Presentacin de PowerPoint
UNIVERSIDAD TCNICA DE MANAB FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE LABORATORIO CLNICO MUTAGNESIS DE ADN
CLONADOSIntegrantes:Parrales Guillen AideeCantos Vergara Fernanda
Bravo Zambrano Josue Cedeo Cedeo Moiss Chabla Espinales Bryan Musso
Muso Alexandra Cevallos Mora DiegoBermello Lpez Bryan
Palabras claves Gentica inversa Mutacin Genes clonadosGen
dianaInterferencia Homlogos
Glosario Mutagnesis.- engentica se denominaMutagnesisa la
produccin demutaciones sobreADN,clonado o no.deleciones.- es un
tipo especial deanomala estructural cromosmica que consiste en la
prdida de un fragmento deADN de uncromosoma. dicerEs
unaribonucleasamiembro de la familia de lasARNasaIII es una gran
protena (>200 kd) monomrica presente en elcitoplasmacelular.
dicer cataliza el primer paso del mecanismo de rnai corta ARN doble
banda.siARNSon las siglas en ingls desmall interfering rna. es una
clase deARNbicatenario. es un tipo de arn interferentecon una
longitud de 20 a 25nucletidosque es altamente especfico para la
secuencia de nucletidos de suARN mensajerodiana, interfiriendo por
ello con la expresin delgen respectivo.Caenorhabditis elegansEs
unaespeciede nematodorabdtidofamiliarhabditidaeque mide
aproximadamente 1 mm de longitud, y vive en ambientes templados. ha
sido un importante modelo de estudio para labiologa, muy
especialmente lagentica del desarrollo, a partir de los aos
70.DrosophilEs ungnerodemoscaspequeas, perteneciente a
lafamiliadrosophilidae, cuyos miembros se llaman frecuentemente
moscas de la fruta, o, ms adecuadamente aunque con menos
frecuencia, moscas del vinagre, en referencia a la caracterstica de
muchas especies de permanecer cerca de fruta madura o
podridaArabidopsisEs ungnerodeplantasherbceasde lafamiliade
lasbrasicceas, que han sido objeto de intenso estudio en poca
reciente como modelos para la investigacin fitobiolgica.arabidopsis
thalianafue la primera planta cuyogenomase secuenci por entero.
MUTAGNESIS DE ADN CLONADOSEn los estudios genticos clsicos, la
clave para identificar los genes y entender su funcin es la
observacin del fenotipo alterado de los organismo mutantes.En
dichos estudios los genes mutantes son detectados porque producen
cambios fenotpicos observables.El aislamiento de genes por tcnicas
de ADN recombinante ha permitido un enfoque diferente de la
Mutagnesis
Ahora es posible introducir la alteracin que se desee en un gen
clonado y determinar el efecto de la mutacin en funcin de los genes
Dichos procedimientos han sido denominados gentica inversa, dado
que el primer lugar se introduce una mutacin en un gen y
posteriormente se determina su consecuencia.La capacidad de
introducir mutaciones especificas en ADN clonados ha demostrado ser
una poderosa herramienta en el estudio de la expresin y funcin de
los eucariticos5
Un mtodo habitual es el uso de oliogonucletidos sintticos La
Mutagnesis in vitro ha permitido la caracterizacin en detalle del
papel funcional tanto de las secuencias reguladoras como de las
codificaciones para protenas de los genes clonados.-En clulas
animales la recombinacin entre el ADN transferido y su gen homologo
es un hecho poco frecuente.-La inactivacin de genes por este mtodo
es mas difcil que en levaduras, probablemente a causa del mayor
tamao de los genomas de las clulas en mamferos.-Ha sido posible
desarrollar mtodos tanto para aumentar la frecuencia de la
recombinacin homologa como para seleccionar y aislar las clulas
transformadas en las cuales se ha producido recombinacin homologa,
por lo que se puede inactivar genes en clulas animales por este
procedimiento.ES IMPORTANTE RESALTAR QUE:Estos genes pueden ser
inactivados en las clulas madre embrionarias en el ratn, y estas
pueden usarse despus para generar ratones transgnicos.Estos ratones
pueden criarse y generar progenie que contiene copias mutadas del
gen diana en ambos cromosomas homlogos.Adicionalmente, pueden
cultivarse las clulas obtenidas a partir de embriones de ratn y que
contienen copias del gen mutado, de modo que pueden estudiarse las
funciones de genes diana en el cultivo celularLas actividades
biolgicas de alrededor de 5.000 genes de ratn han sido investigadas
de este modo, y dichos estudios han sido de importancia critica
para el descubrimiento del papel de muchos genes en el desarrollo
del ratn.INTERFERENCIA CON LA EXPRESIN GNICA CELULARUn mtodo que se
ha empleado para inhibir la expresin de un gen diana deseado es la
introduccin de cidos nucleicos antisentido en clulas de cultivo.
ARN o ADN monocatenario complementario al ARNm del gen de inters
(antisentido) hibrida con el ARNm y bloquea la traduccin de la
protena. Adicionalmente, los hbridos ARN ADN resultantes de la
introduccin de molculas de ADN antisentido generalmente son
degradados en el interior celular. Los ARN antisentido pueden
introducirse directamente en las clulas o las clulas pueden ser
transfectadas con vectores que han sido diseadas para expresar el
ARN antisentido.
Cuando los ARN de doble hebra son introducidos en la clula son
escindidos en pequeos molculas de doble hebra por una enzima
denominada Dicer. Esta molcula se asocia con un complejo protenas
conocido como el complejo silenciador inducido por ARNDentro de
este complejo , las 2 hebras del siARN se separan por la hebra de
ARNm (hebra anti sentido) gua al complejo hacia la diana de ARNm
como consecuencia de la complementariedad de bases
El ARN es incidido por una protena del RISC. El complejo de RISC
siARN es librado despus de la degradacin de ARNm y puede continuar
con su participacin en mltiples ciclos de degradacin de ARNm, dando
lugar a una eficiente destruccin del ARN diana. Adicionalmente se
estn empleando bibliotecas de ARN bicantenarias o si ARN( ARN de
silenciamiento) que cubren una gran parte de los genes del genoma
Funciones biolgicas especificas como el crecimiento o la
supervivencia celularLa interferencia por ARN es tambin uno de los
principales mecanismos de regulacin empleados por clulas para
controlar la expresin gentica Inactivan un gen y inducen la
degradacin de un ARNm que interfiere directamente con la funcin de
las protenas en el interior celular
Frente a la que estn dirigidasLos ADN clonados que codifican
tales protenas mutantes pueden introducirse en las clulas mediante
transferencia genticas Ser empleados para estudiar los efectos de
bloquear la funcin gentica normal
