Guida all’interpretazione della colorazione del tessuto ... · Stabilità dei tessuti tagliati e applicati sui vetrini ... più elevato non solo di cancro del colon-retto, ma anche

VENTANA MMR IHC Panel

Guida all’interpretazione della colorazione del tessuto del colon-retto

VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody

1016703IT Guida all’interpretazione 2017 2

Sommario

Introduzione ................................................................................................................................................................................................. 4

Cancro del colon-retto e sindrome di Lynch .................................................................................................................................................... 4 Stratificazione della sindrome di Lynch nel CRC ............................................................................................................................................ 4

VENTANA MMR IHC Panel ................................................................................................................................................................... 5

Utilizzo del VENTANA MMR IHC Panel per identificare lo stato MMR e la probabile sindrome di Lynch............................. 5

VENTANA MMR IHC Panel ................................................................................................................................................................... 6

Uso previsto del VENTANA MMR IHC Panel .................................................................................................................................................... 6 VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody .................................................................................................. 6

VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody ............................................................................................. 6

VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody ................................................................................... 7

VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody ................................................................................................ 7

VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody .................................................................................... 7

Scopo della guida all’interpretazione ................................................................................................................................................................... 9 Flusso di campioni per la colorazione con il VENTANA MMR IHC Panel .......................................................................................... 10

Valutazione clinica dei dosaggi MMR IHC ................................................................................................................................... 11

Valutazione dei pattern e delle intensità di colorazione ............................................................................................................................. 11 Flusso di campioni per analisi MMR IHC ......................................................................................................................................................... 13 Criteri di accettabilità della morfologia e del fondo ..................................................................................................................................... 14 Controllo a livello di sistema .................................................................................................................................................................................. 14 Controlli positivi interni ............................................................................................................................................................................................ 16 Criteri per la valutazione clinica di un caso di CRC ..................................................................................................................................... 17 Algoritmo di valutazione per i dosaggi MMR IHC ........................................................................................................................................ 18 Albero decisionale per i dosaggi MMR IHC .................................................................................................................................................... 19

Casi con Stato MMR Intatto ............................................................................................................................................................... 20

Casi di CRC con espressione proteica MMR Intatta.................................................................................................................................... 20

Casi con Stato MMR di Perdita ......................................................................................................................................................... 24

Casi di CRC con perdita dell’espressione proteica MMR .......................................................................................................................... 24

Casi di difficile interpretazione .......................................................................................................................................................... 28

Colorazione di fondo non specifica ..................................................................................................................................................................... 29 Colorazione focale ...................................................................................................................................................................................................... 31 Colorazione puntiforme ............................................................................................................................................................................................ 32

Valutazione clinica di VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay ............................................................................................ 33

Valutazione dei pattern e delle intensità di colorazione ............................................................................................................................. 33 Flusso di campioni per VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay ............................................................................................................ 34 Criteri di accettabilità della morfologia e del fondo ..................................................................................................................................... 35 Controllo a livello di sistema .................................................................................................................................................................................. 35 Algoritmo di valutazione per VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay ................................................................................................. 36 Albero decisionale ...................................................................................................................................................................................................... 38

Casi negativi per BRAF V600E ........................................................................................................................................................... 39

Casi CRC con BRAF V600E stato negativo ....................................................................................................................................................... 39

Casi positivi per BRAF V600E ............................................................................................................................................................ 41

Casi CRC con BRAF V600E stato positivo ........................................................................................................................................................ 41

Casi di difficile interpretazione .......................................................................................................................................................... 45

Colorazione di fondo non specifica ..................................................................................................................................................................... 46


Colorazione di fondo non specifica ..................................................................................................................................................................... 47 Colorazione nucleare ................................................................................................................................................................................................ 48 Colorazione focale ...................................................................................................................................................................................................... 50

Esempi di casi del VENTANA MMR IHC Panel........................................................................................................................... 51

Stabilità dei tessuti tagliati e applicati sui vetrini ....................................................................................................................... 55

Bibliografia ................................................................................................................................................................................................ 56


Introduzione

Cancro del colon-retto e sindrome di Lynch

Il cancro del colon-retto (CRC) è il terzo tumore più comune negli uomini e il secondo nelle donne, con 1,4 milioni di

nuovi casi stimati e 694.000 decessi verificatisi in tutto il mondo nel 2012. I tassi di incidenza variano ampiamente a

seconda della localizzazione geografica, con i tassi più alti stimati in Australia/Nuova Zelanda, Europa e Nord America.1

Nei soli Stati Uniti, il CRC rappresenta l’8,0% di tutti i nuovi casi di cancro e, nel 2012, circa 1,2 milioni di persone erano

affette da cancro del colon-retto.2

Il rischio di sviluppo del CRC è influenzato sia da fattori ambientali (ad esempio dieta, obesità, fumo e alcol) sia da

fattori genetici. Sebbene la maggior parte dei casi di CRC siano di natura sporadica, il 5-10% dei casi dipende da

mutazioni autosomiche dominanti ereditarie.3 Il sottotipo più comune di CRC ereditario è la sindrome di Lynch, che

rappresenta il 3% di tutte le diagnosi di CRC.4

La sindrome di Lynch (cancro del colon ereditario non poliposico, HNPCC) è stata descritta negli anni ’60 ed è stata

identificata come il legame tra la perdita della funzione di riparazione del DNA (Mismatch repair - MMR) e il cancro.5 La

perdita di una proteina MMR (MLH1, PMS2, MSH2 o MSH6) può portare a un’instabilità microsatellitaria e a un rischio

più elevato non solo di cancro del colon-retto, ma anche di cancro dello stomaco, del cervello, della pelle e, nelle donne,

cancro dell’endometrio e delle ovaie. Per i pazienti con sindrome di Lynch il rischio di sviluppare il cancro del colon-

retto nel corso della loro vita è del 40-60%.6

Stratificazione della sindrome di Lynch nel CRC

Utilizzando i dosaggi IHC per MLH1, PMS2, MSH2 e MSH6, è possibile determinare lo stato MMR del tumore. La

rilevazione di tutte e quattro le proteine nel tumore indica uno stato di mismatch repair (pMMR) normale o eccellente.

La perdita dell’espressione MLH1 è quasi sempre accompagnata dalla perdita del suo partner eterodimerico, PMS2. Nei

casi sporadici di CRC, l’espressione del gene MLH1 può essere soppressa dall’ipermetilazione del suo promotore.

Se il risultato indica una perdita di proteina MLH1, i test effettuati per stabilire se è presente la mutazione BRAF V600E

stratificheranno il tumore come sindrome di Lynch sporadica o probabile e indicheranno la necessità di ulteriori test

dello stato di metilazione del promotore MLH1. La presenza della mutazione BRAF V600E con perdita di proteina MLH1

indica che il tumore è il risultato di un evento sporadico e rende estremamente improbabile la sindrome di Lynch come

causa della malignità.5 Se la mutazione BRAF V600E e la metilazione del promotore MLH1 sono negativi, la carenza


dello stato di mismatch repair del DNA (dMMR) è coerente con la sindrome di Lynch e giustifica la richiesta di un test

genetico per una diagnosi di conferma.5

L’uso di IHC per la rilevazione delle proteine PMS2, MSH2 e MSH6 è un indicatore più diretto dello stato di mutazione

della linea germinale. La perdita di PMS2, in presenza dell’espressione MLH1, o della perdita dell’espressione MSH2 o

MSH6 designa il tumore come dMMR ed è coerente con la sindrome di Lynch. Tutti gli individui con sospetta sindrome

di Lynch devono essere rimandati a una consulenza genetica e invitati a fare ulteriori test genetici per confermare la

presenza della sospetta mutazione.


Utilizzo del VENTANA MMR IHC Panel per identificare lo stato MMR e la probabile

sindrome di Lynch

Il VENTANA MMR IHC Panel (VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, VENTANA anti-PMS2

(A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody, VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody,

VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody e VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse

Monoclonal Primary Antibody) contribuisce all’identificazione di pazienti con una carenza di MMR e anche alla

stratificazione del cancro del colon-retto (CRC) come sindrome di Lynch sporadica o probabile. Questo processo è

riepilogato nella Figura 1.

Figura 1: uso del VENTANA MMR IHC Panel



Uso previsto del VENTANA MMR IHC Panel

VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody (anticorpo VENTANA anti-MLH1 - M1) è progettato

per la rilevazione qualitativa della proteina MLH1 in sezioni di tessuto fissate con formalina e incluse in paraffina.

L’anticorpo VENTANA anti-MLH1 (M1) è pronto per essere utilizzato su strumenti BenchMark ULTRA, XT e GX con

OptiView DAB IHC Detection Kit e con i reagenti complementari.

L’anticorpo VENTANA anti-MLH1 (M1) appartiene al VENTANA MMR IHC Panel, che comprende VENTANA anti-PMS2

(A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody, VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody,

VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody e VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse

Monoclonal Primary Antibody. Il pannello VENTANA MMR IHC è indicato per la rilevazione della carenza di proteine di

mismatch repair da utilizzare come test per l’identificazione del rischio di sindrome di Lynch in pazienti affetti da cancro

del colon-retto (CRC); grazie allo stato BRAF V600E il pannello contribuisce a differenziare il CRC sporadico da quello

dovuto a probabile sindrome di Lynch in assenza dell’espressione proteica MLH1.

Questi prodotti devono essere interpretati da un patologo qualificato unitamente all’esame istologico, alle informazioni

cliniche pertinenti e ai controlli appropriati.

Destinato all’uso diagnostico in vitro (IVD).

VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody (anticorpo VENTANA anti-PMS2 - A16-4) è

progettato per la rilevazione qualitativa della proteina PMS2 in sezioni di tessuto fissate con formalina e incluse in

paraffina. L’anticorpo VENTANA anti-PMS2 (A16-4) è pronto per essere utilizzato su strumenti BenchMark ULTRA,

strumenti XT e GX con OptiView DAB IHC Detection Kit, OptiView Amplification Kit e con i reagenti complementari.

L’anticorpo VENTANA anti-PMS2 (A16-4) appartiene al VENTANA MMR IHC Panel, che comprende VENTANA anti-

MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary

Antibody, VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody e VENTANA anti-BRAF V600E (VE1)

Mouse Monoclonal Primary Antibody. Il VENTANA MMR IHC Panel è indicato per la rilevazione della carenza di

proteine di mismatch repair da utilizzare come test per l’identificazione del rischio di sindrome di Lynch in pazienti

affetti da cancro del colon-retto (CRC); grazie allo stato BRAF V600E il pannello contribuisce a differenziare il CRC

sporadico da quello dovuto a probabile sindrome di Lynch in assenza dell’espressione proteica MLH1.





VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody (anticorpo VENTANA anti-MSH2 - G219-1129)

è progettato per la rilevazione qualitativa della proteina MSH2 in sezioni di tessuto fissate con formalina e incluse in

paraffina. L’anticorpo VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) è pronto per essere utilizzato su strumenti BenchMark ULTRA,

XT e GX con OptiView DAB IHC Detection Kit e con i reagenti complementari.

L’anticorpo VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) appartiene al VENTANA MMR IHC Panel, che comprende VENTANA

anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary

Antibody, VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody e VENTANA anti-BRAF V600E (VE1)

Mouse Monoclonal Primary Antibody. Il pannello VENTANA MMR IHC è indicato per la rilevazione della carenza di







VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody (anticorpo VENTANA anti-MSH6 - SP93) è progettato

per la rilevazione qualitativa della proteina MSH6 in sezioni di tessuto fissate con formalina e incluse in paraffina.

L’anticorpo VENTANA anti-MSH6 (SP93) è pronto per essere utilizzato su strumenti BenchMark ULTRA, XT e GX con

OptiView DAB IHC Detection Kit e con i reagenti complementari.

L’anticorpo VENTANA anti-MSH6 (SP93) appartiene al VENTANA MMR IHC Panel, che comprende VENTANA anti-

MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody,

VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody e VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse

Monoclonal Primary Antibody. Il VENTANA MMR IHC Panel è indicato per la rilevazione della carenza di proteine di

mismatch repair da utilizzare come test per l’identificazione del rischio di sindrome di Lynch in pazienti affetti da cancro

del colon-retto (CRC); grazie allo stato BRAF V600E il pannello contribuisce a differenziare il CRC sporadico da quello

dovuto a probabile sindrome di Lynch in assenza dell’espressione proteica MLH1.




VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody (anticorpo VENTANA anti-BRAF V600E - VE1) è

progettato per la rilevazione qualitativa della proteina BRAF V600E in sezioni di tessuto fissate con formalina e incluse in

paraffina. L’anticorpo VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) è pronto per essere utilizzato su strumenti BenchMark ULTRA,

XT e GX con OptiView DAB IHC Detection Kit e con i reagenti complementari.


L’anticorpo VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) appartiene al VENTANA MMR IHC Panel, che comprende VENTANA

anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary

Antibody, VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody e VENTANA anti-MSH6 (SP93)

Rabbit Monoclonal Primary Antibody. Il pannello VENTANA MMR IHC è indicato per la rilevazione della carenza di








Scopo della guida all’interpretazione

Questa guida è stata progettata per fornire ai patologi uno strumento che faciliti la valutazione clinica di sezioni di

carcinoma del colon-retto fissate con formalina e incluse in paraffina (FFPE) colorate con i dosaggi che compongono il

VENTANA MMR IHC Panel, in conformità all’etichetta proposta per il prodotto. Nello specifico, questa guida:

Fornisce immagini fotografiche che illustrano i pattern e le intensità di colorazione che potrebbero risultare

dalla colorazione di tessuti di carcinoma del colon-retto con i dosaggi che compongono il VENTANA MMR IHC

Panel.

Offre un riferimento per la correlazione tra i pattern e le intensità di colorazione rispetto ai punteggi clinici dei

biomarker MMR.

Mostra alcuni esempi di casi di difficile interpretazione.

Illustra altri controlli che è possibile utilizzare con il dosaggio, ma che non vengono forniti da Ventana.


Flusso di campioni per la colorazione con il VENTANA MMR IHC Panel

Tissue sample of colorectal carcinoma is taken from the patient, fixed in 10% neutral buffered formalin for 6-48 hours according to standard lab

practices and embedded in paraffin.

Sections 4-5 microns in thickness are mounted on positively charged slides.

One section is stained with H&E.

Is the H&E slide

acceptable? (≥ 50

viable tumor cells)

NORepeat Staining

YES

For each assay in the VENTANA MMR IHC Panel:

(1) One section is stained with a one of the following:

VENTANA anti-MLH1(M1)

VENTANA anti-PMS2(A16-4)

VENTANA anti MSH2 (G219-1129)

VENTANA anti-MSH6 (SP93)

VENTANA anti-BRAF V600E (VE1)

(2) One section is stained with a negative reagent control antibody (corresponding to the species of the respective VENTANA MMR IHC Panel

assay) in the same staining run.


Valutazione clinica dei dosaggi MMR IHC

Valutazione dei pattern e delle intensità di colorazione

Le cellule etichettate con i dosaggi IHC per le quattro proteine MMR (MLH1, PMS2, MSH2 e MSH6) vengono valutate in

termini di presenza o assenza dei segnali di diaminobenzidina (DAB). Nel carcinoma del colon-retto, la colorazione

immunoistochimica delle quattro proteine MMR segue un pattern di colorazione nucleare. Nei casi di CRC con

sindrome di Lynch o mutazioni somatiche, si osserva la perdita di almeno una delle quattro proteine MMR rilevate dai

dosaggi MMR IHC nei nuclei delle cellule tumorali. Il segnale viene classificato come intatto o perdita sulla base della

sola localizzazione nucleare.

Il segnale positivo (intatto) è caratterizzato da cellule tumorali che presentano una colorazione nucleare

inequivocabile di una qualsiasi intensità al di sopra della colorazione di fondo.

L’intensità del segnale negativo (perdita) è caratterizzata dall’assenza di qualsiasi segnale rilevabile o da uno

scolorimento nucleare grigio chiaro o scuro delle cellule tumorali.

Il segnale DAB può essere distribuito in modo omogeneo, con un livello uniforme di intensità attraverso le porzioni

neoplastiche del tumore oppure essere distribuito in modo disomogeneo e presentare più di un livello di intensità. Un

anticorpo con controllo negativo specie-abbinato viene utilizzato per valutare la presenza della colorazione di fondo nei

campioni test e definire un’intensità di colorazione di base.

Ogni dosaggio richiede tre sezioni seriali di tessuto da ogni campione di tessuto: una sezione per colorazione con

ematossilina ed eosina (H&E), una seconda sezione per la colorazione dell’anticorpo con controllo negativo del reagente

e una terza sezione per la colorazione con uno degli anticorpi MMR. Un tessuto di CRC prequalificato il cui stato MMR

sia Intatto può essere utilizzato come controllo positivo a livello di sistema.

Se la valutazione H&E indica che il campione del paziente è inadeguato (ad esempio perché sono presenti meno di 50

cellule tumorali vitali), è necessario procurarsi un nuovo campione. La ripetizione della colorazione di un campione per

uno specifico dosaggio MMR IHC all’interno del pannello (ad es. anticorpo VENTANA anti-MLH1 - M1) deve essere

eseguita su vetrini non colorati in uno dei seguenti casi: (1) il vetrino di controllo positivo a livello di sistema colorato

con il dosaggio non presenta una colorazione accettabile; (2) il vetrino del caso colorato con il controllo negativo del

reagente appropriato non presenta una colorazione accettabile; (3) il vetrino del caso colorato con quello specifico

dosaggio MMR IHC (ad es. VENTANA anti-MLH1 - M1) non è valutabile. Nel caso in cui quest’ultimo vetrino non sia

interpretabile a causa di assenza di colorazione nelle cellule del controllo positivo interno, di presenza di artefatti, effetti

di bordo, necrosi, assenza di tessuto o qualsiasi altro motivo, non è possibile utilizzare il vetrino per la valutazione clinica.


Se i controlli sono accettabili e il vetrino colorato con il dosaggio VENTANA MMR è valutabile, il vetrino può essere

valutato da un patologo qualificato come descritto nella sezione Criteri di valutazione.


Flusso di campioni per analisi MMR IHC

Is the negative reagent control slide

acceptable?

Repeat staining that

specimen slide.NO

Is the specific MMR assay stained slide

acceptable?

Repeat staining for

that specimen slide.NO

A trained pathologist determines the clinical status for the specific MMR assay (eg.VENTANA anti-MLH1 (M1)) according to the scoring algorithm for the MMR

assays that are part of the VENTANA MMR IHC Panel

YES

THE FOLLOWING SHOULD BE EVALUATED FOR EACH SLIDE STAINED WITH A MMR IHC ASSAY FROM THE VENTANA MMR IHC

PANEL

YES


Criteri di accettabilità della morfologia e del fondo

Per ciascun vetrino del caso colorato con il dosaggio MMR IHC, la morfologia del tessuto e l’accettabilità del fondo

devono essere valutati utilizzando i criteri descritti nella tabella 1 in basso.

Tabella 1: criteri di accettabilità della morfologia e del fondo

Accettabile Non accettabile

Morfologia

Vengono visualizzati gli elementi

cellulari di interesse, che consentono

di eseguire l’interpretazione clinica

della colorazione

Non vengono visualizzati gli elementi

cellulari di interesse e questo

compromette l’interpretazione clinica

della colorazione

Fondo Il fondo non interferisce con

l’interpretazione clinica della

colorazione

Il fondo interferisce con la capacità di

interpretare la colorazione

Controllo a livello di sistema

Per un controllo a livello di sistema, è necessario analizzare un tessuto di controllo positivo noto fissato ed elaborato allo

stesso modo dei campioni del paziente per ogni gruppo di condizioni di test e con ogni procedura di colorazione

eseguita con l’anticorpo MMR IHC. Il tessuto di controllo deve provenire da un campione chirurgico o bioptico

preparato e fissato il prima possibile, in modo identico ai campioni dei pazienti. Questo tessuto può essere utilizzato per

monitorare tutte le fasi di elaborazione e colorazione del campione. Una sezione di tessuto fissata o elaborata in modo

diverso dai campioni del test può essere usata come controllo per i reagenti e la colorazione, ma non per la fissazione o

la preparazione del tessuto. Un tessuto positivo con colorazione moderata è più indicato per il controllo qualità di uno

con una colorazione forte; può essere utilizzato per rilevare livelli minori di degradazione del reagente o problemi di

mancata conformità alle specifiche presumibilmente dovuti allo strumento. Il tessuto di controllo positivo può trovarsi

sullo stesso vetrino del caso del paziente o su un vetrino separato colorato durante la stessa corsa del caso del paziente.

È possibile utilizzare un tessuto di CRC prequalificato con stato MMR clinico IHC Intatto come controllo a livello di

sistema positivo. In alternativa, è possibile utilizzare come controllo a livello di sistema positivo anche un campione di

tessuto normale del colon prequalificato, fissato ed elaborato allo stesso modo del tessuto del paziente. La colorazione

accettabile di un controllo a livello di sistema confermerà che tutti i reagenti di quel particolare dosaggio MMR IHC (ad

es. anticorpo VENTANA anti-MLH1 (M1)) sono stati applicati e che lo strumento funziona correttamente. Il controllo del

tessuto positivo deve essere utilizzato solo per monitorare le corrette prestazioni dei tessuti elaborati, i reagenti del test

e gli strumenti e non come ausilio per formulare una specifica diagnosi sui campioni di un paziente.


È possibile utilizzare un campione di tessuto di CRC prequalificato con stato MMR clinico IHC Perdita come controllo

negativo a livello di sistema. Poiché le proteine MLH1, PMS2, MSH2 e MSH6 sono espresse in tutti i tessuti, non esiste

un controllo di tessuto negativo normale per questi biomarker. Utilizzare il controllo di tessuto negativo solo per

monitorare le adeguate prestazioni dei tessuti elaborati, dei reagenti del test e degli strumenti e non come ausilio per

formulare una specifica diagnosi sui campioni di un paziente.

Tabella 2: criteri di colorazione per un controllo positivo a livello di sistema


Pattern di

colorazione

Intatto

Colorazione nucleare inequivocabile

nelle cellule tumorali vitali, in

presenza di controlli positivi interni

(colorazione nucleare in linfociti,

fibroblasti o epitelio normale in

prossimità del tumore)

Perdita inequivocabile di colorazione

nucleare o colorazione nucleare focale

equivoca o debole nelle cellule tumorali

vitali in presenza di controlli positivi

interni


Controlli positivi interni

Nei campioni di carcinoma del colon-retto, la colorazione nucleare inequivocabile nei linfociti, nei fibroblasti o

nell’epitelio in prossimità del tumore, funge da controllo positivo interno. Le immagini rappresentative del controllo

interno per i dosaggi MMR IHC sono riportate nella figura 2 in basso.

Figura 2: controlli positivi interni - È rappresentata una colorazione evidente del fibroblasto (indicata dalle frecce blu) in un

caso con stato di Perdita di MLH1 e con un caso di stato Intatto di MSH2.

MLH1 10x

H&E 10x Neg Ctrl 10x

MSH2 10x


Criteri per la valutazione clinica di un caso di CRC

La Tabella 3 riassume i criteri per la valutazione di un vetrino di tessuto di CRC ai fini dello stato MMR con uno dei

dosaggi MMR IHC.

Tabella 3: criteri valutabili e non valutabili

Interpretazione

clinica Pattern di colorazione

Valutabile (devono

essere tutti veri)

1) H&E presenta ≥ 50 cellule tumorali vitali

2) Il vetrino Negative Reagent Control è accettabile

3) La morfologia è accettabile

4) Il fondo è accettabile

5) Il controllo a livello di sistema è accettabile

6) I controlli positivi interni presentano una colorazione nucleare inequivocabile

Non valutabile (se un

criterio di questa

sezione è vero, la

colorazione del vetrino

deve essere ripetuta)

1) H&E presenta < 50 cellule tumorali vitali

2) Il vetrino Negative Reagent Control non è accettabile

3) La morfologia non è accettabile

4) Il fondo non è accettabile

5) Il controllo a livello di sistema non è accettabile

6) I controlli positivi interni non presentano una colorazione nucleare inequivocabile

7) L’interpretazione non è possibile a causa di perdita di tessuto, assenza di tumori,

artefatti e/o artefatti del bordo.


Algoritmo di valutazione per i dosaggi MMR IHC

Lo stato clinico è assegnato da un patologo qualificato sulla base della sua valutazione della presenza o dell’assenza di

colorazione specifica rispetto ai quattro dosaggi MMR IHC del VENTANA MMR IHC Panel. Lo stato clinico di Intatto

viene assegnato ai casi in cui è presente la colorazione nucleare per tutti e quattro i marcatori, mentre lo stato clinico di

Perdita viene assegnato ai casi in cui è assente la colorazione nucleare di uno dei marker.

L’interpretazione clinica dei casi di carcinoma del colon-retto colorati con i dosaggi MMR IHC deve essere basata sui

criteri descritti nella tabella 4 in basso. Dopo la tabella vengono riportate diverse immagini di pattern di colorazione con

stato di Intatto e Perdita.

Tabella 4: criteri di interpretazione clinica per i dosaggi MMR IHC

Espressione proteica intatta Perdita di espressione proteica

Colorazione nucleare inequivocabile nelle

cellule tumorali vitali, in presenza di controlli

positivi interni (colorazione nucleare in

linfociti, fibroblasti o epitelio normale in

prossimità del tumore)

Perdita inequivocabile di colorazione

nucleare o colorazione nucleare focale

equivoca o debole nelle cellule tumorali vitali

in presenza di controlli positivi interni

Se la colorazione nucleare inequivocabile è assente nei controlli positivi interni e/o la colorazione di fondo interferisce

con l’interpretazione, il dosaggio deve essere considerato inaccettabile e ripetuto. La colorazione nucleare puntiforme

delle cellule tumorali deve essere considerata negativa (Perdita). Nei casi con colorazione delle cellule tumorali focali,

affinché il caso possa ricevere uno stato clinico di Intatto, l’intensità della colorazione nucleare deve essere almeno

pari a quella dei controlli positivi interni insieme alla colorazione confluente/continua dei nuclei in alcuni nidi o

ghiandole epiteliali. In assenza di questa condizione, al caso viene assegnato lo stato clinico di Perdita.


Albero decisionale per i dosaggi MMR IHC

I vetrini colorati con i dosaggi MMR IHC devono essere valutati utilizzando i criteri di interpretazione clinica (tabella 4);

l’approccio è riassunto nell’albero decisionale in basso.

Is the negative reagent

control slide acceptable?

Repeat

Staining or

request a

new

specimen.

Is the marker from the

VENTANA MMR IHC

Panel slide evaluable?

YES

Does the tumor have

unequivocal nuclear

staining?

YES

Case is Loss for that

VENTANA MMR

IHC Marker

No

Case is Intact for that

VENTANA MMR IHC

Marker

YES

NO

THE FOLLOWING SHOULD BE EVALUATED FOR EACH MMR ASSAY IN THE VENTANA MMR IHC PANEL

Are all 4 markers in the

VENTANA MMR IHC

Panel Intact?

Case is Intact for

VENTANA MMR IHC

Status

YES

Case is Loss for

VENTANA MMR IHC

Status

NO

Is one marker in the

VENTANA MMR IHC

Panel Loss?

Case is Loss for

VENTANA MMR IHC

Status

YES

Casi con Stato MMR Intatto

Casi di CRC con espressione proteica MMR Intatta

Un risultato di colorazione con stato Intatto è caratterizzato dalla presenza di un segnale nucleare rilevabile in presenza

di controlli interni correttamente colorati.

Figura 3: il tessuto con Stato MLH1 Intatto presenta una forte colorazione nucleare nelle cellule tumorali in presenza di

controlli interni colorati correttamente.

Neg Ctrl 4x H&E 4x

MLH1 4x MLH1 10x


Figura 4: il tessuto con Stato PMS2 Intatto presenta una forte colorazione nucleare nelle cellule tumorali in presenza di


Neg Ctrl 4x H&E 4x

PMS2 4x PMS2 10x


Figura 5: il tessuto con Stato MSH2 Intatto presenta una forte colorazione nucleare nelle cellule tumorali in presenza di


Neg Ctrl 4x H&E 4x

MSH2 4x MSH2 10x


Figura 6: il tessuto con Stato MSH6 Intatto presenta una forte colorazione nucleare nelle cellule tumorali in presenza di


Neg Ctrl 4x H&E 4x

MSH6 4x MSH6 10x


Casi con Stato MMR di Perdita

Casi di CRC con perdita dell’espressione proteica MMR

Un risultato di colorazione con stato Perdita è caratterizzato dall’assenza di un segnale nucleare rilevabile in presenza d i

controlli interni correttamente colorati.

Figura 7: il tessuto con Stato MLH1 Perdita presenta un’assenza di colorazione nucleare nelle cellule tumorali in presenza

di controlli interni colorati correttamente.

Neg Ctrl 4x H&E 4x

MLH1 4x MLH1 10x


Figura 8: il tessuto con Stato PMS2 Perdita presenta un’assenza di colorazione nucleare nelle cellule tumorali in presenza


Neg Ctrl 4x H&E 4x

PMS2 4x PMS2 10x


Figura 9: il tessuto con Stato MSH2 Perdita presenta un’assenza di colorazione nucleare nelle cellule tumorali, ma una

debole colorazione citoplasmatica in presenza di controlli interni colorati correttamente. Ai fini dell’interpretazione dello stato,

la colorazione citoplasmatica deve essere ignorata.

Neg Ctrl 4x H&E 4x

MSH2 4x MSH2 10x


Figura 10: il tessuto con Stato Perdita MSH6 presenta un’assenza di colorazione nucleare nelle cellule tumorali in presenza


Neg Ctrl 4x H&E 4x

MSH6 4x MSH6 10x


Casi di difficile interpretazione

I casi di CRC vengono categorizzati come Intatto o Perdita in relazione a un dosaggio MMR IHC a seconda della

presenza o dell’assenza della colorazione sull’intera area tumorale. La colorazione può variare a livello di intensità e

questa intensità può variare sulla superficie del tumore; tuttavia questo non influisce sullo stato MMR.

Alcuni casi possono essere particolarmente difficili da interpretare a causa dei seguenti problemi:

Fondo non specifico

Alcuni campioni possono presentare una colorazione di fondo non specifica per motivi non ben compresi. Per

questo motivo, la valutazione di un vetrino MMR IHC deve includere un confronto con il vetrino di controllo

negativo del reagente per determinare il livello di colorazione di fondo non specifica. Ai fini dell’interpretazione

MMR IHC, la colorazione citoplasmatica, se presente, deve essere ignorata.

Colorazione focale

Alcuni campioni potrebbero presentare una colorazione focale delle cellule tumorali e l’intensità di colorazione

potrebbe variare da debole a forte. Sulla base dell’algoritmo di valutazione MMR IHC, la colorazione nucleare

focale equivoca o debole nelle cellule tumorali vitali in presenza di controlli positivi interni deve essere

categorizzata come Perdita.

Colorazione puntiforme

Alcuni campioni potrebbero presentare una colorazione puntiforme all’interno di alcuni nuclei del tumore;

l’intensità della colorazione potrebbe variare da debole a forte. Questo pattern di colorazione deve essere

ignorato e se un caso presenta solo questo tipo di pattern di colorazione, deve ricevere lo stato clinico di

Perdita.

Artefatto di tessuto o di colorazione

Gli artefatti istologici causati dall’elaborazione dei campioni e dai processi di microtomia possono anch’essi

complicare la determinazione del punteggio clinico MMR IHC. Questi artefatti possono includere, ma non solo:

gradienti di fissazione ed effetti di bordo, intrappolamento del DAB, formazione di bolle nei nuclei, assenza di

colorazione in alcune aree del tessuto, lacerazione o ripiegamento del tessuto e perdita della sezione tissutale.

In alcuni casi, può essere necessario ripetere la colorazione di nuove sezioni o acquisire un nuovo campione.

Nelle pagine che seguono vengono presentati alcuni casi di difficile interpretazione.


Colorazione di fondo non specifica

Figura 11: il tessuto con Stato MSH2 Intatto presenta una forte colorazione nucleare in presenza di controlli interni colorati

correttamente; nelle cellule tumorali è presente una colorazione citoplasmatica di fondo che deve essere ignorata.

Neg Ctrl 4x H&E 4x

MSH2 4x MSH2 10x


Figura 12: il tessuto con Stato MSH2 Perdita presenta un fondo citoplasmatico marrone chiaro nelle cellule tumorali;

tuttavia non è presente alcuna colorazione nucleare nel tumore in presenza di controlli positivi interni colorati correttamente.

Ai fini dell’interpretazione dello stato, la colorazione citoplasmatica deve essere ignorata.

Neg Ctrl 4x H&E 4x

MSH2 4x MSH2 10x


Colorazione focale

Figura 13: il tessuto con Stato perdita MSH6 presenta una colorazione nucleare equivoca debole focale nelle cellule

tumorali vitali in presenza di controlli positivi interni colorati correttamente. Si noti inoltre che l’intensità della colorazione

nucleare focale è inferiore a quella dei controlli positivi interni e non è confluente intorno alla ghiandola.

Neg Ctrl 4x H&E 4x

MSH6 4x MSH6 10x


Colorazione puntiforme

Figura 14: il tessuto con Stato perdita MLH1 presenta una colorazione puntiforme nei nuclei di alcune cellule tumorali;

tuttavia nel tumore non sono presenti cellule che presentino una colorazione nucleare inequivocabile in presenza di

controlli positivi interni colorati correttamente.

Neg Ctrl 10x H&E 10x

MLH1 10x MLH1 20x


Valutazione clinica di VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay

Valutazione dei pattern e delle intensità di colorazione

Nel carcinoma del colon-retto, le cellule neoplastiche etichettate con l’anticorpo VENTANA anti-BRAF V600E (VE1)

vengono valutate per la presenza o l’assenza del segnale di diaminobenzidina (DAB). La colorazione immunoistochimica

nel carcinoma del colon-retto segue un pattern di colorazione citoplasmatica

Un segnale positivo è caratterizzato da cellule che presentano una colorazione citoplasmatica inequivocabile;

l’intensità può essere da debole a moderata.

L’intensità del segnale negativo è caratterizzato dall’assenza di qualsiasi segnale rilevabile. I casi negativi

possono comunque presentare una decolorazione citoplasmatica di colore grigio pallido o marrone chiaro.

Il segnale può essere distribuito in modo omogeneo, con un livello uniforme di intensità attraverso le porzioni

neoplastiche del tumore oppure essere distribuito in modo disomogeneo e presentare più di un livello di intensità. Un

anticorpo di controllo negativo isotipo-abbinato viene utilizzato per valutare la presenza della colorazione di fondo nei

campioni di test e definire un’intensità di colorazione di base.

Il dosaggio VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) IHC richiede una sezione seriale di tessuto per la colorazione con

ematossilina ed eosina (H&E), una seconda sezione seriale di tessuto per la colorazione con l’anticorpo di controllo

negativo del reagente e una terza sezione seriale di tessuto per la colorazione con l’anticorpo VENTANA anti-BRAF

V600E (VE1). Un CRC positivo alla mutazione BRAF V600E secondo l’anticorpo IHC di VENTANA anti-BRAF V600E (VE1)

può essere utilizzato come controllo a livello di sistema. Se la valutazione H&E indica che il campione del paziente è

inadeguato (ad esempio perché sono presenti meno di 50 cellule tumorali vitali), è necessario procurarsi un nuovo

campione. La ripetizione della colorazione di un campione deve essere eseguita su vetrini non colorati se: (1) il vetrino

di controllo positivo a livello di sistema non presente una colorazione accettabile; (2) il vetrino del caso con anticorpo di

controllo negativo del reagente non presenta una colorazione accettabile; (3) il vetrino del caso colorato con BRAF

V600E non è valutabile. Nel caso in cui quest’ultimo vetrino non sia interpretabile a causa di artefatti, effetti di bordo,

necrosi, assenza di tessuto o qualsiasi altra ragione, non può essere utilizzato per la valutazione clinica. Se i controlli

sono accettabili e il vetrino con anticorpo IHC VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) è valutabile, il vetrino può essere

valutato da un patologo qualificato come descritto nella sezione Criteri di valutazione.


Flusso di campioni per VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay


Criteri di accettabilità della morfologia e del fondo

L’accettabilità della morfologia dei tessuti e del fondo viene valutata per ciascun paziente utilizzando i criteri descritti

nella tabella 5.

Tabella 5: criteri di accettabilità della morfologia e del fondo


Morfologia

Vengono visualizzati gli elementi

cellulari di interesse, che consentono

di eseguire l’interpretazione clinica

della colorazione

Non vengono visualizzati gli elementi

cellulari di interesse e questo

compromette l’interpretazione clinica

della colorazione

Fondo Il fondo non interferisce con

l’interpretazione clinica della

colorazione

Il fondo interferisce con la capacità di

interpretare la colorazione

Controllo a livello di sistema

Un tessuto di controllo noto a livello di sistema fissato ed elaborato allo stesso modo dei campioni del paziente deve

essere analizzato con ciascun protocollo di colorazione anticorpi VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) che viene eseguito.

Il tessuto di controllo deve provenire da un campione chirurgico o bioptico preparato e fissato il prima possibile, in

modo identico ai campioni dei pazienti. Questo tessuto può essere utilizzato per monitorare tutte le fasi di elaborazione

e colorazione del campione. Una sezione di tessuto fissata o elaborata in modo diverso dai campioni del test può essere

usata come controllo per i reagenti e la colorazione, ma non per la fissazione o la preparazione del tessuto. Un tessuto

positivo con colorazione moderata è più indicato per il controllo qualità di uno con una colorazione forte; può essere

utilizzato per rilevare livelli minori di degradazione del reagente o problemi di mancata conformità alle specifiche

presumibilmente dovuti allo strumento. Il tessuto di controllo a livello di sistema può essere eseguito sullo stesso vetrino

del caso del paziente o su un vetrino separato eseguito simultaneamente al caso del paziente.

Un controllo positivo a livello di sistema sarebbe un caso prequalificato di CRC che è positivo per la mutazione BRAF

V600E da parte dell’anticorpo IHC VENTANA anti-BRAF V600E (VE1). La colorazione del caso di tessuto di CRC con

mutazione BRAF V600E confermerà che tutti i reagenti sono stati applicati e che lo strumento ha funzionato

correttamente. Il controllo di tessuto positivo deve essere utilizzato solo per monitorare le prestazioni; non deve essere

utilizzato come ausilio nella diagnosi clinica dei campioni del paziente.

Un controllo negativo a livello di sistema sarebbe un caso prequalificato di CRC che è negativo per l’anticorpo IHC

negativo VENTANA anti-BRAF V600E (VE1). Il controllo di tessuto negativo deve essere utilizzato solo per monitorare le

prestazioni; non deve essere utilizzato come ausilio nella diagnosi clinica dei campioni del paziente.

Il tessuto di controllo su ciascun vetrino colorato con anticorpi VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) verrà giudicato

accettabile o inaccettabile dai patologi esaminatori in base ai criteri delineati nella Tabella 6.


Tabella 6: criteri di colorazione per un controllo positivo a livello di sistema


Tessuto di CRC Colorazione citoplasmatica inequivocabile di

qualsiasi intensità nelle cellule tumorali vitali

sopra il fondo.

Nessuna colorazione o colorazione

citoplasmatica equivoca nelle cellule tumorali

vitali.

Fibroblasti e

linfociti nell’epitelio

normale

Nessuna colorazione o colorazione

citoplasmatica equivoca in fibroblasti e linfociti

nell’epitelio normale.

Colorazione citoplasmatica inequivocabile dei

fibroblasti e dei linfociti nell’epitelio normale.

Algoritmo di valutazione per VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay

Lo stato dell’anticorpo IHC VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) è assegnato da un patologo qualificato, sulla base della

sua valutazione dell’intensità di colorazione specifica per VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) come illustrato nella Tabella

7 che segue. Uno stato positivo viene assegnato ai casi con colorazione positiva, e uno stato negativo ai casi con

colorazione assente.

L’interpretazione clinica dei casi di carcinoma del colon-retto colorati con anticorpi VENTANA anti-BRAF V600E (VE1)

deve essere basata sui criteri indicati nella tabella 7. Le immagini dei vari schemi di colorazione negativa e positiva sono

fornite dopo la Tabella 7.


Tabella 7: criteri di interpretazione clinica per VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) IHC Assay

Positivo alla mutazione BRAF V600E Negativo per mutazione BRAF V600E

Colorazione citoplasmatica inequivocabile di qualsiasi

intensità nelle cellule tumorali vitali sopra il fondo.

Nessuna colorazione o colorazione citoplasmatica

equivoca nelle cellule tumorali vitali.

Nota: la colorazione nucleare e la colorazione da

debole a forte di cellule tumorali vitali isolate o

piccoli cluster tumorali dovrebbero essere

considerate negative.


Albero decisionale


Casi negativi per BRAF V600E

Casi CRC con BRAF V600E stato negativo

Un risultato di colorazione negativa è caratterizzato dall’assenza di qualsiasi segnale rilevabile. I casi negativi possono

comunque presentare una decolorazione citoplasmatica di colore grigio pallido o marrone chiaro.

Figura 15: il tessuto BRAF V600E stato negativo non presenta alcuna colorazione citoplasmatica nelle cellule tumorali.

Neg Ctrl 4x H&E 4x

BRAF V600E 4x BRAF V600E 10x


Figura 16: il tessuto BRAF V600E stato negativo presenta una leggera colorazione citoplasmatica rosea.

Neg Ctrl 4x H&E 4x



Casi positivi per BRAF V600E

Casi CRC con BRAF V600E stato positivo

Un risultato di colorazione positiva è caratterizzato da cellule che presentano una colorazione citoplasmatica

inequivocabile; l’intensità può variare da debole a moderata.

Figura 17: il tessuto BRAF V600E stato positivo presenta una colorazione citoplasmatica debole.

Neg Ctrl 4x H&E 4x



Figura 18: il tessuto BRAF V600E stato positivo presenta una colorazione citoplasmatica da debole a moderata.

Neg Ctrl 4x H&E 4x



Figura 19: il tessuto BRAF V600E stato positivo presenta una colorazione citoplasmatica moderata.

Neg Ctrl 4x H&E 4x



Figura 20: il tessuto BRAF V600E stato positivo presenta una colorazione citoplasmatica forte.

Neg Ctrl 4x H&E 4x



Casi di difficile interpretazione

Alcuni casi possono essere particolarmente difficili da interpretare a causa dei seguenti problemi:

Fondo non specifico

Alcuni campioni possono presentare una colorazione di fondo non specifica per motivi non ben compresi. È

stato rilevato che l’anticorpo VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) presenta occasionalmente una colorazione

citoplasmatica di fondo nel muscolo liscio e una colorazione nucleare nelle cellule epiteliali normali del colon,

negli enterociti, nelle cellule testicolari di Leydig, nella ghiandola surrenale, nella ghiandola pituitaria e in

alcune cellule tumorali; tuttavia, tali casi non devono essere considerati positivi per la mutazione BRAF V600E.

Inoltre, questo anticorpo macchia anche le ciglia nei polmoni. Per questo motivo, la valutazione di un vetrino

colorato con anticorpo VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) deve includere un confronto con il vetrino di controllo

negativo per determinare il livello di colorazione di fondo non specifica.

Colorazione nucleare

Alcuni campioni possono presentare solo colorazione nucleare. Sulla base dell’algoritmo di valutazione

dell’anticorpo IHC VENTANA anti-BRAF V600E (VE1), questi casi devono essere considerati negativi.

Artefatto di tessuto o di colorazione

Gli artefatti istologici causati dal trattamento dei campioni e dai processi di microtomia possono complicare la

determinazione dello stato clinico dell’anticorpo IHC VENTANA anti-BRAF V600E (VE1). Questi artefatti

possono includere, ma non solo: gradienti di fissazione ed effetti di bordo, intrappolamento del DAB,

formazione di bolle nei nuclei, assenza di colorazione in alcune aree del tessuto, lacerazione o ripiegamento del

tessuto e perdita della sezione tissutale. In alcuni casi, può essere necessario ripetere la colorazione di nuove

sezioni o acquisire un nuovo campione.

Colorazione eterogenea

Alcuni casi possono presentare una colorazione citoplasmatica inequivocabile anche solo focale. Questi casi

sono impegnativi e possono rendere necessari ulteriori test (Fig. 25).

Nelle pagine che seguono vengono presentati alcuni casi di difficile interpretazione.



Figura 21: il tessuto BRAF V600E stato negativo presenta una colorazione citoplasmatica rosea debole in tutto il tumore.

Neg Ctrl 4x H&E 4x




Figura 22: il tessuto BRAF V600E stato positivo presenta un fondo non specifico elevato al di fuori delle cellule tumorali.

Neg Ctrl 4x H&E 4x



Colorazione nucleare

Figura 23: il tessuto BRAF V600E stato negativo non presenta alcuna colorazione citoplasmatica nelle cellule tumorali. In

alcune cellule è presente una colorazione nucleare moderata; tuttavia, sulla base dei criteri di interpretazione, per determinare

lo stato di BRAF V600E si dovrebbe utilizzare solo la colorazione citoplasmatica.

Neg Ctrl 4x H&E 4x



Figura 24: il tessuto BRAF V600E stato positivo presenta una colorazione citoplasmatica forte inequivocabile all’interno

delle cellule tumorali. In alcune cellule è presente una colorazione nucleare moderata; tuttavia, sulla base dei criteri di

interpretazione, per determinare lo stato di BRAF V600E si dovrebbe utilizzare solo la colorazione citoplasmatica.

Neg Ctrl 4x H&E 4x



Colorazione focale

Figura 25: il tessuto BRAF V600E stato positivo presenta un’intensità colorazione di colorazione eterogenea di BRAF

V600E. La maggior parte del tumore presenta una colorazione citoplasmatica equivoca debole, con una colorazione

citoplasmatica inequivocabile focale da moderata a forte.

BRAF V600E 2x

Neg Ctrl 4x H&E 4x



Esempi di casi del VENTANA MMR IHC Panel

Figura 26: MMR CRC normale questo caso presenta lo stato normale di mismatch repair del

DNA (pMMR) per i quattro marker MMR del VENTANA MMR IHC Panel.


PMS2 10x MLH1 10x

MSH2 10x MSH6 10x


Figura 27: Carcinoma sporadico del colon questo caso presenta una carenza dello stato di

mismatch repair del DNA (dMMR) dovuto alla perdita di MLH1 e PMS2 con MSH2 e MSH6 intatti.

BRAF V600E è positivo per questo caso.


BRAF V600E 10x

PMS2 10x MLH1 10x

MSH2 10x MSH6 10x


Figura 28: Probabile sindrome di Lynch questo caso presenta una carenza dello stato di

mismatch repair del DNA (dMMR) dovuto alla perdita di MSH2 e MSH6 con MLH1 e PMS2 intatti.

BRAF V600E è negativo per questo caso.


BRAF V600E 10x

PMS2 10x MLH1 10x

MSH2 10x MSH6 10x


Figura 29: Probabile sindrome di Lynch questo caso presenta una carenza dello stato di

mismatch repair del DNA (dMMR) dovuto alla perdita di MLH1 e PMS2 con MSH2 e MSH6 intatti.

BRAF V600E è negativo per questo caso.


BRAF V600E 10x

PMS2 10x MLH1 10x

MSH2 10x MSH6 10x


Stabilità dei tessuti tagliati e applicati sui vetrini

Ventana consiglia che le sezioni con uno spessore di circa 4 µm vengano tagliate e montate su vetrini caricati

positivamente. I vetrini vanno colorati entro 8 settimane dalla preparazione.

MLH1

PMS2

MSH2

MSH6

BRAF V600E

Figura 30: colorazione di stabilità dei vetrini tagliati. Questo pannello presenta casi che hanno uno stato intatto per

MLH1, PMS2, MSH2 e MSH6 e uno stato positivo per BRAF V600E per i punti temporali indicati nella figura.

Giorno 0

Giorno 0

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Settimana 4

Settimana 4

Settimana 4

Settimana 4

Settimana 4

Settimana 10

0 Week 4

Settimana 8

Settimana 10

Settimana 10

Settimana 10


Bibliografia

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Guida all’interpretazione della colorazione del tessuto ... · Stabilità dei tessuti tagliati e applicati sui vetrini ... più elevato non solo di cancro del colon-retto, ma anche