Hämoglobinopathien - Wann soll was abgeklärt werden? Dr. phil. nat. et sc. med. S. Brunner-Agten SwissMed Lab Bern, Juni 2012

Hämoglobin

Hämoglobin Gene

h"p://amc-­‐app1.amc.sara.nl/EDUwiki/images/d/d8/Hb-­‐composi=on.gif  

Hämoglobin Fraktionen (HPLC)

α2δ2!

α2β2!

α2β2!

α2γ2!

Hämoglobinopathie

  3% der Weltbevölkerung sind Träger   in der Schweiz leben 50‘000 betroffene Menschen   200-300 mit schweren Hämoglobinopathien

  Gehört zu den häufigsten monogenetischen Erbkrankheiten

  (meist) rezessiv vererbt   heterogene Gruppe von genetischen Erkrankungen

Huber  A  et  al,  Swiss  medical  forum,  2004  

Hämoglobinopathie-Klassifizierung Abnormales Hämoglobin qualitative strukturelle Veränderung des Hämoglobins Thalassämie quantitative Verminderung der Hämoglobinsynthese

β-Thalassämia α-Thalassämia

1.  Phase  Allgemein  Labor  

2.  Phase  biochemische  Analysen  

3.  Phase  molekulare  Analysen  

Diagnostischer Algorithmus

1.  Phase  Allgemein  Labor  

2.  Phase  biochemische  Analysen  

3.  Phase  molekulare  Analysen  

Hämogramm Blutausstich Retikulozyten-Zahl Eisenstatus Entzündungsparameter Hämolyseparameter

1.  Phase  Allgemein  Labor  

Diagnostischer Algorithmus

1.  Phase  Allgemein  Labor  

2.  Phase  biochemische  Analysen  

3.  Phase  molekulare  Analysen  

Klinische Informationen Andere Informationen (FA, Ethnie, Transfusionen, SS) Hämoglobinstabilität

2.  Phase  biochemische  Analysen  

Diagnostischer Algorithmus

1.  Phase  Allgemein  Labor  

2.  Phase  biochemische  Analysen  

3.  Phase  molekulare  Analysen  

ZnPP (Zink-Protoporphyrin)!

Thalassämie vs. Eisenmangel!

3.  Phase  molekulare  Analysen  

Diagnostischer Algorithmus

Nachweis von deletionalen α-Thalassemia → gap-PCR (Multiplex PCR)

α+ ( -α3.7kb, -α4.2kb )

α0 (--SEA , --MED , --THAI, -(α)20.5kb, --FIL)

Basis Untersuchungen Molbio

Nachweis der 22 häufigsten Hämoglobinopathien (β Globin Gen)→ β-strip assay

Basis Untersuchungen Molbio

http://www.ams.ac.ir/aim/0144/image1big.jpg!

Basis Untersuchungen Molbio

Nachweis der 5 häufigsten δβ- and HPFH-

Deletionen im beta-Globingen Cluster → gap-

PCR

HPFH-1, HPFH-2, HPFH-3

(δβ)0-Sicilian/Mediterranean und Hb-Lepore

  Nachweis von Hb-Varianten → α- oder β-Globingen Sequenzierung

Basis Untersuchungen Molbio

Erweiterung vom Algorithmus

4.  Phase  MLPA  /  Array  CGH  

1.  Phase  Allgemein  Labor  

2.  Phase  biochemische  Analysen  

3.  Phase  molekulare  Analysen  

Kriterien für MLPA / array CGH Analysen

Alpha Globingen Array CGH

!   hypochrome microcytäre Anämia (MCH < 27 pg)

!   keine eisendefizienten Erythropoiese

!   keine Hämoglobinopathie

(HbA2 und HbF normal)

!   Nachweis von HbH

Innenkörpern

Beta Globingen Array CGH

!   HbF deutlich erhöht (>5%)

!   mit oder ohne hypochrome mikrozytäre Anämie

!   keine Hämoglobinopathie

(HbA2)

Array CGH

  Datenauswertung mittels GenPix Pro

Array CGH Auswertung

  Datenauswertung mittels SignalMap

Array CGH Auswertung

Fall 1 - Blutbild

36-jähriger Mann

33% Unbek. Variante

Fall 1 - HLPC

Fall 1 - Routine Molekularbiologie

  Identifikation der Hb-Variante:

!  c.364G>C im beta-Globingen !  HbD Punjab (HbD-Los Angeles) !  Im heterozygoten Zustand: keine hämatologische Veränderung

Warum dann die Hypochromie?

Basis Untersuchungen Molbio

  Nachweis von deletionalen α-Thalassemia → gap-PCR (Multiplex PCR)

!  Heterozygote -α3.7kb (α+ -Thalassämie)

HbD Punjab in Kombination mit einer α+-Thalassämie

Fall 2 - Blutbild

36-jährige Frau

Fall 2 - HLPC

Fall 2 - Routine Molekularbiologie

  Identifikation der β-Thalassämie:

!  Heterozygote Mutation IVS 1.6T>C

β+ Thalassämie (Thalassamia minor)

Fall 3 - Blutbild

28-jährige Frau Keine eisendefiziente Erythropoese

Fall 3 - HLPC

Fall 3 - Routine Molekularbiologie

  negative Resultate für:

!  α+-Thalassemia (-α3.7kb, -α4.2kb) mit einem deletierten α-Gen

!  α0-Thalassemia (--αSEA, --αTAI, --αFIL, --αMED, -(α)20.5kb)

Fall 3 - Array CGH

31.7 kb Deletion

Heterozygote α0-Thalassämie (Thalassamia minor)

Fall 4 - Blutbild

33-jähriger Mann

Fall 4 - HPLC

Fall 4 - Routine Molekularbiologie

  negative Resultate für:

!  5 häufigsten δβ- and HPFH-Deletionen im β-Globingen Cluster (HPFH-1, HPFH-2, HPFH-3, (δβ)0-Sicilian/Mediterranean and Hb-Lepore)

!   α+-Thalassemia (-α3.7kb, -α4.2kb) !   α0-Thalassemia (--αSEA, --αTAI, --αFIL, --αMED, -(α)20.5kb)

Fall 4 - Array CGH

>1 Mb Deletion

Heterozygote δβ-Thalassämie (Thalassamia minor)

Zusammenfassung   Stufendiagnostik ist wichtig   Nicht immer alles, nicht immer nur 1 Test   Diagnose = Kombination Molbio & Hämatologie

Schlussfolgerung

  Migration → Hämoglobinopathie-Prävalenz steigt

  heute: mehr diagnostische Möglichkeiten, d.h. mehr definitive Diagnosen

  Keine Therapie ohne Diagnose   Genetische Beratung

Herzlichen Dank für Ihre Aufmerksamkeit