodies to HIV and p24 antigen to detect very recent HIV infections in blood donors. AIDS 1992, 6, 1548-1550

9. LANGE J.M.A., TEEUWSEN V.J.P., VAHLNE A., BARIN F. et al. Antigenic variation of the dominant gp41 epitope in Africa. AIDS 1993, 7, 461-466.

10. CONSTANTINE N.T. Serologic tests for retroviruses : approaching a decade of evolution. AIDS 1993, 7, 1-13.

11. VANDEN HAESEVELDE M., DECOURT JL., DE LEYS R. et al. Genomic cloning and complete sequence analysis of a highly divergent african human immunodeficiency virus isolate. J. Virology 1994, 68, 1586-1596.

12. GURTLER L.G., HAUSER P.H., EBERLE J. et al. A new subtype of human immunodeficiency virus type 1 (MVP-5180) from Cameroon. J. Virology 1994, 1581-1585

13. NAIR B.C., FORD G., KALYANARAMAN V.S. et al. Enzyme immunoassay using native envelope glycoprotein (gp 160) for detection of human immunodeficiency virus type 1 antibodies. J. Clin. Microbio 1994, 32, 1449-1456.

14. GAO F., YUE L., ROBERTSON D.L. et al. Genetic diversity of human immunodeficiency virus type 2 : evidence for distinct sequence subtypes with differences in virus biology. J.Virol. 1994, 68, 7433-7447.

15. BUSCH M.P., SATTEN G.A. Time course of viremia and antibody seroconversion following human immunodeficiency virus exposure. American J. Med. 1997, 102, 117-124.

16. AUBUCHON J.P., BIRKMEYER J.D., BUSCH M.P. Cost-effectiveness of expanded human immunodeficiency virus-testing protocols for donated blood. Transfusion 1997, 37, 45-51.

17. WEBER B. et al. Reduction of diagnostic window by new fourth-generation human immunodeficiency virus screening assays. J. Clin. Microbio. 1998, 36, 2235-2239.

18. GURTLER L., MUHLBACHER A., MICHL U. et al. Reduction of the diagnostic window with a new combined p24 antigen and human immunodeficiency virus antibody screening assay. J.Virology Methods 1998, 75, 27-38.

19. SIMON F., MAUCLERE P., ROQUES P. et al. Identification of a new human immunodeficiency virus type 1 distinct from group M and group O. Nature med. 1998, 4, 1032-1037.

20. COUROUCE AM. et le groupe de travail Retrovirus de la Societe Francaise de Transfusion Sanguine. Tests de depistage combine des anticorps anti-VIH et de l’antigene p24. Spectra Bio. 1999, 18, 38-44. 21. GISLEFOSS RE, GRIMSRUD TK, MOKRID L. Stability of selected serum proteins after long-term storage in the Janus Serum Bank.

16 [SK]

17 [SK]

18 [SK]

19 [SK]

20 [SK]

Bio-Rad 3, Boulevard Raymond Poincare 92430 Marnes-la-Coquette - Francúzsko Tel.: +33 (0) 1 47 95 60 00 2013/10 Fax: +33 (0) 1 47 41 91 33 883637 www.bio-rad.com