GROUPE III

Camille Roger, Emma Castel, Daniela Camargo, Kelly Blasco, Sandrine Rivrain, Christophe Le Gros, Laurent

Esnault, Boris Guédel, Ciprian Davidescu.

I. Transformation

Objectifs : ajout du plasmide contenant le gène GFP à une bactérie.

bactérie

Gène codant pour la GFP

ADN plasmidiqueGène de résistance à la Kanamycine

II. Ensemencement

Objectifs : culture de bactéries transformées et non transformées.

L'échantillon T absence de colonies sur milieu avec Kana.

Ne correspond pas au témoin.

Conclusion : problème au niveau de la transformation.

Transformation des bactéries à refaire.

Témoins Échantillons

T+K+ IPTG

T

NT+K

NT

Deuxième culture bactérienne

NT+K

Témoins Echantillons

NT

T+IPTG

T+IPTG+K T+IPTG

T+K

Conclusion : expérience réussie.

Les bactéries que nous souhaitions transformer se sont développées dans un milieu avec kanamycine, elles ont incorporé le plasmide : transformation réussie.

Objectifs : récupération du plasmide présent dans les bactéries transformées.

III. Isolation et purification du plasmide

IV. Double digestion

Objectifs : séparation du gène GFP de l’ADN plasmidique.

On effectue cette séparation grâce aux enzymes Hind III

et Bam H1.

gène de résistance à la Kanamycine

V. Électrophorèse

Objectifs : vérification de la présence du gène de la GFP dans le plasmide et du fonctionnement des enzymes.

Principes: Le gel d’agarose permet de différencier les fragments d’ADN selon leur taille.

Résultats de la première l’électrophorèse

Marqueur de poids moléculaire

Plasmide digéré Plasmide non digéré Bactéries non transformées

Résultats de la seconde électrophorèse

Marqueur de poids moléculaire

Simple digestion avec Hind III

Simple digestion avec Bam H1

Double digestion

H H HB B B B

HB HBHBHB

Gène GFP